As fábricas celulares microbianas Bio Med Central

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enzimas e potenciais de utilização de termófilos e termoestáveis ​em

biorefinação
Pernilla Turner, Gashaw Mamo e Eva Nordberg Karlsson *

Endereço: Dept Biotecnologia, Centro de Química e Engenharia Química, Universidade de Lund, PO Box 124, SE-221 00 Lund, Suécia Email: Pernilla Turner - pernilla.turner@biotek.lu.se ;

Gashaw Mamo - gashaw.mamo@biotek.lu.se ; Eva Nordberg Karlsson * - eva.nordberg_karlsson@biotek.lu.se

* autor correspondente

Publicação: 15 de março de 2007 Recebidos: 04 de janeiro de 2007

Aceito: 15 março de 2007
As fábricas celulares microbianas 2007, 6: 9 doi: 10.1186 / 1475-2859-6-9

Este artigo é disponível a partir de: http://www.microbialcellfactories.com/content/6/1/9 © 2007 Turner et

ai; licenciado BioMed Central Ltd.

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reprodução em qualquer meio, desde o trabalho original, devidamente citada.

Abstrato
No mundo de hoje, há uma tendência crescente para o uso de biomassa renovável, barato e facilmente disponível na produção de
uma grande variedade de química fina e de massa em diferentes biorrefinarias. Biorefinarias utilizar as actividades de células
microbianas e as suas enzimas para converter a biomassa em produtos alvo. Muitos destes processos requerem enzimas que são
operacionalmente estável a alta temperatura permitindo assim por exemplo fácil de mistura, uma melhor solubilidade do substrato, a
taxa elevada de transferência de massa, e o risco reduzido de contaminação. Termófilos foram frequentemente proposta como
fontes de enzimas termoestáveis ​industrialmente relevantes. Aqui nós discutimos as aplicações existentes e potenciais de termófilos
e enzimas termoestáveis ​com foco na conversão de carboidratos contendo matérias-primas. A sua importância em biorefinarias é
explicada através de exemplos de conversões de lignocelulose e de amido para produtos desejados. Estratégias que melhoram
thermostablity de enzimas tanto na Vivo e em vitro também são avaliadas. Além disso, esta revisão trata a esforços no
desenvolvimento de vetores para expressar enzimas recombinantes em hospedeiros termófilas.

fundo aceitação geral. A maioria das bactérias termófilas caracterizadas hoje

enzimas termoestáveis ​e microorganismos têm sido temas de muita
pesquisa durante as últimas duas décadas, mas o interesse em termófilos e
como suas proteínas são capazes de funcionar a temperaturas elevadas,
na verdade começou tão cedo quanto em 1960 pelo trabalho pioneiro de
Brock e seus colegas [ 1]. Os microrganismos são, com base nas suas
temperaturas de crescimento timas, divididos em três grupos principais, ou
seja psicrófilos (abaixo de 20 ° C), mesófilos (temperaturas moderadas), e
termófilos (temperaturas elevadas, superiores a 55 ° C) [2]. Apenas alguns
eucariotas são conhecidos a crescer acima desta temperatura, mas alguns
fungos crescem no intervalo de temperatura 50 - 55 ° C [3]. Vários anos
atrás Kristjansson e Stetter [4], sugeriu uma divisão adicional das termófilos
e um limite hipertermilo (crescimento a e acima de 80 ° C) que tem hoje
alcançada
crescem abaixo do limite hiperterm�ila (com algumas exceções, como Thermotoga
e Aquifex
[5]), enquanto espécies hipertermofílicos são dominados pela Archaea.
Use e o desenvolvimento de técnicas de biologia molecular, permitindo a análise
genética e de transferência de genes para a produção recombinante, levaram a
um aumento da dramaticamente actividades no campo de enzimas termoestáveis
​durante a década de 1990. Isto também estimulou o isolamento de um número de
micróbios a partir de ambientes térmicos a fim de aceder a enzimas que poderiam
aumentar significativamente a janela para as operações de bioprocessamento
enzimáticas. Um dos exemplos comercializados bem sucedidas iniciais era
utilização analítica de uma enzima termoestável, Taq- polimerase, em cadeia da
polimerase

