Roteiro. Novas Aplicações em Hematologia. Evolução Da Hematologia. Histórico. Histórico

Roteiro
Evoluo da Automao em Hematologia

Histrico
Prefeitura Municipal de Brusque
Tecnologia
Novas aplicaes
Novas aplicaes em Hematologia
Cenrios
Impacto da tecnologia na soluo de problemas

Validao da rotina
1 Simpsio Dr. Verner Willrich de

Medicina Laboratorial
Brusque, 23 de agosto de 2008
Principais causas de problemas nos resultados

automatizados
Otimizao de processos
Estudo de casos clnicos

Concluso
Histrico
Evoluo da Hematologia
Zacharias Jansen 1595
2 lentes num tubo
aumento 3 9 x
Antonie van Leeuwenhoek

(1632 -1723)
- lente feita mo, ajustvel
- aumento 70 - 266 x
Cmara de Burker
Histrico
Determinao precisa do dimetro do

eritrcito humano
Jurin - 1718
Pro
ced
i me
nto
sm
anu
ais
Diferenciao dos leuccitos

Paul Ehrlich
Caractersticas estruturais
Clulas granulares e agranulares
Caractersticas qumicas
Clulas granulares
Basoflicas
Acidoflicas
Neutroflicas
um ncleo
polimorfonuclear
Paul Ehrlich 1845-1915
At 1960
Linha do tempo
Valores calculados
at 1960
Procedimentos manuais
Contagem de leuccitos,
eritrcitos, dosagem de
hemoglobina e determinao
do hematcrito
Hgb x 3 = Hcto
RBC x 3 = Hgb
RBC x 9 = Hct
Clculo dos ndces

hematimtricos
Contagem diferencial de 100
clulas no microscpio
Contagem de Plaquetas pelo
mtodo de Fonio
Dcadas de 60 - 70
Incio da semi-automao da contagem de clulas
Princpio da Impedncia
2 parmetros em 10 minutos
At 1960
Determinao eltrica das

Con
aut tador
o m es s
ati
zad emi
os
Pro
ced
ime
nto
sm
anu
ais
eltrica
clulas sangneas
Aprimoramento dos
TOA CCCC-1001
equipamentos
Resultados mais rpidos,
Linha do tempo
Anos 70
menos trabalhosos, mais
CC-800
7 parmetros em
90 seg.
confiveis
Impedncia
Parmetros determinados por impedncia

Curva de distribui
distribuio das
hem
hemcias
Eritrcitos
Curva de distribui
distribuio das
plaquetas
Plaquetas
Lei de Ohm: V = R x I
Baseado na obstruo da passagem da corrente eltrica
O pulso gerado diretamente proporcional ao tamanho da
partcula
Curva de distribui
distribuio
leucocit
leucocitria
Leuccitos
Eritrcitos e Plaquetas
Discriminadores flutuantes
Histograma de plaquetas
100%
20%
PL
PU
Histograma de eritrcitos
100%
RBC
PLT
20%
12-30 fl 25-75 fl
2-6 fl
RU
RL
PL
PU
RBC
PLT
2-6 fl
200-250 fl
RU
RL
12-30 fl
RBC
PLT
200-250 fl
25-75 fl
Discriminadores flutuantes
100%
20%
PL
PU
100%
RBC
PLT
2-6 fl
RU
RL
12-30 fl
RBC
20%
PLT
25-75 fl
200-250 fl
Histograma de plaquetas e eritrcitos
Os histogramas propiciam
anlise visual das populaes
de clulas
PL
PU
PLT
2-6 fl
RU
RL
RBC
12-30 fl 25-75 fl
200-250 fl
Alteraes na distribuio
Dupla populao
eritrocitria
VCM: tamanho dos eritrcitos
Microcitose
Automao da contagem diferencial
Contagem diferencial de 3 partes
At 1960
Linfcitos
C on
ta g
em
de 3 difer
-pa enci
rtes al
Con
aut tador
o m es s
ati
zad emi
os
Pro
ced
ime
nto
sm
anu
ais
Impedncia
Anos 70
Neutrfilos
Mistas
Eosinfilos
Moncitos
Linha do tempo
Anos 80
Exemplos
Contagem diferencial de 3 partes

