UNIVERSIDADE FEDERALDE LAVRAS

DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA (DEG)

Introdução à Tecnologia do Açúcar e do Álcool

PRODUÇÃO DE ETANOL (2° GERAÇÃO) A PARTIR DE BIOMASSAS

LIGNOCELULÓSICAS

GIOVANA STELLA ALVIM NEVEZ

JÚLIA VERONICA SOUSA COELHO
LEZY FELIPE FIRMINO
MAISA MOTA DOS SANTOS
PÂMELA CRISTINE AMORIM JOANAS
THIAGO FERREIRA COSTA VELOSO

Relatório técnico-científico referente à

disciplina Introdução à Tecnologia do Açúcar e do
Álcool, tendo como professor responsável João
Moreira Neto, sendo parte dos requisitos necessários
à obtenção da aprovação na disciplina.

Lavras – MG
2020
 SUMÁRIO
LISTA DE FIGURAS .............................................................................................................................. i
LISTA DE TABELAS ............................................................................................................................ ii
1 – INTRODUÇÃO ................................................................................................................................. 1
2 – PANORAMA DA PRODUÇÃO DE ETANOL DE 2° GERAÇÃO NO BRASIL E NO MUNDO 2
2.1 –Produção Brasileira ......................................................................................................................... 2
2.2 –Produção global ............................................................................................................................... 2
3 – PRINCIPAIS ETAPAS PARA A PRODUÇÃO DO ETANOL DE 2° GERAÇÃO ........................ 2
4 –PRINCIPAIS BIOMASSAS USADAS NA PRODUÇÃO DE ETANOL DE 2 GERAÇÃO NO
MUNDO .................................................................................................................................................. 4
5 – FINALIDADE E TIPOS DE PRÉ-TRATAMENTO PARA MATERIAS LIGNOCELULÓSICOS
................................................................................................................................................................. 6
5.1 –Tipos de pré-tratamento ................................................................................................................... 7
5.2 –Explosão a vapor ............................................................................................................................. 8
5.3 –Pré-tratamento ácido ........................................................................................................................ 9
6 – PRINCIPAIS ROTAS PARA A HIDRÓLISE DE MATERIAIS LIGNOCELULÓSICOS ............ 9
7 –PRINCIPAIS ENZIMAS USADAS NA HIDRÓLISE ENZIMÁTICA DA CELULOSE .............. 11
8 – FATORES QUE AFETAM A HIDRÓLISE ENZIMÁTICA ......................................................... 12
9 – FERMENTAÇÃO DO HIDROLISADO ........................................................................................ 13
10 – CONCLUSÃO ............................................................................................................................... 15
11 – REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS .......................................................................................... 16
 LISTA DE FIGURAS
Figura 1 - Principais etapas da produção do etanol de segunda geração..................................................3
Figura 2 - Ação do pré-tratamento na a estrutura da biomassa lignocelulósica.......................................6
Figura 3 - Mecanismo de hidrólise da celulose catalisada por ácido......................................................10
Figura 4 - Estrutura molecular da celulose, celobiose com ligação β-glicosídica..................................11
Figura 5 - Desconstrução enzimática da celulose...................................................................................12
Figura 6 - Representação da ação catalítica da Celulase sobre celulose com geração de glicose..........12
Figura 7 - Rotas de hidrólise e fermentação para obtenção de etanol de 2ª geração a partir de matéria
prima constituída de bagaço ou palha de cana-de-açúcar.......................................................................15

i
 LISTA DE TABELAS
Tabela 1 – Composição química parcial de alguns tipos de biomassa....................................................4
Tabela 2 - Composição química de biomassas lignocelulósicas com potencial para produzir etanol
2G.............................................................................................................................................................5
Tabela 3 - Resumo dos tipos de pré-tratamento…………………………………………………...........7

ii
 1 – INTRODUÇÃO
O crescimento acelerado na economia mundial tem gerado um aumento significativo na demanda
energética mundial. Aquecendo assim, as discussões sobre a redução na oferta futura de derivados de
petróleo e os impactos ambientais. Esses fatores associados potencializam a inserção de energia sustentável,
a partir de fontes renováveis, na matriz energética mundial. Segundo Silva (2012), essa nova visão aumentou
o interesse na conversão de biomassa em etanol e, hoje, esse biocombustível é uma alternativa promissora,
estudada mundialmente.

De acordo com estimativa feita pela Agência Internacional de Energia (AIE) até o ano de 2030, os
biocombustíveis corresponderão a aproximadamente 7% do combustível utilizado no transporte. O Brasil
juntamente com União Europeia e Estados Unidos serão os principais consumidores e produtores. Esse
crescimento na demanda já era previsto devido ao aumento no preço do petróleo e pelos acordos firmados
entre os países desenvolvidos (que são responsáveis por 80% das emissões globais) para a reduzir as
emissões de gases poluentes.

Os resíduos provenientes das atividades agroindustriais estão entre as principais fontes de biomassa no
mundo, correspondendo a uma geração anual de aproximadamente 40 milhões de toneladas de resíduo
lignocelulósico, ocasionando prejuízos consideráveis nas atividades econômicas no setor agroindustrial e no
meio ambiente. Assim, surge a possibilidade do aproveitamento desse resíduo, uma opção promissora que
alia o aumento na produção e a redução nos impactos ambientais.

Dois terços da cana são constituídos de material lignocelulósico, indicando seu imenso potencial para
energético. A estimativa é de que o aproveitamento do bagaço e parte das palhas e pontas da cana-de-açúcar
eleve a produção de álcool em 30 a 40%, para uma mesma área plantada (Pacheco, 2011).

