Hematologia- Aula 1

Organização do laboratório Colheita de sangue

O laboratório é constituído por diferentes áreas de
trabalho:
Fase Liquida Plasma
 Receção de amostras
 Área de analisadores automatizados
 Área de extensão de laminas Composição Leucocitos e
 Área microscopia plaquetas
 Etc. Fase solida
A equipa é constituída por vários profissionais, desde Eritrocitos
TSDT’s a administrativos

Variáveis pré, pós e analíticas Plasma ≠ Soro

Existem três fases do processo que podem estar na
origem de erros laboratoriais. Os erros têm diversas Com fibrinogenio Sem fibrinogenio
consequências graves
Flebotomia, é o método usado para recolher sangue
venoso. Usa-se luvas, toda a amostra é considerada
potencialmente infeciosa.
 Atraso/erro diagnostico; repetição dos testes Passos:
 Tratamento inadequado 1. Identificar e preparar paciente.
 Erros transfusionais 2. Posicionar e escolher onde puncionar
 Aumento dos custos e atraso de gestão 3. Preparar material de colheita
4. Desinfetar (alcool etilico 70%)
5. Execução
6. Cuidados após punção
Passo 1- Envolve informar o paciente do
Pré-analiticos* Analíticos Pós analíticos procedimento, pedir a identificação do mesmo (pelo
menos dois dados inequivocos, nome e data de
Colheita e Qualificação Transcrição e
transporte profissional análise correta de
nascimento) e verificar a requisição e as etiquetas
Pedido do exame Qualidade dos resultados associadas. Amostras mal identificadas não são processadas/aceites. Contudo, por
vezes o laboratório pode suspender o relatório até que o requisitante se responsabilize
Preparação do reagentes e Tempo adequado pela identificação presuntiva.
doente equipamentos de entrega dos
Armazenamento mesmos Passo 2- Na posição do braço, o cotovelo não deve
Etc Arquivo registos
estar dobrado, a palma da mão para cima e linha reta
do ombro ao punho. Para selecionar o local deve
haver palpação das veias para
Para reduzir o erro analítico contribuiu, por exemplo, a
identificar se a mesma é
automatização, a melhor formação de profissionais,
estável, viável e a sua
regras de controlo de qualidade ou a padronização.
profundidade. Usa-se: cubital
Fiabilidade e reprodutividade de resultados analiticos.
mediana, cefálica ou basílica. Não escolher locais com
*Ajuda a resolver se o profissional tiver conhecimento hematomas, outras punções, mastectomia ou infusão
do impacto que o seu trabalho tem nas fases intravenosa (diluição na IV). O garrote facilita a
seguintes. É uma fase com pouca automatização, escolha da veia, mas não deve ser deixado demasiado
embora intralaboratorialmente o problema possa ser tempo (afrouxar após punção).
atenuado: diluições, centrifugações, etc.
Passo 3- Escolher o método:
Succção manual, para
Seringa veias de pequeno calibre,
lento e dispendioso, mais
sustetível a erro

Metodo
Colhe-se quantidade de
sangue pré determinada e
Vacutainer multiplas amostras.
Rápido e economico.
Pode ser usada butterfly.
Passo 4- Utilizar idopovidona (betadine) ou álcool
etílico 70% e deixar secar ao ar
Passo 5- Apertar garrote, assegurar correto
posicionamento do braço e puncionar. Encher os
tubos. Quando se retirar a agulha colocar gaze e
pressionar. Homogeneizar os tubos por inversão á
medida que são colhidos.
Passo 6- A pressão deve ser mantida durante alguns
minutos ou até o sangramento parar. Deve ser
confirmada a identificação dos tubos (deve ser feita
antes, de modo a ser visível o enchimento do tubo) e
colocar um penso.
Tubos e anticoagulantes
agregação leucocitaria e plaquetaria. Má
homogeneização cria redes de fibrina.
Os tubos apenas devem ser armazenados durante oito
horas, para não crenar eritrócitos/ aumentar
esferocitos. (Mais de 3h já degenera leucocitos).
No geral, má homogeneização diminui contagens,
altera hematocrito, obstrui a sonda de aspiração
devido aos microcoágulos.
Colher sangue capilar
 Usado principalmente em pediatria
 Obtém-se mistura de sangue proveniente de
arteríolas, vénulas e fluido interesticial e
intercelular.
 As lancetas devem ser escolhidas de acordo
com o pacinte, considerando que
+profundidade origina +sangue.
 O local da punção deve ser aquecido para
aumentar vascularização.
Locais de obtenção de amostra:

 Punção digital – Falnge distal, palma da mao

Para o EDTA existe o K2 e K3 (di ou tripotássico). O
K2 é o recomendado, o K3 desidrata Globulos
Vermelhos.
voltada para cima
 Punção no calcanhar – Face plantar
medial ou lateral
Neste tipo de punções a primeira gota deve
ser descartada devido á diluição. O capilar é
usado para colher as gotas de sangue. Pode
ser pressionado o local para estimular a saída de
sangue, mas não diretamente, para não hemolisar.