Princpio de Impedncia eltrica
Reativo lisante
Neutrofilia
Linfocitose
Histograma WBC
Histograma WBC
Resultados
WBC
LYM%
MXD%
NEUT%
Antes da reao: um nico leuccito e

trs eritrcitos
KX-21N
Basfilos
Depois da reao: o leuccito se

contrai e os trs eritrcitos so
completamente lisados
Diferencial
+ 23.8 x 109/L
8.1%
7.9%
84.0%
Diagnstico clnico: Neutrofilia
Resultados
8%
77 %
7%
7%
1%
0%
Band
Seg
Lymph
Mono
Eo
Baso
(x 400)
50
100
150
200
250
Diferencial
7.9 x 109/L
+ 64.7%
15.8%
19.5%
Band
Seg
Lymph
Mono
Eo
Baso
Aty-Lym
Diagnstico clnico: Linfocitose
Pico proeminente e distribuio mais larga (NEUT%)

na regio dos grandes leuccitos.
Nos casos de linfopenia, ocorrer uma curva similar
0
WBC
LYM%
MXD%
NEUT%
4
20
64
4
5
0
3
%
%
%
%
%
%
%
(x 1000)
Pico agudo na regio de linfcitos (LYM%).

Nos casos de neutropenia, ocorrer uma curva
similar
300
Exemplos
Monocitose
Avanando no processo de automao...
Eosinofilia
Histograma WBC
Histograma WBC
Hematcrito
WBC
LYM%
MXD%
NEUT%
Resultados
Diferencial
Resultados
F1 *
F2 *
7.7 x 109/L
13.2%
37.7%
49.1%
Stab
Seg
Lymph
Mono
Eo
Baso
Met
Aty-Lym
Diagnstico clnico: Monocitose
8%
37 %
17 %
35 %
1%
0%
1%
1%
(x 1000)
Moncitos, os maiores leuccitos do sangue normal, ficam

menores que os neutrfilos devido ao reativo lisante. No
histograma, eles se posicionam na regio das clulas de
tamanho mdio (MXD%).
WBC
LYM%
MXD%
NEUT%
Diferencial
4.3 x 109/L
18,3%
+ 62,2%
19.5%
Stab
Seg
Lymph
Mono
Eo
Baso
My
Met
Aty-Lym
Diagnstico clnico: Eosinofilia
1
19
20
9
47
1
1
1
1
%
%
%
%
%
%
%
%
%
(x 1000)
Deteco da altura de pulsos cumulativos

O hematcrito medido somando o volume de cada
clula que passa pela abertura
Volume constante
volume
constante
= Pulso gerado de eritr

eritrcitos
Eosinfilos e basfilos, so granulcitos como os neutrfilos, mas

ficam menores devido a sua contrao na presena do reativo lisante.
No histograma, eles se posicionam na regio das clulas de tamanho
mdio, junto com os moncitos.
Portanto, eosinofilia ou monocitose devem ser diferenciados
manualmente.
RDW
Curva de distribuio de eritrcitos
Dosagem de hemoglobina
Mtodo SLS-HGB
Reativo livre de cianeto
Atxico
Ecologicamente correto
Minimiza os interferentes
RDW-CV
Homem: 11,9 - 12,9%
Mulher: 11,6 - 14,7%
RDW-SD
Homem: 39,9 - 46,3 fL
Mulher: 36,9 - 50,2 fL
em amostras:
Com lipemia
Com leucocitose
Com protenas elevadas
Clculo dos ndices hematimtricos
Analisadores hematolgicos com

diferencial de 5-partes
At 1960
Anos 70
Anos 80
Con
ta g
em
d
de
5-p iferen
art
es cial
Co n
t ag
em
de 3 difer
-pa enci
rtes al
Concentrao de Hemoglobina Corpuscular Mdia

CHCM (g/dL) = HGB (g/dL)__
HCT (%)
Co n
au tador
tom es
ati sem
zad
i
os
Hemoglobina Corpuscular Mdia

HCM (pg) = HGB (g/dL)__
RBC (x 106/uL)
Pro
ced
i me
nto
sm
anu
ais
Volume Corpuscular Mdio

HCT (%)___
VCM (fL) =
RBC (x 106/uL)
Anos 90
Linha do tempo
Citometria de Fluxo Fluorescente

Sistema ptico de deteco
Diversas combinaes de tecnologias

Foto Multiplicador
(Fluorescncia)
Citometria de fluxo
Impedncia
Condutividade
Citoqumica
Laser
Espelho Dicr
Dicrico
Foto Multiplicador
(Luz desviada
lateralmente)
Laser Semicondutor
( = 633 nm)
nm)
Clula de Fluxo
Foto Diodo
(Luz desviada frontalmente)
Citometria de fluxo fluorescente

Anlise celular
Eosinfilo
Neutrfilo
Eosinfilo
Basfilo
Basfilo
Moncito
Linfcito
Moncito
Linfcito
2 tomos de nitrognio endocclicos produzem sinais de luz "brilhantes"
Amplificao da fluorescncia da ligao com os cidos nuclicos
Excitao e emisso do comprimento do onda com o uso de laser semicondutor
Fluorescncia: corante Polimetina