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reacções (PCR) para amplificação de DNA, e um número de outras enzimas de
ADN modificando a partir de fontes termófilas já, desde então, foi comercializado
nesta área [6-8]. Outra área de interesse tem sido a prospecção de enzimas
industriais para utilização em produtos técnicos e processos, muitas vezes em
uma escala muito grande. As enzimas podem ser vantajoso como catalisadores
industriais, eles raramente requerem iões metálicos tóxicos para a
funcionalidade, criando assim a possibilidade de utilizar mais ambientalmente
amigável processamento [9]. enzimas termoestáveis ​oferecer alternativas de
catalisador sólidas, capazes de suportar as condições, muitas vezes
relativamente severas do processamento industrial.
Conversão de biomassa em açúcares para por exemplo utilização de energia foi
um tema de preocupação cerca de 30 anos atrás. interesse renovado em
conversões biocatal�icas surgiu recentemente, com a crescente preocupação
sobre a instabilidade e possível esgotamento dos recursos petrolíferos fósseis,
bem como a crescente preocupação ambiental, eo foco é novamente colocado em
biorefinação, eo conceito de biorrefinaria. Em biorefinação, recursos renováveis,
tais como culturas agrícolas ou de madeira são utilizados para a extracção de
produtos intermédios ou para bioconversão directa em produtos químicos,
produtos de base e combustíveis [10,11]. enzimas termoestáveis ​tem uma
vantagem óbvia, como catalisadores nestes processos, como elevadas
temperaturas, muitas vezes promover uma melhor penetração da enzima e da
parede celular desorganização das matérias-primas [12]. Pelo desenvolvimento
paralelo em biologia molecular, novo e enzimas estáveis ​desenvolvidos também
têm uma boa possibilidade de ser produzido em níveis adequados. Esta revisão
discute o potencial e possibilidades de enzimas termoestáveis, desenvolvidos ou
isoladas a partir de termófilos, incluindo exemplos em que células inteiras são
considerados, em bioconversões de matérias-primas renováveis ​com uma
perspectiva biorefinação. Exemplos de enzimas termoestáveis ​comerciais que
actuam em matérias-primas renováveis ​será ilustrada.
Estabilidade e desenvolvimento de enzimas termoestáveis
Em aplicações industriais com termófilos e enzimas termoestáveis, enzimas
isoladas são hoje domina sobre microorganismos. Uma enzima ou uma proteína
é chamado termoestável quando uma alta definido desdobramento (transição)
temperatura (T m), ou uma meia-vida longa, a uma temperatura elevada
seleccionado, é observada. A temperatura elevada deve ser uma temperatura
acima do limite thermophile para o crescimento [> 55 ° C]. A maioria, mas não
todas as proteínas de thermophiles são termoestáveis. enzimas extracelulares
mostram geralmente elevada termoestabilidade, uma vez que não pode ser
estabilizado por factores específicos de células, como solutos compatíveis [13].
Além disso, algumas enzimas termoestáveis ​também têm sido identificadas a
partir de organismos de crescimento a temperaturas mais baixas (ver, por
exemplo B. licheniformis amilase abaixo). razões fundamentais para escolher
enzimas termoestáveis ​em bioprocessamento é, claro, a termoestabilidade
intrínseca, o que implica possi-
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lidades de conservação prolongada (à temperatura ambiente), o aumento da
tolerância a solventes orgânicos [14], a redução do risco de contaminação, bem
como perdas de actividade baixa durante o processamento (quando ficam abaixo
da T m da enzima), mesmo a temperaturas elevadas, muitas vezes utilizados em
matérias-primas pré-tratamentos.
Descoberta e utilização de enzimas termostáveis, em combinação com a
produção e desenvolvimento recombinante usando tecnologias evolução dirigidos
ao sítio e enzima, ter apagado alguns dos primeiros dificulta identificados ( por
exemplo acesso limitado e a especificidade do substrato) para uso em biocatálise
industrial. Hoje, um número de empresas de biotecnologia são continuamente
prospecção de novos, e adaptando enzimas existentes para reações de maiores
volumes e condições de processo mais graves [15]. Enzima prospecção
frequentemente incide sobre a recuperação do gene directamente a partir da
natureza por técnicas de sondagem moleculares, seguindo-se a produção
recombinante num hospedeiro seleccionado. A disponibilidade de genes que
codificam enzimas estáveis, e conhecimento de características estruturais nas
enzimas, também podem ser utilizados no desenvolvimento molecular para
melhoria da enzima (Tabela 1).
Em vitro estratégias de evolução pode utilizar genes que codificam proteínas
termoestáveis ​como andaimes estáveis. Quando o desenvolvimento de
andaimes de enzimas termoestáveis, o material de partida é uma coluna
vertebral já estável, criando, assim, uma boa possibilidade de evolução para
optimizar a função em condições seleccionadas para a actividade. Um exemplo
em que este tipo de desenvolvimento tem sido utilizado é a diversificação da
especificidade de ligação de um módulo de ligação de hidratos de carbono,
CBM4-2 proveniente de uma xilanase obtida a partir da bactéria termófila Rhodothermus
marinus [ 30]. módulos de ligação de carboidratos permitem o reconhecimento
polissacarídeo aperfeiçoá-lo [31] e têm potencial como afinidade lida em
diferentes tipos de aplicações, como recentemente revisto por Volkov e colegas
de trabalho [32]. Usando CBM4-2, que tem tanto de alta estabilidade térmica e
boa produtividade em E. coli
sistemas de expressão, uma proteína estável ao calor único poderia ser desenvolvido
com especificidade para diferentes polímeros de hidratos de carbono [27], bem como
no sentido de uma glicoproteína [33], que mostra o potencial de biologia molecular
para o desenvolvimento de especificidade selectiva de uma única proteína com
propriedades desejáveis ​globais.
Em vitro estratégias de evolução são mais comumente usado para aumentar a
estabilidade (Tabela 1), muitas vezes, usando genes que codificam para enzimas
não termoestáveis ​com actividades desejadas, para o desenvolvimento de uma
melhor estabilidade térmica, e usando a temperatura do ensaio de rastreio como
uma pressão de selecção [3436]. Isso poderia, por exemplo, incluir o
desenvolvimento de celobiohidrolases termoestáveis, que são incomuns entre os
termófilos, mas benéfico para conversões de lignocelulose. Além disso, estas
estratégias podem ser utilizadas para optimizar a estabilidade no interior da célula
hospedeira durante recombinante
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Tabela 1: Uma visão geral das características sugeridas para termoestabilidade interno, seleccionado a partir de estudos estruturais de homólogos, juntamente com algum desenvolvimento
abordagens para introduzir termoestabilidade, e desenvolvimento de proteínas termoestáveis.
características propostas para a estabilização interna em
proteínas termoestáveis
estabilização Helix
Estabilizar interacções na proteína dobrada
Estabilizar interacções entre os domínios / subunidades formação de oligómero através por exemplo redes de par de iões
embalagem densa
aminoácidos expostos à superfície estáveis
Abordagens para introduzir termoestabilidade
interno em proteínas mesófilos
A redução de comprimento ou estabilizador laços superficiais e voltas
Introduzir interacções de estabilização
tela de atividade da biblioteca diversificada à temperatura desejada
Abordagens para desenvolver proteínas termoestáveis
especificidade diversificando
Melhorar a actividade a valores de pH seleccionados
Ampliando gama de temperaturas para a actividade através da
introdução de flexibilidade na região do local activo
Substituição de aminoácidos expostos à superfície para conseguir a
estabilidade a longo prazo
expressão [37]. Alternativamente, a identificação de características em
thermostabilising enzimas estáveis ​pode ser utilizada para manipular a
estabilidade em enzimas menos estáveis, usando mutagénese sitedirected
(Tabela 1). Adaptações de biomoléculas em condições extremas envolve
um compromisso de estabilidade e flexibilidade, a fim de optimizar o estado
funcional de proteínas, em vez de para maximizar a estabilidade [38,39]. A
energia livre de estabilização ( Δ G N → VOCÊ) de proteínas globulares
independentes de origem mesófilos é marginal (na gama de 30-65 kJ / mol),
que corresponde a algumas interacções fracas, e a diferença entre uma
proteína termoestável e uma proteína de origem mesófilos ( ΔΔ G N → VOCÊ),
corresponde a apenas algumas interacções adicionais. Além disso, apesar
de vários estudos estatísticos de sequências primárias, não há estratégias
gerais em termos de preferido
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Fatores contribuintes Referências
Baixa frequência de C β- aminoácidos ramificados ( por exemplo Val, Ile, Thr). aminoácidos específicos em extremidades [16, 17]
helicoidais ( por exemplo Pró)
pontes de dissulfeto; As ligações de hidrogénio; [18-24]
interacções hidrófobas; interacções aromáticos; redes
