Introdução às Ciências Biológicas (ICB)

TL4 - A diversidade microbiana no Mundo que nos rodeia

Ficha de Registo de resultados e relatório
Complete a ficha, respondendo a cada um dos itens indicados abaixo (Pf, não altere a
estrutura base do ficheiro).

Data de realização do trabalho / /

Curso / Turno / Grupo
Elementos do grupo (número e nome de cada elemento):

RESUMO
Indique, de forma resumida, os objectivos principais do TL4, os métodos usados, e
os resultados principais obtidos.
(Máximo: 300 palavras)

TL4-A INOCULAÇÃO DE MEIOS DE CULTURA

A.1 – Registe na Tabela 1 a evolução da turbidez no meio líquido inoculado,
recorrendo à escala qualitativa indicada no guia de trabalhos laboratoriais (TL4-A) e
a fotografias ilustrativas.
Tabela 1. Evolução da turdidez no meio líquido inoculado com células da espécie microbiana
_________*___________ durante a incubação da cultura a 30 ºC.

Tempo (h) Turbidez Fotografias ilustrativas

(escala
qualitativa)

**

*Complete com o nome da espécie

**Indique o tempo que passou desde a inoculação até à observação e registo do
resultado

A.2 - Interprete os resultados apresentados na Tabela 1, indicando se ocorreu

crescimento da cultura microbiana durante o período de incubação indicado e
justificando a sua conclusão.

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TL4-B. ISOLAMENTO E ENUMERAÇÃO DE BACTÉRIAS HETEROTRÓFICAS E
FUNGOS A PARTIR DE AMOSTRAS AMBIENTAIS, E EFEITOS DE AGENTES
ANTIMICROBIANOS NO SEU CRESCIMENTO
B.1 - DESCRIÇÃO DA AMOSTRA
 Tipo de amostra e local da colheita:
 Data / hora da colheita:
 Modo de armazenamento até à realização da análise:
 Data e hora da análise:
 Massa de amostra analisada (g):
 Volume total de suspensão inicial obtido (mL):

B.2 - Observe a diversidade das colónias isoladas nos meios de cultura (onde não aplicou
discos com agentes antimicrobianos) e registe o número de tipos morfológicos diferentes
de colónias que encontrou em cada um dos meios de cultura:
- no meio PDA+CT (meio “Potato Dextrose Agar” suplementado com o antibiótico
clortetraciclina):
- no meio TSA (meio “Tryptic Soy Broth” agarizado):
(Nota: para cada um dos meios de cultura, considere todas as colónias observadas no
conjunto das várias placas de Petri que contenham colónias isoladas).

B.3. – Relativamente às placas de Petri referidas em B.2, designe cada tipo diferente de
colónia com um número ou um letra, registe-a na Tabela 2 e descreva a sua morfologia.
(Sugestão: Registe e descreva até 5 colónias com morfologias diferentes em cada meio)
Tabela 2. Descrição sumária da morfologia dos diferentes tipos de colónias isoladas nos meios
PDA+CT e TSA.
Meio Designação Existe indício de
de da actividade com possível
Descrição sumária da colónia
cultura colónia interesse industrial ou
(ver instruções indicadas no
(com letra ou comercial?
Guia / TL4-B)
número) Se sim, indique qual.
(ver Guia / TL4-B)

Nota: Junte (por baixo da Tabela 2 ou em anexo no final do relatório) algumas fotografias
ilustrativas das placas de Petri (fotografadas de cima, através da tampa, de forma a mostrar
as colónias), onde deve indicar cada uma das “colónias-tipo” registadas na Tabela 2 com
uma seta e respectiva designação (letra ou número). Numere a(s) figura(s)
correspondente(s) à(s) foto(s) (Por ex. Fig. 1, Fig. 2, etc.). Por debaixo da(s) figura(s),
escreva uma legenda que seja explícita em relação ao que está a mostrar (por exemplo,

2
que tipo de amostra analisada, que diluição, que meio de cultura, que temperatura e qual o
tempo de incubação).

B.4.- Registe na tabela seguinte o número total de colónias contadas nas placas de
meio TSA e de meio PDA+CT onde espalhou as suspensões de amostra ambiental.
Tabela 3. Número total de colónias contadas na superfície de meio sólido TSA ou
PDA+CT onde foram espalhadas a “suspensão inicial” e as “diluições” B1 (1:10), B2
(1:100) e B3 (1:1000), após incubação à temperatura ambiente durante o período de
tempo indicado.
Meio de Tempo de incubação Número total de
Suspensão
cultura (dias) colónias

TSA

PDA+CT

(Nota: Se as colónias estiverem demasiado juntas e não isoladas, escreva “incontável” na

coluna “Número de colónias”)

B.5 - Calcule o número total de Unidades Formadoras de Colónias (UFCs) por g de de solo
das comunidades microbianas de bactérias heterotróficas (meio TSA) e de fungos (meio
PDA+CT) presentes na amostra ambiental que analisou.
Explique os cálculos realizados (veja orientações no Guia do TL4-B) e registe os valores
obtidos na Tabela 4. Faça uma explicação detalhada do raciocínio usado nos cálculos para
o caso do meio TSA, incluindo uma análise crítica quanto aos critérios usados na seleção
dos resultados experimentais obtidos (Tabela 3).