O bioetanol pode ser obtido a partir de qualquer biomassa que contenha quantidades significativas de
carboidratos, particularmente amido ou açúcares (sacarose, glicose, frutose, maltose) (Jardine & Peres,
2009). A produção de etanol, com base na biomassa lignocelulósica, utiliza processos químicos (empregando
ácidos) ou da biotecnologia moderna (empregando enzimas), para a quebra de moléculas de celulose e
liberação de açúcares, para então produzir o etanol, por meio de processos fermentativos alcoólicos da
biotecnologia convencional (Ferreira, 2015).

O obstáculo na produção do etanol de segunda geração ser economicamente viável está em encontrar a
opção mais adequada para disponibilizar a glicose a partir da hidrólise da celulose considerando o custo
global, rendimento e fermentabilidade do hidrolisado. Além, do aproveitamento integral de todos os resíduos
(hemicelulose, lignina e águas residuais). O Brasil tem investido consideravelmente em pesquisas para o
aprimoramento das técnicas de produção, muitos estudos estão sendo desenvolvidos para que o processo
produtivo do etanol de segunda geração tenha ampla comercialização e torne- se economicamente viável em
futuro bem próximo.

1
 2 – PANORAMA DA PRODUÇÃO DE ETANOL DE 2° GERAÇÃO
NO BRASIL E NO MUNDO
2.1 –Produção Brasileira

No Brasil, o etanol de segunda geração é produzido principalmente a partir do bagaço e da palha de

cana-de-açúcar. E para tal, existem apenas duas empresas que possuem usinas especializadas para produzir
este combustível em escala comercial, a Raízen e a GranBio, segundo a CNPEM (2017).

A primeira usina de etanol de segunda geração no Brasil, que é pertencente à GranBio, localiza-se em
São Miguel dos Campos (AL) e possui capacidade anual de produção de até 60 milhões de litros. Já a usina
da Raízen, que se localiza em Piracicaba (SP), possui capacidade para produzir anualmente, até 40 milhões
de litros do combustível.

Além disso, segundo a Green Car Congress (2020) a GranBio anunciou uma aliança estratégica com a
NextChem, uma gigante subsidiária italiana Maire Tecnimont para operações na área de química verde e
tecnologias para energia de transição. Assim, unindo os conhecimentos da GranBio em biomassa e
biocombustíveis e da NextChem em engenharia, a aliança visa estudar a viabilidade e o desenvolvimento de
projetos para produzir na GranBio o etanol de segunda geração e exportar para diversos países.

2.2 –Produção global

No mundo todo, há nove usinas para produção de etanol de segunda geração. Dentre elas, duas no
Brasil, uma na Europa, e o restante na América do Norte. Todas já são indústrias do etanol de primeira
geração e têm governos que dão apoio à produção do etanol celulósico.

Governos de alguns países, como China, Índia, Indonésia e Malásia possuem interesses em apoiar
projetos deste combustível, na consagração de mercado em seus países.

O bagaço da cana-de-açúcar é a mais barata fonte de biomassa, pois já é obtida em algumas indústrias,
no entanto, é queimada para produzir eletricidade. Brasil, China, Índia e Tailândia são os maiores produtores
desta biomassa. Em comparação aos Estados Unidos, que já produz o etanol com restos de milho, o qual
possui um custo de biomassa em torno de duas vezes mais em relação ao bagaço de cana, segundo o Alfano,
S. et al. (2017)

Apesar da abundante quantidade de matéria prima para a produção do etanol de segunda geração, a
transição do combustível fóssil para o sustentável tem falhado, devido ao preço de mercado ainda não ser
competitivo. Os custos pesam sobre a coleta e transporte da matéria-prima, enzimas, logística, entre outros.

3 – PRINCIPAIS ETAPAS PARA A PRODUÇÃO DO ETANOL DE 2°

GERAÇÃO
Existem quatro principais etapas para se produzir o etanol de segunda geração, as quais são chamados
de pré-tratamento, hidrólise, fermentação e destilação.

2
 fonte: GROSSI, 2015
Figura 1- Principais etapas da produção do etanol de segunda geração.

Na primeira etapa, ocorre o pré-tratamento da biomassa, com o intuito de promover a formação de

açúcares ou dar condições para sua formação na etapa de hidrólise; evitar a degradação ou perda do teor de
carboidratos e evitar a formação de bioprodutos inibidores do processo de hidrólise enzimática e
fermentação.

Nesta etapa, ocorre a remoção da hemicelulose e da lignina, redução da cristalinidade da celulose,

aumento da porosidade dos materiais, redução da degradação ou perda de carboidratos e redução da
formação de bioprodutos que inibem a ação dos microrganismos fermentadores.

A etapa seguinte, chamada hidrólise, tem como finalidade obter açúcares fermentescíveis, como as
pentoses e hexoses, a partir da biomassa. As pentoses são provenientes da hidrólise da fração hemicelulose,
e as hexoses são geradas na degradação de parte das hemiceluloses e celulose.

A obtenção de açúcares a partir de material celulósico pode ocorrer de duas maneiras: por enzimas ou
por ácidos. A hidrólise ácida possui alta eficiência, com 90% de recuperação de açúcares, no entanto,
permite gerar também alguns produtos que inibem a fermentação e degradam açúcares. Já a hidrólise
enzimática, possui menor eficiência, no entanto, não há ocorrências de reações secundárias que inibem a
fermentação.

A etapa de fermentação é a conversão dos açúcares em etanol, gás carbônico, ácido succínico, ácidos
voláteis e ésteres. Para isso, é empregada o uso de microrganismos, a qual é usualmente utilizada a levedura
Saccharomyces cerevisiae como agente de fermentação, devido a sua eficiência.

