Pratica 1 – CROMATOGRAFIA DE AMINOACIDO POR CAMADA DELGADA

Introdução

O Processo de Cromatografia é um método físico-quimico de separação e identificação de

substancias de uma mistura baseado na diferença de afinidade destes compostos por duas
fases quando colocadas em contato direto. Uma fase, chamada de fase móvel, que se
movimenta sobre a outra fase, chamada de estacionária.

Um exemplo de cromatografia clássico é a cromatografia em camada delgada, onde a fase

móvel liquida flui por um suporte, ou placa, vertical recoberto de sílica. A cromatografia em
camada delgada é considerada simples, e requer poucos instrumentos para realização.

Na cromatografia de aminoácidos em camada delgada, utiliza-se como fase móvel uma placa
revestida de sílica. E como fase móvel, dentre outras, uma substancia chamada de n-butanol.
Os aminoácidos são colocados sobre a placa. Depois, a mesma é emersa na fase móvel, que
ascende no suporte, por ação capilar, fazendo com que os aminoácidos migrem de acordo com
a afinidade com as fases.

Objetivo

O objetivo do experimento é conhecer o processo de cromatografia, e através desde, mais

especificamente em camadas delgadas, separar e identificar os componentes de uma mistura
contendo aminoácidos. Além da preparação para tal execução e conhecimento dos
instrumentos de uso no laboratório, como a pipeta eletrônica. Logo após, revelar a
cromatografia e identificar os aminoácidos pelos cálculos dos valores de Rfs.

Materiais

Pipera eletrônica de P2;

Soluções de 5 amoniácios conhecidos (0,04mol/L)

Solução desconhecida de aminiácidos

Fase móvel: isopropanol, acido acético, agra (10:3:3)

Fase estacionária: Placa de aço revestida de sílica

Solução reveladora: ninidrina (0,1% p/v) em acetona.

Procedimentos

Para análise da amostra desconhecida, utilizou-se soluções de aminoácidos clarrificados

abaixo:
  Alanina, que é uma molécula neutro, em pH 7, de cadeia aberta, alifático e apolar, de
forma estrutural apresentada abaixo

FROMA ESTRUTURAL

 Asparagina que é uma molécula neutro, em pH 7, e apresenta cadeia polar não

dissociada.

FROMA ESTRUTURAL

 Glicina que é uma molécula neutro, em pH 7, de cadeia aberta, alifático e apolar, de

forma estrutural apresentada abaixo

FROMA ESTRUTURAL

 Lisina Possui carga positiva em pH 7

FROMA ESTRUTURAL

 Treonina que é uma molécula neutro, em pH 7, e apresenta cadeia polar não

dissociada.

FROMA ESTRUTURAL

Em uma placa contendo sílica, construiu-se uma linha horizontal, com 1 cm da borda inferior.
Marcou-se 2 cm de cada lado da linha e a subdividiu em 6 pontos igualmente distanciados
entre si. Tomando cuidado para não tocar a placa com a mão.

Pipetou-se 1,5 ml de solução 0,04 mol/L dos cinco aminoácidos conhecidos e da mistura
desconhecida e aplicou-se sobre os pontos marcados, seguindo a seguinte ordem: Primeiro
ponto aplicação de Alanina, no segundo Asparagina, e assim por diante para Glicina,
desconhecida, lisina e Treonina, Como mostra a figura abaixo. Após as aplicações, secou-se a
gota inoculada.

Figura 1: Modelo de divisão e aplicação das amostras de aminoácidos na fase estacionária.

Após a secagem, introduziu-se a placa na cuba cromatográfica contendo o solvente

previamente saturado, evitando que o solvente alcance os pontos aplicados. O sistema
manteve em repouso, para que o solvente suba por capilaridade até atingir uma altura
considerável. No fim, retirar a placa e marcar a altura atingida pelo solvente.

A fim de secar o solvente da placa, aqueceu a mesma na estufa. Aplicou-se em seguida o

revelador (ninidrina), com auxilio de um nebulizador, sobre toda a área atingida pelo solvente,
e levou-a novamente para a estufa para revelação das manchas. Circulando e marcando os
diâmetros horizontais das manchas, como mostra a figura abaixo, foi possível o cálculo do Rf
de cada aminoácido e do desconhecido, a fim de identificá-lo.

FIGURA DOS AMINOÁCIDOS

Os cálculos de Rf foram explícitos abaixo, sabendo que:

Rf= distancia percorrida pela substancias/distancia percorrida pela fase móvel

CALCULOS DE RF