de par iónico (resíduos carregados); Encaixe de
extremidades soltas
[17, 19, 25]
Aumentar hydrophobicit núcleo ;, preencher cavidades. [19]
Não é um recurso geralmente aplicáveis ​como mostrado por Karshikoff & Ladenstein [21]
Baixo nível de aminoácidos de superfície propensas a desamidao ( por exemplo Gln, Asn) ou a degradação [17, 24]
oxidativa ( por exemplo Cys, Met)
metodologia de engenharia
local com base na estrutura de mutagénese dirigida. [17, 24]
relatados resultados promissores para: deleções Loop;
Prolina-estabilização de malhas; Docking de pontas soltas.
local com base na estrutura de mutagénese dirigida. Sucesso relatado para a introdução de íon-pares, pontes [17, 24]
dissulfeto, enquanto a embalagem núcleo e estabilização hélice geralmente não resultam em ganho de alta
estabilidade.
evolução dirigida e outros métodos aleatórios utilizado com sucesso em vários casos [24, 26]
(Estrutura-base) directed evolution por por exemplo oligonucleotídeo randomização na região sítio ativo, utilizado [27]
com sucesso
evolução dirigida [28]
(Estrutura-base) directed evolution [29]
Patente por Diversa. Pode ser feito por exemplo por randomização oligonucleótido na região do sítio activo.
Mutagénese de saturação em posições seleccionadas também utilizado.
Dirigida ao local ou mutagénese de saturação em posições seleccionadas para reduzir Gln, Asn, Cys, Met, sugeriu [16, 17]
trocas de aminoácidos são para ser esperado [38-43], e muito pequenas
alterações 3D-estrutural pode, por conseguinte, ser suficiente para lidar com as
várias condições extremas [38,42]. Para identificar racionalmente o tipo de
interacções de estabilização utilizados, vários estudos têm sido realizados, onde
3D-estruturas de uma única enzima isolada a partir de uma variedade de
organismos de crescimento a diferentes temperaturas têm sido investigados.
Estes estudos incluem um número de enzimas intracelulares [17,19,20,42] e
algumas enzimas extracelulares, por exemplo endoglucanase [23] e lipase [44].
Um número de características têm sido propostos a partir destes estudos (Tabela
1), e por exemplo
aumento em iões para pares e redes de par iónico foi frequentemente
observada, especialmente em enzimas de espécies hipertermofílicos. ligações
dissulfeto é outra característica de estabilização de proteínas, demonstrou ser
importante para muitos
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enzimas e proteínas, que também foi recentemente mostrado para proteínas
intracelulares hipertermófilos, parecendo ser especialmente comum em
pequenas proteínas [18]. Estabilização de proteínas menos estáveis ​utilizando
estas estratégias requer conhecimento estrutural e que pode ser bastante
complicado para prever o efeito de introdução de resíduos de aminoácidos
novos interagir. Apesar destas dificuldades, continua a evolução de enzimas
estáveis ​com actividades desejadas, usando ambas as técnicas dirigidos ao
sítio e ao acaso, preparar o caminho para as enzimas mais eficazes. Espera-se
assim que a utilização de enzimas termostáveis ​em aplicações industriais irá
aumentar com o tempo, levando a uma maior disponibilidade e preço mais
baixo, melhorando assim o seu potencial em aplicações em grande escala,
como biorefinação.
Biorrefinarias para a utilização de recursos renováveis
A biorrefinaria recentemente se tornou um conceito-chave utilizado nas
estratégias e visões de muitos países industrializados, sendo impulsionada por
uma combinação de preocupações ambientais (encorajando produtos químicos e
combustíveis renováveis ​e gás de efeito estufa net desanimadora), políticos e
econômicos [45-49]. Um biorrefinaria é definido como um sistema de combinação
de tecnologias necessárias entre as matérias-primas renováveis, produtos
intermediários e produtos industriais finais [10,11] (Fig.
1). O objectivo é produzir tanto alto valor, produtos de baixo volume e de baixo valor,
produtos de alto volume ( por exemplo combustíveis) [10]. As matérias-primas (ou os
seus produtos de repouso) podem ser utilizados directamente como matéria prima
para bioprocessamento, ou ser utilizados como substratos baratos para processos de
fermentação a partir da qual os produtos podem ser extraídos [50]. Dependendo da
matéria-prima disponível em diferentes países, a biomassa de diferentes origens têm
sido sugeridos como matérias-primas, e incluem, por exemplo, milho [51], trigo [52],
cana-de-açúcar [46,53], colza, algodão, sorgo, mandioca [ 54] e lignocelulose [47]. Os
sistemas mais simples de biorrefinaria ter em princípio processamento fixa de um tipo
de matéria-prima ( por exemplo grãos) para um produto principal, enquanto que as
mais flexíveis utilizar uma mistura de matéria-prima de biomassa para produzir uma
variedade de produtos. Diferentes tipos de matérias-primas de biomassa podem ser
utilizados, tais como colheita inteira ( por exemplo cereais e milho), ou matéria-prima
de lignocelulose ( por exemplo biomassa a partir de madeira ou resíduos) [10,11]. De
modo a conseguir uma conversão eficiente da matéria-prima, uma mistura de
mecânica, biocatalíticas e tratamentos químicos são esperados para ser combinado.
Nosso foco será sobre as conversões biocatal�icas e exemplos usando culturas ou
lignocelulose como matérias-primas será dado.
Biocatálise, envolvendo acções enzimáticos ou microbianos, realizar uma tarefa
dupla nos sistemas de biorrefinaria, ambos os blocos de construção metabolizável
(geradores de geração de açúcares a partir de polímeros) para mais converss, e
actuando como catalisadores específicos na conversão de blocos de construção em
produtos desejados (especificidade de conversão) . Uma ampla gama de tipos de
reacção, por exemplo oxidações, reduções, formações de ligação carbono-carbono,
e hidrólise, pode ser catalisada utilizando
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enzimas. Para dar alguns exemplos, monooxigenases pode ser utilizado
para a hidroxilação e reacções de oxidação de Baeyer-Villiger [55]. reduo
estereosselectiva de compostos de carbonilo aos coois quirais podem ser
preparados utilizando álcool desidrogenases, entre os quais alguns dos
origem termofílicas são relatados [56]. À medida que estas enzimas são
coenzima dependente, as estratégias de regeneração tem que ser
considerada (ver abaixo a secção seguinte). síntese epóxido, utilizando
lipases ou oxidorredutases, têm um grande potencial para a síntese de uma
vasta gama de produtos químicos, e reacções enzimáticas poderia
substituir alguns produtos químicos tóxicos [57]. formação da ligação CC
pode ser levada a cabo com liases [58]. glicosídeo hidrolases e
transferases pode catalisar a síntese de glicósido (eventualmente, por meio
de hidrólise inversa), para a produção de glico-oligossacarídeos de
comprimentos definidos,
Estas reacções podem ser realizadas usando células livres ou imobilizadas
inteiros, em bruto, enzimas purificadas ou imobilizadas, muitas das quais são
baseadas em organismos recombinantes [15]. Para aumentar a disponibilidade do
substrato, enzimas de hidrólise de polímero dar uma contribuição significativa. Por
exemplo, glicosídeo hidrolases (que também são utilizadas no processamento de
alimentos e alimentos para animais) degradar de armazenagem e de construção
de materiais poliméricos de plantas e árvores em oligo- e blocos de construção de
monossacárido, que são mais fáceis de microrganismos para assumir e
metabolizar. Isto pode ser desejável se biocatalisadores de célula inteira (, isto é,
proteína recombinante nativa ou de outro modo produzir metabolicamente
manipulado microorganismos) são seleccionados, o que pode ser o caso quando
os produtos da via metabólica são os compostos alvo. As enzimas que actuam nas
ligações glicosídicas pode também ser utilizado para a modificação dos produtos
naturais contendo glicosídeos como antioxidantes flavonóides [61]. A possibilidade
de usar células inteiras, bem como enzimas isoladas para posterior
processamento aumenta a diversidade de blocos de construção potencialmente
produzidos, e uma série de produtos metabólicos já hoje foram identificados como
produtos químicos plataforma interessantes.
produtos químicos de plataforma
O Departamento de Energia dos Estados Unidos publicou uma lista de blocos de
construção químicos de valor superior, ou seja produtos químicos de plataforma que
podem ser derivadas a partir de biomassa por conversão biológica ou química e
posteriormente convertido para um número de produtos químicos de alto valor ou
materiais [62] de base biológica. Os blocos de construção 12 valor de topo estão listados
na Tabela 2. Cada bloco de construção pode ser convertida para vários produtos
químicos de alto valor ou de materiais e as potenciais aplicações industriais são
enormes (alguns dos quais estão listados na Tabela 2). Todos os blocos de construção
listados podem ser produzidos a partir de (óleos de celulose, hemicelulose, amido ou
vegetal) de biomassa, quer por fermentação ou por em vitro conversões enzimáticas
através
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Colheitas e grãos ( amido,

