Testes de Impurezas

O que são impurezas?

São quaisquer componentes de composição química
diferentes da matéria prima ou fármaco a serem
utilizados na fabricação do medicamento

Ensaios de Pureza
✓ São associados com a frequência (abundância) e/ou
relevância do contaminante

✓ Os ensaios de pureza incluem as pesquisas de

contaminantes de natureza física, química ou
biológica.
Testes de Pureza Química:
• Densidade
• pH
• Ponto de fusão
• Solubilidade
• Viscosidade
• Condutividade
• Perda por dessecação ou determinação de água
• Resíduo de incineração ou perda por incineração
Ensaios de Impurezas:

(Cont. ...)
• Ensaios limite de cloretos, sulfato, ferro, metais
pesados, arsênio
• Índice de acidez, saponificação e índice de iodo
• Pesquisa de resíduos de solvente
• Pesquisa de compostos relacionados, oriundos do
processo de obtenção ou da degradação da
substância.
 Impurezas

Inorgânicas Orgânicas
São decorrentes do
processamento da São decorrentes de
matéria-prima ou processos de decomposição,
produto acabado contaminação ambiental e
falha nos processos de
purificação
 Impurezas inorgânicas
✓ São decorrentes do processamento da matéria-prima
ou produto acabado.

✓ Contaminantes inorgânicos mais comuns: água, íons

metálicos, cloretos, sulfatos e outros ânions.

✓ Existem procedimentos gerais para determinação de

impurezas nas diversas farmacopéias.

✓ Cada insumo farmacêutico possui um diferente preparo

de amostra.
 Impurezas inorgânicas
✓ Ensaios quantitativos e semi-quantitativos.

Quantitativos Semi-quantitativos
Teor de umidade Ensaio limite para cloretos
Teor de substâncias Ensaio limite para sulfatos
voláteis e não voláteis
Teor de substâncias Ensaio limite para amônia
solúveis e insolúveis
Teor de cinzas Ensaio limite para ferro
Teor de cinzas sulfatadas Ensaio limite para metais
pesados
Teor de cinzas insolúveis Ensaio limite para arsênio
Ensaios Quantitativos
 Teor de umidade
✓ Diversas substâncias encontram-se na forma hidratada
ou contém água absorvida, tornando relevante o
estabelecimento de limites e a sua determinação em
ensaio específico.

Três métodos:

➢ Método gravimétrico

➢ Método volumétrico (Karl Fischer)

➢ Destilação Azeotrópica
 Método gravimétrico
✓ Tecnicamente mais simples e rápido

✓ Determina o conteúdo de água somado ao conteúdo de

substâncias voláteis.

✓ A amostra é dessecada a 100-105 ºC, até peso

constante.

✓ Calcula-se a porcentagem de água em relação à droga

seca ao ar.
 Método gravimétrico
✓ balanças de infravermelho: se baseiam no
aquecimento da amostra com raios infravermelhos e
subseqüente evaporação da água.

✓ E se houver substâncias voláteis ou o fármaco se

degradar na temperatura de evaporação da água?
 Método Volumétrico
Principio do método: é baseado na reação quantitativa
dos íons hidrogênio da água com solução anidra de dióxido
de enxofre e iodo na presença de tampão.

✓ Vantagem: pode ser usado para amostras de natureza

diversa, incluindo líquidos mais voláteis que a água.

✓ Desvantagem: custo e toxicidade dos reagentes e

solventes.

Também chamado Karl Fischer devido ao reagente

utilizado.
Reagente de Karl Fischer

✓ Solução anidra de iodo e dióxido de enxofre dissolvidos

em piridina e metanol.

✓ Quando recém-preparada, a solução reagente

neutraliza cerca de 5 mg de água/mL

✓ O reagente de Karl Fisher deteriora-se com rapidez

por isso recomenda-se a sua padronização
imediatamente antes do uso.
Aparelho

Qualquer equipamento que permita a exclusão adequada da

umidade atmosférica e a determinação do ponto final da
titulação.