Na indústria, a fermentação ocorre em reatores com agitadores, também chamadas de dornas agitadas.
A conversão em etanol a partir dos açúcares totais obtidos no processo anterior (hidrólise), nestes reatores,
variam entre 85 a 92%. O restante destes açúcares, aqueles que não se converteram em etanol, geram
produtos secundários por motivos diversos. (Andrade, 2014).

Na última etapa, a destilação, ocorre a separação do etanol da mistura. Para isso, é utilizado uma
coluna de destilação, onde a mistura que foi fermentada, agora é aquecida até uma dada temperatura. A
separação do álcool ocorre, pois, a temperatura escolhida, é o suficiente para evaporar o etanol da mistura,
porém, insuficiente para evaporar os outros componentes.

Os vapores de etanol gerado na coluna de destilação, passam então por um condensador, onde se
obtém o etanol líquido, com teor alcoólico de cerca de 96% segundo, Murakami, L. S. N. et al. (2016).
3
 4 –PRINCIPAIS BIOMASSAS USADAS NA PRODUÇÃO DE
ETANOL DE 2 GERAÇÃO NO MUNDO
O etanol 2G (etanol de segunda geração) ou etanol lignocelulósico, chamado assim por ser obtido
através da biomassa lignocelulósica, trata-se de uma alternativa que vem sendo estudada pela comunidade
científica e empresas privadas, para aumentar significativamente a produção de etanol no mundo, tanto nos
países do hemisfério norte onde a cana-de-açúcar não tem um bom desenvolvimento, quanto nos países que
já possuem grande disponibilidade dessa matéria-prima, como por exemplo no Brasil, para conseguir
aumentar a quantidade produzida, sem ser necessário aumentar a área de cultivo, e causar uma disputa de
terras, com outros produtos agrícolas.

Ademais, o etanol 2G é uma alternativa sustentável e econômica em comparação com os combustíveis

fósseis, por conseguir dar um destino aos resíduos da produção de etanol 1G (etanol de primeira geração),
assim reduzindo a formação de dejetos e aumentando a eficiência da linha de produção, extraindo mais
combustível da matéria prima (“Quais os diferenciais do etanol de segunda geração? | Blog Minaspetro”,
2016), além disso a biomassa usada no processo possui grande disponibilidade com fácil acesso e baixo
custo.

Uma das alternativas encontradas para essa produção foi a utilização dos resíduos agrícolas,
agroindustriais e dos resíduos florestais, que na maior parte representa uma grande porção do carbono total
fixado por fotossíntese (Draber, 2013) e dos compostos orgânicos de alta abundância na biosfera,
representando mais de 60% da biomassa total.

Atualmente podemos citar que as principais biomassas usadas na produção de etanol 2G, divididas
como dito acima, são:

Resíduos agrícolas: palha e bagaço de cana-de-açúcar, palha de trigo, resíduos de milho, como o
sabugo de milho, palha de arroz e casca de aveia.

Resíduos florestais: pó e restos de madeira, capim elefante, aparas de eucalipto, braquiárias, panicuns
e árvores de crescimento rápido, que podem representar alternativas competitivas e eficientes para locais
onde não se cultiva cana-de-açúcar (Barros, [s.d.]).

O material lignocelulósico é constituído de três tipos de polímeros: celulose, hemicelulose e lignina,

que se encontram em associação por pontes de hidrogênio ou ligações covalentes (Lee,1997 apud Santos,
2012). Entretanto as suas proporções variam substancialmente, dependendo do tipo, a espécie, e até mesmo a
fonte da biomassa (Grossi, 2015), como é mostrado na Tabela 1 e na Tabela 2, os valores entre elas se
diferem um pouco, devido aos fatores levantados anteriormente.

Tabela 1– Composição química parcial de alguns tipos de biomassa.

Biomassa
Celulose (%) Hemicelulose (%) Lignina (%)
Lignocelulósica

Farelo de cevada 23 32,7 24,4

Sabugo de milho 31,7 34,7 20,3

4
 Folhas de milho 37,6 34,5 12,6

Bagaço de cana 40,2 26,4 25,2

Palha de arroz 43,5 22 17,2

Palha de trigo 33,8 31,8 20,1
Palha de sorgo 34 44 20
Casca de aveia 30,5 28,6 23,1

Eucalyptus grandis 40,2 15,7 26,9

Eucalyptus globulus 46,3 17,1 22,9

fonte: GROSSI, 2015

Tabela 2 - Composição química de biomassas lignocelulósicas com potencial para produzir etanol 2G

Biomassa
Celulose (%) Hemicelulose (%) Lignina (%)
Lignocelulósica
Palha de cana 40-44 30-32 22-25
Madeira dura 43-47 25-35 16-24
Madeira mole 40-44 25-29 25-31
Talo de milho 35 25 35

Espiga de milho 45 35 15

Algodão 95 2 0,3
Palha de trigo 30 50 15
Sisal 73,1 14,2 11
Palha de arroz 43,3 26,4 16,3

Forragem de milho 38-40 28 7-21

Fibra de coco 36-43 0,15-0,25 41-45

Fibra de bananeira 60-65 6-8 5-10

Palha de cevada 31-45 27-38 14-19

Fonte: GOMEZ et al.,2010 apud SANTOS et al., 2012

Conforme observado, a massa seca vegetal é composta por cerca de 70% de polissacarídeos, sendo
que 40-60% de celulose, 20-40% de hemicelulose e 15-25% de lignina (Balat et al., 2008 apud Santos,2012).

