ANEXO 2 : PO-001

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DETERMINAÇÃO DE CROMO HEXAVALENTE NO AR 21/09/2009 03

Assunto: Unidade
Centro de Tecnologia SENAI-RJ
Ambiental
INSTRUÇÃO TÉCNICA Código Página
IT-066 1/11
1 – OBJETIVO

Determinação de Cromo Hexavalente no ar através de método colorimétrico com leituras em

espectrofotômetro com absorção molecular na faixa do visível.

2 – CAMPOS DE APLICAÇÃO

Aplica-se a amostras de higiene industrial.

3 – RESPONSABILIDADE

A aplicação desta IT é de responsabilidade do Laboratório de Espectrofotometria de

Ultravioleta / Visível.

4 – DEFINIÇÕES / SIGLAS

4.1 – SIGLAS

 P.A.: Para análise

 FIRJAN: Federação das Indústrias do Estado do Rio de Janeiro
 IT: Instrução Técnica
 PO: Procedimento Operacional
 PVC: Poly Vinyl Chloride (Policloreto de vinila)
 NR: Norma Regulamentadora

4.2 – DEFINIÇÕES

 Espectrofotômetro: Equipamento para medidas de Espectrofotometria

 Espectrofotometria de absorção molecular: Técnica analítica de determinação
quantitativa e qualitativa de compostos a partir de reações colorimétricas
 ANEXO 2 : PO-001

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Assunto: Unidade
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INSTRUÇÃO TÉCNICA Código Página
IT-066 2/11
 Absorvância: Medida espectrofotométrica de caracterização e quantificação de
compostos químicos
 Curva analítica: Relação matemática entre duas grandezas numéricas (ex.:
concentração e absorvância)
 Branco de Calibração ou de Reagentes: Solução utilizada como parâmetro de
medições espectrofotométricas. Qualquer sinal obtido a partir dela corresponde a leitura
do analito em questão
 Água Milli-Q (Tipo I): Água filtrada, deionizada, desgaseificada e esterilizada própria
para análises químicas espectrofotométricas e cromatográficas
 Água Elix (Tipo II): Água filtrada, deionizada e desgaseificada própria para análises
químicas espectrofotométricas
 Sistema de sucção “Auto Sipper”: Mecanismo de sucção de líquidos acoplado ao
espectrofotômetro
 Padrão de verificação: Solução-amostra de concentração conhecida utilizada para
testar o nível de recuperação de um método analítico
 Programa de Controle Inter-laboratorial: Sistema de verificação do nível de
concordância de resultados analíticos entre vários laboratórios-teste.
 Caminho óptico: Distância focal que a luz percorre em um meio material
 Validação: é a confirmação por exame e fornecimento de evidência objetiva de que os
requisitos específicos para um determinado uso pretendido são atendidos (NBR ISO/IEC
17025)

5 – REFERÊNCIAS

 PO-001: Elaboração e Controle da Documentação de laboratório

 IT-019: Guia de amostragem de agentes químicos em ar
 IT-023: Descarte de amostras e reagentes
 IT-025: Limpeza de materiais do Laboratório de Toxicologia e Higiene Ocupacional
 IT-026: Operação do espectrofotômetro de Visível da marca Thermo Electron
Corporation, modelo Aquamate
 Portaria nº 3214 de 22 de dezembro de 1994, NR-15, anexo 11, Manuais de
Legislação: Segurança e Medicina do Trabalho, 48 a edição
 PO-027: Garantia da Qualidade de Ensaios
 ANEXO 2 : PO-001