Sem corar
Neutrfilo
XE-2100 Plus/D e XT-1800/2000
Corante
fluorescente
Canal WBC/Baso
Luz dispersa
frontal
Volume celular
do de RNA/DNA)
(conte
Fluorescncia (conte
Canal DIFF
Luz dispersa lateral

Complexidade interna
Luz dispersa lateral (estrutura interna celular)
Canal WBC DIFF
Populaes anormais
XS-1000i
CBC + DIFF
Citometria de fluxo
fluorescente
Grfico de disperso do
Canal WBC DIFF
Posicionamento celular
para uma populao
normal
Moncitos
Linfcitos
Neutrfilos
Eosinfilos
Fantasmas
RBC
Basfilos
Limitaes da contagem diferencial manual
Reprodutibilidade das contagens

diferenciais
Quantas clulas
Estatstica
Com o que se est comparando
Como est o esfregao
Onde est se realizando a contagem
Qual o padro
Realidade
Esfregao sangneo
Neutrfilos
e Moncitos
Distribuio irregular das clulas
Qualidade da colorao
Limitaes da contagem manual
Rumke C.L. The statistical expected variability in differential

leucocyte counting en Kopke JA Differential Leucocyte Counting
CAP 1978
Bacus JW. The observer error in peripheral blood leucocyte
classification Am J Clin Path 1973, 59, 223-230
Talstad I, Problems in microscopic and automatic differentiation
of blood and cell suspensions Scand J Haematol, 1981, 26, 398406
Bentley S.A. Quality control and the differential leucocyte count.
Clin Lab Haemat, 1990, 12 Suppl 1, 101-109
Kopke JA, Dotson MA, Shifman MA, A critical evaluation of the
manual/visual differential leucocyte counting method Blood Cells,
1985, 11, 173- 186
Goossens W, Van Hove L, Verwilghen RL, Monocyte counting,
discrepancies in results obtained with differential automated
instruments , J Clin Pathol, 1991, 44, 224-227

Canal RET
Canal RET
Reticulcitos
Plaquetas
pticas
Canal NRBC
Canal DIFF
Contagem de Eritroblastos
Canal de contagem de eritroblastos
Corrige automaticamente as
contagens de leuccitos e
linfcitos
Estes parmetros ficam marcados
com smbolo &
Contagem de Plaquetas pticas
Canal de Reticulcitos e Plaquetas pticas

Canal RET
Reticulcitos
Volume
celular
Luz dispersa
frontal
Fluorescncia - Contedo de DNA/ RNA
Canal RET
Plaquetas
pticas
Alm disso tudo... Canal IMI
Alm disso tudo... Canal IMI
Corrente Direta e Radiofrequncia
Corrente Direta e Radiofrequncia
Radio frecuencia
Fa
nt
as
m
as
Granulocitos inmaturos
Blastos
Corriente directa
celular
Volume
Densidade
celular
Radio
frecuencia
Bandas
Fa
nt
as
m
as
Densidade celular
Plaquetas agregadas
Plaquetas agregadas
Bandas
Granulocitos
inmaturos
Blastos
Corriente directa
Volume celular
O que so novos parmetros?

Parmetros adicionais ao Hemograma
At 1960
Anos 70
Anos 80
No
vo
Aut s par
m
om
a etro
o to s e
tal
Con
ta g
em
d
de
5-p iferen
art
c
es ial
Con
t ag
em
de 3 difer
-pa enci
rtes al
Con
aut tador
o m es s
ati
zad emi
os
Pro
ce d
ime
nto
sm
anu
ais
Aprovados pelo FDA (Food and Drug Administration)
Anos 90
Anos 2000
at hoje
Realizados por um analisador hematolgico

Sem reagente adicional
Aplicao laboratorial ou clnica
Linha do
tempo
Expanso para novos parmetros

Contagem automatizada de granulcitos imaturos
IG % e #
Parmetros:
Contagem automatizada de Granulcitos Imaturos - IG
Contagem de Plaquetas Reticuladas IPF
Contedo de Hemoglobina dos Reticulcitos RET- He
Plataforma tecnolgica nica

Tecnologia de Citometria de Fluxo Fluorescente
Softwares especficos
Contagem automatizada de granulcitos imaturos
Contagem de granulcitos imaturos - IG
Software IG Master
Canal DIFF
Quantifica clulas imaturas da linhagem mielide

Mielcitos
Promielcitos
Fluorescncia
Conte
do de RNA/DNA
Conte
Metamielcitos
Luz dispersa lateral