lignocelulose)
combinado
lignocelulose ( cellolose, hemicelulose,
vários FEEDSTOCK pectina)

processamento de -processos Bio resíduos

sólidos municipais
Tecnologias de
Processos químicos

processos térmicos

processos físicos

PRODUTOS
combustíveis ( sólido, líquido e gasoso)

Produtos quimicos ( pharma, especialidades,

mercadorias)

materiais ( polímeros)

etanol intermediários bioplásticos tensioactivos

biodiesel ácidos gordos detergentes adesivos

biogás óleos lubrificantes, corantes, pigmentos, tintas

figuraesquemática
Visão 1 do princípio básico de uma biorrefinaria, juntamente com alguns exemplos de produtos
Visão esquemática do princípio básico de uma biorrefinaria, juntamente com alguns exemplos de produtos.

os açúcares intermediários; glucose, frutose, xilose, arabinose,
lactose, sacarose e, respectivamente (glicerol
isentos). Nas rotas biocatal�icas sugeridas, fermentações de organismos
mesófilos ainda estão dominando entre os top 12, e em alguns casos a rota
biotransformação não é conhecida e precisa ser explorado. A fim de alcançar
uma utilização eficiente de materiais de biomassa ( por exemplo para libertar
tanto açúcares quanto possível a partir da matéria-prima), acredita-se que
existe uma necessidade de biocatalisadores termoestáveis ​eficientes.
Catálise a alta temperatura poderia por exemplo ser vantajoso na
bioconversão do xilano da hemicelulose a partir de materiais
lenhocelulósicos em xilitol (Tabela 2, [63]). A dificuldade de degradação da
lignocelulose foi relatada por diversos autores [64-66], e um pré-tratamento
térmico é frequentemente incluída para melhorar a degradabilidade destes
materiais. O tratamento térmico também é relatado para melhorar a
penetração da enzima hemicelulase para conversões [12], melhorando a
disponibilidade xilano. Três enzimas são necessárias
para o xylan à conversão xilitol: xilanase (EC 3.2.1.8), xilosidase (CE
3.2.1.37), e xilose redutase (CE
1.1.1.21). Uso de xilanase termoactivos e termoestável permitir a acção
enzimática a ter lugar simultaneamente com o passo de aquecimento, sem
necessidade de pré-arrefecer o sistema, por conseguinte, encurtando o tempo de
processamento. Ao adicionar xilosidase termoestável (activo em
xilo-oligossacarídeos), hidrólise eficiente em monómeros de xilose pode ser
alcançado. Conversão de xilose em xilitol é no entanto catalisada por uma NAD
(P) H-dependente xilose redutase: por conseguinte, para reduzir a necessidade
de co-factores (e os seus custos), a adição de uma enzima de reciclagem de
co-factor de, ou catálise de células inteiras utilizando co-factores intracelulares
devem ser considerados. Hoje em dia, a xilose em xilitol conversões são
frequentemente relatados utilizando pentose diferente utilizando estirpes de
levedura [67], mas um problema com estas estirpes está ainda a conversão de
xilitol em xilulose. Em xilose fermentação de leveduras, como
Pichia e Candida, este passo é catalisada por uma desidrogenase NAD +
dependente xilose, enquanto nas bactérias do passo correspondente é
catalisado por uma xilose isomerase.