5
 Segundo Kadam & Mcmillan e Cheng et al. (2003; 2008 apud Santos, 2012) dos resíduos derivados de
materiais lignocelulósicos, como os que foram citados acima, os mais promissores para serem
empregados em bioprocessos em cada parte do mundo são:

Na América do Sul, o bagaço de cana, na Ásia, a palha de arroz, nos Estados Unidos a palha de milho,
e na Europa a palha de trigo.

Segundo Sarkar et al. (2012 apud Santos,2012), a Ásia gera cerca de 667,6 milhões de toneladas de
palha de arroz e 145,2 milhões de toneladas de palha de trigo, enquanto que a América produz 140,86
milhões de toneladas de palha de milho.

Tratando-se do Brasil, a cana-de-açúcar é a matéria-prima mais utilizada na indústria sucroalcooleira,

tanto para a produção de açúcar quanto para a produção de etanol (Anp, 2018 apud Martins,2018). O uso do
bagaço de cana, que é gerado como resíduo pelo processo de produção de etanol 1G, é considerado uma
ótima matéria –prima, devido ao seu enorme potencial energético, mesmo ele sendo usado também para
geração de energia nas unidades de produção, ainda existem excedentes. O bagaço da cana representa 28%
do peso da cana. Trazendo vantagens ao país, tanto em relação ao etanol 1G quanto ao etanol 2G, por causa
do baixo custo e alta disponibilidade.

5 – FINALIDADE E TIPOS DE PRÉ-TRATAMENTO PARA

MATERIAS LIGNOCELULÓSICOS
O pré-tratamento dos materiais lignocelulósicos desempenha um papel importante no rendimento do
processo de produção do etanol 2G. Os principais objetivos do pré-tratamento são: aumentar a área
superficial da biomassa, dissociar o complexo lignina-celulose e reduzir o grau de cristalinidade da celulose
(HSU, 1996 apud Draber,2013). Assim, o pré-tratamento desarranja a estrutura da biomassa lignocelulósica,
facilitando assim o processo de hidrólise enzimática.

Para a produção do etanol 2G se tornar mais viável e competitivo, uma das prioridades é o
desenvolvimento de pré-tratamentos cada vez mais eficientes (Zhang, Y. P., Lynd, L.R. apud Grossi,2015)

fonte: SANTOS et al., 2012

Figura 2-Ação do pré-tratamento na a estrutura da biomassa lignocelulósica.

6
5.1 –Tipos de pré-tratamento

Existem vários tipos diferentes de pré-tratamentos, sendo eles classificados da seguinte forma: físicos,
físico-químicos, químicos, biológicos ou uma combinação desses (Sarkar et al., 2012).

Tabela 3 - Resumo dos tipos de pré-tratamento

Pré-tratamento Descrição Vantagens e desvantagens

Aumenta a superfície de contato da

Limpeza e desorganização do material,
biomassa;
a fim de causar a destruição da sua
Trituração mecânica Não é suficiente para aumentar a taxa
estrutura celular e torná-la mais
de conversão de açúcar; Não remove a
acessíveis aos posteriores tratamentos
lignina.

Provoca a degradação da hemicelulose;

A biomassa triturada é tratada com
Ruptura incompleta da matriz
Explosão de Vapor vapor saturado seguido de uma rápida
ligninacarboidratos; Geração de
descompressão
compostos inibidores a microrganismos.

Maior solubilização que a explosão a

Utiliza água quente a alta pressão
vapor;
Termo-hidrólise (pressões acima do ponto de saturação)
Grande consumo de água; Geração de
para hidrolisar a hemicelulose
compostos inibidores a microrganismos.

Por meio do uso de ácidos minerais
Hidrólise Ácida
concentrados ou diluídos
Hidrolisa hemicelulose.
Custo elevado; Equipamentos
resistentes à corrosão; Não hidrolisa a
lignina.

Remoção da Lignina da biomassa;

Longo tempo de permanência exigido;
Hidrólise alcalina Tratamento em meio alcalino Sais irrecuperáveis formados e
incorporados na
biomassa.

Hidrolisa lignina e hemicelulose;

Uma mistura de um solvente orgânico
Os solventes devem ser drenados a
com um catalisador ácido é usada para
Organosolv partir do reator, evaporados,
quebrar as ligações internas da lignina e
condensados e reciclados;
da hemicelulose
Alto custo.

7

Exposição à amônia líquida a alta
AFEX (ammonia temperatura e pressão por certo período
fiber explosion) de tempo, seguida de uma rápida
descompressão
Aumenta a área de superfície
Acessível; Retira a lignina e
hemicelulose até certo ponto; Não é
eficiente para biomassa com alto teor de
lignina; Alto custo e elevado impacto
ambiental causado pela amônia.

Vantagens e desvantagens semelhantes

Similar a AFEX, porém é utilizado CO2 as AFEX, a mudança é que o custo
Explosão de CO2
no lugar da amônia inferior, mas o rendimento é inferior a
explosão a vapor

fonte: Elaborada com base em (Draber, 2013; Grossi, 2015)

Segundo Grossi (2015), os pré-tratamentos químicos e combinações de mais de um método estão

sendo os tipos de pré-tratamento mais empregados já que removem a lignina sem degradar a cadeia
celulósica. E ainda complementa que outros processos que também são bastante estudados são os de
explosão com CO2 e tratamento com água quente.

Um exemplo de combinações de mais de um método seria após a biomassa já triturada, submetê-la a

um pré-tratamento ácido e depois a uma explosão a vapor.