Complexidade interna celular
Contagem diferencial de 6-partes
Contagem de granulcitos imaturos
4
6
1
2
3
5
Laboratorio clnico central do hospital da

Universidade de Kyoto
Aplicao laboratorial
Aplicao clnica
Impacto direto na rotina
A presena de granulcitos
imaturos no sangue um
indicador para o diagnstico
precoce de sepse
Diminuio de contagens manuais

Aumento da quantidade de amostras
liberadas automaticamente
Diminuio da digitao de resultados
Menor quantidade de erros
LABORATORY BOTTLENECK
Diminuio do tempo para liberao

de resultados
Immature Myeloid Cell Detection (IMI,

IG) as a Predictive Marker in Adult
Sepsis- Axel Nierhaus
Immature Granulocyte Measurement
Using the Sysmex XE-2100. Relationship
to Infection and Sepsis M. Ali AnsariLari, MD, PhD, thomas S. Kickler, MD,
and Michael J. Borowitz, MD, PhD
Referncias bibliogrficas
Evaluation of the diagnostic performance of the Sysmex XT-2000i

automated hematology analyser in the detection of immature
granulocytes - CENCI A M(Ospedale S. Agostino, Modena, Ita), MACONI
Contagem de plaquetas reticuladas

IPF % e #
M(Azienda Ospedaliera Arcispedale Santa Maria Nuova,Reggio Emilia, Ita),

CASOLARI B(Ospedale S. Agostino, Modena, Ita)
Inmature granulocytes, inmature myeloid cells and outcome in adult

severe sepsis and septic shock
Evaluation of the Automated Immature Granulocyte Count (IG) on
Sysmex XE-2100 Automated Haematology Analyser vs. Visual
Microscopy (NCCLS H20-A) - Th WEILAND, H.K., ALKMAN and H H EIHN
(Central Laboratory, Barmbek General Hospital, R-benkamp 148, D-22291,
Hamburg, Germany, Institute for Laboratory Medicine, Medical Microbiology and
Hospital Hygiene, LBK Hamburg, Stiegkamp 3, 22763 Hamburg, Germany and
Sysmex Europe GmbH, Norderstedt, Germany
Flow Cytometric Method for Enumeration and Classification of

Reactive Immature Granulocyte Populations - FUJIMOTO H(Sysmex Corp.,
Kobe, Jpn) SAKATA T(Sysmex Corp., Kobe, Jpn) HAMAGUCHI Y(Sysmex Corp., Kobe,
Jpn) SHIGA S(Kyoto Univ., Kyoto, Jpn) TOHYAMA K(Kyoto Univ., Kyoto, Jpn) ICHIYAMA
S(Kyoto Univ., Kyoto, Jpn) WANG F-S(Loma Linda Univ. School Of Medicine,
California) HOUWEN B(Loma Linda Univ. School Of Medicine, California)
10
Plaquetas reticuladas
Plaquetas Reticuladas
Medula ssea
Anlogas aos reticulcitos da srie eritroctica
Sangue
Perifrico
Ingraham e Coopersmith (1969): estudos em ces
Plaquetas jovens, recentemente liberadas

pela medula ssea, com contedo de RNA
citoplasmtico
RNA
Megacaricito
Imaturas
Maduras
New Methilene Blue + microscopia ptica
Determinao da Frao das Plaquetas

Imaturas - IPF
Plaquetas reticuladas
So mais densas e reativas que as plaquetas maduras *
Canal de reticulcitos
Contribuem na avaliao da supresso e consumo

plaquetrio **
O contedo de RNA nas plaquetas est correlacionado
com a atividade megacarioctica
Presentes em diferentes patologias
Volume celular
Refletem a velocidade de trombopoiese
IPF
* McCabe e col., 2004; Mohan e col., 2006

Fluorescncia
** Saxon e col., 1998
Exemplos de casos
Normal
Exemplos de casos
ITP/PREG
Prpura Trombocitopnica Idioptica
(PTI)
Platelet count
227 (x10 /L)
IPF 3.4%
Platelet count
IPF 53.8%
IPF
IPF
Platelets
Anemia Aplstica (AA)
74 (x10 /L)
Platelets
Abe e col., 2006
11
Contagem de plaquetas reticuladas

Aplica
Aplicao Cl
Clnica
Diferenciar as causas de trombocitopenia
Falha da medula ssea
Plaquetas reticuladas(%) baixas
Aumento da produo devido ao

consumo ou destruio
Plaquetas reticuladas(%) altas
Artigos sobre aplicaes das Plaquetas Reticuladas

