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Soluções e Técnicas em Análises Clínicas p/ EMSERH (Bioquímico)
Teoria e exercícios comentados
Prof.ª Denise Rodrigues Aula 00
SUMÁRIO PÁGINA
1. Apresentação 01
2. Estrutura do Curso 02
3. Soluções 02
4. Solubilidade 04
5. Concentração de Soluções 0 05
6. Diluição 07
7. Tipos de Soluções 09
8. Água Reagente 09
11. Gabarito 36
Apresentação
Olá, pessoal! Eu sou Denise Rodrigues, biomédica e meu
objetivo com esse curso é auxilia-los no estudo sobre o preparo de
soluções e algumas técnicas específicas com aplicação em
análises clínicas, conteúdos exigidos no último edital de concurso
da EMSERH para o cargo de bioquímico. É preciso conhecer de que
maneira esse conteúdo costuma ser abordado nas provas! Por isso
vamos treinar resolvendo questões de concursos anteriores. Antes de
iniciar, vamos conferir os conteúdos que estão previstos em nosso
curso!
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Estrutura do Curso
Soluções
As misturas podem ser homogêneas ou heterogêneas.
Nas misturas homogêneas o soluto e o solvente constituem uma fase
única. As misturas heterogêneas possuem duas ou mais fases
distintas.
Solução é como chamamos uma mistura homogênea
translúcida entre duas ou mais substâncias, com diâmetro médio
de partículas entre 0 e 1nm. O processo utilizado para obter essa
mistura é chamado de dissolução.
Exemplos: açúcar na água, sal de cozinha na água, álcool hidratado.
Uma solução é sempre formada pelo soluto e pelo solvente.
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Solvente: substância que dissolve. Usualmente é o componente que
está presente em maior quantidade.
Uma solução verdadeira é caracterizada por formar um sistema
homogêneo (a olho nu e ao microscópio), sendo impossível separar o
disperso do dispersante por processos físicos convencionais.
A água é chamada de solvente universal. Isso porque ela
dissolve muitas substâncias e está presente em muitas soluções.
As soluções podem ser formadas por qualquer combinação
envolvendo os três estados físicos da matéria: sólido, líquido e
gasoso.
As misturas são classificadas em soluções verdadeiras (0 a 1
nm), soluções coloidais (0 a 1000 nm) e suspensões (acima de
1.000 nm). Trataremos apenas das soluções verdadeiras, as quais
chamamos apenas de soluções.
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em que o soluto é indistinguível do solvente. Para que a situação
(depósito de cristais de soluto) descrita na letra D ocorra, deve haver
a evaporação do solvente.
Gabarito: B.
Solubilidade
A solubilidade é a capacidade de uma substância ser
dissolvida por uma determinada massa de solvente a uma dada
temperatura. Cada substância possui seu coeficiente de solubilidade.
O que isso quer dizer? A uma certa temperatura tem uma quantidade
máxima de soluto que pode ser dissolvida em uma dada quantidade
de solvente.
E as soluções podem ser insaturadas, saturadas ou
supersaturadas, de acordo com a quantidade de soluto dissolvido.
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g de água a 20ºC. Quando apenas se adiciona uma quantidade
superior ao coeficiente de saturação, teremos uma solução
supersaturada? Não!!! Teremos uma solução saturada com corpo de
chão/fundo!
Concentração de Soluções
A concentração de uma solução é a relação entre a
quantidade de soluto e a quantidade do solvente ou da solução.
Uma vez que as quantidades de soluto e solvente podem ser
dadas em massa, volume, mol etc.., há diversas formas de se
expressar as concentrações de soluções. Vejamos as formas mais
utilizadas:
Onde:
Molaridade (mol/L)
Também chamada “concentração em quantidade de matéria”,
“concentração molar” ou “concentração em mol/L”, corresponde a
razão entre a quantidade de matéria do soluto (expressa em mols) e
o volume da solução (em litros). Dessa forma, a molaridade indica
quantos mols de soluto existem em cada litro de uma determinada
solução. Para calcular a molaridade usamos a seguinte equação:
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M = n/V onde n = m1/MM. Juntando as duas:
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(Eq). Como referência rápida, são apresentadas as regras para o
cálculo do equivalente dos tipos mais comuns de reagentes.