5.2 –Explosão a vapor

Esse tratamento consiste em submeter o material lignocelulósico a vapor de água saturado à alta
pressão por um determinado tempo em um reator e em seguida a uma brusca descompressão em condições
atmosféricas. As moléculas de vapor a alta pressão e temperatura, penetram na estrutura do material
lignocelulósico e, no momento da descompressão se expandem rompendo as ligações da lignina,
hemicelulose e celulose. A maior parte das hemiceluloses são eliminadas, colaborando com a hidrólise da
celulose (Martin et al., 2007).

Depois desse procedimento, o material em suspensão aquosa é mantido sob agitação mecânica de 1
hora na temperatura ambiente, sendo posteriormente filtrado e as fibras lavadas novamente (Pitarelo et al.,
2012).

De acordo com Sun, Y. & Cheng, J. (2002 apud Grossi, 2015), uma vantagem da explosão a vapor
consiste na solubilização da lignina pela simples adição de algum solvente orgânico ou acidificação da água.
Outra vantagem da utilização da técnica são os resultados obtidos da hidrólise enzimática sobre a biomassa
oriunda que mostram uma eficiência de 90% contra apenas 15% utilizando resíduos não tratados.

Mesmo sendo promissora, essa técnica ainda não está completamente ajustada para aplicação em
escala industrial. O principal fator é quanto a viabilidade econômica do processo, como exemplo em usinas
sucroalcooleiras, não há equipamentos capazes de operar o bagaço de cana em uma taxa razoável (Grossi,
2015).

8
5.3 –Pré-tratamento ácido

Esse pré-tratamento consiste na diluição de ácido para realizar a hidrólise da hemicelulose presente na
biomassa, solubilizando esse componente. O ácido mais utilizado nesse processo é o ácido sulfúrico, mas
outros também, podem ser utilizados, como o clorídrico ou o fosfórico. Segundo Baudel (2006 apud Santos,
2012), combinações entre concentração de ácido, temperatura e tempo de reação podem gerar grandes
quantidades de açúcares provenientes da fração hemicelulósica.

Depois do tratamento, o hidrolisado obtido contém açúcares simples (xilose, glicose, arabinose e
galactose) e também um resíduo formado por celulose e lignina, esta que pode ser removida por um
tratamento alcalino para que a celulose possa ser hidrolisada enzimaticamente com maior rendimento (Sun,
Y. & Cheng, 2002 apud Santos, 2012).

No tratamento ácido, as principais desvantagens do processo são o fato de poder ocorrer a degradação
dos açúcares, a formação de substâncias inibidoras da fermentação e a necessidade de uso de equipamentos e
reatores muito resistentes a corrosão. Além disso, esse tratamento não é muito eficiente na despolimerização
da celulose (Grossi, 2015).

Diante disso, muitos autores defendem a utilização de pré-tratamentos combinados, como por exemplo
além do pré-tratamento da biomassa lignocelulósica com ácidos usar também em conjunto à explosão a
vapor.

Como visto, nenhum dos pré-tratamentos são totalmente satisfatórios na preparação da biomassa para
hidrólise enzimática, tendo cada processo suas desvantagens, sendo essa etapa uma das limitantes para
produção em ampla escala do etanol de segunda geração.

6 – PRINCIPAIS ROTAS PARA A HIDRÓLISE DE MATERIAIS

LIGNOCELULÓSICOS
Após a etapa de pré-tratamento, é necessária que seja realizada a hidrólise do material vegetal usado
para a obtenção do álcool. De forma simplificada, a hidrólise decompõe as fibras desses vegetais através do
uso de ácidos, enzimas específicas, ou ainda outros meios, transformando o material sólido num caldo.
Existem diversas rotas para a hidrólise, dentre elas a hidrólise ácida, com ácido diluído ou concentrado, ou
enzimática, sendo a enzimática a mais desenvolvida e utilizada (Lorenzi e Andrade, 2019).

A principal diferença entre a hidrólise química (com ácido concentrado ou diluído) e a enzimática é o
catalisador. Na hidrólise química, como o ácido consiste em um catalisador não específico, reações paralelas
indesejáveis precisam ser evitadas por um rigoroso controle do processo (Lucarini et. al., 2017). Já no
processo enzimático, as enzimas constituem catalisadores muito específicos, o que impede reações
secundárias e proporciona elevada eficiência.

Na hidrólise enzimática, enzimas como celulases, sintetizadas por fungos e bactérias, trabalham de
forma conjunta para degradar celulose e outros polissacarídeos estruturais da biomassa. Esse tipo de hidrólise
é realizado sob pressão ambiente e temperaturas moderadas (entre 50 a 60°C), com ausência de formação de
subprodutos indesejáveis e apresenta possibilidade de otimização do processo a partir de técnicas de
biotecnologia avançadas.

9
 Para que seja feita a hidrólise enzimática, ao menos três grupos de enzimas devem ser utilizados. As
endoglicanases, que atacam regiões de baixa cristalinidade na fibra celulósica, as exoglicanases, que
degradam ainda mais a molécula separando as unidades de celobiose e as β-glicosidades, que hidrolisam a
celobiose para produzir glicose. Como resultado da ação das enzimas na celulose, são obtidos glicose e
celobiose. No entanto, conforme as concentrações desses monômeros no meio aumentam, as atividades das
celulases são inibidas. A celobiose é um inibidor mais forte do que a glicose, sendo interessante que ela seja
rapidamente transformada em glicose pelas glicosidades (Ferreira, 2015). Embora o rendimento alcançado
pela rota enzimática seja, em geral, mais favorável em relação às rotas químicas, o custo das enzimas é
bastante elevado, constituindo uma barreira ao crescimento da produção de etanol de segunda geração.

