Aula 2 – Bioquímica II

Ferro Sérico
e
Capacidade de Ligação do Ferro

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 Ferro Sérico
 O ferro é um elemento essencial para os
humanos, sendo o íon central do grupo heme, o
constituinte não-protéico da hemoglobina. A
hemoglobina é responsável pelo transporte e
distribuição do oxigênio dos pulmões até os
tecidos.

 A deficiência de ferro causa uma diminuição de

síntese do heme, levando a anemia que resulta
na hipóxia dos tecidos, o heme também é um
constituinte da mioglobina do tecido muscular.

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 Absorção e Aproveitamento
 Absorção
 O intestino delgado, mais precisamente no duodeno e
jejuno é o principal local de absorção do ferro.

 Aproveitamento
 O ferro proveniente da alimentação é encontrado na
forma Fe ³ (íon férrico) e para que a sua absorção seja
possível é preciso que o mesmo seja reduzido a Fe²
(íon ferroso).
 2/3 do ferro necessário para a formação da
hemoglobina é proveniente do reaproveitamento e os
outros 1/3 vem da dieta.

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 Armazenamento
 Cerca de 65% do ferro do corpo está presente na hemoglobina
(nos glóbulos vermelhos) e cerca de 4% é encontrado na
mioglobina (no músculo esquelético).

 Aproximadamente 30% do ferro do corpo está armazenado

(como ferritina ou hemossiderina) no fígado, medula óssea e
células reticuloendoteliais do baço. Uma pequena
porcentagem do ferro do corpo é transportada entre diversos
compartimentos (associado à transferrina) ou faz parte da
composição de enzimas em células do corpo.

 O ferro livre é muito reativo (estimula reações que formam

radicais livres) e, normalmente, não está presente nos líquidos
corporais.

 Suas concentrações no soro variam com a idade e com o

sexo.

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 Transporte
 O ferro é transportado no plasma ligado a uma
glicoproteína específica, a transferrina, que se
liga a íons ferro, justamente com o ânion
bicarbonato, uma vez ligado à transferrina, o Fe
é levado à medula óssea onde é incorporado
para a formação da hemoglobina.

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 A Deficiência de Ferro
 A deficiência de ferro é conseqüência de:
suprimento inadequado, aumento da demanda,
perda sanguínea ou a combinação destes.

 O suprimento inadequado é característico das

crianças alimentadas apenas com leite. Já o
aumento de demanda é característica da gravidez
e das crianças nos primeiros 5 anos de vida.

 O corpo conserva o ferro de forma eficiente,

sendo que apenas cerca de 1 mg (em homens e
mulheres após a menopausa) ou 1,8 mg (em
mulheres adultas antes da menopausa) é perdido
na urina ou sangue menstrual.

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 Recomendações para Ingestão
• A ingestão diária recomendada (RDA, um guia
determinado pelo Departamento de Controle de
Drogas e Alimentos dos Estados Unidos (FDA))
para o ferro é de 10 mg (para homens e
mulheres após a menopausa) e de 18 mg (para
mulheres adultas antes da menopausa).

• Na gestação, as necessidades de ferro

aumentam consideravelmente. A deficiência de
ferro é mais comum em mulheres em idade
reprodutiva.

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 Significado Clínico
 Esse exame é realizado quando há suspeita de
deficiência de ferro.

 Diminuição do Ferro
 Menstruação abundante, hemorragias gastrointestinais,
hemorróidas, carcinoma de cólon e parasitoses são
causas comuns de deficiência de ferro sérico por perda
sanguínea no adulto.

 Aumento de Ferro
 Transfusões repetidas, hemocromatose idiopática,
cirrose, talassemia e anemia sideroblástica são as
causas mais comuns de aumento do ferro sérico.

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 O ferro sérico, como é determinado no laboratório
clínico, é o ferro férrico associado à transferrina.

 Cada molécula de transferrina pode transportar 2

átomos de ferro. Normalmente, cerca de 30% dos
locais disponíveis estão preenchidos. Isso é
chamado de percentual de saturação da
transferrina.

 Ao saturar completamente todos os sítios de ligação

disponíveis, é possível medir a TIBC, capacidade de
ligação do ferro total. Na verdade, essa é a
determinação da transferrina sérica. Normalmente, a
TIBC e o percentual de saturação da transferrina
são determinados juntamente com o ferro sérico.
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 Metodologia
 Labtest Ferrozine

 Amostra
 Sugere-se jejum mínimo de 8 horas. Usar soro.

 Para controle terapêutico, aconselha-se colher a

amostra sempre no mesmo horário, devido a
variações diurnas do ferro sérico.

 Procedimento Técnico
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 Valores Desejáveis ou Recomendados

 Soro: 50 a 150 g/dl

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 Capacidade de Ligação do
Ferro
 A determinação da capacidade de ligação
do ferro em amostras de sangue é útil na
abordagem laboratorial das anemias.

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 Significado Clínico
 O ferro é transportado no sangue por uma
proteína, a transferrina, e armazenado nos
tecidos ligado à outra proteína chamada ferritina.

 A transferrina do soro tem considerável reserva

de capacidade de ligação do ferro, que é a
Capacidade Latente de Ligação do Ferro (CLLF).

 A Capacidade Total de Ligação do Ferro (CTLF)

no soro é a medida da concentração máxima de
ferro que a transferrina pode transportar.

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 Alterações
 Aumento
 A CTLF mostra-se freqüentemente aumentada
na deficiência de ferro, .