Os mais usados em hematologia são: EDTA, citrato

sódio e heparina. A porporção de voluma
anticoagulante/sangue deve ser respeitada. Contudo,
o EDTA é preferencial para hemograma.

 EDTA: Quelante de calcio: forma sais de

calcio insoluveis e impede coagulação. Em
excesso danifica a morfologia celular (altera
GV e WBC). Desintegra plaquetas. Em casos
de pseudotrombocitopena (em que devido á
diminuição de cálcio os autoanticorpos anti
plaquetas levam a aglutinaçã), repetir com
citrato para contar plaquetas. Má
homogeneização cria agregação plaquetária.
 Citrato de sódio: Forma sais de cálcio,
removendo-o. Pode ser tampa azul iu preta,
em que difere a porporção dos volumes. É o
primeiro tubo a colher para evitar
contaminação com outros anti-coagulantes.
No primeiro caso, se estiver em excesso, os
valores de coagulação serão aumentados
falsamente (tubo usado para este tipo de
testes). O tubo preto é usado para examinara
a velocidade de sedimentação. Má
homogeneização ativa a coagulação.
 Heparina: Tem atitrombina III, inativa a
trombina e inibindo formação de fibrina. Usado
para testar fragilidade osmotica. Induz
 Hematologia- Aula 2

Esfregaços
Utilidade: Avaliar morfologia celular, sempre que for
detetada alguma anormalidade nas contagens
Ocorre a hematopoiese.
celulares/hematócrito. Vermelha Esqueleto axial no
adulto.

Os esfregaços devem ser realizados o mais Medula ossea

rapidamente possível de modo a minimizar artefactos.

Branca Tecio adiposo
O angulo entre as duas laminas deve ser ajustado
tendo em conta a viscosidade do sangue:
 Mais viscoso implica menor ângulo (ou angulo
mais agudo) O tecido hematopoiético é muito vascularizado e
A secagem deve ser feita ao ar (completamente), a contém adipócitos. No fim da maturação as celulas
fixação em metanol 100%. Má secagem vai fazer com passam pelo endotélio até á corrente sanguínea. Em
que o conteúdo celular aparente estar fora da célula. condições neoplásicas, devido à infltração tumoral que
Coloração Romanovsky: altera a estrutura dos vasos, a passagem é facilitada
 Corante básico azul-violeta cora ácidos para as celulas imaturas (vão ser visíveis reticulócitos
nucleicos, grânulos dos basófilos e
no esfregaço, por exemplo).
ligeiramente grânulos dos neutrófilos
 Corante ácido laranja-rosa cora substâncias
eosinofílicas como os eosinófilos, a
hemoglobina e o núcleo.
Em alterações de pH, má filtração dos corantes, mau
Componente
tempo para corar, pH do tampão incorreto ou diluição vascular
Vasos

incorreta dos corantes, o esfregaço irá ficar mal

Espaço
corado. Atualmente este processo já é automatizado intertrabecular Parenquima Celulas hematopoiéticas

em diversos labratórios. Espaço

extravascular
Distribuição dos leucócitos: Ceulas que produzem
moleculas pertencentes á
 Linfocitos no centro/corpo Estroma
matriz extracelular e
 Polimorfonucleares na cauda necessárias á hematopoiese

 Celulas imaturas nas regiões periféricas da

lamina.
A medula óssea também destrói eritrócitos velhos e
armazena ferro como ferritina e hemossiderina.

A hematopoiese inicia-se numa célula mononuclear

Hematopoiese
Processo de produção de células sanguíneas
As células com menor tempo de vida são os
granulócitos, com menor são os linfócitos. (GV
aproximadamente 120 dias).
A hematopoiese dá-se no fígado e baço durante a vida
uterina, nos adultos ocorre na medula óssea, em
particular no espaço intertrabecular.
Com o envelhecimento a medula branca aumenta, e
em certas patologias é possível haver hematopoiese
no baço/fígado/S.linfático.
pluripotente (dá origem a células comprometidas com
uma linhagem celular - células estaminais
multipotentes - células progenitoras linfoides ou
mieloides)
A célula progenitora linfoide origina diretamente
linfócitos, enquanto a célula progenitora mieloide
origina células estaminal bipotentes (progenitores
eritrócitárias ou granulócitárias ou unipotentes-
megacariócitos, que dão origem a plaquetas).
As células estaminais originam células percursoras:
 Pró-eritoblásto
 Monoblasto
 Mieloblasto
 Linfoblasto
  Megacarioblasto carcinogénica e em patologias associadas a
São células reconhecíveis em esfregaço. Os fatores fibrose (ex.mielofibrose)
de transcrição regulam a sobrevivência e
diferenciação de células estaminais e os fatores de
crescimento são importantes para proliferar, Aspirado Biópsia
diferenciar e para um bom funcionamento celular. Espinha ilíaca
Crista ilíaca póstero-superior*
Local
posterior/ esterno1 ou antero-
superior