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IT-066 3/11

6 – DIRETRIZES / METODOLOGIA

6.1 – Princípio do Método

O cromo é utilizado industrialmente no recobrimento protetor de metais e de aço contra a

oxidação (processos de galvanoplastia), na produção de ligas, entre elas o aço inoxidável, na
fabricação de pigmentos minerais, tinturas para fibra têxtil, síntese de fármacos como o
trinitrotolueno, antraquinona, ácido nicotínico, entre outros. O cromo (Cr) se apresenta sob diversos
estados de oxidação, entretanto somente ao cromo hexavalente (cromatos e dicromatos) são
atribuídos efeitos tóxicos ao homem. É irritante e corrosivo para a pele e mucosas, devido a sua
capacidade de desnaturar proteínas e ácidos nucléicos. As exposições ocupacionais a este metal
estão associadas, principalmente, ao câncer do trato respiratório. As amostras poeiras e/ou névoas
contendo compostos de Cr6+ são coletadas em membranas de PVC (cloreto de polivinila), com  =
37 nm e porosidade de 0,8 m, submetidas a extração com solução alcalina de hidróxido de sódio e
carbonato de sódio, têm seu pH corrigido e são complexadas com difenilcarbazida e quantificadas
em espectrofotômetro de absorção UV/Visível, à 540 nm de comprimento de onda.

6.2 – Aspectos de Segurança

Usar luvas, jaleco de mangas compridas, sapatos fechados e óculos de segurança.

6.3 – Amostragem e Preservação das amostras

6.3.1 – Amostragem

Proceder a amostragem de Cromo Hexavalente de acordo com a IT-019.

6.3.2 – Preservação das amostras

Proceder a preservação das amostras de acordo com a IT-019.

6.4 – Limpeza de materiais

 ANEXO 2 : PO-001

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Todo o material deverá estar limpo de acordo com a IT-025.

6.5 – Materiais e Equipamentos

6.5.1 – Materiais

 Balões volumétricos, cap. 50 a 2000 mL, marca Pyrex.

 Bastões de vidro em vidro borossilicato.
 Becker cap. 50 mL à 250 mL, marca Pyrex.
 Células de fluxo em vidro especial ou quartzo, com caminho ótico de 1,0 cm.
 Cubetas em vidro especial ou quartzo, com caminho ótico de 1,0 cm.
 Espátulas em aço inox.
 Pipeta graduada de 10 mL.
 Ponteiras para pipetador de volume variável de 100 a 1000 µL.
 Filtro-membrana de PVC com 5,0 µm de porosidade e 37 mm de diâmetro.
 Porta-filtro em polietileno com 37 mm de diâmetro

6.5.2 – Equipamentos

 Balança analítica, com precisão de 0,01 mg.

 Balança técnica de precisão, cap. 500 g.
 Placa de aquecimento com agitação magnética.
 Espectrofotômetro de UV-Visível.
 Pipetador de volume variável, cap. 100 a 1000 µL
 Pipetador de volume variável, cap. 20 a 100 µL

6.6 – Reagentes e Preparo de Soluções

6.6.1 – Reagentes
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 Ácido Sulfúrico 97-98% P.A.

 Carbonato de Sódio Anidro P.A.
 Hidróxido de Sódio P.A.
 Cromato de Potássio P.A.
 Difenilcarbazida P.A.
 Acetona P.A.

6.6.2 – Preparo de Soluções

 Solução de ácido sulfúrico 12 mol/L: Transferir lentamente 167 ml de ácido sulfúrico 97-
98% P.A. para um balão contendo água Milli-Q e avolumar a 1000 mL em balão volumétrico.
Estocar esta solução à temperatura ambiente.

 Solução de ácido sulfúrico 1 mol/L: Transferir lentamente 14 mL de ácido sulfúrico 97-98%

P.A. para um balão contendo água Milli-Q e avolumar a 1000 mL em balão volumétrico. Pode-
se também diluir a solução 12 mol/L na proporção 1:12. Estocar esta solução à temperatura
ambiente.

 Solução de difenilcarbazida 0,25 %m/v: Dissolver 0,5 g de Difenilcarbazida P.A em 100mL

de Acetona P.A. e 100 mL de água Milli-Q. Esta solução deve ser mantida em refrigeração a
4ºC e é válida por 3 meses.