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Tabela 2: priorizado blocos de construção derivados de açúcar, conforme listado pelo Departamento de Energia dos EUA. Adaptado a partir de [62].
Blocos de construção carbonos Pathways
1,4 diácidos fermentação aeróbia a produzir
(Succínico, fumárico, málico e) 4 diácidos C4 de patways do ciclo de
Krebs
ácido 2,5-dicarboxílico furano 6 desidratação oxidativo de açúcares C6
conversão (química) Enzimática?
3-hidroxipropiónico ácido 3 fermentação aeróbia
ácido aspártico 4 A conversão do oxaloacetato no ciclo de
Krebs por meio de fermentação aeróbica
ou conversão enzimática
ácido glucárico 6 Um passo de oxidação com ácido nítrico de
amido (químico) a fermentação aeróbia
Ácido glutâmico 5 fermentação aeróbia
ácido itacónico 5 fermentação do fungo aeróbio
ácido levulínico 5 Catalisada por ácido decomposição de
celulósicos e açúcares Biotransformação?
3-hidroxibutirolactona 4 A degradação oxidativa de
Biotransformação amido?
glicerina 5 transesterificação enzimática ou
química dos óleos
sorbitol 6 A hidrogenação de glicose
(químico) a fermentação aeróbia
ou biotransformação
Xilitol / arabinitol 5 fermentações aeróbicas ou
anaeróbicas ou conversões
enzimáticas de lignocelulose
engineeed metabolicamente Saccharomyces cerevisiae transformada com
xilose redutase (a partir de P. stipidis) tem xilitol como um produto final, e este
organismo tem sido utilizado para
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derivativos usos diretos ou utilizações de
derivados
THF, 1,4-butanodiol, γ- solventes verdes, Fibras (Lycra, e outros),
butirolactona, pirrolidonas, ésteres, TBD, polímeros solúveis em água
diaminas, 4,4-Bionelle, ácido
hidroxibutírico, os derivados de
succinato insaturados, derivados de
succinato hidroxi, hidroxibutirolactona
Numerosos derivados de furano, polysters Furanoic (garrafas,
succinato, ésteres, ácido levulínico, recipientes) filmes As poliamidas
poliaminas furanoic, análogos de (nylons) novos
polietileno tereftalato
Acrilatos, acrilamidas, ésteres, fibra Sorona, lentes de contacto, as
1,3-propanodiol, ácido malónico, fraldas (polímeros super-absorventes)
propionol,
butanodiol amina, amina análogos de amino ácidos
tetra-hidrofurano, butirolactona dicarboxílicos C4 1,4 Pharma e
amina-, anidrido aspártico, intermediários adoçante
poliaspártico, vários diácidos
amino substituídos
Dilactonas, monolactones,
ésteres e amidas polyglucaric Solventes, Propriedades
nylons de diferente
Dióis, dióis, diácidos aminados, ácido Monómeros para poliésteres e
glutárico, pirrolidonas substituídas poliamidas
butanodiol metilo, butirolactona, Solventes, polímeros (BDO, GBL,
tetra-hidrofurano família, pirrolidonas, THF), látex de nitrilo
poliitacónico
δ- aminolevulinato, metil oxigenados de combustível, solventes,
tetra-hidrofurano, δ- policarbonato síntese
butirolactona, acrilatos de acetilo, os ácidos
succínicos acético-acrílico, ácido difenólico
Hidroxibutiratos, epóxi δ- Elevado valor compostos farmacêuticos,
butirolactona, butenóico, furanos, solventes, análogos de amino para fibras
análogos para pirrolidonas lycra
produtos de fermentação, propileno produtos de uso pessoal / oral cuidados,
glicol, 1,3- propanodiol, diácidos, álcool produtos farmacêuticos, alimentos / bebidas,
propílico, dialdeído, epóxidos, ácidos polióis poliéteres, anticongelante, umectante
glicéricos, polysters ramificados e polióis
Etileno glicol, propileno glicol, Polietileno, tereftalatos de isossorbida
glicerol, ácido láctico, isossorbida, (garrafas), anticongelante, PLA (ido
polissacáridos ramificados poliltico), polímeros solúveis em água
Etileno glicol, propileno glicol, Não nutritivo adoçantes, anidros,
glicerol, ácido láctico, furanos resinas polyster insaturados,
hidroxi, ácido xylaric, polióis anticongelante
a conversão de xilose a xilitol com a conversão superior a 95%, mas, como uma
nova enzima dependente de co-factor é introduzido, a reciclagem de co-factor
de tem de ser considerada [68].
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enzimas industriais e aplicações relacionadas /
Biorefining
Para ilustrar ainda mais a utilização de biocatalisadores termoestáveis ​em
matérias-primas renováveis, em grande escala, que irá incidir sobre o
potencial e aplicações de enzimas hidrolíticas (proteases, lipases e
glicosídeo hidrolases), os quais são estabelecidos em escala industrial.
aplicações de protease e lipase só serão mencionados brevemente (para
revisões, ver [69-72]) e especial ênfase será colocada em glicosídeo
hidrolases.
De acordo com um relatório do Business Communications Company Inc, o mercado mundial de
enzimas industriais foi estimado totalmente $ 2 bilhões em 2004 [73]. Além disso, a taxa de
crescimento anual de enzimas industriais está previsto para ser entre 4 e 5% e com isto vem preços
inferiores de enzimas, devido a uma intensa competição no mercado. O mercado enzima industrial
pode ser separado em secções de aplicação: (1) enzimas técnicas, (2) enzimas alimentares, e (3)
enzimas para rações animais. A maior seção é enzimas técnicas em que as enzimas utilizadas para
detergentes e papel e celulose constituem 52% do mercado total mundial [73]. Principais enzimas
nesta secção são enzimas hidrolíticas, classificadas como proteases e amilases, que compreendem
20 e 25% do mercado total, respectivamente [73]. Hidrolases são geralmente fáceis de usar em
bioprocessos, como eles normalmente não requerem co-fatores ou substratos complexos. Além
disso, eles podem ser usados ​em um estágio inicial no material prontamente disponível encontrados
na floresta e agricultura. Algumas aplicações disponíveis a partir de materiais de biomassa onde
variantes termoesteis foram consideradas estão listadas [ver arquivo adicional 1] em conjunto com
as actividades de enzimas que podem ser utilizadas para a sua degradação ou modificação.
Aplicações de exemplos seleccionados com uma perspectiva biorefinação será ainda mais discutida
no texto nas respectivas secções abaixo. Algumas aplicações disponíveis a partir de materiais de
biomassa onde variantes termoesteis foram consideradas estão listadas [ver arquivo adicional 1] em
conjunto com as actividades de enzimas que podem ser utilizadas para a sua degradação ou
modificação. Aplicações de exemplos seleccionados com uma perspectiva biorefinação será ainda
mais discutida no texto nas respectivas secções abaixo. Algumas aplicações disponíveis a partir de
materiais de biomassa onde variantes termoesteis foram consideradas estão listadas [ver arquivo
adicional 1] em conjunto com as actividades de enzimas que podem ser utilizadas para a sua
degradação ou modificação. Aplicações de exemplos seleccionados com uma perspectiva
biorefinação será ainda mais discutida no texto nas respectivas secções abaixo.
Cortar biorefinação
O passo inicial na colheita é biorefinação fraccionamento. Isto é conseguido
por ambos os processos biológicos [74] física, química e. Após um passo
física começando, muitas vezes moagem, o processo biológico emprega
diferentes hidrolases, dependendo do que tipo de cultura é fracionado. O
fraccionamento é frequentemente acompanhada por temperaturas elevadas,
o que exige enzimas termoestáveis ​e termoactivos. processos químicos
podem ser usados ​para algumas aplicações, mas podem gerar produtos
secundários tóxicos e indesejáveis, e nós não incidirá sobre os métodos
aqui. Em vez disso, a degradação enzimática do amido de cereais e à
utilização de produtos obtida com este irá servir como um exemplo do
potencial de enzimas termoestáveis ​neste tipo de processamento. A palha
pode também ser processado para utilizar os hidratos de carbono presentes
na fraco lignocelulósico (ver abaixo).
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Amido degradação e modificação
Amido de plantas cultivadas é uma das fontes de energia mais abundantes e
acessíveis do mundo. É composto de amilose e amilopectina, e uma
perspectiva geral da principal estrutura indicando locais de ataque enzimático
é dado na Fig. 2. O milho é a cultura mais utilizado no processamento de
amido, em indústrias, mas de trigo, de batata e de tapioca também são
importantes culturas enquanto que o arroz , sorgo, batata-doce, araruta, sagu
e feijão mung são utilizados em menor medida [75].
Hidrolases (e transferases relacionados com a sequência) que actuam sobre o
amido são membros da α- superfamília amilase, que consiste de um grande
número de enzimas relacionados com a sequência primária com um
mecanismo catalítico de fixação [76], grupos no libertador α- configuração. A
superfamília pertence glicosado clã hidrolase GH-H, e consiste em 3 famílias
relacionados com a sequência de glicosídeo hidrolases (GH13, 70 e 77 [77])
catalisar uma variedade de reacções [ver arquivo adicional 1]. sequências de
consenso específicas, e um número variável de domínios, acredita-se ser
responsável pelas variações da especificidade, conduzindo a hidrólise ou a
actividade de transferase, bem como especificidade de substrato diferente.
amido processado é utilizada, principalmente, para a glucose, maltose, e a produção
de oligossacáridos, mas um número de produtos / intermediários também pode ser
produzido através de ciclodextrinas. A glicose pode ser adicionalmente convertido para
xaropes de alta frutose, a dextrose cristalina e xaropes de dextrose, que são usados
​em aplicações de alimentos [78]. A glicose pode também, naturalmente, ser
fermentada para produzir etanol (ver biocombustível abaixo), os aminoácidos ou os
ácidos orgânicos [78]. Conversão para o xarope de alto teor de frutose por glucose
isomerase (EC 5.3.1.5) é normalmente executado a 55-60 ° C e pH 7,0-8,5 [78], o que
requer uma enzima termoestável. A frutose é um adoçante popular, em parte por causa
da disponibilidade de grandes quantidades de amido de milho com baixo custo.
processamento do amido é geralmente realizada em um processo de hidrise em
dois passos de liquefacção e sacarificação. Liquefação, é a conversão de amido
granular em dextrinas mais curtas, de cadeia de comprimento solúveis [DE
(equivalentes de dextrose) 9-14]. Em liquefacção, o amido é gelatinizado por
meio de tratamento térmico que requer uma temperatura por volta de 70 a 90 °
C (para o milho) [78], mas para garantir a remoção de todos os complexos
lípido-amilose, um processo de temperatura preferida é acima de 100 ° C [78] .
Quando o amido-lama é arrefecida para baixo que forma um gel
termo-irreversível, por um processo conhecido como retrogradação, em que as
cadeias de amilose interagir por ligação de hidrogénio [79]. A ordem cristalina é
então perdida e os grânulos de amido de inchar como a amilose e amilopectina
cadeias são hidratados [80]. A termoestável α-
amilase [ver arquivo adicional 1] é adicionado antes do tratamento térmico,
o que tem lugar a 105-110 ° C durante 5-7 min [81]. O amido-lama é então
flash-arrefecida para 95 ° C e
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β
α

maltose e maltotriose
β- limite de dextrina

pululanase
amylopullulanase

neopullulanase
isopullulanase

Panose

isopanose

Figura 2
ataque enzimático em parte de uma molécula de amilopectina
ataque enzimático em parte de uma molécula de amilopectina. moléculas de glicose são indicados como círculos e as extremidades redutoras são marcados por uma linha através do
círculo.