Aumento de Plaquetas Reticuladas - PR(%) - em pacientes submetidos
dilise (Himmelfarb e col., 1997)
Aumento de Plaquetas Reticuladas - PR(%) - em pacientes com
Insuficincia Renal Crnica tratados com rHUEPO (Tssie e col., 1998)
Aumento de Plaquetas Reticuladas - PR(%) - nos acidentes vasculares
cardioemblicos (Nakamura e col., 2002)
Diminuio de Plaquetas Reticuladas - PR(%) - em pacientes com
LMA, AA e trombocitopenia induzida quimioterapia(Watanabe e col, 1997)
Aumento de Plaquetas Reticuladas - PR(%) - trombocitemia essencial
(Harrison e col., 1998)
Aumento de Plaquetas Reticuladas - PRs (%) - em pacientes com
hipertiroidismo (Stiegler e col., 1998)
Aumento significativo das Plaquetas Reticuladas - PR(#) - na crise
vaso oclusiva (CVO) nas Sndromes Falciformes (Noronha e col., 2007)
A Clinical Evaluation of High Fluorescent Platelet Fraction Percentage in Thrombocytopenia

Thomas S. Kickler, MD, Sinichiro Oguni, and Michael J. Borowitz, MD, PhD
Contedo de hemoglobina nos reticulcitos

RET-He
Contedo de Hemoglobina dos Reticulcitos

RET- He (pg)
Diagnstico da deficincia funcional de ferro

Estoques de ferro esto completos, mas o ferro no est
disponvel para ser usado na sntese de hemoglobina
Anemia de doena crnica
Reticulocyte hemoglobin equivalent (ret He) and assessment of iron-deficient states

C. Brugnara, B. Schiller, J. Moran
Reticulcitos no sangue perifrico
Contedo de Hemoglobina nos Reticulcitos

RET-He
Aplica
Aplicao Cl
Clnica
Estgio 1
(0,1%)
Estgio 2
(7%)
Estgio 3
(32%)
Estgio 4
(61%)
Reticulcitos so precursores dos eritrcitos
A presena de reticulcitos no sangue demonstra a

atividade eritropoitica da medula ssea
Reticulcitos com contedo de hemoglobina < 28 pg so

chamados de reticul
reticulcitos hipocrmicos
A presena de reticul
reticulcitos hipocrmicos no
sangue demonstra a deficincia na sntese de
hemoglobina na medula ssea
A diminuio do contedo de hemoglobina nos
reticulcitos est relacionada com a deficincia de
ferro
Boa correlao com a colorao de Azul da Prssia
da medula ssea
Quantidade real de ferro para a sntese de

hemoglobina na medula ssea
Deteco precoce do nvel da deficincia de ferro,
quando os marcadores bioqumicos podem sofrer
interferncia pelos quadros de infeco,
inflamao ou gravidez
Monitora a terapia com eritropoetina nos pacientes
com anemia crnica
Usado em testes anti-dopping nas olimpadas de Atenas
12
Referncias na literatura
Anlise automatizada da eritropoese
Thomas C, Thomas L: Biochemical markers and

hematologic indices in the diagnosis of funcional iron
deficiency - Clin. Chem. 2002,48:1066
Franck S, Linssen J, Messinger M, Thomas L:

Potential utility of RET-Y in the diagnosis of ironrestricted erythropoesis - Clin. Chem. 2004,50:1240
Primeira dimenso RBC maduros

RBC/ HCT/ VCM/ HCM/ CHCM
RBC3
Segunda dimenso Informa

Informao da
produ
produo de RBC
RET#
Frao imatura dos reticulcitos-IRF
Terceira dimenso Informa

Informao
funcional de RBC
Hinzmann R: Iron metabolism, iron deficiency and
RET-He
anaemia from diagnosis to treatment and

monitoring Sysmex Journ. Intern. 2003, 13:65
Contagem automatizada de leuccitos e

eritrcitos em lquidos corporais
E ainda tem mais...
Lquor - LCR
Fludos corporais
Peritonial
Pleural
Sinovial
pr-tratado con hialuronidase
Automao da preparao de lminas