Diluição
Consiste em adicionar mais solvente puro a uma determinada
solução. A massa de uma solução após ser diluída permanece a
mesma, não é alterada, porém a sua concentração e o volume se
alteram. Enquanto o volume aumenta, a concentração diminui. Veja a
fórmula:
Onde:
M1 = molaridade da solução 1
M2 = molaridade da solução 2
V1 = volume da solução 1
V2 = volume da solução 2
Para esta fórmula, sempre M1 e V1 são mais concentrados e M2
e V2 são mais diluídos.
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M1.V1= M2.V2
3M.V1=2,5M.1000mL
V1= 833,3mL
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Comentário: vamos utilizar a fórmula de diluição C1.V1=C2.V2,
onde: C1 = concentração da solução 1; C2 = concentração da
solução 2;
V1 = volume da solução 1; V2 = volume da solução 2. Para esta
fórmula, sempre C1 e V1 são mais concentrados e C2 e V2 são mais
diluídos. O valor que queremos achar é o da concentração da solução
2, o qual chamaremos de C2. Logo: 0,15.500=C2.1500, resultando
em 0,05, ou seja, C2=5%.
Gabarito: CERTO.
Tipos de soluções:
Solução padrão: são aquelas que possuem concentração
exatamente conhecida, usadas para fins analíticos. A concentração
é expressa com exatidão (quatro casas decimais). Para preparo desse
tipo de solução, a pureza dos reagentes e precisão dos
instrumentos e vidrarias é determinante.
Soluções não padronizadas: usadas para fins não analíticos sendo
sua concentração aproximada. Não é requerida a mesma exatidão
exigida para soluções padronizadas.
Água Reagente
A água é um reagente utilizado na maioria dos testes
laboratoriais e por isso deve seguir um padrão de controle de
qualidade rigoroso. O fornecimento urbano de água apresenta
moléculas orgânicas, íons inorgânicos, partículas, coloides, gases,
bactérias e seus produtos, que podem alterar os resultados dos
exames laboratoriais e causar eventuais erros e falhas mecânicas em
equipamentos analíticos. Para remover essas impurezas, é necessário
recorrer a uma combinação de tecnologias de purificação. Há várias
organizações que especificam normas sobre a água reagente, a fim
de minimizar sua interferência nos ensaios laboratoriais, pois as
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tecnologias de ensaio são refratárias à água reagente de baixa
qualidade.
A maioria dos laboratórios utiliza as normas estabelecidas pelo
Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) que classifica
a água em:
- Clinical Laboratory Reagent Water (CLRW);
- Special Reagent Water (SRW); e
- Instrumental Feed Water (IFW).
A CLRW (em português “água reagente para laboratório
clínico”) substitui a antiga classificação de água tipo I e tipo II.
Nesse tipo de água não encontramos bactérias, materiais
inorgânicos e orgânicos e nem partículas e coloides. É utilizada
em diluições, reconstituição de reagentes liofilizados, preparação de
branco, preparação de meios de cultura, realização de exames e
lavagem.
A SRW (“água reagente especial”), é uma água livre de
DNAses e RNAses, utilizada nas técnicas de biologia
molecular.
A IFW (“água para alimentação instrumental”), é utilizada
em equipamentos automatizados, para banhos aquosos, diluições,
enxagues, dentre outros.
O monitoramento da qualidade é realizado pela determinação
de: resistividade e condutividade (diariamente, permite mensurar
a quantidade de contaminantes iônicos presentes na água), carbono
orgânico total-TOC (realizar anualmente, altos níveis indicam
contaminantes orgânicos), controle microbiológico (contagem de
UFC – unidades formadoras de colônia, realizada semanalmente) e
teste de endotoxinas (indicador de subprodutos de bactérias,
fungos e algas).
O tipo de água a ser utilizado deve atender aos requisitos
analíticos da metodologia/técnica que se pretende.
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Os cuidados na preparação e no manuseio da água auxiliam na
minimização de possíveis erros analíticos, aumentando a
confiabilidade dos resultados.
Tecnologias de Purificação
Já sabemos que a água deve ser purificada de alguma forma,
tanto para a última lavagem da vidraria a ser utilizada como na
preparação das soluções e diluições necessárias. Mas como isso é
feito? Quais são os tipos de água utilizados?
Para se tornar adequada para a utilização no laboratório, a
água deve passar por purificação para a eliminação dos
contaminantes dissolvidos nela, tornando-se água reagente. O
processo de purificação não é único e pode ser decorrente de uma
combinação de métodos para que atenda às especificações
internacionais de qualidade. Existem vários métodos para remoção de
impurezas, por isso é necessário recorrer a uma combinação de
tecnologias, associando suas vantagens, a fim de se obter uma água
de alta qualidade. Veja a tabela a seguir:
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Os processos de purificação são:
Filtração: processo de separação de partículas contaminantes
presentes na água por meio da utilização de um material poroso,
como filtros de carvão ativado ou de celulose.