 Solução de extração (hidróxido de sódio 2% m/v e carbonato de sódio 3% m/v): Dissolver

20 g de hidróxido de sódio P.A. e 30 g de carbonato de sódio anidro com água Milli-Q e
avolumar a 1000 mL em balão volumétrico.

 Solução padrão de cromo hexavalente 1000 mg/L: Pesar 3,735 g de cromato de potássio e
avolumar com água Milli-Q a 1 L em balão volumétrico. Estocar esta solução à temperatura
ambiente.

Observação:
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Todo o manuseio e preparo das soluções acima deverão ser realizados em capela,
observando-se a utilização dos equipamentos de proteção adequados. Cromato de potássio é
extremamente tóxico, usar luvas de látex e respirador para evitar inalação do particulado.

6.7 – Dados de Validação

Segue método normatizado NIOSH 7600 4ª edição

Limite de Quantificação: 0, 003 mg/m³
Limite de Detecção: 0, 001 mg/m³

6.8 – Interferências

As interferências possíveis são o ferro, cobre, níquel e vanádio; 10g de algum destes
causa uma absorbância equivalente a aproximadamente 0,02g de cromo hexavalente, devido a
formação de complexos coloridos com a difenilcarbazida. Interferências por agentes oxidantes (por
exemplo, Fe e Fe+2 ) são minimizadas pela extração alcalina.

6.9 – Procedimentos Analíticos

6.9.1 – Preparo dos amestradores

Os filtros-membrana (policloreto de vinila de 5 m de porosidade) a serem utilizados na

coleta de amostras devem ser retirados, cuidadosamente, de sua caixa original e depositados sobre
os corpos inferiores da porta-filtros (cassetes) já preparados com os suportes de celulose.
Monta-se os porta-filtros e em seguida veda-se a parte externa com bandas de celulose para
garantir que não haja violação. Coloca-se o plugue azul na parte superior do cassete e o plugue
vermelho na parte inferior. Identificá-lo.

Observação:
Em caso de falta da banda de celulose, vedar com filme de polietileno (parafilm), uma fita
adesiva ou veda-rosca (teflon).

6.9.2 – Preparo da curva de calibração

 ANEXO 2 : PO-001

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a) Transferir 1,00 mL da solução estoque de cromo hexavalente 1000 mg/L e avolumar

com água Milli-Q em balão volumétrico de 100 mL. Esta solução possui uma
concentração de 10 mg/L.
b) Transferir 10 mL de ácido sulfúrico 1 mol/L para todos os balões volumétricos de 25 mL.
c) Adicionar volumes da solução 10 mg/L de cromo hexavalente nos respectivos balões
volumétricos, de acordo com a tabela 1.

Tabela 1: Preparo da curva de calibração

Código dos Alíquotas da solução Massa de Cromo para 25
padrões 10 mg/L (L) mL (µg)
Br 0,0 -
P1 25 0,25
P2 50 0,50
P3 100 1,00
P4 200 2,00
P5 400 4,00
P6 600 6,00
P7 800 8,00

d) Em seguida, adicionar 1,0 mL de solução de difenilcarbazida 0,25 m/v em todos os

balões contendo branco e padrões.
e) Avolumar a 25 mL com ácido sulfúrico 1mol/L.
f) Realizar a leitura em espectrofotômetro com cubetas de 5 cm de caminho óptico logo
após a formação da coloração.