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mantida a essa temperatura durante 60-120 min para completar a
liquefacção enzimática [81,82]. Por conseguinte, uma enzima altamente
termoestável é exigido que irá ser activa durante todo o processo. Hoje em
dia existem, além das enzimas originalmente usados Bacillus
stearothermophilus ou B. licheniformis, numerosos exemplos disponível e
comercializado por exemplo Vale "™ Ultra-fino" do Vale Research / Diversa,
Multifect AA 21L ® da Genencor e Termamyl ® e Liquozyme ® da Novozymes
[ver arquivo adicionais 2]. Idealmente, a enzima deve estar activa e estável
a um pH baixo (~ 4,5) e não exigir cálcio para a estabilidade. Algumas
enzimas modificadas têm sido relatados para cumprir estas propriedades
desejadas [ver arquivo adicional 2]. O teor de água no amido-lama é
geralmente bastante alta (35%), como uma alta viscosidade aumenta a
temperatura de fusão do amido [83]. A redução do teor de humidade pode
ser mais económico, e tem mostrado ser possível, quando, incluindo um
tratamento de corte [82]. Este foi no entanto acompanhado por aumento da
formação de isomaltose [82], e o aumento das temperaturas também
exigiria enzimas com muito elevada estabilidade térmica.
Sacarificação envolve a hidrólise de oligossacáridos remanescentes (8-12
unidades de glucose) para um ou outro xarope de maltose por β- amilase ou
de glucose / glucose xaropes por glucoamilase [84]. O processo é
executado a um pH de 4,2-4,5 e 60 ° C, temperatura à qual o actualmente
utilizados Aspergillus niger glucoamilase é estável. Ainda, a temperatura tem
de ser arrefecida após liquefacção e o pH tem de ser ajustado, a fim de que
a glucoamilase actuar. Mais economicamente viável seria utilizar uma
enzima activa no mesmo pH e gama de temperatura como as enzimas de
liquefacção. Kim et al. têm relatado recentemente em um glicoamilase de solfataricus
Sulfolobus, que é optimamente activa a 90 ° C e pH 5,5-6,0. Esta enzima
também formado menos isomaltose, uma reacção secundária comum, do
que a glucoamilase fúngica disponível comercialmente [85]. Para aumentar
a eficiência na sacarificação, uma enzima desramificadora, tais como a
pululanase, podem ser adicionados ao processo. misturas de enzimas
termoestáveis ​são hoje disponíveis no mercado contendo tanto glicoamilase
e pululanase, por exemplo OPTIMAX ®
da Genencor.
O amido gelatinizado (obtido a partir de liquefacção) também pode ser
modificado por amylomaltases (CE 2.4.1.25, e membros de GH 77) que são
4- α- glucanotransferases transferência α- 1,4-glucano ligado fragmentos do
amido para um aceitador, que pode ser o grupo 4-OH de outra α- 1,4linked
glucano ou glucose [86]. Nas plantas, esta enzima é também chamado de
enzima disproportionating ou D-enzima [79]. Vários amylomaltases
termoestáveis ​e termoativos industrialmente relevantes são conhecidos até
à data ( Thermus espécies,
Thermococcus espécies, e Aquifex aeolicus, [ ver arquivo adicional 2]), com
temperaturas óptimas entre 75 e 90 ° C. Amylomaltase catálise resulta na
conversão em uma tera-
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gel de amido moreversible que consiste em amilopectina com cadeias
laterais encurtado e alongadas, mas livre de amilose [79]. O gel obtido
comporta-se semelhante a gelatina (e pode substituir a gelatina obtida a
partir da medula óssea de vacas) e tem muitos usos na indústria alimentar.
Aplicações de amylomaltases em amido também incluir a formação de
cicloamiloses [87] e a produção de isomalto oligossacáridos [88].
As ciclodextrinas (CDs) são outros produtos derivados do amido com uma
gama de aplicações possíveis, devido ao interior apolar que pode hospedar
"moléculas convidadas" e solubilizar e estabilizá-los [89]. Existem CDs de
diferentes tamanhos, adequados para diferentes aplicações. Exemplos de
aplicações de CDs e seus derivados são: transportadores para
terapeuticamente
importante péptidos, proteínas e
oligonucletidos [90], a solubilização e a estabilização de uma gama de
moléculas farmacêuticas [91], separações analíticas [92], e diversas aplicações
em alimentos e cosméticos, têxteis, e adesivos [93]. Há também grandes
dextrinas cíclicos, geralmente conhecidas como cicloamiloses [94] ou LR-Cd
[95]. Estes produtos podem ser sintetizados por CGTases [96] ou
amylomaltases [87,97]. Cicloamiloses pode ser utilizado como um material de
revestimento, em adesivos, para materiais plásticos biodegradáveis, como um
aditivo de elevado energia para refrigerantes, como um retardador de
retrogradação para melhoria de pão, de geleias resistentes congelamento e para
a produção de arroz não-pegajoso conforme descrito por Larsen, 2002, e
referências aí [98]. Cicloamiloses também têm sido propostos para auxiliar no
re-enrolamento da proteína, agindo como uma chaperona artificial [99] e para a
solubilização dos compostos maiores, por exemplo Buckminster fulereno (C60,
C70) [95].
Biodegradação e modificação de lenhocelulose
Lignocelulose é um importante exemplo de uma matéria-prima abundante,
produzido em grandes quantidades para a produção de produtos florestais,
muitas vezes deixando uma fração significativa de resíduos de produtos não
utilizadas. resíduos agrícolas, como palha, também tem significativa
conteúdo lignocelulose.
enzimas (Incluindo comercialmente disponíveis alimentação
enzimas) que hidrolisam a lignocelulose polimérico em intermediários metabolizáveis
​mais curtos, ou que reduzem a viscosidade de polissacárido não amido de cereais em
alimentos para animais ( por exemplo
cevada, centeio, aveia) [100] pode ser usado para melhorar a utilização da fracção
de hidratos de carbono lignocelulósico. À medida que os materiais
lignocelulósicos, muitas vezes são submetidas a tratamentos térmicos para facilitar
a degradação, enzimas termoestáveis ​tem uma clara vantagem. enzimas
alimentares têm sido no mercado há 15 anos e o valor estimado deste mercado é
cerca de US $ US360 milhões [100]. processamento de alimentos para animais é
normalmente realizada a temperaturas elevadas [101], de modo usar e
desenvolvimento de enzimas estáveis ​e robustos foi imperativo.
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Lignoceluloses de paredes de células de plantas são compostas por celulose,
hemicelulose, pectina, lenhina e (os três anteriores sendo polissacarídeos). A
celulose é o principal constituinte de todo o material de planta e a molécula
orgânica mais abundante na crosta terrestre [102], enquanto hemiceluloses e
pectinas são polissacarídeos de matriz de parede da célula da planta. Muitas
enzimas estão envolvidas na degradação deste recurso biomassa [103], e
eles são muitas vezes construídas por módulos discretos (o mais comum
sendo os módulos catalíticos ou de hidratos de carbono de ligao), ligadas
entre si por péptidos ligantes curtos, às vezes ligar um módulo catalítica com
especificidade para a celulose com um módulo hemicellulosespecific. Tal
ajuda vários sistemas de enzimas na criação de degradação eficiente dos
materiais lignocelulósicos. Além do que, além do mais, vários microrganismos
produzem enzimas individuais múltiplas que podem actuar em sinergia. A Fig.
3 mostra uma vista geral de alguns polímeros presentes em lignocelulose, e
os locais de ataque para um número de enzimas que actuam sobre estes
substratos. Mais exemplos de
a representa 25-35% de biomassa lignocelulósica [115]. As hemiceluloses são
lignocelulose enzimas degradantes de origem termófilos com especificidades
diferentes são dadas [ver arquivo adicionais 3].
conversão de celulose por celulases
A celulose é um composto de homopolissacárido β- unidades de
D-glucopiranose ligadas por β- ( 1 → 4) -glucosídicas. A unidade repetitiva
menor é a celobiose, que os resíduos de glicose sucessivas são rodados
de 180 ° em relação à outra [104-106]. As enzimas de hidrólise de celulose
( ou seja celulases) são divididos em três grupos principais: endoglucanases,
celobio-hidrolases (e exoglucanases), e β-
glucosidases, todos os três atacar β- ligações 1,4-glicosicas [107,108]. As
endoglucanases ([EC 3.2.1.4], classificadas em 12 famílias de GH
diferentes, com dois inversores e retenção de mecanismos de reacção, e
com diferentes dobras) catalisam a clivagem de ligações internas aleatório
na cadeia de celulose, enquanto celobiohidrolases (EC 3.2.1.91, GH 5 , 7
[reteno] e 6, 9 [inversora]) atacar as extremidades da cadeia, libertando
celobiose. β- glicosidases (EC 3.2.1.21, GH1, 3 [reteno] e 9 [inversora]) são
apenas activo em celo-oligossacáridos e celobiose, libertando glicose (Fig.
3A).
A importância industrial significativo para celulases foi alcançado durante a
década de 1990 [109], principalmente dentro têxtil, detergente e indústria de
papel e polpa ( por exemplo na destintagem de papel reciclado). Várias
enzimas termoesteis foram caracterizada [ver arquivo adicional 3], e tem
havido muitos ensaios nestas áreas como a termoestabilidade é altamente
relevante para o desempenho das enzimas.
Degradação da celulose (Fig. 3A) em açúcares fermentáveis ​para a
produção de produto de base é uma área de biorrefinaria, que investiu
enormes esforços de pesquisa, pois é um pré-requisito para a posterior
produção de energia, ver
biocombustível abaixo. Ela é susceptível de ser realizado, pelo menos em parte, a
temperaturas elevadas para facilitar a degradação, assim MAK
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enzimas termoesteis (ing ou microrganismos termofílicos) desejável. Embora
as celulases clivar um único tipo de ligação, os substratos cristalinos com a
sua extensa padrão de ligação necessária a acção de um consórcio de
enzimas livres ou complexos de multi-componentes, alternativamente
chamados celulosomas [110]. módulos de ligação a hidratos de carbono
ligados por ligantes para os módulos catalíticos também podem dar
contribuição significativa para a acção das enzimas, e melhorar a eficiência
da degradação, especialmente em substratos lenhocelulósicos complexos
[111-113]. Outras melhorias na eficiência nível na degradação da celulose
(mais rápido e menos dispendioso), criaria ambos os benefícios ambientais e
económicos, motivando ensaios utilizando misturas de enzimas, bem como
células manipuladas, e ainda é um dos principais desafios aberta para a
investigação [114].
conversões hemicelulose
A hemicelulose é o segundo biomassa renovável mais abundante e
polímeros heterogéneos construídas por pentoses (D-xilose, D-arabinose),
hexoses (Dmannose, D-glucose, D-galactose) e ácidos de açúcar [115]. As
hemiceluloses em madeira contêm principalmente xilanos (Fig. 3B),
enquanto que em glucomananas de madeira macia (Fig. 3C) são as mais
comuns [115]. Há várias enzimas responsáveis ​pela degradação da
hemicelulose. Na degradação de xilano,
por exemplo endo-1,4- β- xilanase (EC 3.2.1.8), β- xilosidase (CE
3.2.1.37), α- glucuronidase (CE 3.2.1.139), α- L-arabinofuranosidase (CE
3.2.1.55) e esterase acetylxylan (CE
3.1.1.72) (Fig. 3B) todos agem sobre os diferentes heteropolímeros
disponíveis na Natureza. Na degradação glucomanano, β- mananase (EC
3.2.1.78), e β- manosidase (EC 3.2.1.25) são clivar o esqueleto do polímero
(Fig. 3C). A cadeia principal de clivagem de endo enzimas (xilanases e
mananases) estão entre os mais bem conhecidos. A maioria das
sequências de xilanase são classificados sob família GH 10 e 11 (ambos de
retenção), e algumas outras enzimas são encontradas em outras famílias
(ambos inversora e reter [77]). Mananases são predominantemente
classificadas sob família GH 5 e 26 (ambos com mecanismo de retenção),
e apenas uma enzima bifuncional é a data classificadas em GH44
[invertendo]. Essas famílias têm representantes de origem termofílica.
A hemicelulose é, tal como a celulose, uma fonte importante de açúcares
fermentáveis ​para aplicações Biorefining (ver também
biocombustível abaixo), e degradação eficientes é vital para a sua utilização.
Tal como exemplificado antes, também é possível prever uma potencial
aplicação na produção de intermediários para produtos químicos verdes ( por
exemplo xilitol). Outras aplicações biotecnológicas também são estabelecidas
para estas enzimas, muitos dos quais motivam o uso de enzimas termoestáveis.
A selecção de enzimas é mostrada abaixo [ver arquivo adicional 3]. Uso de
endo-1,4 β- xilanases (EC 3.2.1.8.) no processo de branqueamento de pastas
para fabrico de papel é um conceito
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β
β
UMA.
β