Determinação do ponto final da reação

Visualmente Amarelo para ambar
(amostras incolores)
Ambar para amarelo

Eletrometricamente:

Eletrodos de platina
Circuito elétrico simples
 Destilação azeotrópica
✓ A amostra é colocada juntamente
com tolueno em um recipiente.

✓ A água presente na amostra é

destilada juntamente o com
tolueno, com auxílio de um
condensador de refluxo.

✓ A água e o solvente destilados são

coletados em um tubo coletor.

✓ Após a separação dos dois

solventes imiscíveis (água e
tolueno), o volume de água
depositado no tubo receptor é
verificado.
 Teor de subtâncias voláteis e
não voláteis
✓ Visa determinar a quantidade de substância volátil de
qualquer natureza.

✓ Pode ser determinado pelo método gravimétrico.

 Teor de substâncias solúveis e
insolúveis
✓ Pesar quantitativamente a amostra e diluir em solvente
conforme a monografia.

✓ Filtrar em funil de vidro

✓ Secar o funil em estufa até peso constante

% solúveis = Pa – Pp/Pa x 100

% insolúveis = Pp/Pa x 100

Pp – peso precipitado seco

Pa – peso amostra
 Teor de cinzas
✓ Teor de cinzas Total (resíduos de sólidos inorgânicos metálicos)

✓ Teor de cinzas sulfatadas

✓ Teor de cinzas insolúveis: determina a sílica e componentes

silícicos. Constituem, o resíduo obtido a fervura de cinzas totais,
ou sulfatadas com ácido clorídrico diluído após filtragem; lavagem e
incineração.

Amostra
 Teor de cinzas Totais
✓ O teor de cinzas totais é a quantidade remanescente
de material inorgânico após incineração.

✓ As cinzas totais incluem cinzas fisiológicas e cinzas

não-fisiológicas, provenientes de materiais estranhos.

✓ O procedimento consiste na incineração do material

pulverizado até que todo o carvão seja eliminado, sob
uma temperatura de no máximo 600 ± 25 ºC.
 Teor de cinzas Totais
✓ Pode ser utilizado gradiente de temperatura, tal como a
incineração por 30 minutos a 200 ºC, 60 minutos a 400 ºC
e 90 minutos a 600 ºC.

✓ O material deve ser incinerado até peso constante.

✓ Calcular a porcentagem de cinzas em relação à droga seca

ao ar.
 Teor de cinzas sulfatadas
✓ Visa determinar o resíduo de sólidos inorgânicos
metálicos, e a adição de ácido sulfúrico confere maior
poder oxidante.

✓ Procedimento: Colocar cerca de 1,0 g da droga em cadinho

previamente dessecado e pesado.

✓ Umedeça a droga com ácido sulfúrico concentrado e carbonize em

bico de Bunsen.

✓ Umedeça novamente com ácido sulfúrico concentrado, carbonize e

incinere com aquecimento gradativo até 800 ºC.

✓ Incinere até que a diferença entre duas pesagens sucessivas não

seja maior que 0,5 mg.
Teor de cinzas insolúveis em ácido
✓ Constituem o resíduo obtido após fervura de cinzas totais
com ácido clorídrico diluído e incineração.

✓ O método destina-se à determinação de sílica e

constituintes silícicos da droga.

✓ Procedimento: consiste na fervura do resíduo obtido na determinação de

cinzas totais com ácido clorídrico a 7% (p/v).

✓ Após fervura, o resíduo deve ser filtrado em papel de filtro isento de cinzas
e o papel deve ser incinerado a 500 ºC até peso constante.

✓ Calcular a porcentagem de cinzas insolúveis em ácido em relação à droga seca

ao ar.
Ensaios Limites
 Definições

“Ensaio limite consiste em meios quantitativos e semi-

quantitativos destinados a identificação de impurezas
presentes em matérias-primas de produtos
farmacêuticos.”