6.9.3 – Preparo das amostras

a) Remover o filtro de PVC do cassete com o auxílio de uma pinça e coloque-o em um bécker
de 50 mL. Utilizar um filtro virgem como branco de amostra.
b) Purgue o ar do bécker com nitrogênio para evitar a oxidação de algum cromo trivalente
presente na amostra.
c) Adicionar 5 mL da solução de extração no bécher contendo os filtros-membrana.
d) Cubra-o com vidro de relógio e aqueça brandamente numa placa aquecedora por 30 a 45
minutos. Não deixe que a solução entre em ebulição ou o tempo de aquecimento ultrapasse
os 45 minutos. Não deixe que a solução evapore até a secura porque o cromo hexavalente
pode ser perdido devido a reação com o filtro de PVC. Uma indicação de que o cromo
hexavalente foi perdido é quando o filtro de PVC adquire uma coloração amarronzada. Se a
 ANEXO 2 : PO-001

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solução estiver turva, filtre em filtro de PVC por filtração a vácuo usando água Milli-Q para
rinsar.
e) Aguarde a solução esfriar e transfira quantitativamente, rinsando o bécker com água Milli-Q,
para um balão volumétrico de 25 mL, mantendo o volume em torno de 20 mL.
f) Adicionar 1,9 mL de ácido sulfúrico 12 mol/L em todos os balões contendo a amostra.
g) Remover o excesso de dióxido de carbono formado. Para acelerar o processo de liberação
de dióxido de carbono pode-se colocar o balão volumétrico em banho ultra-sônico por alguns
minutos.
h) Em seguida, adicionar 1,0 mL, a todos os balões contendo a amostra, da solução de
difenilcarbazida 0,25 %m/v.
i) Avolumar com água Milli-Q.
j) Realizar a leitura em espectrofotômetro com cubetas de 5 cm de caminho óptico logo após a
formação da coloração.

6.9.4 – Condições do equipamento

 ANEXO 2 : PO-001

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6.9.4.1- Espectrofotômetro marca Thermo Electron modelo Aquamate

6.9.4.2.1 – Condições utilizando o display do equipamento

 Quant: Ajuste curva: Linear

ID: Cromo Hexavalente Mede Stds: Sim
Compr. de onda: 540.0 nm Cronômetro(s): 0
Larg. de faixa: 2.0 nm UV CALC: 0
Integração: 1 s
Standards: 7 (de acordo com a tabela  Acessórios:
1) Sipper:
Repetições: 1 Sipper: Off
Unidades: µg

6.9.4.2.2 – Condições utilizando o software Visionlite

 Method: Cromo Hexavalente Unit: IU

 Calibration:  Spectrophotometer:
Curve type: Linear with intercept Integration time: 0,5 s
Measurement waveleght: 540 nm
Output digits: 2 , 3  Standard data: (Conforme Tabela 1)

6.10 – Controles de Qualidade

6.10.1 – Caso não seja construída uma curva de calibração no momento do ensaio, preparar
01 padrão de verificação: (P 2 a 0,5 µg), (P4 a 2,0 µg) ou (P6 a 6,0 µg) para checar a
aceitabilidade da curva. Estes padrões devem ser preparados alternando-se o uso a cada
lote de amostras. Registrar os valores obtidos no formulário de Registro FR-045. Os limites
mínimo e máximo de concentração, em mg/L, aceitáveis para os padrões de verificação são,
respectivamente, 90 e 110 % do valor nominal.

6.11 – Ações Corretivas

A ordem de adição dos reagentes não interfere no resultado final de cromo hexavalente.
Neste caso, percebendo-se que algum reagente não foi adicionado, este poderá ser acrescentado
ao final, antes de avolumar o balão, sem prejuízo para a qualidade do resultado final.

6.12 – Expressões dos Resultados

Os valores de concentração de amônia serão obtidos automaticamente a partir da

interpolação das absorbâncias lidas com a curva analítica previamente traçada e utilizada a
seguinte fórmula:

Cr6+ (mg/m³) = (M-B)

V

Onde:
M – Massa de cromo hexavalente interpolada da curva analítica em µg.
B – Massa do branco interpolada da curva analítica em µg.
V – Volume de ar amostrado em litros.

6.13 – Descarte de amostras / reagentes

Seguir procedimento da IT-023.

