Curso de Ps-Graduao Lato Sensu em Biotecnologia

Biorremediao de Ambientes Terrestres e Aquticos

Microbiologia ambiental X Processos biotecnolgicos ambientais O que um processo biotecnolgico ambiental? Definio simples e tradicional: uso de microrganismos para degradar resduos Resolver problemas ambientais biotecnologia; ex: biossensores, nanotecnologia, etc atravs da biotratamentos,

Sociedade Internacional de Biotecnologia Ambiental (desde 1992). Duas linhas: (1) Biotecnologia microbiana para melhoria do meio ambiente (tratamentos de resduos e biorremediao) e (2) Engenharia qumica relacionada ao meio ambiente.

Tpicos atuais:

Uso de tcnicas moleculares para proteo do meio ambiente, incluindo anlise de risco de microrganismos geneticamente modificados (OGMs) Energia renovvel: engenharia gentica de plantas para produo de energia limpa, biocombustveis, biomassa, e animais para a produo de alimentos, etc.

Biotecnologia

Ambiental

integrao

muldidisciplinar das cincias e engenharia a fim de utilizar o grande potencial dos microrganismos, plantas e partes deles para a recuperao e preservao do meio ambiente e para o uso sustentvel das reservas.

Alguns entraves da biorremediao:

Tcnicas in vitro podem no funcionar em grande escala. Trabalhar bem no lab, com simulao, pode no funcionar no campo. Necessidade da aplicao da engenharia ambiental. Alternativamente, selecionar espcies adaptadas on site (espcies indgenas) para remediar um local semelhante. Alguns stios esto localmente contaminados, como resultado da produo, transporte, estocagem ou despejo de resduos. Estes locais tem diferentes caractersticas e requerimentos. Os compostos so persistentes ou recalcitrantes degradao microbiana.

BIORREMEDIAO Objetivo Estudar diferentes processos biolgicos para a remediao de solos contaminados e aquferos.

Conceitos: # Biodegradabilidade Processo natural de reduo das concentraes de poluentes e oxidao completa de alguns poluentes a CO2, H2O, NO3- e outros componentes inorgnicos que podem ser acomodados no meio ambiente.

# Biodegradao aerbica uso do O2 para oxidar matria orgnica # Biodegradao anaerbica - utilizao do nitrato, sulfato, metano ou outros aceptores de eltrons

# Mineralizao Transformar compostos txicos em substncias incuas como CO2 (ou outro gs) ou substncia inorgnica, gua e Biomassa. # Biorremediao Tecnologia que utiliza agentes biotecnolgicos, particularmente os microrganismos, para remover poluentes txicos do ambiente, principalmente do solo e da gua.

Sistemas de engenharia que utiliza microrganismos para degradar compostos qumicos orgnicos. Refere-se ao tratamento do solo e gua. * Biofiltrao (para contaminantes gasosos)

# Antropognico De ocorrncia no natural em determinado ambiente.

# Xenobitico Composto completamente sintetizado quimicamente, no ocorrendo naturalmente no meio ambiente.

# Recalcitrante Persistente, no biodegradvel.

Alguns compostos xenobiticos

Fatores relevantes nos processos de biodegradao (qumicos, fsicos e ambientais)

1) Toxicidade a humanos

1) A remediao tem importncia crucial devido s baixas concentraes permitidas na gua para fornecimento. * MCLs

Ref: 2004 TLVs and BEIs. American Conference of Governmental Industrial Hygienists. 2004. 206 p. Based on the documentation of the threshold limit values for chemical substances and physical agents & biological exposure indices

2) Estrutura molecular do contaminante e sua resistncia degradao A biodegradabilidade est relacionada solubilidade, grau de ramificao, grau de saturao e presena de substituintes. 3) Polaridade Compostos no polares tendem a ser hidrofbicos e a se concentrar na matria orgnica do solo.
* Partio * Mobilidade Hidrocarbonetos do petrleo so apolares e se concentram na fase slida Alguns contaminantes podem acumular em microporos (< 1 um) onde as bactria no podem colonizar

4) Solubilidade De similar significncia polaridade; mais diretamente relacionada disponibilidade dos compostos na fase aquosa * Relacionada com a disponibilidade na gua, permitindo a degradao microbiana

Composto orgnico
Alcanos Alcenos

Requerimento O2
Biodegradao aerbia Biodegradao aerbia

Comentrio
C5-C10 dissolvem membrana Alcenos com insaturao no incio da cadeia so mais facilmente degradados que aqueles com insaturao interna Ao das enzimas monoxigenases e dioxigenases

Cicloalcanos

Biodegradao aerbia Benzeno e tolueno podem ser degradados anaerobicamente, porm mais lentamente Biodegradao aerbia

Aromticos

Ao das enzimas monoxigenases e dioxigenases Ao das dioxigenases. O aumento no PM e nmero de anis diminui a solubilidadee aumenta a adsoro. A biodegradabilidade diminui com o aumento do nmero de anis e substituintes alquil. Quanto maior o no de substituintes halogenados na molcula, menos biodegradvel em sistemas aerbios Quanto maior o nmero de substituintes halogenados na molcula, maior a probabilidade de sofrer dehalogenizao redutiva em ambientes redutores

Hidrocarbonetos aromticos policclicos (PAHs)

Biodegradao aerbia

Compostos alifticos halogenados Compostos aromticos halogenados

Dehalogenizao anaerbia Biodegradao aerbia a qual diminui com o aumento dos halosusbtituintes Biodegradao anaerbia em alguns casos

Biodegradao do 2,4,5-T

Crescimento de Burkholderia (Pseudomonas) cepacea em 2,4,5-T. Liberao de Cl um indicativo da biodegradao. b) Via de degradao aerbica.

Papel das oxigenases no metabolismo de aromticos

5) Volatilidade

Obs: Compostos volteis tendem a passar para a fase gasosa, podendo ser removidos do solo e gua por ventilao.

* Compostos volteis so bastante mveis em solos insaturados.

6) Presena da cultura capaz de degradar o contaminante

Biodegradao intrnsica - quando existe microflora natural e condies necessrias para a biodegrao Bioaugmentao inoculao de bactrias degradadoras de um determinado poluente Ex: Phanerochaete DDT, TNT, benzopireno, polietileno Pseudomonas TCE Burkholderia (Pseudomonas) cepacia G4 - TCE

7) Provimento de nutrientes necessrios para o crescimento microbiano 8) Condies do meio ambiente apropriadas (O2, pH, aw, umidade, temperatura) Bioestimulao estimulao da populao indgena por meio do suprimento de nutrientes e/ou modificao dos fatores ambientes limitantes
Umidade tima para biorremediao: 150 a 250 g de gua por Kg de solo seco * Solubilidade do O2 = 9 mg/L a 20
o

C portanto alta umidade

(saturao dos poros) resulta em pobre disponibilidade de O2

Ex: O2 drenagem/injeo de ar/adio de H2O2 (100 mg/L)

O O2 fornecido pela adio de H2O2 0,47 g/g. A adio de H2O2 >100 mg/L resulta em condies txicas.

Ex: N e P hidrossolveis ou fertilizante oleoflico Acidente com Amoco Cadiz (Frana,1978) e Acidente com Exxon Valdez (1989, Alaska)

Inipol EAP 22 - microemulso contendo uria (N), lauril fosfato (P), cido oleico (C)

Bactrias oxidantes de hidrocarboneto em associao com gotas de leo. As bactrias esto concentradas em grande nmero na interface leo-gua, nunca no interior das gotas.

PRINCIPAIS FONTES DE CONTAMINAO DO SOLO E GUA Tanques subterrneos (UST) Aterros Lagoas de deposio de resduos

Schematic of plumes generated from small leaks in waste-disposal ponds and underground storage tanks

Contamination of soil and groundwater by leachate from a landfill

A EVOLUO DA BIORREMEDIAO
LAGOAS DE TRATAMENTO DE GUAS RESIDURIAS (municipais e industriais) TRATAMENTO DE RESDUOS SLIDOS
Bactrias do solo

2a metade Sec XIX

1a metade Sec XX

LODO ATIVADO TRICKLING FILTERS

2 metade Sec XX
a

BIORREMEDIAO DE SOLOS E AMBIENTES AQUTICOS BIOFILTRAO

Tcnicas de tratamento

Biorecuperao de reas contaminadas com tecnologias microbiolgicas Termos utilizados: In situ tratamento diretamente no local contaminado sem a remoo do solo e gua On site remoo do solo conaminado e tratamento ad hoc na rea contaminada Off site remoo e exportao do solo e/ou gua contaminada e tratamento em recipiente distante da rea contaminada

BIORREMEDIAO DE GUAS Mtodos: # In situ (Latin = no seu lugar original) A atividade dos microrganismos estimulada pela adio de O2 (injeo de ar ou H2O2) e soluo de nutrientes (injeo ou infiltrao) Dificuldades: distribuio O2 distribuio dos microrganismos dificuldade de isolamento dos contaminantes migrao dos poluentes.

Percolao A adio de nutrientes limitada a aquferos superficiais devido ao tempo requerido para alcanar a zona contaminada No se pode adicionar O2 por percolao

Tcnicas de fornecimento de ar:

injeo de ar no aqufero (in situ aquifer sparging IAS)

elevao da superfcie da gua (air lift) com circulao de gua aerada prxima ao sistema (in-well aeration IWA)

# Pump and treat

A gua bombeada at a superfcie, tratada e em seguida

retorna ao aqufero ou utilizada O processo utilizado semelhante ao tratamento de gua (lodo ativado, filtros de contato) No recupera a gua a padres para consumo

# Pump, treat and reinjection Combinao de biorremediao ex situ pump and treat com remediao in situ A injeo de nutrientes e O2 permite a biorremediao in situ

Taxa de bombeamento ser funo da: condutividade hidrulica do aqufero tamanho da zona de contaminao tempo de degradao coeficiente de distribuio do contaminante

Pump, treat and reinjection

Vantagens custo relativamente baixo controle de contaminantes no local transtornos mnimos no local no h interrupo das operaes comerciais e industriais Desvantagens possibilidade de espalhamento do contaminante dificuldade no processo de reinjeo dificuldade no controle de fluxo devido a no homogeneidade longos tempos de tratamento

BIORREMEDIAO DE SOLOS Mtodos: # In situ Requer fornecimento de O2 e nutrientes ou ainda inoculao com microrganismos Dificuldade com solo altamente porosos Em caso de contaminantes volteis tratamento ex situ do gs (ex: biofiltrao) Bioventilao para contaminantes menos volteis; mais econmico

Emisso de VOCs Resultado da degradao anaerbia de compostos Transformao de VOCs em compostos mais volteis (ex.: tricloroeteno em cloreto de vinila) ocorre em anarobiose Maioria dos processos de biodegradao so aerbios

Tratamento de VOCs Extrao de vapor do solo (SVE)

VOCs so removidos do solo atravs de presso negativa Sistemas para baixa profundidade (< 10 m) Raio de influncia 5 a 10 m Vcuo de 0,1 a 0,2 atm so tipicamente aplicados para uma extrao de 1 a 6 m3/min

Esquema do sistema SVE

Vantagens e desvantagens do SVE Excelente quando compostos volteis so os principais contaminantes Em casos de contaminantes biodegradveis (ex: H2S, NH3, VOCs do petrleo, estireno) biofiltrao Para compostos menos biodegradveis (ex: TCE, PCE, TCA) oxidao cataltica Para zonas profundas o custo torna-se proibitivo

Bioventilao Usado para o tratamento de contaminantes menos volteis (coeficiente da lei de Henry < 0,1) A degradao do contaminante ocorre no local, podendo ser tratados tambm ex situ Limitaes: falta de nutrientes, baixa umidade do solo, dificuldade de distribuir o fluxo de ar na zona contaminada

# Landfarming (ex situ)

Processo mais simples de biorremediao Envolve homogeneizao do solo, adio de nutrientes, microrganismos (em alguns casos), controle peridico da umidade (adio de gua) O resduo a ser tratado incorporado matriz do solo, incorporado em perodos regulares Ocorre oxidao fotoqumica em alguns casos 1900-1950 mtodo para tratamento de resduos indusrtriais na forma lquida, slida ou lodo. 1970 leis ambientais mais restringentes No mais se permitiu a volatilizao e lixiviao como mtodo de remoo de parte dos contaminantes

Landfarming (ex situ)

 Profundidade de escavao: crtica para a difuso do O2 e depende das propriedades do solo e quantidade a ser tratada Pode ser adicionada matria orgnica para aumentar porosidade e permeabilidade Tratamento em camadas para reas profundas. Aps o tratamento da camada superficial, essa removida (estocada temporariamente) seguido do tratamento das camadas mais profundas

15-61 cm *<30 cm

Controle do processo Landfarming

Inicia-se com testes de laboratrio: - C:N:P, pH, contagem microbiana - Difuso do O2 atravs do balano de massa - Capacidade de reteno de gua do solo: contedo de umidade aps saturao com H2O e drenagem natural aps 24h - Controle da temperatura: irrigao, adio de composto, capas (reduz emisso de compostos volteis) - pH (xido de clcio, hidrxido de clcio, clcio, carbonato de magnsio) -Oxignio: CaO2 carbonato de

Vantagens e desvantagens do Landfarming - Baixo custo de capital e operao - Requerimento de grandes reas - Longo tempo - Altas taxas de volatilizao

# Compostagem (ex situ) O material contaminado misturado com estrume e material inerte (cavacos de madeira, composto) e arranjado em pilhas ou leiras (3-4m largura X 1,2-1,5m altura) Utiliza-se agentes para dar volume aumentam porosidade e facilitam o fluxo de ar

Controle do processo Aerao, pH, temperatura e umidade Elevao da temperatura: aumenta a taxa de biodedegradao e aumenta a solubilidade e transferncia de massa 3 volumes de cavacos de madeira:1 volume de despejo reduzem umidade de 78 para 60% aerao satisfatria

Pilhas estticas: * Aerao passiva (resultante de gradientes trmicos entre o ar do ambiente e o ar dos poros) * Aerao positiva (injeo de ar) ou negativa (vcuo)

Diagrama esquemtico de uma pilha esttica aerada

O material empilhado sobre uma plataforma, provida de canos para drenagem (preveno de lixiviao) e aerao forada positiva (injeo de ar) ou negativa (vcuo)

Taxa de aerao de pilha esttica Taxa fixa. Ex: liga 6 min e desliga 18 min. Desvantagem de aerar demais no incio e pouco no perodo de maior atividade metablica Varivel. Inicia-se baixa, aumenta e depois reduz-se novamente. Necessita de monitoramento dia-a-dia. Aerao automatizada. Programa de computador regula o fluxo de aerao de acordo com as resposta de flutuao de temperatura.

Biopilhas para tratamento de aproximadamente 20.000 yd3 de solo contaminado com hidrocarbonetos de petrleo de tanques subterrneos

Vantagens e desvantagens da compostagem Baixo requerimento energtico Tempo de reteno menor do que os requeridos nos tratamentos in situ e landfarming, por ex, semanas em vez de meses Requer menores reas de terra Minimizam problemas de contaminao Mais barato que processos no biolgicos (por ex. incinerao) Requerem alto controle de umidade devido s altas temperaturas Requer controle de emisses

# Biorreatores (ex situ)

O solo contaminado transferido para um reator contendo gua, microrganismos, nutrientes, com adio de O2 e agitao contnua Maior controle do processo Controle de off-gases reciclagem, combusto, biofiltrao Alto custo Baixo tempo de tratamento Biorreatores comercialmente disponveis: 3-15 m dimetro x 4,5-7,6 m de profundidade Biorreatores in situ so construdos no local onde foi excavado o solo contaminado

Lquido: retornam ao reator ou seguem para planta de tratamento de gua

Etapas do tratamento do solo em um biorreator em sistema de batelada

Slidos: retornam ao solo

Pr-tratamento do solo
Fracionamento: separao de debris (material plstico,

madeira, etc) para reduo da quantidade de solo que dever ser tratado
* Partculas finas de solo absorvem mais os contaminantes Lavagem do solo: separao de partculas fina altamente

contaminadas das maiores menos contaminadas.

*Ocorre solubilizao dos contaminantes, tornando-se vivel somente
se 70% das partculas maiores sejam descontaminadas

Etapas do desenvolvimento de culturas para biorremediao em biorreatores

Etapa 1. Seleo de fontes microbianas Objetivo Encontrar grupos microbianos capazes de degradar os contaminantes alvos Selecionar as melhores espcies de microrganismos para uso futuro Design e desenvolvimento de parmetros operacionais Determinar limites de concentrao e operao Comentrio Mais que uma fonte deve ser usada. Solo ou lodo ativado devem sempre ser includos Mistura de espcies pode ser uma melhor escolha

2. Cultivo das culturas em laboratrio

3. Determinao de parmetros cinticos e estequiomtricos 4. Determinao de limites de toxicidade

Design de transferncia de O2 e adio de nutrientes

Toxicidade para os microrganismos um problema comum Em geral quanto maior a populao melhor o resultado

5. Crescimento de culturas densas

Prover microrganismos para o tratamento

Parmetros de controle da biorremediao em biorreatores

Oxignio dissolvido: mnimo 2 mg/L pH e temperatura: controlada no inverno severo Surfactantes: ajudam a desorver e contaminantes Ex: Tween 80, biosurfactantes solubilizar

VOCS: devido constante aerao e agitao, a liberao de VOCs desprezvel. Cobertura de reatores in situ questionvel devido ao custo