A detecção pode ser feita através de uma reação

química específica que provoca uma alteração visual no
meio da reação.
 Definições

- Estes ensaios limites (semi-quantitativos) baseiam-se

na comparação de duas soluções, uma conhecida como
PADRÃO e outra como PROBLEMA, preparadas nas
mesmas condições.

Padrão: adiciona-se quantidade máxima de

impureza permitida pela farmacopéia, ppm,
juntamente aos reagentes que irão reagir
quimicamente com a impureza produzindo turvação ou
coloração.
 Definições
Compara-se a turvação ou coloração desenvolvida nas soluções
padrão e problema, sendo que, a coloração ou turvação
desenvolvida na solução problema deve ser menor ou igual à
do padrão para que o ensaio esteja de acordo.

Padrão Amostra

Tubo de Nessler
 Definições
Limite: é o teor máximo de impureza permitido
em determinada substância. Pode ser expresso em:

- ppm: (partes por milhão), expressa o no. de partes

(em massa) da impureza por milhão (em massa) da
substância analisada.
30 ppm = 30 partes por milhão, logo:

30/1.000.000 = 3/100.000 = 0,3/10.000 = 0,03/1.000 = 0,003/100

Sendo assim, 30 ppm = 0,003%

- %: expressa o no. de partes (em massa) da impureza

por cem (em massa) da substância analisada.
 Ensaio limite para cloretos
Principio do método: Baseia-se na reação de precipitação
do íon cloreto por nitrato de prata, em meio ácido.

Visa determinar se a amostra ultrapassa um valor máximo

permitido de íons cloreto.

Reação:
HNO3
Cl- + AgNO3 AgCl + HNO3
 HCl 0,01 M
Sol. volumétrica Amostra
Volume depende da Massa ou volume de
matéria-prima solução - como
determinado pela
HNO3 monografia
HNO3

AgNO3
AgNO3

Padrão Amostra

H2O H2O

A turvação da amostra deve ser menor que a

turvação da solução padrão
 Ex.: Paracetamol

Cloretos (5.3.2.1). Agitar 1 g da amostra com 25 mL de água,

filtrar e adicionar 1 mL de ácido nítrico 2 M. No máximo 0,014%
(140 ppm).

1,0 mL da solução padrão (HCl 0,01 M) que contém 3,546 x 10-4 g de cloreto.

PM (g/mol) M (mol/L) = m (g)/PM x V (L)

H–1 0,01 mols de HCl em 1 litro

Cl – 35,5 1 mL – 0,00001 mols de HCl
HCl – 36,5
Cl- ????

1 mol = 36,5 g de HCl - (35,5 g de Cl-)

0,00001 mols de HCl - g de Cl- ???

0,00001 x 35,5 / 1 = 0,000355 = 3,55 x 10-4

 Ensaio limite para sulfatos
Principio do método: Baseia-se na reação de precipitação
do SO2– pelo BaCl2 em meio ácido.

Visa determinar se a amostra utrapassa um valor máximo

permitido de sulfatos.

Reação:

HCl
SO4-2 + BaCl2 BaSO4 + 2HCL
 H2SO4 0,005 M
Sol. volumétrica Amostra
Volume depende da Massa ou volume de
matéria-prima solução - como
determinado pela
HCl monografia
HCl

BaCl2
BaCl2

Padrão Amostra

H2O H2O

A turvação da amostra deve ser menor que a

turvação da solução padrão
Ex.: Paracetamol

Sulfatos (5.3.2.2). Agitar 1 g da amostra com 25 mL

de água, filtrar quantitativamente para tubo de Nessler.
No máximo 0,02% (200 ppm).
 Ensaio limite para amônia
Princípio do método: baseia na reação de mudança de
coloração da solução contendo amônia pela solução alcalina
de tetraiodomercurato (II) de potássio (Reagente de
Nessler).

Visa determinar se a amostra ultrapassa um valor máximo

permitido de amônia.