Tabela 4. Concentração de Unidades Formadoras de Colónia (UFC) das comunidades microbianas

isoladas em cada meio de cultura a partir da amostra ambiental descrita em B.1.
Meio de Grupo/tipo de Concentração média de UFC na amostra
cultura microrganismos (número de UFC / g de amostra)
isolados (em notação científica)
TSA
PDA+CT

B.6. - Compare os resultados que obteve nos meios PDA+CT com os obtidos no meio TSA
em termos da diversidade (tendo em conta diferenças na morfologia das colónias como as
apresentadas em B.2 e B.3) e de quantidade (com base nos resultados de concentração de
UFC obtidos em B.5) das diferentes comunidades microbianas presentes na amostra que
analisou.
Para além disso, pesquise* informação publicada sobre bactérias e fungos presentes em
amostras de tipo semelhante à analisada no trabalho e compare com os resultados obtidos
pelo grupo (caso tenha pesquisado e não tenha obtido nenhuma informação relevante,
refira-o na mesma aqui).
*Nota: Pode fazer pesquisa online através do Google (ou outro motor de busca) ou na base de
dados bibliográfica PUBMed (https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/), de preferência usando palavras-

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chave em inglês, ou consultar livro(s) de Microbiologia ou usar outra fonte bibliográfica a que tenha
acesso. Não se esqueça de indicar as fontes/referências bibliográficas junto dos textos onde as usou
(por exemplo, identificando cada referência com um número), e de as listar e descrever no final do
relatório na secção “Bibliografia”; de acordo com regras e exemplos aí indicados .

B.7 – Pesquise (em literatura científica disponível, em papel e/ou online, seguindo as
orientações indicadas em “*Nota” na questão B.6) para indicar um exemplo de
microrganismo (género ou espécie) que é frequente encontrar no tipo de amostra que
analisou e, se possível, indique actividade(s) desse microrganismo nesse habitat/ambiente.

B.8 – Estime a quantidade (em g ou L, consoante os casos) de cada agente

antimicrobiano (ampicilina, gentamicina, fluconazole, etanol e hipoclorito de sódio) presente
nos discos de papel, e discuta o seu efeito antimicrobiano nas diferentes comunidades
microbianas (de bactérias heterotróficas ou de fungos), que caracterizam a sua amostra
(Nota: recorra ao registo fotográfico das placas de Petri, com legendas suficientemente
informativas, para mostrar esses resultados).

B.9 - Mostre fotografias das colónias isoladas nas placas de meio TSA ou PDA+CT a partir
do “swab” realizado sobre a superfície sólida. Escreva, por debaixo da(s) figura(s), uma
legenda que seja explícita em relação ao que está a mostrar (por exemplo, superfície onde
foi recolhida a mostra, meio de cultura, temperatura e tempo de incubação).
Discuta se encontra algumas semelhanças macroscópicas entre as colónias isoladas a
partir da superfície sólida e algumas das colónias isoladas a partir da amostra ambiental
(descritas em B.3), indicando descrições resumidas de características morfológicas das
colónias isoladas que lhe pareçam mais relevantes. e sim, dê pelo menos uma razão
plausível.

4
TL4-C) O MUNDO MICROSCÓPICO QUE HABITA A SUPERFÍCIE DA NOSSA
PELE: ISOLAMENTO DE COLÓNIAS MICROBIANAS E EFEITO DA LAVAGEM
OU DESINFEÇÃO DAS MÃOS

C.1 - Insira fotografias das placas de Petri (vistas de cima; tiradas através da tampa) de
modo a mostrar as colónias que isolou nesta parte do trabalho. Numere a(s) figura(s) e
escreva ao lado do número, por baixo da figura, uma legenda adequada, i.e., que
descreva sucintamente o que é mostrado. Nessas imagens, indique (com setas ou outra
forma que prefira) exemplos de colónias com tipos morfológicos diferentes, e descreva-as
suncintamente na legenda da imagem (use os critérios usados na Tabela 2 para descrever
a morfologia das colónias).

Figura
1-

Comparação entre as colónias microbianas que habitam a superfície na nossa pele no meio
TSA antes e após a lavagem das mãos com água e sabão azul e branco

1. Exemplo de colónia punctiforme, amarela, opaca, com fronteira e superfície lisas

2. Exemplo de colónia redonda, branca, translúcida, com fronteira lobada e
superfície lisa
Nenhum dos dois tipos diferentes de colónias identificados apresenta características de
interesse comercial.

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C.2 – Tendo em conta o conjunto de resultados obtidos, qual a situação onde observou
maior diversidade microbiana? Explique, fazendo referência às fotos que mostrou em C.1, e
sugira explicação(ões) plausível(eis).