Destilação: é usada para separar misturas homogêneas do tipo
sólido-líquido, nas quais os componentes têm pontos de ebulição
diferentes. O vapor da água aquecida é condensado, coletado e
armazenado, removendo grande parte dos contaminantes;
Desinfecção por sistema ultravioleta (UV): a água circula no
reator de esterilização. Em contato com a luz, os microrganismos são
inativados pela luz UV (na faixa de 250 a 270 nm), resultado do dano
fotoquímico ao ácido nucleico dos mesmos. A localização da lâmpada
deve ser anterior à troca iônica;
Deionização: é utilizada para remoção de substâncias
inorgânicas, empregando-se colunas com resinas carregadas
eletricamente, que permitem a troca seletiva de íons por compostos
inorgânicos dissolvidos na água;
Eletrodeionização: é um processo contínuo, em que a água
passa em canais, migrando para o canal de eletrodo, seguindo
através de membranas permeáveis a ânions e cátions (canais de
purificação) e, por fim, pelo canal de concentração. O campo elétrico
criado faz que os íons removidos transitem por canais em que ficam
concentrados, enquanto o produto transita por outro canal e é
estocado. Para evitar a precipitação de carbonato de cálcio ou
magnésio, existem partículas de carvão ativado entre as resinas de
troca iônica que são continuamente regeneradas pela corrente
elétrica;
Microfiltração e ultrafiltração: a membrana, que é colocada na
saída do sistema de purificação, não permite que quaisquer partículas
acima de 0,22 µm a atravessem, promovendo uma filtração
esterilizante, como é o caso da microfiltração. Mais recentemente, a
ultrafiltração foi proposta como uma forma de eliminar outros
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contaminantes não eliminados pela microfiltração, pois os poros do
filtro são menores, variando de 25 a 3 kDa;
• Osmose Reversa: é o processo de passagem de água através
de uma membrana semipermeável em um sistema de alta pressão,
que força sua passagem pela membrana, retendo partículas,
compostos orgânicos e bactérias.
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são as técnicas de espalhamento em placa, de membrana filtrante e
por microscopia de epifluorescência. O controle microbiológico deve
ser feito semanalmente.
• Endotoxinas: constituem o maior componente lipídico da membrana
externa de bactérias Gram-negativas, que as liberam em seu meio
circundante durante sua multiplicação ou quando morrem. As
endotoxinas adsorvem-se de modo variado à maioria das superfícies,
incluindo o carvão ativado e as resinas. A detecção e/ou a
quantificação dos níveis de endotoxinas pode ser feita por teste do
coágulo, turbidimetria ou técnica cromogênica.
Algumas especificações que devem ser estabelecidas no
momento de produção da água, de acordo com o tipo desejado:
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de destiladores, é a que apresenta maior pureza do ponto de vista
microbiológico, não contém elementos orgânicos. Em contato com o
ar, a água destilada pode se tornar rica em gases dissolvidos, como o
gás carbônico (CO2). Seu pH é da ordem de 7, mas, se exposta ao ar,
tende a ficar um pouco ácida devido ao CO2 que irá se dissolver nela.
A água destilada é estéril enquanto estiver protegida do ar ambiente.
Destiladores:
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água e os substitui por íons H+; enquanto uma resina fortemente
básica (OH-) remove os ânions que estejam contaminando a água.
Deionizadores
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Para análise: indicado para análises mais exigentes;
Cromatograficamente puros: destinado a processos analíticos
altamente sensíveis;
Espectograficamente puros: possui alto grau de pureza, sendo
destinado a análises espectroscópicas.
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analises espectroscópicas são utilizados reagentes com alto grau de
pureza. Letra D: pelo que vimos, uma solução padrão contém uma
determinada quantidade exata, portanto, a pureza dos reagentes e
precisão dos instrumentos e vidrarias é determinante.
Gabarito: A.
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de análises clínicas, precisam implantar um parâmetro de controle no
sistema de purificação da água para evitar a contaminação da água
por microrganismos e você, que é Biomédico, foi escolhido para
implantar este parâmetro no laboratório. Qual é o parâmetro de
controle indicado para esse tipo de contaminação?