A hidrólise ácida inicia com a protonação do oxigênio glicosídico, Figura 1a, com posterior quebra da
ligação C1–O. O carbocátion gerado na etapa b é estabilizado pela deslocalização do par de elétrons existente
sobre o oxigênio do anel glicosídico, adjacente a C1. O ataque nucleofílico da água sobre C1 Figura 1c, com
regeneração do ácido, Figura 1d e Figura 1e, encerra a etapa de despolimerização, se esta ocorrer no interior
da cadeia da celulose, gerando novos terminais, ou de produção de glicose, quando ocorre hidrólise
diretamente nos terminais (Ogeda & Petri, 2010).

fonte: OGEDA & PETRI (2010).

Figura 3-Mecanismo de hidrólise da celulose catalisada por ácido.

Na hidrólise por meio de ácido concentrado, soluções aquosas de ácidos minerais fortes, como ácido
sulfúrico, clorídrico ou fosfórico, em baixas temperaturas (<100°C) são usadas para promover a quebra da
celulose e hemicelulose da biomassa. Normalmente, nesse tipo de processo, a fração de hemicelulose é
hidrolisada mais rapidamente que a fração de celulose, o que expõe os monossacarídeos liberados da
hemicelulose ao meio reacional por muito tempo, levando a uma pequena degradação e perda desses
açúcares. Como vantagem, apresenta-se o elevado rendimento tanto de hexoses quanto de pentoses (em torno
de 90%). A recuperação do ácido utilizado é essencial por fatores econômicos e para evitar problemas
ambientais (Rabelo, 2010). A principal desvantagem da técnica consiste na necessidade de equipamentos
com elevada resistência devido à natureza corrosiva do ácido, o que torna o custo do produto final mais alto.

Para a hidrólise com ácido diluído, o utiliza-se comumente o H2SO4, devido ao seu menor preço e
poucos problemas com corrosão quando comparado ao, por exemplo, HCl. O uso de concentrações baixas de
ácido (<1%) demanda o uso de altas temperaturas (180-230 ºC) para alcançar taxas de reações aceitáveis na
hidrólise da celulose, além de obter altos rendimentos de glicose. Entretanto, em temperaturas elevadas, as

10
pentoses da hemicelulose, e numa extensão menor as hexoses, são rapidamente degradadas, levando a uma
inibição no processo de fermentação. Dessa forma, divide-se a hidrólise com ácido diluído em duas etapas
para que se obtenha um maior rendimento. Na primeira, a hemicelulose, principalmente, é hidrolisada em
condições menos severas com temperaturas em torno de 170-190 ºC, e concentrações de ácido de 0,5-1,2%
(m/m). Depois, os sólidos restantes são removidos e tratados na segunda etapa sob temperaturas na faixa de
200 a 230 ºC e em concentrações de ácido de até 2,5% m/m (Ogeda & Petri, 2010). Como desafios dessa
metodologia encontram-se a formação de compostos secundários difíceis de lidar, como o alcatrão, e o
controle do tempo de reação para rendimento máximo de glicose.

7 –PRINCIPAIS ENZIMAS USADAS NA HIDRÓLISE ENZIMÁTICA

DA CELULOSE
Como dito anteriormente, o material lignocelulósico é constituído por três tipos de polímeros, a
celulose, hemicelulose e lignina. No entanto, a celulose compõe a maior parte da parede celular dos vegetais
e é o principal polímero da biomassa lignocelulósica de interesse para a produção de etanol de segunda
geração (Lemões, 2017). Contudo, é fundamental que a celulose passe pelo processo de hidrólise para obter
uma conversão em açúcares fermentáveis que poderão ser convertidos em etanol pelo processo posterior de
fermentação.

A celulose é um polissacarídeo formado por unidades de β-D-glicose, unidas por ligações glicosídicas
β(1-4) carbono-carbono e por ligações de hidrogênio, originando em um polímero linear, como mostra na
Figura 4. A celobiose, duas unidades de glicose unidas por ligações β(1-4), é a unidade de repetição do
biopolímero de celulose.

A molécula é constituída por uma estrutura cristalina altamente organizada e uma barreira física de
lignina que circunda as fibras de celulose, tornando-a resistente à hidrólise. Porém, existem regiões amorfas,
nas quais as moléculas não são tão ordenadas, sendo mais suscetíveis à hidrólise e são nessas regiões que vão
acontecer o processo (Vásquez, 2007)

.
fonte: SOUZA, 2016
Figura 4- Estrutura molecular da celulose, celobiose com ligação β-glicosídica.

Para isso, usa-se grupos enzimáticos denominadas Celulases que são compostas por diferentes
enzimas subdivididas em três classes, de acordo com seu local de atuação no substrato celulósico. Essas três
classes de enzimas são as Endoglucanases, Exoglucanases e 𝛃-glucosidases. Elas serão responsáveis pela
desconstrução da biomassa, como pode-se observar pela Figura 5.

11
 fonte: LEMÕES, 2017
Figura 5- Desconstrução enzimática da celulose.

As Endoglucanases ou Endo-1,4-𝛃-D-glucanases são responsáveis por atacar as regiões amorfas das

cadeias de celulose e de seus derivados quebrando as ligações glicosídicas e liberando oligossacarídeos, ou
seja, novos terminais com menores grau de polimerização. Com isso geram novas extremidades redutoras e
não-redutoras. Já as Exoglucanases, também conhecidas na literatura como Celobio-hidrolases ou Exo-1,4-
𝛃-D-glucanases, atuam nessas extremidades redutoras e não redutoras da cadeia de celulose liberando D-
celobiose, que consiste na unidade repetitiva do polímero, como já dito, formada por duas moléculas de
glicose. Por fim, 𝛃-glucosidases ou 1,4-𝛃-D-glucosidases a partir da celobiose catalisam a liberação de
unidades monoméricas de D-glicose. Na Figura 6 representa-se de modo simplificado a ação de cada uma
dessas enzimas (Ogeda & Petri, 2010).

fonte: OGEDA & PETRI, 2010

Figura 6- Representação da ação catalítica da Celulase sobre celulose com geração de glicose.

