A Biotecnologia transforma nosso dia a dia

O seu impacto atinge vários setores produtivos - novas oportunidades de emprego:

• plantas resistentes a doenças,

• plásticos biodegradáveis,
• detergentes mais eficientes,
• biocombustíveis,
• processos industriais e agrícolas menos poluentes,
• métodos de biorremediação do meio ambiente,
• testes para diagnósticos e novos medicamentos.

Setores Bens e serviços

Agricultura adubo composto, pesticidas, silagem, mudas de plantas ou de

árvores, plantas transgênicas, etc
Alimentação pães, queijos, picles, cerveja, vinho, proteína unicelular, aditivos,
Produtos de origem etc.
biotecnológica Química butanol, acetona, glicerol, ácidos, enzimas, metais, etc.
Eletrônica biosensores
Energia etanol, biogás
Meio Ambiente recuperação de petróleo, tratamento do lixo, purificação da água
Pecuária embriões
Saúde antibióticos, hormônios e outros produtos farmacêuticos, vacinas,
reagentes e testes para diagnóstico, etc.
AS AGROBACTÉRIAS
E A COLONIZAÇÃO
GENÉTICA
 Os mecanismos de
interação planta-
patógenos são
extremamente complexos
e diversificados.
 Entre os diferentes tipos
de parasitismo, o que
utiliza a transferência de
material genético como
estratégia de colonização
é um dos mais intrigantes
e já foi descrito nos vírus
e agrobactérias.
 Os vírus utilizam o
sistema de transcrição e
tradução da célula
hospedeira para produzir
suas próprias proteínas,
o que permite a sua
multiplicação, debilitando
o hospedeiro, podendo
levá-lo à morte.
 As agrobactérias
transferem parte de seu
material genético para o
genoma da planta
hospedeira, por um
processo denominado
colonização genética.
Agrobacterium obervada em microscópio óptico
 Os genes transferidos
são replicados,
transcritos e traduzidos
como se fossem da
própria célula vegetal
......
resultando no desenvolvimento de
tumores

ou
raízes
adventícias
no sítio de
infecção.......
Planta de tabaco infectada com Agrobacterium
Galhas em flores de Crisântemos
 As células neoplásicas
sintetizam e excretam
compostos derivados de
aminoácidos e açúcares,
denominados opinas, que
servem de nutrientes para
a agrobactéria...
 A célula vegetal é
“subjugada” para
produzir nutrientes para a
agrobactéria invasora
que, desta forma, obtém
carbono e nitrogênio sem
competir com as demais
bactérias do solo....
 Agrobacterium tumefaciens:
uma ferramenta natural para a transformação de
plantas
Os genes envolvidos na formação de “galhas” não estão no
cromossomo da agrobactéria mas em um plasmídeo,
chamado plasmídeo Ti (tumor-inducing) .

Cromossomo
circular LB

RB
T-DNA
Genes
vir
Ti
plasmídeo
Ti ~ 120 kbp
ori

A. tumefaciens
INJÚRIA NA PLANTA.
INJÚRIA NA PLANTA.
INJÚRIA NA
PLANTA.
 INFECÇÃO

Compostos fenólicos e
açúcares são
exsudados como
proteção e início de
cicatrização do
ferimento.

Agrobacterium
são atraídas
para o local.
 SINALIZAÇÃO

Compostos fenólicos
estimulam a proteína virA a
sofrer auto-fosforilação.
 ATIVAÇÃO

A proteína virG é
fosforilada pela virA.

ATIVAÇÃO

virG ativa a transcrição

dos genes vir
remanescentes.
 ATIVAÇÃO

virG ativa a transcrição dos genes vir

remanescentes.
 RECONHECIMENTO

A proteína virC liga-se na extremidade direita do

segmento do T-DNA.
 RECONHECIMENTO

A endonuclease virD reconhece o complexo virC-

DNA ligando-se na extremidade direita do segmento
do T-DNA.
 QUEBRA DO T-DNA
Após a clivagem pelas proteínas virD1 e
virD2,centenas de proteínas virE ligam-se ao T-DNA
com as virD complexadas nas extremidades do T-
DNA.
 TRANSPORTE DO T-DNA

As proteínas virE “escoltam” o T-DNA através das

pontes de conjugação formadas pelas proteínas virB
e o núcleo da célula vegetal.
 INTEGRAÇÃO DO T-DNA

O segmento de T-DNA é inserido no genoma da

planta por recombinação ilegítima, preferencialemnte
em locais ativos do genoma.
.
 INTEGRAÇÃO DO T-DNA

Os genes do T-DNA são expressos pela planta.

Aqueles que codificam enzimas responsáveis pela
síntese de hormônios levam à diferenciação e
proliferação celular e, os que codificam para opinas
sintases produzem nutrientes para as bactérias
colonizadoras.
Seleção e regeneração de uma planta transgênica
Seleção e regeneração de uma planta transgênica
 Passos para a transformação de plantas
com Agrobacterium

• Remover os genes do T-DNA que normalmente causam a

produção do tumor.
• Adicionar um gene marcador para a resistência à
canamicina ao T-DNA.
• Incluir os genes de interesse em transferir.
• Remover explantes de tecidos da planta.
• Incubar o tecido ferido com Agrobacterium contendo o
plasmídeo modificado.
• Colocar o tecido infectado em meio de crescimento que
contenha canamicina.
• As células transformadas crescem e são transferidas para
um meio que permita o desenvolvimento de raízes.
• Transferência para o solo.
Ti Plasmid of Agrobacterium
Questões para estudo (não é para entregar)
1. Qual a relação entre as moléculas sinais liberadas pela
planta injuriada e o processo infeccioso?
2. Qual o papel dos oncogenes do T-DNA na proliferação
do tumor e formação da galha na planta infectada?
3. Por que podemos afirmar que as células neoplásicas
tornam-se escravas exclusivas da agrobactéria que
provocou a própria neoplasia?
4. Quais as principais regiões existentes no plasmídeo Ti ?
5. Comente sobre o papel da região vir no processo de
transferência do T-DNA.
8. Como esse modelo biológico de colonizaçãogenética foi
adaptado para a Biotecnologia vegetal?