A) Teste LAL (Limulus Amoebocite Lysate).
B) Filtração.
C) Carbono orgânico total.
D) Resistividade.
E) Contagem total de bactérias heterotróficas em placa.
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Comentário: a questão fala sobre o o controle microbiológico, que
pode ser realizado por meio da técnica de contagem de bactérias
heterotróficas, que avalia o número de microrganismos viáveis
presente no sistema de purificação. As metodologias utilizadas são as
técnicas de espalhamento em placa, de membrana filtrante e por
microscopia de epifluorescência. Esse controle microbiológico deve
ser feito semanalmente. Portanto, letra E é alternativa correta.
Gabarito: E
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Comentário: a concentração de uma solução é a relação entre a
quantidade de soluto e a quantidade do solvente ou da solução. Há
diversas formas de se expressar as concentrações de soluções (já que
as quantidades de soluto e solvente podem ser dadas em massa,
volume, mol e etc.... Considerando os dados fornecidos na questão,
devemos utilizar a fórmula de Concentração Comum (C), que
relaciona a massa do soluto em gramas e o volume da solução em L
(g/L) na seguinte fórmula: C=m/V. Devemos converter tudo que está
em miligramas para gramas e o que está em mililitros para litro e
calcular. Após calcular, veremos que as três soluções têm a mesma
concentração.
Solução I: 0,456/0,260= 1,754 g/L
Solução II: 0,228/0,130= 1,754 g/L
Solução III: 0,114/0,065= 1,754 g/L
Gabarito: B.
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e) Molaridade indica o peso molecular do soluto contido em 1 litro de
solvente.
Comentário: molaridade indica a relação entre número de mols do
soluto e o volume de solução (em litros), logo, a letra A, C e E estão
incorretas. Já a Normalidade é uma forma de expressar a
concentração de uma solução que é dada pela razão entre o número
de equivalentes-grama (Eq) de soluto dissolvidos e o volume da
solução em litros, logo, a letra B está incorreta e a letra D é o
gabarito da questão.
Gabarito: D.
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para preparar a solução mais diluída. Assim, vamos usar a fórmula:
10MxV1=0,4x100ml; V1=40/10; V1=4ml. Obtemos que pipetando
4ml da solução mãe a 10M para um volume final de 100ml, vamos
obter 100ml de solução a 04M.
Gabarito: E.
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desde que sejam sem carga elétrica. Portanto, o líquido obtido é
impuro, não estéril e não pode ser utilizada na preparação de
injetáveis. Mas pode, por exemplo, ser utilizada nas indústrias como
água de processo.
Gabarito: B.
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11. (2017/AOCP/EBSERH/Técnico em Análises Clínicas (HUJB –
UFCG) Um técnico deve preparar uma solução 1:10 de hipoclorito de
sódio, assinale a alternativa que contém a preparação correta dessa
solução.
a) 900 ml de água e 10 de hipoclorito de sódio.
b) 10 ml de água e 90 de hipoclorito de sódio.
c) 10 ml de água e 900 de hipoclorito de sódio.
d) 1000 ml de água e 90 de hipoclorito de sódio.
e) 90 ml de água e 10 de hipoclorito de sódio.
Comentário: 1:10 de hipoclorito significa que será uma parte de
hipoclorito para nove partes iguais de água. A única alternativa que
traz dessa forma é a letra E. Lembrando que usualmente o solvente é
o componente que está presente em maior quantidade. E o soluto é a
substância/componente que será dissolvido.
Gabarito: E.
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13. (2014/NC-UFPR/ITAIPU BINACIONAL/Técnico em Análises
Clínicas) Uma mulher com 62 anos foi realizar exame de triglicerídeos
no laboratório. O resultado deu maior que a linearidade do método.
Para que o exame possa ser liberado, é necessário fazer uma diluição
do soro com água e quantificar novamente o analito. Em relação a
essa diluição, é correto afirmar:
a) O soro é o solvente.
b) A água é o solvente.
c) A água e o soro são solventes.
d) A água e o soro são solutos.
e) A água é o soluto.
Comentário: o soluto é sempre a substância/componente que será
dissolvido. Nesse caso iremos diluir o soro para que o resultado não
seja novamente maior que a linearidade do método, portanto, ele é o
soluto e a água é o solvente.
Gabarito: B.
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6,25 . V1 = 0,5 . 5000ml
6,25. V1= 2.500/6,25
V1=400 ml
Portanto, seriam necessários 400mL e não 500mL como diz o
enunciado da questão.