β β

B. β
α

C.
β β

β
α

α
α

D. αα
α

Figura 3 e locais de ataque enzimático de polímeros a partir de lignocelulose simplificado

estruturas
estruturas simplificado e locais de ataque enzimático de polímeros a partir de lignocelulose. Um fragmento de cadeia de celulose (A) é mostrado, juntamente com fragmentos
hipotéticas do xilano hemiceluloses (B), glucomanano (C), e pectina (D). Locais de ataque de algumas das principais enzimas que actuam sobre o respectivo material são
indicadas por setas. O tipo de ligação glicosídica da cadeia principal é indicada entre parêntesis à direita de cada fragmento do polímero. Os hidratos de carbono são indicados
como círculos, e a extremidade redutora de cada cadeia principal é marcada por uma linha através do círculo. Branco = glicose, verde = xilose, ácido glucurónico = amarelo,
vermelho = Inose-árabe, luz azul = manose, azul escuro = galactose, ácido galacturónico cinzento =, e rosa = resíduos de açúcar indefinidos. grupos acetato são mostrados como
triângulos, como grupos fenólicos, diagonais e grupos metilo como rombs.

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introduzida por pesquisadores finlandeses, que é de grande interesse ambiental
devido à possibilidade de diminuir o consumo de branqueamento químico em
etapas posteriores [116,117]. Devido às condições do processo, as enzimas que
funcionam a altas temperaturas e valores de pH elevados são desejáveis ​na
seguinte processo de branqueamento. Enzimas de termófilos satisfazer a procura
de temperatura, uma vez que exibem estabilidade térmica intrínseca, e uma
actividade máxima a uma temperatura elevada, e por exemplo a xilanase de
Xyn10A R. marinus foi mostrado para melhorar o brilho, em sequências de
branqueamento de polpas de madeira dura e de madeira macia kraft preparados
por processamento Kraft, quando se introduz o passo de tratamento com enzima,
a 80 ° C [118]. Várias patentes foram arquivados em xilanases termoestáveis ​em
relação à utilização em polpa [119-121], incluindo por exemplo aminoácido
substituído GH11 enzimas para melhorar o desempenho [122]. As xilanases são
também produzidos em escala industrial, como aditivos em alimentos para aves
de capoeira [123] e como aditivos para farinha de trigo para melhorar a qualidade
dos produtos cozidos [63].
Mananases têm potencial no branqueamento da polpa, especialmente em combinação
com xilanase [124], e aplicações em alimentos e alimentos para animais incluem
viscosidade decrescente acção dos extractos de café para a produção de café
instantâneo [125].
Conversão de pectinas
As pectinas são o terceiro grupo polissacárido estrutural principal da parede
celular das plantas, abundante em polpa de beterraba [126] e fruta, por exemplo em
citrinos e de maçã, onde pode formar-se a metade do teor polimérico da parede
celular [127]. A espinha dorsal de pectina, que é constituído por regiões de
ácidos homo-galacturónico (por vezes metilado), e regiões de ambos ramnose e
ácido galacturónico (Fig. 3D), tem cadeias laterais de açúcar neutros constituídos
a partir de L-ramnose, arabinose, galactose e xilose [128] . resíduos de
L-ramnose na espinha dorsal transportar cadeias laterais contendo arabinose e
galactose. Há também cadeias laterais xylogalacturonan único [127]. Pectina tem
encontrado ampla utilização comercial, especialmente na indústria têxtil [129] e
na indústria alimentar como espessante, agente de textura, agente emulsionante,
estabilizador, agente de enchimento em produtos de confeitaria, produtos
lácteos, e produtos de padaria, etc [130]. Também é estudada pelo seu potencial
na entrega de drogas e na indústria farmacêutica [131], e é interessante como
um suplemento alimentar para seres humanos devido ao seu efeito de
abaixamento do colesterol possível [132]. A pectina também tem um potencial em
fazer películas biodegradáveis ​[133]. Apesar destas aplicações, as pectinas são,
semelhante à celulose e hemiceluloses, materiais residuais comuns que podem
ser convertidos em açúcares solúveis, etanol [134], e de biogás [135].
pectinases microbianos são responsáveis ​por 25% das vendas enzimas alimentares
mundial [136], e são utilizados extensivamente para a clarificação de sumos de fruta,
extracção de sumo, produção de amido pectinfree, refinamento de fibras vegetais,
desengomagem de fibras naturais, de tratamento de águas residuais, de cura de
café,
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cacau e tabaco e como uma ferramenta analítica na avaliação de produtos
vegetais [136,137]. Em algumas aplicações, pode ser mais eficiente a
utilização de enzimas termostáveis, particularmente quando se utiliza
substratos (que também pode ser outra que ocorre naturalmente moléculas
contendo glicósido com ligações semelhantes aos do pectina) que são
fracamente solúveis à temperatura ambiente, tal como a naringina e rutina,
presente em frutos [138]. Muitas enzimas estão envolvidas na degradação
da pectina (alguns exemplos principais mostrados na Fig 3D), mas são
referidos por vários nomes diferentes, o que pode ser bastante confuso.
Eles podem estar a actuar quer por hidrólise ou por trans-eliminação; esta
última realizada por liases [128]. Polymethylgalacturonase, (endo)
poligalacturonase (depolimerase pectina, pectinase, EC 3.2.1.15),
polygalacturonase (CE 3.2.1.67), e exopolygalacturanosidase (CE 3.2.1. α- L-rhamnosidases
(CE
3.2.1.40, em GH família 28, 78 e 106) hidrolisar ramnogalacturonano na
espinha dorsal péctico. α- L-arabinofuranosidases (CE 3.2.1.55, α- L-AFases
encontrados em 5 famílias diferentes de GH) hidrolisam as cadeias laterais de
L-arabinose, e endo-arabinase (CE 3.2.1.99, GH43) agir em arabinano
cadeias laterais em pectina [140]. Estas duas enzimas operam sinergicamente
em arabinano ramificado degradantes para produzir Larabinose [126]. liases
de polissacáridos (PL), que, tal como a GH foram classificadas em famílias de
sequências relacionadas com, clivar o polímero de ácido galacturónico pela β- eliminação
e compreendem por exemplo liase polymethylgalacturonate (pectina liase, EC
4.2.2.10), liase poligalacturonato (pectato liase, CE
4.2.2.2), e exopolygalacturonate liase (pectato-liase de dissacárido, EC
4.2.2.9) [77139141]. Pectinesterase (esterase pectinmethyl,
pectinmethoxylase, EC 3.1.1.11) de-esterificar os encadeamentos de éster de
metilo do esqueleto de pectina [139]. pectinases termoestáveis ​não são tão
freqüentemente descrito, mas os relatórios mostram alguns termoestável α- L-rhamnosidases,
por exemplo de Clostridium stercorarium [ 142] e a partir de uma estirpe de
perto relacionada com Thermomicrobium [ 138]. A poligalacturonase
termoestável a partir de um molde termofílica, thermophile Sporotrichum, otimamente
ativa a 55 ° C também tem sido relatada e pode ser relevante para a indústria
de suco de fruta [143] [ver arquivo adicionais 3]. vários termoestável α- L-AFases
(também envolvidas na degradação da cadeia lateral de xilano) são descritos
na literatura (listado em hemicelulases [ver arquivo adicional 3]).
biocombustível
Durante a crise mundial do petróleo na década de 70 o interesse no uso de celulases
para produzir açúcares fermentáveis ​de resíduos celulósicos foi despertado tanto nos
Estados Unidos e na Europa. O objetivo era então a tornar-se menos dependente do
petróleo e reduzir as importações de petróleo. Actualmente, esta necessidade é
ainda mais franco, não só por causa do aumento do custo do petróleo, mas também
porque há uma necessidade de reduzir o efeito estufa
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as emissões de gases e, em geral melhorar a qualidade do ar. Hoje, existem
programas especiais em um número de países-alvo para o desenvolvimento de
produção de biocombustíveis a partir de recursos renováveis, examinando as
possibilidades de, por exemplo, biogás, bioetanol, biodiesel e células de
combustível.
O bioetanol é o combustível renovável mais comum hoje em dia, e por exemplo
a "Iniciativa de Biocombustíveis" nos EUA (US Department of Energy), se
esforça para fazer costcompetitive etanol celulósico em 2012 e supostamente
correspondem a um terço do consumo de combustível dos Estados Unidos em
2030. O "Energia para o Futuro" na UE, tem o objetivo de ter 12% de energias
renováveis ​na UE até 2010 [144]. O etanol é vulgarmente derivados a partir de
grãos de milho (amido) ou de cana de açúcar (sacarose) [145]. A sacarose
pode ser fermentados directamente para o etanol, mas o amido é hidrolisado
em glicose antes que pode ser fermentado, geralmente por Saccharomyces
cerevisiae [ 146]. Etanol fermentação do amido pode ser melhorada através da
utilização de melhores enzimas e as estirpes e preferencialmente hidrolisar o
amido a partir de grãos inteiros sem um pré-tratamento químico e com
simultânea liquefação, sacarificação e fermentação [147].
No entanto, o material de biomassa de amido, bem como cana-de-açúcar, é
limitada e para o biocombustível renovável de ser capaz de competir com
combustíveis fósseis, é necessário um processo custo-eficaz de um recurso
renovável ainda mais abundante. Agrícola e biomassa florestal estão
disponíveis em quantidades suficientes para ser considerado para a
produção em larga escala de combustíveis à base de álcool [148]. resíduos
urbanos são uma fonte adicional de biomassa; estima-se que a celulose é
responsável por 40% dos resíduos sólidos urbanos [148]. produtos à base de
celulose pode ser competitiva com produtos derivados de custos de
processamento de recursos fósseis fornecidas são reduzidos [149].
Infelizmente, devido à estrutura complexa e cristalino de lignocelulose, este
material é muito mais difícil do que para hidrolisar o amido. é necessária uma
conversão eficiente de material ligno-celulósico em açúcares fermentáveis,
mas requer melhores estirpes ou sistemas de enzimas que são capazes de
converter tanto pentoses e hexoses e tolerar condies de stress [150]. O uso
de celulases, hemicelulases, termoestáveis ​e microrganismos termofilicos na
degradação do material lignocelulósico oferece uma vantagem de minimizar
o risco de contaminação e pode permitir que um processo de um único passo
de hidrólise enzimática, a fermentação, e a destilação do etanol formado
[151].
Hoje em dia, as fases de hidrólise e de fermentação são separados. A etapa de
fermentação é geralmente realizada por Saccharomyces cerevisiae ou Zymomonas
mobilis, mas esta pode ser uma desvantagem, uma vez que a temperatura tem de
ser reduzido a partir do passo de hidrólise, que é melhor realizada à temperatura
mais elevada, pelo menos 50 ° C [152]. levedura termoativos,
Kluyveromyces marxianus, activa-se a 50 ° C, realizada
http://www.microbialcellfactories.com/content/6/1/9
igualmente bem como S. cerevisiae [ 153], mas até mesmo temperaturas mais
elevadas são desejados. A fermentação também pode ser realizado por bactérias
anaeróbias termo-activo. Por exemplo, alguns termófilos isoladas a partir de fontes
termais Icelandic um bom desempenho na produção de etanol a partir de
hidrolisados ​lignocelulolíticos, mas necessita de mais testes [154].
hidrólise enzimática de celulose de glucose é hoje predominantemente
realizada por fungos, por exemplo, Trichoderma, Penicillium e Aspergillus [ 155],
mas a competir com os resultados de hidrólise de ácido, degradação mais
eficiente, presumivelmente em é necessária uma temperatura mais
elevada, e algumas enzimas relevantes foram descritos a partir termófilos e
hipertermófilos [ver arquivo adicional 3]. O obstáculo reside na expressão
de uma série de proteínas e montá-los
em vitro [ 151], mas demonstrou-se que as celulases de diferentes origens,
com temperatura óptima diferente variando de mesófilos para termofílica,
podem ser combinados em conjunto e ainda exibem sinergismo substancial
na degradação do material celulósico [156]. Um endoglucanase de Acidothermus
cellulolyticus, que foi fundido com T. reesei celobiohidrolase e expresso em T.
reesei foi exemplo para melhorar os rendimentos de sacarificação, [157].
Endoglucanase e actividade de celobio-hidrolase não é no entanto
suficiente, como o produto de degradação (celobiose) inibe as enzimas
antigos e mais blocos de despolimerização da celulose. Para resolver esta
inibição do produto, β- glucosidases têm de ser adicionado, ou manipulados
em estirpes de produção que são capazes de fermentar celobiose e
celotriose em etanol [158]. Thermophiles ainda não tenham desempenhado
um papel importante na engenharia metabólica, devido à quantidade limitada
de vetores e ferramentas disponíveis para a sua modificação. mesófilos Em
vez disso, conhecidos como S. cerevisiae são usados, e, recentemente, tem
sido modificada com genes de uma via de xilose e de fungos a partir de uma
via de arabinose bacteriana, o que resultou numa estirpe capaz de crescer
em ambos os açúcares pentoses e hexoses com rendimentos melhorados
de etanol [159]. Também são necessárias tecnologias melhores para
pré-tratamento da biomassa. Mecânicas, químicas, biológicas ou
pré-tratamentos térmicos aumentar a acessibilidade de celulase por remoção
de lignina e hemicelulose e por interromper parcialmente a estrutura de
fibras. Uma revisão recente é dada por Wyman et al. [160] e a comparação