Reação:

2K2[HgI4] + 2 NH3 = NH2Hg2I3 + 4 KI + NH4I

 NH3 (1 ou 2,5 ppm)
cloreto de amônio Amostra
Volume depende da Massa ou volume de
matéria-prima solução - como
determinado pela
NaOH 2 M monografia
NaOH 2 M

tetraiodomercurato
(II) de potássio tetraiodomercurato
(II) de potássio

Padrão Amostra

H2O H2O
Tubo de Tubo de
Nessler Nessler
 Ensaio limite para Ferro
Principio do método: baseia na reação de complexação da
solução contendo íons ferro com ácido tioglicólico,
tiocianato de potássio ou peroxidissulfato de amônio.

Visa determinar se a amostra ultrapassa um valor máximo

permitido de íons ferro.
 Fe 100ppm
sulfato férrico amoniacal Amostra
dodecaidratado
Massa ou volume de
Volume depende da
solução - como
matéria-prima
determinado pela
Ácido cítrico monografia
Ácido cítrico
20%
20%

ácido tioglicólico
ácido tioglicólico

Hidróxido de
Hidróxido de amônio
amônio H2O
Tubo de H2O
Tubo de
Nessler Nessler
Padrão Amostra
1,0 mL da solução padrão de ferro de 100 ppm, que contém 10-4 g de ferro
 Ensaio limite para metais
pesados
Princípio - Reação colorimétrica de metais com íon sulfeto.
Os limites são especificados em µg de Pb+2

Reação: M++ + H2S → MS + 2H+

Obtenção de H2S por tiocetamida (em meio ácido)

CH3CSNH2 + 2H2O → CH3COONH4 + H2S
tioacetamida Acetato de amônio Ácido sulfídrico (gás)
Ensaio limite:

✓ Método I – amostras límpidas e incolores diluídas em água.

✓ Método II – amostras diluídas em dioxano ou acetona.

✓ Método III – digestão do material orgânico (incineração)

✓ Método IV – digestão com ácido nítrico.

✓ Método V - Decomposição por via úmida em sistema fechado ou

Método de combustão iniciada por micro-ondas em sistema
pressurizado

Substâncias que respondem ao teste: Chumbo,

mercúrio, bismuto, arsênico, antimônio, cádmio, prata,
cobre e molibdênio
 Método I
Padrão Amostra Contole
Pb 10ppm Amostra Amostra + Padrão
Nitrato de chumbo
pH 3-4
Ác. acético/ pH 3-4 pH 3-4
hidróxido de Ác. acético/ Ác. acético/
amônio hidróxido de hidróxido de
amônio amônio

tampão tampão
tampão
acetato pH acetato pH
acetato pH
3,5 3,5
3,5

Tioacetamida Tioacetamida Tioacetamida

H2O H2 O H2 O

O teste somente é válido se a intensidade da coloração desenvolvida na

preparação controle for igual ou superior àquela da padrão.
Método III

incinerar

Banho-maria
Ensaio limite para metais
pesados
 Ensaio limite para arsênio
Princípio do método: Baseia-se na reação colorimétrica
entre a arsina (ASH3) e o dietilditiocarbamato de prata

Transformação do Arsênio em Arsina volátil

1. Redução do arsênio por cloreto estanhoso

Na3AsO4 + 2H2SO4 + 2KI + SnCl2 → Na3AsO3 + I2 + H2O

Arsenato de sódio Ácido arsênico

2. Transformação do arsênio reduzido em arsina

Na3AsO3 + Zn• + H+ → AsH3 (volátil)

Método I – substâncias inorgânicas Diferem no
preparo da
Método II - substâncias orgânicas amostra e padrão

Figura 1 - compreende: (a) gerador de arsina; (b) e (d) juntas; (c) unidade
esmerilhada; (e) tubo de absorção.
Padrão de Arsênio → As2O3
dietilditiocarbamato-
prata