6.14 – Bibliografia

 NIOSH – Manual of Analytical Methods, National Institute of Occupational. Method 7600

4ª edição.
7 – REGISTROS

Observação: todo o registro de análise no laboratório deve ser feito no FR-045.

EQUI-065 – Para abrir os arquivos gerados pelo espectrofotômetro Thermo Electron modelo
Aquamate deve-se consultar o diretório “Biblioteca” situado na tela “Home” do display do
equipamento ou, no caso do uso do software Visionlite, no diretório: \\Shared em ‘Srvcta01’ (G):\ \
Laboratórios \ Laboratório Instrumental-LAI \ Áreas \ UV-Vis \ Aquamate \ (ano) \ Cromo
hexavalente \ (nome do arquivo).rqa. onde são armazenados definitivamente.
Os dados relativos a curva de calibração são salvos em: \\Shared em ‘Srvcta01’ (G):\ \
Laboratórios \ Laboratório Instrumental-LAI \ Áreas \ UV-Vis \ Aquamate \ (ano) \ Cromo
Hexavalente \ Curva \ (nome do arquivo).mqa.

Observação: O equipamento EQUI-065 não possui driver de comunicação para transporte

automático de dados para o aplicativo Cali Lims. Sendo assim, o lançamento dos resultados
emitidos por este equipamento deve ser realizado manualmente.

O lançamento e a revisão dos resultados inseridos no Cali-Lims devem ser realizados por
pessoas distintas e habilitadas para tal ou, se lançado e revisado pelo mesmo analista, deve
ocorrer em momentos diferentes e cada amostra deve ter o seu resultado conferido
individualmente com o arquivo original gerado pelo espectrofotômetro. O FR-045 deve receber uma
rubrica de aprovação pelo responsável ou substituto, sendo esta etapa realizada por pessoas
diferentes ou em momentos distintos.
O número, o ano e a revisão do formulário de registro original bem como o número e a
revisão desta IT devem ser cadastrados no campo “Observações da preparação” do Cali-Lims.
As informações relativas ao preparo das soluções de análise devem ser cadastradas no Caderno
de Soluções UV-(Seqüência), FR-089 (número)/(ano).

8 – HISTÓRICO DE REVISÕES

Número da Data da Resumo das alterações

Revisão revisão

00 09/09/2005 Documento original

Em todo o documento – Substituiu-se “água deionizada” por

“água Milli-Q”. Substituiu-se a unidade “M” por “mol/L”.
Item 4.2 – Item novo.
Item 5 – Foi inserida a referência “PO-027”.
Item 6.6.2 – Foram acrescentadas a forma de estocagem de todas
01 13/09/2007 as soluções descritas.
Item 6.9.2 – Foi acrescentada a expressão “em todos os balões” no
subitem d).
Item 6.9.3 – Foi acrescentada a expressão “em todos os balões”
nos subitens f) e h).
Item 6.9.4.2 – Item novo.
Item 6.10.1 – Foi relatado o uso do padrão verificação com o intuito
de aprovar uma curva de calibração anterior ao invés de servir para
 ensaio de precisão.
Item 7 – Foi alterado o diretório de armazenamento definitivo dos
arquivos emitidos pelos espectrofotômetros. Foi referenciada a
forma de lançamento dos dados das amostras bem como o registro
do FR de preparo de soluções.
No cabeçalho, o campo “Unidade” foi modificado de Centro de
02 01/09/2009 Tecnologia Ambiental do Sistema FIRJAN para Centro de
Tecnologia SENAI-RJ Ambiental.
Item 5– Foram excluídas as informações do EQUI-064
Item 6.7– Foram incluídos os dados de LQ e LD

03 21/09/2009 Item 6.9.1– Foram excluídas as informações das condições do

EQUI 064
Item 7 – Foi excluído o diretório de armazenamento dos registros
definitivos do EQUI- 064.