SP-1000i
Temos que fazer contagem diferencial e

anlise morfolgica manual!!
Opes de identificao
Servio remoto
Micro amostras
SP-1000i
Fcil Operao
Confeco de lminas
otimizada
Pr-fix extra
13
Automao da confeco e colorao do

esfregao
Hematologia em
constante evoluo...
IM
LV
VO
N
SE
DE
TO
EN
L
O
CN
E
T
IC
G
e laboratrios
com grande volume
para laboratrios com

pequeno volume
Sistematizao: linhas de automao HST
Automao da microscopia
Morfologia Digital Automatizada
CellaVision
DM96/DM8
Evoluo da Automao:
alm da tecnologia, depende tambm de como
ela utilizada
Cenrios
14
Anos 80
Procedimentos
manuais ou semiautomatizados
Laboratrios convivendo
Pouca disponibilidade
de equipamentos
Predomnio de pacientes
Grande quantidade de
colaboradores
Pouca presso em custos
Bons tempos!!!
em relativa tranquilidade
particulares
Anos 90
Expanso da automao em
Hematologia
Cdigo de barras/
interfaciamento
Fomos luta!!!
Aumento da quantidade de
clientes assistidos por
planos de sade
Presso por diminuio de
Aprimoramento das
tecnologias
custos
Liberao automtica de
resultados
Aumento da produtividade
Aumento da
competitividade
Associao de laboratrios
Investimento em treinamento
Cenrio atual
Sistematizao
Portfolio abrangente
Novas tecnologias e
parmetros
Aumento da produtividade
Educao
Bons tempos!!! Que no voltam mais...
Necessidade de
diminuio de custos
Fuses e aquisies de
laboratrios
Disposio geogrfica
variada
Mercado dinmico e
altamente competitivo
15
Reviso dos paradigmas
Existem solues!!! melhores que essa...
Qualidade a qualquer custo
Qualidade a um custo adequado

Qualidade ao menor custo possvel
Empresas competentes
Inovar
Diminuir custos
Empresas
competentes
Laboratrios
Qualidade
Foco no cliente
Tecnologia
Conhecimento
Processos
otimizados
Validao da rotina
Impacto da utilizao da tecnologia

na soluo de problemas
Implementao adequada
Calibrado corretamente
Protocolo de testes
baseado em protocolos de orgos normatizadores
como o CLSI (Clinical and Laboratory Standards
Institute) - NCCLS (National Committee for Clinical
Laboratory Standards), CLIA (FDA), entre outros
www.nccls.org
www.clsi.org
www.fda.gov/cdrh/clia/
16
Validao da rotina
Controle de qualidade
Validao da rotina
Monitorizao da rotina
Controle comercial: alto, baixo e normal
Colaboradores capacitados e treinados
Grficos Levey-Jennings
Avaliao dos resultados
Controle Comercial
Programa de controle de qualidade

Sysmex-Streck KX-21N
Programa inter-laboratorial para os controles
comerciais de referncia
Os laboratrios recebem relatrios mensais com
comparaes entre os resultados do laboratrio e um
grupo de usurios do mesmo tipo de equipamento e
do mesmo lote de controles
Relatrio de fcil interpretao
Dados estatsticos
Grficos de Levey-Jennings
Sysmex Insight
Validao da rotina
Insight
Programa interlaboratorial de
avaliao da qualidade(CQ)
em tempo real
disponvel 24 horas por dia
Relatrio mensal do
comportamento do analisador
Mdias dos normais: XM
Reprodutibilidade
Relatrios completos e fceis

de interpretar
Grficos
Reportes numricos
17
Reprodutibilidade
Validao da rotina
Educao
Treinamento
Fornecimento de conhecimentos,
mtodos ou tcnicas com objetivos
isolados em busca de resultados breves
Lembrar que...
Um conhecimento dura por volta de 3 meses
Uma reciclagem vale 2 anos
Diferenciao
Educao
Pessoas
Visa o desenvolvimento, aperfeioamento

do homem para o seu crescimento, tanto
pessoal como profissional
EDUCAO
Validao da rotina

Conhecimento do equipamento
Anlise dos histogramas e dos
grficos de populaes leucocitrias

Sensibilidade dos alarmes

Sensibilidade = Liberao automtica
18
A tecnologia pode auxiliar na

soluo dos problemas?
Conhecimento do equipamento
Anlise dos histogramas e dos grficos de populaes
leucocitrias
Sensibilidade dos alarmes
Microscopia
Monitora a qualidade do resultado automatizado
Controle de Qualidade
Principais causas de problemas dos

resultados automatizados
Problemas de coleta e armazenamento

coagulao parcial
amostra diluda (cateter)
Contagens de plaquetas
excesso de anticoagulante EDTA

hemlise acentuada
agregao plaquetria
induzida pelo EDTA
aquecimento ou congelamento da amostra

sangue coletado h mais de 48 horas ou em
condies inadequadas de armazenamento
transporte
Agregados plaquetrios