 Diminuição
 Transfusões repetidas, hemocromatose
idiopática(doença na qual ocorre depósito
de ferro nos tecidos), cirrose, talassemia e
anemia sideroblástica são as causas mais
comuns de aumento do ferro sérico e diminuição
da CTLF.

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 Dosagem da Capacidade de
Ligação do Ferro

 Princípio do Teste
 O tampão (Reagente 2) contendo íons férricos é
incubado com o soro para saturar a transferrina,
que é a proteína transportadora de ferro.

 O excesso de ferro que não se ligar a transferrina

reagirá com a ferrozina (Reagente 3), formando
um complexo de cor magenta brilhante cuja
absorbância medida em 560 nm é proporcional á
concentração de ferro na amostra.

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 A diferença entre esta quantidade de ferro
e a contida no tampão corresponde á
Capacidade Latente de Ligação de Ferro
(CLLF).

 Dosando a concentração de ferro na

amostra e somando o seu valor ao da
CLLF obtém-se o valor da Capacidade
Total de Ligação de Ferro (CTLF).

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 Cálculos

 CLLF ou LIBC = Capacidade Latente de

Ligação de Ferro

 CTLF ou TIBC = Capacidade Total de

Ligação de Ferro

 IST = Índice de Saturação de Transferrina

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 A primeira leitura da absorbância (A1)
do Teste, Calibrador e Branco devem
ser corrigidas para o volume final da
reação, obtendo-se A1cor antes de
realizar o cálculo da concentração de
ferro.

 A1cor = A1 x 0,809

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• CLLF ou LIBC = Capacidade Latente de Ligação de Ferro
• CTLF ou TIBC = Capacidade Total de Ligação de Ferro =
CLLF + Ferro Sérico
• IST = Índice de Saturação de Transferrina
• AB1 = Absorbância do Branco (1°leitura)
• AT1 = Absorbância do Teste ( 1° leitura)
• AC1 = Absorbância do Calibrador (1° leitura)
• AB2 = Absorbância do Branco (2° leitura)
• AT2 = Absorbância do Teste (2° leitura)
• AC2 = Absorbância do Calibrador (2° leitura)
• CC = Concentração do Calibrador (Ver valor de CLLF no
rótulo do frasco)

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• Para obter as absorbâncias do Teste e do Calibrador,
fazer a correção pelas absorbâncias do Branco, da
seguinte maneira:

• AT = Absorbância do Teste = (AB2 – AB1 corrigida) –

(AT2 – AT1corrigida)

• AC = Absorbância do Calibrador = (AB2 – AB1 corrigida)

– (AC2 – AC1 corrigida)

• Devido a grande reprodutibilidade obtida na

metodologia, pode-se fazer os cálculos através do Fator
de Calibração (FC).

• FC = CC ÷ AC
• CLLF (µg/dL) = FC × AT
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 Exemplo

Se AB1 = 0,003 e AB2 = 0,724

AB1 corrigida = 0,003 × 0,809 = 0,002

Se AT1 = 0,032 e AT2 = 0,672

AT1 corrigida = 0,032 × 0,809 = 0,026

Se AC1 = 0,030 e AC2 = 0,618

AC1 corrigida = 0,030 × 0,809 = 0,024

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• AT = Absorbância do Teste = (AB2 –
AB1 corrigida) – (AT2 – AT1 corrigida)

• AT = (0,724 – 0,002) – (0,672 – 0,026) =

0,722 – 0,646 = 0,076

• AC = (0,724 – 0,002) – (0,618 – 0,024) =

0,722 – 0,594 = 0,128

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• Se CC = Concentração do Calibrador =
265 µg/dL (Valor indicado no rótulo do
Calibrador)

• FC = CC ÷ AC = 265 ÷ 0,128 = 2070

• CLLF (µg/dL) = FC × AT = 2070 × 0,076 =

157 µg/dL

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• CTLF = Ferro Sérico + CLLF
• Se o Ferro Sérico da amostra = 144 µg/dL

• CTLF = 144 + 157 = 301 µg/dL

• IST = (Ferro Sérico ÷ CTLF) × 100 = (144 ÷ 301)

× 100 = 0,48 × 100 = 48%

• Transferrina (mg/dL) = CTLF × 0,70 = 301 ×

0,70 = 211 mg/dL
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 Resultados
 CLLF = 157 µg/dL

 Ferro = 144 µg/dL

 CTLF = 301 µg/dL

 IST% = 48%

 Transferrina = 211 mg/dL

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 Valores Desejáveis ou
Recomendados

 CLLF: 140 – 280 µg/dL

 CTLF (Adultos): 250 a 450 µg/dL

 CTLF (Crianças): 150 a 400 µg/dL

 IST: 20 - 50%

 Transferrina: 200 a 300 mg/dL

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 Considerações Importantes
1. Concentrações de Bilirrubina (Conjugada ou
Não Conjugada) até 20 mg/dL, Triglicérides
até 1000 mg/dL e Hemoglobina até 200 mg/dL
não produzem interferências significativas.

2. O uso de amostras contendo heparina ou de

pacientes submetidos a procedimento de
hemodiálise não apresenta interferência
significativa na determinação da capacidade
de ligação do ferro com o sistema Labtest.

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3. As amostras devem ser colhidas em
jejum e pela manhã. O ritmo circadiano
afeta as concentrações de ferro, sendo
obtidos valores inferiores à tarde. Esta
diferença pode ser crítica, atingindo até
30%.

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Exercícios!!!

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