9 – ANEXOS

9.1 – Anexo 1: FR-045 – Formulário de Registro da Determinação de Cromo Hexavalente no ar

Elaborado em 17/09/2009 Verificado em 17/09/2009 Aprovado em 21/09/2009

_______________________ _______________________ ______________________

Renata Guimarães dos Santos Carolina Maria M. de Carvalho
(Técnica em Serviços Carlos Henrique Brasil Bizarri Andrade
Tecnológicos) (Analista de Serviços Tecnológicos) (Especialista em Serv.
Tecnológicos)
 ANEXO 1: IT-066

FR-045 rev.03
Formulário de Registro Vigência: 21/09/2009
Página
Determinação de Cromo Hexavalente no ar N.º / Ano
____/____ 1/1

Método: IT-066 Data da Análise: Analista/Responsável:

Registro de soluções de análise Obs. n° EQUI de Transferência
Nº DO CADERNO: Nº / ANO DO FR:
SOLUÇÃO PADRÃO DE CROMO EQUI-252 EQUI-237
HEXAVALENTE 1000 mg/L UV-_________ ______ / ______ EQUI-307 EQUI-_______

Nº DO CADERNO: Nº / ANO DO FR: EQUI-213 EQUI-211

SOLUÇÃO DE EXTRAÇÃO
UV-_________ ______ / ______ EQUI-226 EQUI-_______

Nº DO CADERNO: Nº / ANO DO FR:

SOLUÇÃO DE ÁCIDO SULFÚRICO 12 EQUI-213 EQUI-211
mol/L UV-_________ ______ / ______ EQUI-226 EQUI-_______

Nº DO CADERNO: Nº / ANO DO FR:

SOLUÇÃO DE ÁCIDO SULFÚRICO 1 NÃO SE APLICA
mol/L UV-_________ ______ / ______ EQUI-________

Nº DO CADERNO: Nº / ANO DO FR:

SOLUÇÃO DE DIFENILCARBAZIDA 0,25 NÃO SE APLICA
%m/v UV-_________ ______ / ______ EQUI-________

Registro de solução intermediária Obs. n° EQUI de Transferência

EQUI-252 EQUI-237
SOLUÇÃO PADRÃO DE CROMO HEXAVALENTE 10 mg/L
EQUI-447 EQUI-_______

Registro de análise
DATA DA CURVA DE CALIBRAÇÃO:
PLACA DE AQUECIMENTO: EQUI-112 EQUI-113 EQUI-087 EQUI-_______

Registro do padrão de verificação

USO DE PADRÃO
Obs. Valor obtido (0,5 µg): __________ µg Limite inferior: 0,45 Μg Limite Superior: 0,55 Μg
DE VERIFICAÇÃO:
Não Utilizado Valor obtido (2,0 µg): __________ µg Limite inferior: 1,80 Μg Limite Superior: 2,20 Μg
Utilizado Valor obtido (6,0 µg): __________ µg Limite inferior: 0,54 µg Limite Superior: 6,60 µg

Uso do Espectrofotômetro EQUI-065 EQUI-_____

Localização Eletrônica de Dados das Amostras: Localização Eletrônica da Curva de Calibração:

SHARED EM ‘SRVCTA01’ (G): \LABORATÓRIOS\ SHARED EM ‘SRVCTA01’ (G): \LABORATÓRIOS\
LABORATÓRIO INSTRUMENTAL-LAI\ÁREAS\UV-VISÍVEL\ LABORATÓRIO INSTRUMENTAL-LAI\ÁREAS\UV-VISÍVEL\
AQUAMATE\20______(ANO)\ CROMO HEXAVALENTE\ AQUAMATE\ 20______(ANO)\AMÔNIA\CURVA\
_____________.rqa _____________.mqa
Registros das Amostras
n° Recebimento-ID Código Interno n° Recebimento-ID Código Interno n° Recebimento-ID Código Interno

Código das Obs. Descrição das Observações

Aprovado por: Data da Aprovação: