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I.

INTRODUO
Antes do desenvolvimento da tecnologia do DNA recombinante, a maioria de
protenas teraputicas de origem humana estavam disponveis em quantidades
muito limitadas, o custo de produo era elevado e muitas vezes o seu modo
de aco no foi bem caracterizado. Durante anos vm isolando urina, sangue
e outros tecidos (humanos e animais) com protenas teraputicas tradicionais
mtodos bioqumicos. Os tratamentos com as protenas de origem animal, que
diferem no que respeita s suas homlogas humanas podem provocar uma
resposta imune. Tecidos humanos so uma oferta insuficiente e, como o
sangue, tambm em risco de ser contaminado com microorganismos. No
tratamento de nanismo congnito com hormnio de crescimento ou
somatotropina obtido da hipfise de cadveres houve relatos de transmisso
da doena de Creutzfeldt-Jakob. Algo semelhante aconteceu em hemoflicos
infectados com o vrus ou vrus que causam hepatite HIV.
Atualmente, mais de 300 genes foram clonados que codificam protenas com
potencial uso teraputico humano. Grandes nmeros destas sequncias so
expressos em clulas hospedeiras e est actualmente a ser testados para o
tratamento de vrias doenas humanas. No entanto, eles devem ser de vrios
anos at que muitas destas protenas esto disponveis comercialmente como
produtos farmacuticos devem ser rigorosamente testados em animais e em
seres humanos, em seguida, antes de serem aprovados para uso geral. No
entanto, o incentivo monetrio para as empresas farmacuticas importante
porque estima-se que o mercado global anual para medicamentos humanos
tem cerca de 150 mil milhes de dlares (22,5 mil milhes de pesetas, 135
bilhes de euros) e em crescimento .
II. PRODUO insulina humana
A produo do hormnio insulina foi o primeiro e mais bem sucedido de
protenas recombinantes humanas para fins teraputicos utilizados
comercialmente. A insulina uma protena produzida no pncreas, que
essencial na regulao do metabolismo dos carboidratos no corpo. Dois tipos
de transportadores de glicose que so idnticas em 60% dos seus 500
aminocidos. Alguns encontram-se na membrana e o outro (mais frequente)
em vesculas intracelulares. A ligao da insulina aos seus receptores da ativa
(atravs de um mecanismo desconhecido que pode ser envolvido protena
quinase) exocitose de vesculas contendo transportadores de glicose
abundantes, resultando num aumento de 10 vezes no nmero de
transportadores na membrana plasma. Simultaneamente, todos os
transportadores de glucose encontrados na membrana plasmtica so
activados. O resultado que a quantidade de glucose que arrastado para a
clula aumentou de 10 para 20 vezes. Uma vez que a insulina perdida ou
removido, as regies da membrana do plasma rico em que o transportador de
glucose tipo mais abundante sofrer endocitose, assim estas desaparecem
transportadores de membrana. Simultaneamente, as operadoras que
permanecem na membrana so desativadas.