8 – FATORES QUE AFETAM A HIDRÓLISE ENZIMÁTICA

A hidrólise enzimática de materiais lignocelulósicos é limitada por vários fatores. Inicialmente, tem-se
a utilização de altas concentrações de substrato. Essa grande quantidade pode conduzir a elevadas
concentrações de açúcares no hidrolisado que favorece a etapa de fermentação e também contribuir para a

12
redução dos custos global de produção como consequência do baixo consumo de água e do menor
processamento de recuperação e purificação. Porém, acarretaria em algumas dificuldades, fazendo com que
restrinjam uma carga de sólidos máxima a ser utilizada no processo (Silva, 2015).

Primeiro, pode citar como uma dessas dificuldades a inibição do complexo celulolítico pelos açúcares
liberados na hidrólise. A celobiose e glicose, obtidas pela ação das enzimas Endoglucanases e Exoglucanases
sobre a celulose, acumulam-se no meio reacional, e com o aumento de suas concentrações, as atividades das
Celulases respectivas são inibidas por estes produtos, resultando em uma diminuição final na taxa e no
rendimento da hidrólise. A celobiose apresenta um poder de inibição maior do que a glicose.

Já como um segundo problema, durante a hidrólise de materiais lignocelulósicos, são gerados uma
série de compostos os quais são inibitórios a microrganismos. A formação desses inibidores está relacionada
com o longo tempo envolvido na etapa de hidrólise no qual a solução de glicídios torna-se uma fonte
disponível para os microrganismos indesejados. Além disso, as próprias enzimas podem constituir uma fonte
de contaminação. Com isso, esses compostos podem limitar a utilização eficiente dos hidrolisados.

Outro fator importante que afeta a hidrólise enzimática são os polímeros hemicelulose e lignina que
também compõem o material lignocelulósico. Esses polímeros dificultam o acesso da Celulase à celulose,
diminuindo a eficiência da hidrólise. A lignina, um agente de ligação entre as fibras de celulose gerando uma
estrutura resistente e rígida, interfere na hidrólise por bloquear o acesso das Celulases na celulose e por ligar
irreversivelmente enzimas hidrolíticas. Já a hemicelulose, que atua como uma conexão entre a lignina e a
fibra de celulose e fornece uma maior rigidez a rede celulose-hemicelulose-lignina, deixa o substrato com
poros de pequeno tamanho, diminuindo assim a acessibilidade e a probabilidade de hidrólise da celulose. Em
vista disso, a remoção da lignina e da hemicelulose pode aumentar consideravelmente a taxa de hidrólise.

Variações na temperatura e no pH do meio em que ocorre a hidrólise também podem influenciar no

rendimento do processo. Em geral, segundo as informações de Ogeda & Petri (2010), as Celulases
apresentam maior atividade na faixa de temperatura de 60°C a 70°C e pH entre 4,5 e 5. E por fim, a hidrólise
enzimática da celulose consiste das etapas de adsorção da Celulase sobre a superfície da celulose, a
biodegradação da celulose para açúcares fermentáveis e dessorção da Celulase. Com isso, a atividade da
Celulase pode diminuir durante a hidrólise, e também, a adsorção irreversível de Celulase pode causar
desativação.

9 – FERMENTAÇÃO DO HIDROLISADO
A fermentação é um processo comum a todos os substratos açucarados, cujo princípio é a
transformação dos açúcares em etanol e dióxido de carbono. As variações entre os processos de fermentação
são apenas em detalhes (Lima et al., 2001).

A fermentação alcoólica pode ocorrer em qualquer material que contenha açúcares como a glicose ou
a frutose, ou que contenha algum composto que possa resultar nesses monossacarídeos por meio da hidrólise
(Lopes et al., 2017). A fermentação é a etapa que ocorre após a hidrólise do material lignocelulósico e pela
qual passam os açúcares simples produzidos na quebra da celulose e hemicelulose, sendo convertidos, por
micro-organismos, em etanol (Martins, 2018).

Os materiais lignocelulósicos, quando hidrolisados produzem hexoses oriundas da celulose que é

facilmente fermentada pelos microrganismos. Já a hidrólise da hemicelulose fornece pentoses (xilose e

13
arabinose), que não são diretamente fermentadas por leveduras industriais convencionais, sendo a
biotransformação dessas pentoses, a etanol um dos desafios mais importantes a resolver no âmbito científico
e tecnológico (Jardine & Peres, 2009).

Os fatores que afetam diretamente o processo fermentativo, destacam-se pH e temperatura. (Ribeiro et

al., 2019). Segundo Pacheco (2011), ainda não são conhecidos os micro-organismos e as condições que
produzam enzimas hidrolíticas de forma eficiente e econômica. A glicose obtida no processo de hidrólise é
fermentada segundo procedimento usual já estabelecido, produzindo etanol.

No processo de fermentação do hidrolisado celulósico para a produção de etanol, a principal espécie

utilizada é a Saccharomyces cerevisiae. Estas fermentam uma ampla variedade de hexoses, tais como
glicose, frutose, galactose, maltose e maltotriose, levando a um alto rendimento de etanol. Estas leveduras
têm sido tradicionalmente empregadas na produção industrial de etanol porque são cultivadas para
produzirem uma concentração moderadamente alta de álcool (Rabelo, 2007). Não existe microrganismo mais
apropriado que a levedura Saccharomyces cerevisiae, que através de seu emprego intensivo em fermentação
industrial, já passou por um processo de seleção natural, apresentando os melhores desempenhos em
conversão de glicose a etanol, produtividade e tolerância alcoólica (Kirally et al., 2003).