Interferem na
contagem de
plaquetas
Vortex
agregao plaquetria induzida pelo EDTA
satelitismo plaquetrio
Coletar a amostra
em anticoagulante
citrato
Aquecer a 37C
19
Satelitismo plaquetrio
Interfere na
contagem de
plaquetas
Vortex
Coletar a
amostra em
anticoagulante
citrato
Interferem na
contagem global de
leuccitos e de
plaquetas
Avaliar quantidade e
impacto no resultado
Interferncias na Contagem de Plaquetas

por Impedncia
Fragmentos de RBC
Micrcitos

filamentos de fibrinas ou microcogulos
Aquecer a 37C
Filamentos de fibrina ou microcogulos
Falsamente aumentadas


filamentos de fibrinas ou microcogulos
interferncia de micrcitos, esquizcitos,
plaquetas gigantes e grumos de plaquetas
Contagem de Plaquetas pticas
Falsamente diminudas
Plaquetas Gigantes
Agregados Plaquetrios
20
Contagem de Plaquetas por Impedncia x

Plaquetas pticas obtidas por Fluorescncia
Macrotrombcitos VPM = 15
PLT-I = 68
Manual = 130
PLT-O =135
Referncia
Optical fluorescent platelet counting has reduced

manual review rate of flagged impedance platelet
counts from 29 % to less than 8%
Johns Hopkins Hospital
Micrcitos VCM = 52
PLT-I = 166
Manual = 252
PLT-O = 267
Esquizcitos VCM 71
PLT-I = 146
Manual = 41
PLT-O = 31

Trombocitose acentuada
Pode ultrapassar a

Contagens muito elevadas de plaquetas e
leuccitos
linearidade da contagem de
plaquetas
Diluir a amostra com diluente
do equipamento, calculando
diluio para valor
intermedirio dentro da
linearidade do equipamento
Linearidade de plaquetas:
0 at 5.000.000/mm
Leucocitose acentuada
Pode ultrapassar a
linearidade da contagem
global de leuccitos
Interfere na dosagem de
hemoglobina, devido
turbidez do plasma
Linearidade de leuccitos:
de 0 at 440.000/mm
Diluir a amostra com

diluente do equipamento,
calculando diluio para
valor aproximado de
100.000 leuccitos (ex:
500.000: diluir 1:5)

leuccitos
Aglutinao de eritrcitos por crioaglutininas
21
Crioaglutininas
Interferem na contagem
global de eritrcitos e nos
ndices hematimtricos
Aquecer por 15min. a
37C

leuccitos
Lipemia
Repassar a amostra
aquecida no equipamento
Aps aquecimento
Lipemia
Interfere no resultado de
hemoglobina e nos
ndices
hematimtricos
Substituir o plasma
cuidadosamente pelo
diluente do equipamento
ou por soluo fisiolgica

leuccitos
Lipemia
Presena de eritroblastos circulantes
Eritroblastos - NRBC
Eritroblastos (NRBC)
Histograma WBC
Interfere na contagem
global de leuccitos e na
diferencial de linfcitos
Resultados
WBC
LYM%
MXD%
NEUT%
WL*
WL*
WL
56.1 x 109/L
42.7%
-.---.---
(x 1000)
Caso: Eritroblastos Ortocromticos

NRBC = 1352/100 WBC
Esta uma amostra com eritroblastose. O vale entre a regio dos clulas lisadas (eritrcitos)
e a dos leuccitos pequenos invadiram os limites, o que gerou o alarme WL. A maioria dos
NRBC so contadas como leuccitos. A contagem global de leuccitos deve ser corrigida:
Contagem de WBC corrigida =
contagem de WBC x 100
(100 + contagem de NRBC *)
* Contagem de NRBC: quantidade de NRBC em 100 leuccitos
22
Contagem de eritroblastos no XE-2100
Otimizao de processos
Canal NRBC
Correo da contagem de
leuccitos e linfcitos
Corrige automaticamente as
contagens de leuccitos e
linfcitos
Estes parmetros ficam
marcados com smbolo &
Drain
Processos
Passos
envolvidos
Waste
Barrel
Advia #1
Advia #2
Waste
Barrel
Advia
Parts &
Tools
Reviso de processo
QC & QW
Exceptions
STA
Reagents
Avaliar fluxo de trabalho
Advia #3
Waste
Barrel
Trash
Advia
Reagents
DI H20
Drain
Hematology
Processing
Special
Flow
Heme
Trash
Trash
Heme
Samples
Hct
Fuge
Diff
Ves-Matic
20
Setup
Manuals
UA
Cups
Cyto
Fuge
Supplies
Body Fluid
Prep
Daily
Purple
Tubes
Trash
Microscopy
Shred
Trash
Trash
Trash
Sakura
Atlas
Blood Trash
Gases
Drain
Drain
ID
ID