Diabetes, uma doena caracterizada por uma deficincia de insulina, que afeta
milhes de pessoas. O tratamento padro da diabetes so as injeces
peridicas ou a administrao oral de insulina. Uma vez que a maioria das
insulinas de mamferos so semelhantes em estrutura, possvel tratar a
diabetes utilizando insulina humana isolada a partir do pncreas de sunos e
que apenas difere do humano em um aminocido. No entanto, esta insulina
no humana, no to eficaz como o ser humano, e o processo de isolamento
caro e complexo.
A produo de hormonas tais como a insulina, num organismo geneticamente
modificado no to simples como a clonagem de um gene (cDNA) num
vector de expresso. Isto porque muitas destas hormonas so apenas
pequenos fragmentos dos polipptidos codificados pelo gene.
A insulina na forma activa que consiste em dois polipeptdeos (A e B) ligadas
por pontes de dissulfureto. Estes dois polipptidos so codificadas por partes
separadas de um nico gene de insulina. Este gene codifica para a pr-pr de
comprimento, polipptido contendo um pptido de sinal envolvida na excreo
de protena dos polipeptidos A e B da molcula de insulina activa e um
polipptido que os une e que est ausente da insulina madura. A proinsulina
formado a partir de pr-pr, e insulina proinsulina converso realizada por
enzimas que quebram a ligao que liga as cadeias polipeptdicas A e B.
A obteno de insulina humana em bactrias conseguido atravs da
produo de cadeias A e B em culturas de bactrias que so
subsequentemente separados quimicamente ligados para produzir insulina.
Como a insulina uma pequena protena revelou sequncias de ADN
sintetizadas quimicamente mais prticos que tentar isolar o gene da insulina de
tecido humano. A cadeia contm 63 bases e 90 bases B.
Quando os polinucleotdeos so sintetizados, foram adicionados cada
extremidade locais de ao das enzimas de restrio, a fim de ligar o
polinucleoteo em um vetor plasmdeo. Para a expresso eficaz de genes
inseridos sintetizados seguindo um promotor de E. coli, mas de tal modo que o
fragmento de insulina foi sintetizada como parte de uma protena de fuso.
Uma vantagem de a protena de fuso o produto de fuso mais estvel em
Escherichia coli sozinho insulina. Alm disso, um tripleto de codificao da
metionina foi inserido. A razo para isto que as quebras de brometo de
cianognio cadeias polipeptdicas especificamente nos resduos de metionina,
permitindo que uma vez para recuperar a insulina foi isolado de protena de
fuso das bactrias. A insulina no contm metionina, portanto, no afectado
por tratamento com brometo de cianognio. Finalmente, dois codes de
paragem so incorporados no final da sequncia.
Quando a insulina produzida atravs de pptidos A e B separadamente, cada
uma das protenas de fuso so isolados separadamente a partir da cultura
bacteriana correspondente e cadeias so libertadas por tratamento com
brometo de cianognio. Estas cadeias libertados so ligados entre si por meio
de tratamento qumico de formao de ligaes dissulfureto entre as cistenas.

O produto final, a insulina humana biossinttica, idntico em todos os


aspectos para a insulina de pncreas humano purificado.
III. PRODUO DE INTERFERO
Os interferes so substncias antivirais produzidas por muitas clulas animais
em resposta infeco por certos vrus. So protenas de baixo peso molecular
(ca 17.000 Da), que impedem a multiplicao viral nas clulas normais.
Os interferes foram descobertas quando os investigadores descobriram que
os animais infectados com o vrus produzida uma srie de pequenas protenas
que no ajudou a infeco progrida. Estas protenas foram chamadas de
interferes, devido sua capacidade para "interferir" com a replicao viral.
Ns identificamos trs tipos principais de interferon:
Interfero alfa produzido por clulas T
Interfero beta, produzido pelos fibroblastos
Interfero gama, o qual tambm produzido clulas T
Existem 13 tipos diferentes de interferons alfa interferons beta e 5 de um
nmero desconhecido de interferon gama. Os interferons so classificados de
acordo com sua estrutura qumica e origem, ao invs da funo
desempenhada, sobrepondo-se em trs grupos de interferons. Em geral, os
mais potentes agentes antivirais pertencem ao grupo de interfero gama.
As clulas que foram infectadas por um vrus em particular so estimuladas
para produzir e libertar molculas de interfero de fora, o que, por sua vez, so
recebidos por clulas no infectadas na vizinhana. Por conseguinte, estas
clulas no infectadas de sintetizar protenas antivirais (AVPs), que so as
enzimas que interferem com a sntese de protenas virais e reduzir a
disseminao da infeco. A maior parte dos tipos mais importantes de vrus
estimular a produo celular de interfero e o ARN de cadeia dupla, tanto
naturais como sintticas. Uma vez que o RNA de cadeia dupla existe apenas
em clulas infectadas com vrus de ARN, o ARN de cadeia dupla isto pode
funcionar como um sinal de infeco viral numa clula animal que activam o
sistema de produo de interfero.
Os interferes so produzidos por muitos tipos diferentes de vertebrados de
rpteis para os seres humanos. Cada interfero especfico do hospedeiro, ou
seja, que s protege contra a infeco para outros animais da mesma espcie.
No entanto, o interfero especfico do vrus, o que significa que cada
interferon ativo contra muitos vrus diferentes.

