Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC)

Centro de Ciências da Saúde (CCS)

Departamento de Ciências Farmacêuticas (CIF)
Laboratório Central de Cromatografia (CentralCrom)

Procedimento Operacional Padrão (POP) para a preparação de solventes:

1. Preparação da proporção dos Solventes:

 Caso seja um tampão, pesar a quantidade necessária dos sólidos e

realizar a solução em balão volumétrico.

 Utilizando uma proveta ou micropipeta, realizar a preparação da

proporção adequada dos solventes.

 Verificar se o pH do solvente está correto. Caso necessário, ajustar com

ácido clorídrico (HCl) ou hidróxido de sódio (NaOH) até atingir o valor

desejado.

 Proceder a etapa 2.

2. Filtração:
 Colocar uma membrana de 0,22 µm no funil de placa porosa

 Montar o funil de placa porosa em um kitassato limpo e seco de volume

adequado utilizando uma junta de borracha para a vedação.

 Conectar o sistema montado a bomba de vácuo pela entrada adequada

do kitassato.

 Utilizar uma pequena quantidade do solvente a ser filtrado para molhar a

membrana.

 Ligar a bomba de vácuo e realizar a filtração, deixando o solvente passar

por completo, descartando a primeira porção que passa pelo filtro.

 Passar o solvente para frasco âmbar com volume adequado e tampa em

rosca do tipo GL-32 devidamente etiquetado (informações da proporção

de solventes e data da filtragem)

 Descartar a membrana e a sobra do solvente filtrado nos lugares

apropriados. A membrana deve ser descartada nos resíduos sólidos

(balde branco) e o solvente deve ser descartado nas bombonas azuis,

Elaborado por Natan Gláuber Filippi

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exceto caso se esteja filtrando água. Nesse caso, o filtro pode ser
descartado em lixo normal e a água pode ser descartada na pia.

 Proceder a etapa 3.

3. Degaseficação:
 Transferir o solvente filtrado para um frasco de vidro adequado para

HPLC, UPLC ou LCMS.

 Colocar o frasco em uma sonicadora e liga-la durante pelo menos 10

minutos para remover as bolhas de ar.

 Após 10 minutos, retirar o frasco da sonicadora e deixar descansar por

cerca de 5 minutos para permitir que as bolhas subam à superfície.

 Caso ocorram, remover as bolhas de ar da superfície com uma pipeta de

vidro.
 Armazenar o solvente degaseficado em um frasco de vidro com tampa

em rosca do tipo GL-32 adequadamente etiquetado (informações de

proporção dos solventes e data da filtragem).

Notas:

 Os passos 1, 2 e 3 devem ser realizados novamente caso o solvente

esteja parado há mais de 24h.

 Todos os frascos e equipamentos devem ser limpos e secos antes de

serem utilizados.

 O tempo de degaseficação pode variar dependendo do volume de

solvente a ser degaseificado.

 TODOS os solventes utilizados devem ser de grau HPLC ou superior, e a

água deve ser ultrapura (MiliQ).

 Para melhor resolução, pode-se adicionar ácido trifluoroacético (TFA) ou

ácido fórmico (AF), respeitando a proporção máxima de 0,1%, para evitar

Elaborado por Natan Gláuber Filippi

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a degradação da coluna. Para o MS, esses aditivos podem suprimir a

formação de íons negativos e diminuir a sensibilidade desses.

 Para os sistemas LC, os tampões utilizados preferenciais são os de sais

voláteis (ex: acetato de amônio), sistemas a base de sais inorgânicos

podem causar entupimento do atomizador e/ou da coluna, e devem ser

utilizados preferencialmente em baixas concentrações.

Elaborado por Natan Gláuber Filippi

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