Gabarito: ERRADO.
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50000mL------------------X
X=25000mg=> ou 25g
Façamos agora o mesmo cálculo para o parabeno:
100mL-------------------2g
50000mL---------------- X
X=1000g=> ou 1kg
Assim chegamos a 25 g de fluoreto de sódio e 1 kg de solução
conservante de parabenos.
Gabarito: C.
Lista de Questões
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2. (2010/CESPE/MS/Farmacêutico) Julgue os itens subsequentes,
acerca de cálculos e unidades relacionadas a procedimentos de
manipulação em farmácia.
“Ao se diluir 500 mL de uma solução 15% (v/v) para 1.500 mL,
obtém-se uma solução de concentração final equivalente a 5%.”
CERTO ERRADO
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laboratórios clínicos, necessitando atender especificações de
qualidade descritas pela padronização do CLSI (Clinical and
Laboratory Standards Institute). Assim, para ARLC, o parâmetro é um
indicador da contaminação iônica dessa água, e o valor ideal desse
parâmetro para uso no laboratório clínico é ____________________
Assinale alternativa que preenche, correta e respectivamente, as
lacunas do texto.
A) Carbono Orgânico Total … < 1.000 ng/g
B) Bactérias heterotróficas … < 10 UFC/mL
C) Resistividade … ≥ 10 M .cm a 25 °C
D) pH … ≥ 7,00
E) Teor de silicatos … < 10 mg/L
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6. (2012/PR-4/UFRJ/UFRJ/Técnico em Farmácia) O quadro a seguir
apresenta três soluções que contêm quantidades diferentes de um
mesmo soluto em diferentes volumes.
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8. (2016/IBFC/EBSERH/Técnico em Farmácia) Reagentes são
substâncias utilizadas, quer como tais, quer como constituintes de
soluções, na realização dos ensaios farmacopeicos. Para o preparo de
100 mL (mililitros) de uma solução de cloreto férrico a 0,4 molar,
deve-se partir de uma solução saturada de cloreto férrico que está a
10 molar. Assinale a alternativa correspondente ao volume que
deverá ser utilizado da solução saturada de cloreto férrico a 10 molar
para o preparo da solução a 0,4 molar:
a) 0,25 mL (mililitro)
b) 2,5 mL (mililitro)
c) 0,04 mL (mililitro)
d) 0,4 mL (mililitro)
e) 4 mL (mililitro)
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e) O sistema de obtenção, distribuição e armazenamento da água
deve ser validado e apropriado, de forma a impedir a contaminação
microbiana e a formação de endotoxinas bacterianas.
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c) uma parte do soluto em nove partes de álcool.
d) 1,1 do soluto em dez partes de álcool.
e) nove partes do soluto em uma parte de álcool.
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importante para aos cálculos no preparo de soluções, assinale a
alternativa correta.
a) Molaridade indica massa de soluto contida em 1 litro de solvente.
b) Normalidade indica a relação entre átomo-grama e sua valência.
c) Molaridade indica a relação do número de mols do soluto ou de
solvente e o número de mols da solução.
d) Normalidade indica a relação entre equivalentes-gramas do soluto
e o volume de solução (em litros).
e) Molaridade indica o peso molecular do soluto contido em 1 litro de
solvente.
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b) 2,5g de fluoreto de sódio e 1000 g de solução conservante de
parabenos.
c) 25g de fluoreto de sódio e 1kg de solução conservante de
parabenos.
d) 250mg de fluoreto de sódio e 0,1kg de solução conservante de
parabenos.
e) 25g de fluoreto de sódio e 100g de solução conservante de
parabenos.
1-B
2-CERTO
3-A
4-C
5-E
6-B
7-D
8-E
9-B
10-A
11-E
12-C
13-B
14-D
15-D
16-ERRADO
17-C
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Soluções e Técnicas em Análises Clínicas p/ EMSERH (Bioquímico)
Teoria e exercícios comentados
0
Prof.ª Denise Rodrigues Aula 00
Referências Bibliográficas
http://www.quimica.ufpr.br/fmatsumo/antigo/2011_CQ092_Preparac
aoDeSolucoes_Pratica2.pdf. Acessado em: 27 de julho de 2016.
- http://www.biomedicinapadrao.com.br/2015/10/principais-
contaminantes-da-agua-parte.html. Acesso em 27 de julho de 2016.
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