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CADERNO DE LABORATÓRIO
DE CROMATOGRAFIA
Prof. Alexandre Schuler
JULGO:_________________
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Prof. Alexandre Ricardo Pereira Schuler
SUMÁRIO
Prática No 10 - Estudo do Efeito da Polaridade da Fase Móvel sobre a Separação – Gradiente de Polaridade.
INTRODUÇÃO
Antes de realizar os trabalhos constantes desta relação, o estudante certamente necessita saber operar
o cromatógrafo. Para tanto, é apresentada abaixo uma seqüência lógica (comentada) para ligar o equipamento:
6. Ligar o Integrador/Microcomputador.
7. Ligar o Sistema de Detecção:
1. Desligar o Integrador/Microcomputador.
2. Desligar a Corrente e o módulo eletrônico do Detector de Condutividade Térmica ou o Amplificador Eletrométrico do
Detector de Ionização de Chama.
3. Apagar a chama do Detector de Ionização por Chama, colocando a Válvula de Reversão na posição "para fora".
4. Fechar as válvulas de passagem dos gases auxiliares.
5. Desligar o aquecimento do Forno das Colunas.
6. Fechar a válvula de passagem da Fase Móvel, quando a temperatura do Forno estiver abaixo de 50oC.
7. Desligar o aquecimento do Detector e do Vaporizador.
8. Desligar a Chave Geral.
9. Desligar o Estabilizador.
10. Fechar as Válvulas dos cilindros dos gases.
TRABALHO PRÁTICO No 1
Objetivo: Avaliação do efeito da vazão da fase móvel sobre a eficiência de uma coluna.
o
Modelo do Cromatógrafo: Temperatura do Forno: C
2 o
Pressão de Trabalho: psi bar kgf/cm Temperatura do Detector: C
o
Tipo de Detector: Temperatura Vaporizador/Injetor: C
Coluna: Fase Móvel:
Procedimento: Injetar três vezes a mesma solução (Padrão de teste) em cada vazão. Calcular os valores médios de n para cada
componente da solução e a resolução (Rs) média das três injeções. Interpretar os resultados.
a) Componente A:
b) Componente B:
Equações:
D
2
2(t r (B) − t r (A) )
n = 16 r Rs =
L (L(A) + L (B) )
Conclusões: ___________________________________________________________________________________________
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Data: / /
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TRABALHO PRÁTICO No 2
Parâmetros:
Número de pratos efetivos (Nef), fator capacidade (k), retenção relativa (RR), seletividade (α) e fator de assimetria (TF).
Equações:
tr − to t r (B) t'r (B) t'
2
BC
'
t = tr − to
r
k' = RR = α= n ef = 16 r TF =
to t r (A) t'r (A) L AB
Conclusões: ___________________________________________________________________________________________
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Data: / /
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TRABALHO PRÁTICO No 3
Padrões disponíveis:
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Dados Experimentais:
Coluna 1: _______________________________________________________________
Coluna 2: _______________________________________________________________
Conclusões: ___________________________________________________________________________________________
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Data: / /
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TRABALHO PRÁTICO No 4
Dados do Padrão:
TOTAIS
Equações:
C pi A ci
Fi = Área corrigida = A ci = A i × Fi Ca (i) = × 100
A pi A ci
Data: / /
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TRABALHO PRÁTICO No 5
Objetivo: Avaliação do erro de injeção, do erro de medição de área (integração) e do erro de identificação.
o
Modelo do Cromatógrafo: Temperatura do forno: C
2
Pressão de Trabalho: psi bar kgf/cm Fase Móvel: Vazão: mL/min
o
Tipo de Detector: Temperatura do Vaporizador/ Injetor: C
Coluna: Amostra:
Dados obtidos:
Cálculos:
Injeção No Pesagem Triangulação Meia-Altura Altura Medição do Volume (1) Tempo de retenção
01
02
03
04
05
MÉDIA
ERRO % (2)
(1) Considere desprezível o erro do integrador. Nesse caso, a variação na área medida por ele é provocada exclusivamente pela
medição do volume. Nos demais casos, o erro calculado é global (medição de volume + integração).
(2) Aplicar a relação ε = 100 x (VALOR MAIOR – VALOR MENOR) / (2 x Média Aritmética)
Conclusões: ___________________________________________________________________________________________
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Data: / /
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TRABALHO PRÁTICO No 6
Dados do Padrão:
COMPONENTE CONC. ÁREA FATOR
Padrão Interno
Componente 1
Componente 2
Dados da Amostra:
Primeira Injeção
COMPONENTE ÁREA ÁREA CORRIGIDA A ppi / A api
Padrão Interno
Componente 1
Componente 2
Segunda Injeção
COMPONENTE ÁREA ÁREA CORRIGIDA A ppi / A api
Padrão Interno
Componente 1
Componente 2
Terceira Injeção
COMPONENTE ÁREA ÁREA CORRIGIDA A ppi / A api
Padrão Interno
Componente 1
Componente 2
Conclusões: ___________________________________________________________________________________________
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Data: / / __________________________
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TRABALHO PRÁTICO No 7
Metodologia: Preparar a solução padrão em 6 diferentes concentrações, variando de 0,01 % até 20 %, injetando em duplicata
um volume de 5 µL, se for uma coluna empacotada ou 2 µL, se for uma coluna capilar/megabore. Construir um Gráfico
concentração X área. Determinar o ponto, correspondente à maior massa, (limite superior da FLD), em que ainda é possível
identificar uma correlação linear (por eliminação sucessiva de pontos).
Conclusões: ___________________________________________________________________________________________
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Data: / /
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TRABALHO PRÁTICO No 8
Metodologia: Injetar a solução mais diluída da prática no 7 em triplicata e determinar a altura média (hP). Anotar a atenuação
utilizada no cromatógrafo (atpc) e no integrador (atpi). Diminuir a atenuação até observar um ruído com pelo menos 3 mm de
altura média (hR). Anotar a atenuação utilizada no cromatógrafo (atRc) e no integrador (atRi). O LD é uma concentração que
corresponde a uma altura de pico equivalente ao dobro da altura média do ruído e o LQ corresponde a uma altura dez vezes
maior que a do ruído. Portanto,
Conclusão: ___________________________________________________________________________
Data: / /
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TRABALHO PRÁTICO No 9
Dados da amostra:
2. Propor uma Programação de Temperatura que resolva totalmente a amostra no menor espaço de tempo.
Conclusão: ___________________________________________________________________________
Data: / /
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TRABALHO PRÁTICO No 10
Objetivo: Estudo do Efeito da Polaridade da Fase Móvel sobre a Separação – Gradiente de Polaridade
Injetar a amostra com fases móveis de diferentes polaridades, anotando os tempos de retenção e calculando os valores de
Retenção Relativa (RR):
RR = tri / tr1
tri RR
# Fase Móvel
Subst1 Subst2 Subst3 Subst4 Subst5 RR1 RR2 RR3 RR4 RR5
1 A 1
2 B 1
3 C 1
4 D 1
A = 20% Acetonitrila + 80% Água;
B = 40% Acetonitrila + 60% Água;
C = 60% Acetonitrila + 40% Água;
D = 80% Acetonitrila + 20% Água.
Conclusão: ___________________________________________________________________________
Data: / /
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