Posição
Decúbito lateral ou Decúbito lateral*
ventral ou dorsal

1. Explicar ao 1. Processo
paciente igual ao
2. Desinfetar e anterior
secar ao ar 2. Agulha até
3. Esterilizar o ao periósteo
campo 3. Retirar
4. Anestesiar estilete e
5. Puncionar até á colocar
medula tampa na
O conjunto de moléculas secretadas pelas células do 6. Aspirar o agulha

Procedimento
estroma (macrófagos, linfócitos, etc) para o necessário para 4. Colocar a
microambiente da MO formam fatores estimulantes ou tubo agulha com
heparinizado ou movimentos
fatores inibitórios. Em caso de falha no controlo destes seco rotativos até
estímulos e, consequentemente, na regulação das 7. Fazer ser suficiente
células progenitoras, há relação com doenças esfregaço com 5. Rodar em
hematológicas neoplásicas. a primeira sentido
amostra em horario e
Mielograma e biópsia óssea seringa seca anti-horário
8. Por penso e 6. Retirar a
Qual é a utilidade de um exame de medula?
tudo isso :D agulha,
Estes exames são uteis para avaliação introduzir o
estilete para
qualitativa/morfológica e contagem diferencial dos tirar a
diferentes tipos de células hematopoiéticas. Estas amostra
amostras podem ser para estudos de diversas áreas Hemofilia-
(morfológicos, imunológicos, microbiológicos, etc) Administrar fator
VIII antes
Limitações

Hemofilia;
Existem duas formas de obter amostra de medula: Trombocitopenia-
Trombocitopenia
Menos que
9 (menos que
 Aspirado medular 20 ×10 /L, 9
50 ×10 / L
administrar
 Biópsia ossea plaquetas
Acesso difícil
Ambos têm diferentes objetivos:  Fazer
 O aspirado medular é usado para exames esfregaço de
citológicos, em que se estudam Sangue
morfologicamente as células. Pode ser usado periférico e NUNCA colher no
Extra
para diagnosticar doenças malignas ou hemograma. esterno
hereditárias, por exemplo, mas também para  Se correr mal,
estudar a resposta a uma terapia e avaliar o repetir com
prognóstico. É especialmente relevante para outro angulo.
anemias de causa desconhecida, estudo de
dadores, lesão óssea focal em raio-X,
Eritropoiese
avaliação de depósitos de ferro, etc.
 Com a biopsia óssea obtem-se um fragmento Processo de formação de eritrócitos. Consiste na
de medula que é útil para observação acumulação gradual de hemoglobina e perda de
histológica, permitindo avaliar a arquitetura da organelos celulares.
MO. É aconselhada para avaliar a
celularidade, doenças infiltrativas ou 1
Não em crianças. Exceção: crista ilíaca anterior e
granulomatosas, suspeita de invasão face medial da tíbia em crianças até 18 meses
Permite numero constante de eritrócitos na corrente, Imagens que podem ajudar na eritropoiese:
de modo a fornecer o oxigénio necessário.

Inclui um equilíbrio entre produção e destruição, logo,

em certas patologias, haverá maior produção.

Stem cell Eritoblasto Eritoblasto

pluripotente basófilo policromatófilo

Stem cell
Eritoblasto
mieloide Proeritroblasto
ortocromático
multipotente

BFU (1ª celula CFU-E (1º

Reticulócito
progenitora identificavel na
(depois eritrocito)
comprometida) medula)

A partir do proeritroblasto, o RNA diminui e a

hemoglobina amenta. Aos poucos a celula fica menos
azul e mais cinzenta, até ser rosa-cinza 2. Não é
normal a presença de eritroblastos na corrente porque
indica hiperplasia eritroide3 ou infiltrações, contudo
pode ocorrer na gravidez.

Reticulócito- Na medula óssea, quando sai o núcelo,

origina o reticulócito. Ainda contem rRNA (visivel com
supravital porque precipita), logo ainda pode produzir
(pronormoblastos são as celulas que começam no
hemoglobina. Existe na MO e na corrente.
eritoblasto basofilo e acaba no eritoblasto
ortocromático, inclusive.
Eritrocito- Forma-se depois de sair o RNA. Muito
moldável para passar em microvasos, sem núcleo.

Eritropoietina- Hormona que regula a eritropoiese.

Induz a maturação e proliferação das celulas
progenitoras medulares, lingando-se a elas. Tem dois
locais de produção:

 Hepatocitos
 Cel que revestem capilares renais
É produzida de acordo com a disponibilidade de
oxigenio, ou seja:
-O2 disponivel, então o corpo produz mais hormona
para tentar fazer com que haja mais eritrócitos, e
aumentar esta disponibilidade. Isto ocorre em altas
atltitudes, anemias, ou quando a disponibilidade de O2
no rim é menor (defise de perfusão renal)

2
No Pptx da aula, pag 69, tem uma imagem. Não sei
se é importante
3
Anemia grave- aumenta a produção para suprir a
necessidade.