Procurar alternativas
IPU
ID
Reviso de processo
Diagrama
Proposto
Cella
Vision
MOLIS
WAM
Ps-melhoria
IPU
XE-2100
IPU
XE-2100
DI H20
QC & QW
Exceptions
ID
Processos
XE-2100
SP-100
TS-1000
Sysmex HST-Expert Line
Sysmex
Reagents
Drain
Hematology
Processing
Special
Flow
Heme
Trash
Trash
Heme
Samples
Hct
Fuge
Diff
Ves-Matic
20
Setup
Manuals
UA
Cups
Cyto
Fuge
Supplies
Body Fluid
Prep
Trash
Microscopy
Shred
Trash
Trash
Trash
UF-100
Sakura
Blood Trash
Gases
23
Processos
Reviso de processo
Avaliar continuamente possibilidades de
melhoria
Processos
Processos
Reviso de processo

melhoria
Avaliar os passos de maior impacto
Retirar os passos desnecessrios
Casos clnicos
Reviso de processo
melhoria
Avaliar os passos de maior impacto
Retirar os passos desnecessrios
Viso global
Caso 1: Adulto, 61 anos, sexo masculino
Paciente com diagnstico de LMC Ph+

(Leucemia mielide crnica com cromossomo
Philadelphia positivo)
24
Microscopia
Durante o acompanhamento...
Presena de
escalonamento da
linhagem granuloctica
Aumento da contagem
de basfilos
Leucemia mielide aguda

LMA-M2
Microscopia
30% de blastos
Blastos grandes
Basofilia
citoplasmtica
Cromatina frouxa
Nuclolos
aparentes
Paciente com febre persistente, calafrios, dor

muscular, nusea e vmito
Ao exame clnico apresentava
hepatoesplenomegalia
25
Microscopia
Plasmodium falciparum
Eritrcitos intensamente
parasitados
Caso 3: Adolescente, 16 anos, sexo feminino
Caso 3: Adolescente, 16 anos, sexo feminino
Paciente com sintomas de febre baixa, fadiga,

dor de garganta, gnglios infartados
Microscopia
Mononucleose infecciosa
26
Canal DIFF
Parmetro de investigao - Other
Contagem diferencial de 7- partes
Alarme: linfcitos atpicos
Conte
do de RNA/DNA
Conte
Fluorescncia
Por que automatizar?
Concluso
Exame complexo
Hemograma
Grande quantidade de
parmetros
Informaes quantitativas e
qualitativas
Diferentes metodologias:
- Contagens globais, contagens diferencial e
absoluta de leuccitos, dosagem, medio de
volume do eritrcito, ndices e anlise ao
microscpio
Outros grandes motivos

Qualidade
Melhora a preciso e exatido
Aumenta confiabilidade dos
resultados
Reduz o erro humano
Melhora a documentao
Produtividade
Reduz o T.A.T.
27
Outros grandes motivos
Mensagem final
Eficincia
Reduz necessidade de recursos
Reduz repeties
Segurana
Reduz contato com material
biolgico
L.E.R.
Nunca ande pelo caminho traado, pois ele

conduz somente at onde os outros foram
Alexander Graham Bell
Aperfeioamento
Atualizao profissional
Muito Obrigada
consultoria@sysmex.com.br
28

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Parmetros determinados por impedncia

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VCM: tamanho dos eritrcitos

Automao da contagem diferencial

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Contagem diferencial de 3 partes

Contagem diferencial de 3 partes

Antes da reao: um nico leuccito e

Depois da reao: o leuccito se

Diagnstico clnico: Neutrofilia

Diagnstico clnico: Linfocitose

Pico proeminente e distribuio mais larga (NEUT%)

Pico agudo na regio de linfcitos (LYM%).

Avanando no processo de automao...

Diagnstico clnico: Monocitose

Moncitos, os maiores leuccitos do sangue normal, ficam

Diagnstico clnico: Eosinofilia

Deteco da altura de pulsos cumulativos

= Pulso gerado de eritr

Eosinfilos e basfilos, so granulcitos como os neutrfilos, mas

Avanando no processo de automao...

Avanando no processo de automao...

Clculo dos ndices hematimtricos

Evoluo da Automao em Hematologia

Analisadores hematolgicos com

Concentrao de Hemoglobina Corpuscular Mdia

Hemoglobina Corpuscular Mdia

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Citometria de Fluxo Fluorescente

Diversas combinaes de tecnologias

Citometria de fluxo fluorescente

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Rumke C.L. The statistical expected variability in differential

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Citometria de fluxo fluorescente

Canal de contagem de eritroblastos