Acetato de Pb

As2O3
H2SO4

KI AsH3

SnCl2

H2O
Zn•
álcool isopropílico

Reagir45
Reagir 30minutos
minutos25 C Observar coloração ou
ler espectrofotômetro
Amostra
dietilditiocarbamato-
prata

Acetato de Pb

Amostra
H2SO4

KI AsH3

SnCl2

H2O
Zn•
álcool isopropílico

Reagir45
Reagir 30minutos
minutos25 C Observar coloração ou
ler espectrofotômetro
Métodos instrumentais de
determinação de metais
➢ A presença de metais em produtos farmacêuticos
pode ter impacto:

✓ Estabilidade: catálise oxidativa de fármacos e

coadjuvantes.

✓ Inocuidade: efeito carcinogênio do cádmio,

neurotoxicidade do chumbo e mercúrio.

➢ Técnicas instrumentais de determinação:

✓ Fotometria de chama

✓ Espectrometria de absorção atômica

✓ Espectrometria de emissão atômica

 Fotometria de chama

Ou espectrometria de emissão de chama ou

espectrometria de absorção atômica de chama.

Entre os elementos analisados principais encontram-se:

Cálcio, sódio, potássio e lítio.

Princípio:

Chama – nebulizador – filtro - detector

 Ocorrência da excitação

Energia Liberada
luz
Energia Incidente
Calor da chama

Elétron expulso
L

M
Espectrofotômetro

Espectrofotômetro de Absorção Atômica com chama

Espectrometria atômica

✓ O método por espectrometria atômica possibilita

quantificar cada elemento contaminante na amostra

As, Cd, Cr, Cu, Hg, Ir, Mn, Mo, Ni, Os, Pb, Pd, Pt, Rh, Ru

✓ Pode–se estabelecer limites diferenciados para cada

elemento de acordo com a sua toxicidade e o tipo de
forma farmacêutica.

✓ Elementos como As, Cd, Pb e Hg, devido à elevada

toxicidade apresentam limites mais baixos que os
demais.
Dois tipos:

✓ Espectrometria de absorção atômica

✓ Espectrometria de emissão atômica

Farmacopeia brasileria 5 edição v.1, 2010.
Impurezas orgânicas
 Impurezas orgânicas
✓ Podem ser:

Intrínsecas: são decorrentes de processos de

decomposição.
Ex.: ácido salicílico em ácido acetil salicílico – AAS.

Extrínseca: decorrem de contaminação ambiental ou

falhas de processo de purificação.
Estão associadas ao processo de obtenção do produto.

✓ Impurezas orgânicas são relativamente particulares

para cada insumo farmacêutico, de modo que é inviável
a elaboração de métodos gerais.
• Captopril: formação de dissulfeto de captopril, como
resultado de degradação
 Impurezas orgânicas
✓ Para cada monografia descreve-se a metodologia a ser
aplicada na determinação das impurezas orgânicas
potenciais.

✓ Principais Métodos:

▪ HPLC

▪ CCD

▪ Condutivimetria

▪ Potenciometria (eletrodos íons seletivos)

▪ Rotação óptica
 Solventes residuais
A avaliação da presença de solventes residuais se aplica a todas as matérias-
primas (Insumo Farmacêutico Ativo e excipientes) e ao produto acabado.
Objetivo: garantir que o medicamento ingerido contenha quantidades de
solventes residuais em concentrações seguras.

Em relação ao produto acabado, os solventes residuais devem

obrigatoriamente ser pesquisados quando são usados na fabricação do
medicamento. Quando não houver utilização de solventes potencialmente
tóxicos na produção do medicamento, a empresa pode optar por (1) testar os
solventes que podem estar presentes no medicamento ou (2) calcular os
níveis de solventes no produto acabado, com base nos limites de solventes
residuais de cada componente da formulação (IFA e excipientes) e dose
máxima diária do medicamento e, se estiver abaixo do limite seguro
recomendado em guias internacionais como ICH ou farmacopeias
reconhecidas pela Anvisa, apresentar justificativa/ racional para não
realização do teste no produto acabado.