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Regra Contagem de Colonias
Regra Contagem de Colonias
resultado como muito numeroso para contar ou TNTC (too numerous to count).
Escolher pores da placa que sejam representativas da distribuio das colnias em
toda placa e estimar o nmero de colnias presentes.
4.3.2.1 Se houver menos de 10 colnias por cm2
Contar as colnias em 12 cm2 selecionando 6 quadrados consecutivos dispostos
horizontalmente e 6 quadrados consecutivos dispostos em ngulo reto com os quadrados
horizontais escolhidos.
Somar as contagens obtidas nos 12 quadrados e dividir o valor obtido por 12, de forma a
obter a mdia de colnias por cm2 da placa.
Multiplicar o valor encontrado para cada cm2 pela rea da placa utilizada (placas padro
de plstico de 15 x 100 mm possuem rea aproximada de 56 cm2) e, finalmente, multiplicar pela
diluio usada.
Expressar o resultado como estimado.
Exemplo:
rea das placas: 56 cm2
Maior diluio inoculada: 10-3
Quadrado
Quadrado
Quadrado
Quadrado
1:
2:
3:
4:
7
7
6
8
colnias
colnias
colnias
colnias
Quadrado
Quadrado
Quadrado
Quadrado
5:
6:
7:
8:
6
8
8
8
colnias
colnias
colnias
colnias
Quadrado 9: 8 colnias
Quadrado 10: 6 colnias
Quadrado 11: 9 colnias
Quadrado 12: 7 colnias
R = Resultado
C = nmero de colnias contadas
c = nmero de colnias confirmadas
r = nmero de colnias repicadas
d = diluio utilizada
Exemplo:
Diluio 10-2 = 30 colnias contadas, das quais 20 eram tpicas e 10 atpicas.
Para confirmao, foram repicadas 5 colnias de cada tipo.
Quatro colnias tpicas e duas atpicas apresentaram resultado positivo nos testes
confirmativos.
Aplicando-se a frmula, teremos para colnias tpicas:
RT
RA
20 x 4 x 100 =
1.600
5
Aplicando-se a frmula, teremos para colnias atpicas:
10 x 2 x 100
5
400
O resultado final ser igual soma das colnias tpicas e atpicas confirmadas:
Resultado final = RT + RA = 1600 + 400 = 2000 = 2,0 x 103 UFC/g ou mL.
4.7.3 Quando for necessrio contar colnias tpicas e atpicas em placas de diferentes
diluies
Nunca somar colnias tpicas ou atpicas de diferentes diluies, pois colnias atpicas
em uma determinada diluio podero se apresentar tpicas em diluies subseqentes.
Submeter aos testes confirmativos, segundo a metodologia especfica para cada caso, 3 a 5
colnias tpicas e 3 a 5 colnias atpicas da diluio escolhida.
Calcular o nmero de UFC/g ou mL somente aps a confirmao de cada tipo (T e A) em
uma mesma diluio.
Exemplo:
Diluio 10-2 = 240 colnias contadas, das quais 50 eram tpicas e 190 atpicas.
Diluio 10-3 = 20 colnias tpicas e 5 atpicas.
Como na diluio 10-3 o nmero de colnias se encontra fora do intervalo de preciso e
repetibilidade, a diluio escolhida para confirmao foi 10-2. Destas, foram repicadas 5 colnias
tpicas e 5 colnias atpicas. Todas as colnias tpicas e 4 atpicas apresentaram resultado
positivo nos testes confirmativos.
10-2 RT
=
50x5x100
=
5000
5
Aplicando-se a frmula, teremos para colnias atpicas:
10-2 RA
=
190x4x100
=
15.200
5
Colnias confirmadas na diluio 10-2 = 20.200 colnias
Resultado final ser a soma do nmero de colnias confirmadas
Res final
5.000 + 15.200
na diluio escolhida:
5. BIBLIOGRAFIA CONSULTADA
BRASIL. Ministrio da Agricultura do Abastecimento e da Reforma Agrria. Secretaria de Defesa
Agropecuria. Departamento de Defesa Animal. Manual de mtodos microbiolgicos para alimentos.
Coordenao Geral de Laboratrio Animal. 1991/1992 2 reviso. 136p.
SWANSON, K.M.J.; PETRAN, R.L.; HANLIN,J.H. Culture methods for enumeration of
microorganisms In: Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods, 4. ed.
Washington DC. American Public Health Association. Frances Pouch Downes & Keith Ito (Eds.),
2001. p.53-62.