A levedura Saccharomyces é um aeróbio facultativo, ou seja, possui a habilidade de se ajustar

metabolicamente, tanto em condições de aerobiose como de anaerobiose (ausência de oxigênio molecular).
Os produtos finais da metabolização do açúcar irão depender das condições ambientais em que a levedura se
encontra. Enquanto uma porção do açúcar é transformada em biomassa, CO2 e H2O em aerobiose, a maior
parte é convertida em etanol e CO2 em anaerobiose, processo denominado de fermentação alcoólica (Lima et
al., 2001).

Durante a produção de etanol de segunda geração existe a geração de uma grande quantidade de águas
residuais, como o licor de pré - tratamento, rico em pentoses; a lignina solúvel e insolúvel, e a vinhaça; além
de eventuais resíduos sólidos resultantes após a etapa de hidrólise enzimática, constituído principalmente de
lignina e hemicelulose não hidrolisáveis (Rabelo, 2007). A fermentação das pentoses geradas a partir da
hemicelulose requer micro-organismos específicos, e é ainda uma barreira a ser superada pelos muitos
estudos dedicados ao etanol de segunda geração (Pacheco, 2011).

Quando se trata da fermentação de pentoses poucos microrganismos conseguem fermentá-la a etanol

sendo considerada um inibidor da fermentação. De acordo com Jardine & Peres (2009) outro obstáculo na
fermentação do material lignocelulósico hidrolisado é causado pelo próprio processo antecedente a ela, o
processo de pré-tratamento, sem o qual a hidrólise torna-se inviável. Esse processo acarreta a formação de
uma série de compostos secundários que inibem a atividade dos microrganismos fermentadores.

O grande desafio na etapa de fermentação reside na bioconversão das pentoses. Sendo que a conversão
das pentoses em etanol (2ª geração) é de suma importância na eficácia do processo a partir de biomassas
lignocelulósicas.

Muitas pesquisas estão sendo desenvolvidas com a finalidade de que as pentoses sejam fermentadas
naturalmente a etanol, além do desenvolvimento de linhagens recombinantes de Saccharomyces cerevisiae.
Segundo Jardine & Peres (2009) três espécies de leveduras são identificadas como as de maior potencial para
a fermentação alcoólica das pentoses, são elas: Pichia stipitis, Candida shehatae e Pachysolen tannophilus,
porém com desempenho até o momento muito limitado.

Para realizar a fermentação alcoólica de um substrato contendo pentoses e hexoses há duas opções:
fermentação simultânea ou sequencial de pentoses e hexoses. Na fermentação simultânea são utilizados dois
14
microrganismos: um que fermente a glicose e outro que fermente a xilose. Estes são cultivados em cocultura.
Outra alternativa é conduzir a fermentação num esquema sequencial, fermentando primeiro a glicose e
depois as pentoses ou vice-versa (Jardine & Peres, 2009).

fonte: ROSSEL, 2007 apud JARDINE; PERES, 2009

Figura 7- Rotas de hidrólise e fermentação para obtenção de etanol de 2ª geração a partir de matéria
prima constituída de bagaço ou palha de cana-de-açúcar.

10 – CONCLUSÃO
Com o presente estudo, tornou-se possível o aprofundamento nas etapas de produção e desafios
referentes à produção de etanol de segunda geração no Brasil e no mundo. Pôde-se compreender a gama de
biomassas disponíveis para utilização na geração de etanol 2G e os principais tipos e finalidades do pré-
tratamento da biomassa. Em relação à hidrólise do material lignocelulósico, fez-se a diferenciação entre o
processo de hidrólise ácida ou enzimática e apresentação dos principais fatores que geram interferência na
hidrólise enzimática, bem como das enzimas utilizadas no processo, uma vez que esse tipo de hidrólise é
mais amplamente adotado pelas usinas. Por fim, abordou-se o processo fermentativo de conversão dos
açúcares hidrolisados a etanol e dióxido de carbono pela ação de leveduras.

A produção de etanol a partir de biomassas lignocelulósicas, como o bagaço da cana de açúcar,

majoritariamente usado no Brasil, apresenta alguns obstáculos a sua ampliação. Entre eles, pode-se destacar
a escolha do melhor processo de pré-tratamento do material lignocelulósico, uma vez que ainda existem
incertezas quanto à melhor combinação de tratamentos a ser utilizada para aprimorar o rendimento do
processo. Além disso, apesar de possibilitar eficiência elevada, o alto custo das enzimas necessárias para a
hidrólise enzimática também constitui uma limitação. Já em relação à fermentação, a maior barreira reside
em buscar técnicas de realizar a fermentação das pentoses, para convertê-las também a etanol e maximizar a
eficácia da produção.

Logo, observa-se que o etanol de segunda geração representa uma alternativa de combustível
sustentável e de potencial interesse econômico para as indústrias, uma vez que permite a reutilização de
resíduos agrícolas ou florestais em seu processo, o que reduz a necessidade de ampliação de área de plantio
de matéria prima. Desse modo, considera-se de grande relevância a realização de estudos para a melhoria das

15
etapas e otimização dos mecanismos da produção do etanol 2G, visando principalmente à obtenção de
estratégias para minimizar os obstáculos anteriormente descritos.

11 – REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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