foi feita entre tecnologias principais [161].
possibilidades de produção dos biocatalisadores
Uma consideração importante ao selecionar um biocatalisador é a
perspectiva de produzi-lo em quantidades suficientes. Estas considerações
incluem a escolha de produzir pelo hospedeiro nativo, ou, se o gene que
codifica uma enzima de interesse deve ser transferido para um hospedeiro
seleccionado para a produção recombinante. De um modo geral, a
expressão do gene não é um problema relacionado com o thermophilicity da
proteína alvo e os que têm origem a partir termofílica
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As fábricas celulares microbianas 2007, 6: 9
recursos cumprir os mesmos gargalos de produção como os seus
homólogos de mesófilos.
Outra consideração importante, crucial para a implementação de
biocatalisadores, é o custo de produção, e há alguns anos atrás por
exemplo Genencor International estava a trabalhar sob um subcontratação
do escritório de Biomassa Programa (EUA), para reduzir os custos de
celulase, a fim de fazer a degradação em açúcares fermentáveis ​mais
rentável [162].
degradação da celulose por celulases em grande escala é (como se referiu no
biocombustível à secção) geralmente levada a cabo por estirpes fúngicas [155], mas
a introdução de enzimas mais termoactivos existe uma possibilidade para a
produção heteróloga em hospedeiros bacterianos, que geralmente possuem maiores
taxas de crescimento do que os fungos. A dificuldade em usar celulases bacterianas
é que eles são maiores enzimas, mais complexos e muitas vezes parte de uma
celulossoma com muitas actividades diferentes. A pesquisa também foi destinado
para melhorar as espécies de fermentação utilizados atualmente por engenharia
metabólica.
produção de enzimas por thermophiles
Cultivo de termófilos a temperatura elevada é tecnicamente e
economicamente interessante, uma vez que reduz o risco de
contaminação, reduz a viscosidade, tornando assim mais fácil a mistura, e
conduz a um elevado grau de solubilidade substrato. No entanto, em
comparação com os seus homólogos mesófilos, a biomassa obtida por
estes organismos é normalmente infelizmente baixa. O rendimento celular
de baixo levanta problemas tanto para a produção em grande e pequena
escala, o que torna extensivos estudos sobre as suas enzimas muito difícil.
Isso provocou considerável pesquisa com o objetivo de melhorar o
rendimento das células termofílica. Até à data, vários relatórios sobre
composições de mídia e otimização de cultura de diferentes thermophiles
estão disponíveis [163]. equipamentos especiais e processos específicos
foram desenvolvidos para melhorar os processos de fermentação de
termófilos e hipertermófilos [164]. Contudo,
Tabela 3: vectores construídos para expressão sistema termofílica
Hospedeiro plasmídeo
thermophilus Thermus pMKMOO1
thermophilus Thermus pMKE1
solfataricus Sulfolobus pEXSs
Talaromyces sp. CL240 pUT737
Rhodothermus marinus prM100
Pyrococcus abyssi pYS2
Thermoanaerobacterium saccharolyticum pRKM1, pRUKM
Thermoanaerobacterium saccharolyticum pUXK, pUXKC
Sulfolobus acidocaldarius pAG1 / pAG2
Pyrococcus furiosus pAG1 / pAG2
http://www.microbialcellfactories.com/content/6/1/9
[164], a cultura comercial em grande escala de termófilos para a produção da
enzima continua a ser um desafio económico. O elevado custo dos processos
de fermentação de larga escala para a produção de enzimas por termófilos e
hipertermófilos é justificável apenas para poucas aplicações específicas.
a produção da enzima recombinante em hospedeiros mesófilas e
termófilas
Redução do custo de produção de enzimas termófilas é fundamental para o
seu avanço em grande escala. Uma alternativa para reduzir os custos de
produção e aumentar o rendimento destes processos é a utilização de
tecnologia recombinante. Uma grande variedade de enzimas termoestáveis
​tem sido clonada e expressa com sucesso em organismos mesófilos, tais
como Escherichia coli [ 165], Bacillus subtilis
[166], Saccharomyces cervisae [ 167], Pichia pastoris [ 168],
Aspergillus oryzae [ 169], Kluyveromyces lactis [ 170], e Trichoderma reesei [ 171].
No entanto, as diferenças na utilização de codões ou dobragem incorrecta das
proteínas pode resultar em actividade enzimática reduzida ou baixo nível de
expressão [172,173]. Além disso, muitas enzimas complexas, como hetero ou
aqueles que requerem co-factores ligados covalentemente podem ser muito
difíceis de produzir em hospedeiros mesofílicas. Isto iniciou a busca de
ferramentas genéticas para a sobre-expressão de tais enzimas em sistemas
hospedeiros termófilas. Até agora, uma série de vectores têm sido
desenvolvidos para a expressão de proteínas em vários hospedeiros
termofílicas (Tabela 3). O uso dos novos sistemas de expressão termófilas é, no
entanto, ainda em nível de pesquisa e mais trabalho ainda antes da exploração
em grande escala ou industrial pode ser considerado.
enzimas isoladas ou aplicações de células inteiras?
enzimas termófilas são potencialmente aplicáveis ​numa grande variedade de
processos industriais, principalmente devido à sua estabilidade extraordinária
operacional a altas temperaturas e tolerância desnaturante. Tais enzimas são
usadas na indústria química, indústria alimentar, farmacêutica, papel, têxteis
e outras indústrias [182-185]. A maioria destas aplicações utilizam enzimas
termostáveis ​recombinantes que tenham sido
Tipo Referência
Transporte [174]
Transporte [175]
Transporte [176]
Shuttle, Integração [177]
Transporte [178]
Transporte [179]
Transporte [180]
Integração [180]
Transporte [181]
Transporte [181]
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As fábricas celulares microbianas 2007, 6: 9
expressa em hospedeiros mesófilos. Dependendo do tipo de aplicação, a
natureza das reacções e a pureza do produto, a preparação de enzima pode
ser isento de células (em bruto, parcialmente purificada ou homogénea) ou
associado a células. Por exemplo, o uso de desidrogenases livre de células é
dificultada pela necessidade de co-factores caras e sensíveis [186] enquanto
transaminases sofrem de equilíbrio das reacções desfavoráveis ​[187]. Neste
sentido, aplicações de células inteiras podem ser mais atraente. aplicações de
células inteiras também foram relatados no processamento de alimentos,
fazendo uso de termófilos recombinante α- glucosidase expressa em Lactococcus
lactis
[188].
O uso de células inteiras é de especial interesse para a transformação de
lignocelulose. A bioconversão envolve dois passos principais; sacarificação e
fermentação. Sacarificação é a hidrólise de polímeros de hidratos de carbono
(celulose e hemicelulose) em açúcares, e este hidrolisado é então utilizado
como substrato no passo de fermentação por microrganismos que o
transformam em produtos metabólicos ( por exemplo etanol, ver Biocombustível).A utilização de microrganismos que ocorrem naturalmente é, no entanto,
bioconversão microbiana de célula inteira oferece uma possibilidade atractiva
de um único passo de transformação, em que os microrganismos produzem
enzimas que degradam o sacarolíticos lignocelulose e fermentar os açúcares
libertados, o que poderia levar a uma eficiência mais elevada do que nas
conversões lignocelulósicos de várias etapas comuns [189,190].
A associação íntima da celulose e da hemicelulose a lenhina na parede celular
das plantas, no entanto, tornam este substrato difícil de degradar em açúcares
monoméricos em rendimentos elevados (em comparação com açúcar- ou
culturas contendo amido, por exemplo cana-de-açúcar ou milho). Pré-tratamento
(utilizando vapor, ácido ou alcalino) é, assim, necessário para tornar os
polímeros de hidratos de carbono disponíveis para a hidrólise enzimática e
fermentação [155,191]. Entre os métodos de pré-tratamento, a alta temperatura
pré-tratamento usando água quente líquido é mostrado para fazer a biomassa
(especificamente a parte celulose) mais acessíveis ao ataque enzimático.
Desenvolvimento de sistemas de fermentação para termófilos é aqui atraente,
uma vez que permite a poupança de energia, reduzindo o custo de
arrefecimento após a vapor pré-tratamento, redução do risco de contaminação,
e melhorar as taxas de sacarificação e fermentação. Além disso, na produção
de etanol, condições termofilicas resultar na evaporação de etanol contínua
permitindo que a colheita durante a fermentação. fermentação simultânea e
recuperação do produto pode diminuir a inibição do produto do processo de
fermentação (pelo etanol), reduzir o volume de água consumida por
arrefecimento destilaria, e o tempo necessário para a destilação, o que leva a
um processo mais eficiente. Um problema associado com os procedimentos de
pré-tratamento de lignocelulose é, no entanto, a libertação de produtos de
degradação que podem inibir o crescimento microbiano [191], mas algumas
bactérias termofílicas têm mostrado resultados promissores em fermentar
hidrolisados ​de lignocelulose em etanol, como
http://www.microbialcellfactories.com/content/6/1/9
a bactéria termófila anaeróbio xilanolica, Thermoanaerobacter mathranii, mostrada
para fermentar a xilose na fracção de hemiceluloses a partir de palha de
trigo oxidados alcalina molhado em etanol sem desintoxicação anterior
[191]. Ainda assim, o crescimento em lignocelulose pré-tratada pode variar
dependente tanto organismo e substrato origem [189]. Além disso, a
insolubilidade de lignocelulose cria problemas em manter a homogeneidade
em reactores que fazem a monitorização e controle dos parâmetros do
processo difícil. Portanto, assim como para os seus homólogos mesófilos,
utilização eficiente de termófilos em bioprocessos integradas precisa de
investigação aprofundada. Nos últimos anos, foram feitos relatos sobre o
cultivo de estado sólido de termófilos em lignocelulose [192,193]. Em
alguns casos, em comparação com o líquido de fermentação submersa
mais tradicional, melhor conversão foi alcançado sob cultivo sate sólido
[194].
geralmente não suficientemente eficientes na transformação do substrato em
produtos de valor mais elevado. Assim, é imperativo para melhorar a robustez
dos micróbios para uma maior hidrólise do substrato e maiores rendimentos de
produtos por meio de engenharia metabólica. A engenharia metabólica foi
prosseguido em hospedeiros mesófilos, resultando em estirpes de interesse
biorrefinaria que produzem elevados rendimentos de etanol [195,196],
propanodiol [197,198], acetato de [199], ido adico [200], ácido succínico [201] e
ácido láctico [ 202]. No entanto, os relatórios de engenharia metabólica têm
sido muito raro para thermophiles [203], mas pode aumentar com a
disponibilidade / desenvolvimento de ferramentas genéticas. Vários
organismos termofilicos tais como Thermoanaerobium brockii
[204], Clostridium thermohydrosulfuricum [ 205], e Moorella sp. HUC22-1
[206], têm sido estudados para a produção de etanol. A engenharia
metabólica de tais termófilos para melhorar a produtividade e a eficiência
da utilização de diferentes substratos, como celulose, hemicelulose e
pectina pode ser muito interessante etanol.
Observações finais
Termófilos e enzimas especialmente termófilas até à data ganhou um grande
interesse tanto como ferramentas analíticas, e como biocatalisadores para
aplicação em larga escala. Utilização destas enzimas é, contudo, ainda hoje,
apesar de muitos esforços, muitas vezes limitados pelo custo das enzimas.
Com um mercado crescente para as enzimas, que leva à produção em
volumes maiores, o custo é, contudo, previsto para diminuir. Além disso, com
uma mudança de paradigma na indústria em movimento a partir de fósseis
para com a utilização de recursos renováveis, a necessidade de catalisadores
microbianos é previsto para aumentar, e certamente não haverá uma
necessidade contínua e aumentou de biocatalisadores selectivos
termoestáveis ​no futuro.
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(Número da página não para fins de citação)
As fábricas celulares microbianas 2007, 6: 9 http://www.microbialcellfactories.com/content/6/1/9

Material adicional
Arquivo adicional 1
Exemplos de possíveis e actuais aplicações de hidrolases termoesteis, e transferases
relacionada-sequência. A tabela mostra as aplicações de enzimas termoestáveis; hidrolases e
transferases, juntamente com números CE.
Clique aqui para arquivo
[Http://www.biomedcentral.com/content/supplementary/14752859-6-9-S1.pdf]
Arquivo adicional 2
Propriedades de algum tipo selvagem termoestável ou membros de engenharia do α-
família amilase agindo sobre o amido e moléculas relacionadas. A tabela mostra algumas propriedades das
enzimas termostáveis ​que actuam sobre o amido e moléculas relacionadas.
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Clique aqui para arquivo

[Http://www.biomedcentral.com/content/supplementary/14752859-6-9-S2.pdf]
Arquivo adicional 3
Propriedades de alguns hidrolases termoestáveis, tanto de origem termófilos e mesófilos agindo em
materiais lignocelulósicos. A tabela mostra algumas propriedades das enzimas que actuam sobre
lignocelulose.
Clique aqui para arquivo
[Http://www.biomedcentral.com/content/supplementary/14752859-6-9-S3.pdf]
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