Cuando se descubrieron se esper que podran utilizarse para el tratamiento de


algunas de las enfermedades ms graves. Su efecto antivrico los converta en
posibles agentes para combatir las infecciones vricas y, por otro lado, la
capacidad que poseen de ralentizar la divisin celular los converta en posibles

agentes para el tratamiento del cncer. Sin embargo y debido a las enormes
dificultades para obtener grandes cantidades se retras su uso como agente
teraputico hasta que se desarrollaron las tcnicas de ingeniera gentica y fu
posible la produccin de grandes cantidades de interferones humanos
purificados. Desgraciadamente los resultados de la terapia con interfern no
fueron tan espectaculares como se esperaba. Los interferones demostraron ser
ineficaces frente a muchos tipos de cnceres y enfermedades de naturaleza
vrica; y, a pesar de que son agentes de origen natural, se pudo demostrar que
la terapia con interfern produca muchos efectos txicos.
En la actualidad, los interferones se utilizan en el tratamiento de determinados
tipos de leucemias y en el de algunas infecciones vricas de tipo crnico, entre
las que se incluyen la hepatitis crnica y el herpes.
A nivel de laboratorio, varios grupos estn trabajando en la obtencin de
interferones modificados mediante la combinacin de una porcin de un gen
del interfern alfa con una secuencia de DNA de un gen diferente del
interfern alfa para crear protenas hbridas que exhiban nuevas propiedades,
como por ejemplo propiedades diferentes a las que exhiben cada uno de los
genes ensamblados. En uno de estos estudios, se construyeron genes hbridos
del IFN2 y IFN3. Al comparar las secuencias de estos dos genes se
comprob que compartan los mismos sitios de restriccin en las posiciones
60, 92 y 150 (RE1, RE2, RE3). La digestin de ambos DNA en los sitios
comunes de restriccin y posterior unin de los fragmentos condujeron a la
formacin de un nmero de hbridos derivados de los genes originales de los
cuales se representan cuatro posibilidades en la figura. Estos hbridos se
expresaron en Escherichia coli y las protenas que se obtuvieron se purificaron
y se ensayaron para varias actividades biolgicas. Algunos de estos hbridos
posean mayor actividad antivrica que las molculas originales y otros tenan
una mayor actividad antiproliferativa frente a varios cnceres humanos.
La creacin de estos interferones hbridos demuestran que se pueden construir
nuevas molculas teraputicas mediante la combinacin de los dominios
funcionales de genes relacionados.

IV. PERSPECTIVAS FUTURAS


Desde que la empresa Eli-Lilly introdujera la insulina humana recombinante,
los frmacos sintetizados con esos procedimientos tcnicos han representado
una fraccin creciente del mercado farmacutico. En 1995 movieron 1,53
billones de pesetas, el triple que en 1990. Se estima que, a largo plazo, un 2025% del mercado farmacutico mundial se abastecer con estos
medicamentos. En 1996, en todo el mundo estaban autorizados 32 frmacos

con principios activos sintetizados mediante ingeniera gentica. Se estima


que en el ao 2002 ms de doscientas sustancias desarrolladas por las
pequeas empresas de biotecnologa habrn llegado a la ltima fase de ensayo
clnico y son de esperar nuevas sorpresas y frmacos novedosos.
En 1996 existan en Europa 716 empresas de biotecnologa y por otro lado
contina el proceso de concentracin de la industria farmacutica.