A situação onde se observou a maior diversidade microbiana foi a situação antes da

lavagem de mãos. Nessa situação, além dos microrganismos observados após a lavagem
das mãos (presentes em ambas as situações, por fazerem parte da fauna que habita sobre
a nossa pele), encontramos outras colónias morfologicamente distintas, que correspondem
a um diferente microrganismo.
Na placa de Petri com a amostra após a lavagem das mãos, encontramos em alguns
pontos, uma maior concentração de colónias, mas sendo morfologicamente idênticas, já
não se observando outros microrganismos. A maior concentração observada pode dever-se
à pressão aplicada pelo dedo no meio TSA, ou a superfície do dedo que entra em contacto.

C.3 - Pesquise (em literatura científica disponível, em papel e/ou online, seguindo as
orientações indicadas em “*Nota:” na questão B.6) para indicar dois exemplos de
microrganismos que fazem parte da microbiota usual da pele humana (microrganismos
residentes) ou que podem ser transientes na superfície da pele (pode escolher indicar um
exemplo de cada tipo). Escreva um pequeno texto (por exemplo, 6 linhas) sobre cada um
dos microrganismos que indicou, referindo qual(is) o(s) seu(s) papel(is) / impacto(s) na
pele e, se possível, qual a sua proveniência previsível (no caso de micróbios transientes na
pele).
Não se esqueça de indicar as fontes/referências bibliográficas que usou e de as listar na
secção “Bibliografia” do relatório.
Dois exemplos de microrganismos que fazem parte da microbiota usual da pele
humana são a Cutibacterium acnes e a Staphylococcus aureus.
A Cutibacterium acnes foi descrita pela primeira vez por Paul Gerson Unna em 1865
e é uma bactéria gram-positiva em forma de bastonete, de crescimento lento e
anaeróbica facultativa. Ela faz parte da flora normal da pele, boca, trato
gastrointestinal e geniturinário. Em pele saudável, a C. acnes tem um papel
comensal, produzindo ácidos gordos a partir do sebo e ajudando a um pH ácido da
pele, que inibe bactérias patogénicas, ao passo que favorece outras bactérias
comensais. No entanto, quando se multiplica em excesso, a C. acnes pode
desencadear a inflamação e a formação de lesões cutâneas, incluindo acne. A C.
acnes também pode estar implicada em outras doenças, como endocardite, artrite
séptica e osteomielite.

A Staphylococcus aureus como uma bactéria gram-positiva que causa uma

variedade de doenças clínicas. O S. aureus é encontrado no ambiente e na flora
humana normal, localizado na pele e mucosas da maioria dos indivíduos saudáveis.
Em condições normais, a presença de Staphylococcus aureus na pele humana
ajuda a prevenir a colonização por outras bactérias potencialmente patogénicas.
Além disso, a bactéria produz substâncias que ajudam a manter a integridade da
barreira cutânea, protegendo a pele contra a perda de água e a entrada de
substâncias nocivas. Porém, se entrar na corrente sanguínea ou em tecidos internos
pode causar infeções graves.

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https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6874694/ - Cutibacterium acnes
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK441868/ - Staphylococcus aureus

D. BIBLIOGRAFIA
Descreva aqui as referências bibliográficas que usou ao longo do relatório.
Atenção:
- As fontes bibliográficas devem ser referenciadas ao longo do texto (por exemplo com um
número ou letra) nos locais onde usou a informação correspondente;
- Não é suficiente nem apropriado simplesmente adicionar um "web-link" ao citar artigos de
pesquisa ou revisão, capítulos de livros, relatórios ou teses. As referências devem ser
completas e seu formato padronizado (de acordo com regras; ver exemplos a seguir). Em
geral, um estilo de citação adequado e completo inclui a indicação dos nomes dos autores, o
título do estudo, o ano, o título da revista científica, a edição ou volume e/ou local de
publicação e as páginas.
Exemplos de regras a ter em conta na descrição das referências bibliográficas:
- Referência de informação disponível online  Indicar o título, autor(es) se
disponível, endereço web e a data em que foi consultada;
- No caso de artigo científico  indicar autores (apelido, 1ª letra dos nomes próprios),
título, revista onde está publicado, volume, páginas, ano de publicação;
- No caso de capítulo de livro  indicar autor(es), título do capítulo, editores ou
editores do livro, título do livro, páginas correspondentes ao capítulo, editora, ano de
publicação;
- No caso de livro  indicar autor(es), título do livro, páginas onde está a informação
relevante, editora, ano de publicação.
- Atenção também à credibilidade das fontes bibliográficas online; e, Wikipedia & Co devem
ser minoritárias (ou mesmo evitadas) como fonte de literatura ao escrever relatórios
científicos.

Exemplo de listagem de bibliografia (para artigo científico):

1. Pham, V.H.T. and Kim, J. (2012). Cultivation of unculturable soil bacteria.
Trends in Biotechnology 30(9): 475-484.
2. …