Métodos de registo de transporte iónico

b Fluorescence Ressonance Energy Transfer (FRET)

Drug Discovery Today: Technologies 5 (1):e23-e28 (2008)

 Voltage clamp

- Correntes iónicas em condições de potencial controlado (Voltage-clamp)

- Modelo de Hodgkin-Huxley (modelo HH)

Bibliografia:
Hille, Bertil: Ion Channels of Excitable Membranes (Sinauers
Associates Inc.)- capítulo 2- Classical Biophysics of the squid giant axon
 VOLTAGE CLAMP
Kenneth Cole

Voltage wire
m

Space
SPACEclamp
CLAMP -
+ E command

Current wire

Em ≈ E command
 REGISTO DE CORRENTES TOTAIS
Holding potential
Test potential

Im= Ic+ Ii
Q=CE
Ic = dQ/dt
Test potential
Holding potential Ic = C dE/dt

Im= C dE/dt + Ii

Im= Ii
REGISTO DE CORRENTES TOTAIS
Alan Hodgkin
Andrew Huxley
Bernard Katz

IL = gL (Em – EL)

IL = gL [-130mV - (- 65mV)]

IL = gL (- 65mV)

IL = Corrente negativa
Corrente de entrada
 IDENTIFICAÇÃO DAS CORRENTES
Determinação do potencial de reversão Uso de bloqueadores específicos

VT -Test potential
VH - Holding potential
(B) mV
mV
mV
mV
mV

VH = - 65 mV

(A)
Alteração das concentrações iónicas

(Corrente de Na+)
CURSO TEMPORAL DAS CONDUTÂNCIAS DE Na+ E K+

gNa = θ(t) ğNa

gK = ψ(t) ğK
VARIAÇÃO DAS CONDUTÂNCIAS EM FUNÇÃO DA VOLTAGEM

INa= gNa (E- ENa ) IK= gK (E- EK )

gK = ψ(v) ğK

gNa = θ(v) ğNa

○ - Valores medidos
no pico da curva

● - Valores medidos
no plateau

gNa = θ(t,v) ğNa gK = ψ(t,v) ğK

 PRESSUPOSTOS PARA O MODELO

- Na+ e K+ atravessam a membrana por caminhos independentes

- Logo: Im = Ic+ IL+ INa + IK

Ic= Cm dEm/dt

IL = gL (Em – EL)
INa = gNa (Em – ENa)
IK = gK (Em - EK)

- EL, ENa e EK são constantes (axónio gigante da lula- célula grande)

- gL não varia com potencial de membrana ou com o tempo

Variação de gNa e gK com a voltagem e o tempo

CURSO TEMPORAL DAS CONDUTÂNCIAS

Y(t) = (1- e -t/τ ) j

CURSO TEMPORAL DOS PARÂMETROS DO MODELO HH

n = 1- e (-t/τn )

m = 1- e (-t/τm )
h = e (-t/τh )
gNa- após um atraso, aumenta rapidamente- ACTIVAÇÃO
atinge um pico
decai novamente- INACTIVAÇÃO

τm= 0.2 ms – 0.6 ms

τh= 1 ms - 4 ms

gK- com maior atraso, aumenta mais lentamente- ACTIVAÇÃO

durante 10 ms não apresenta inactivação

τn= 1 ms – 4 ms
PREVISÃO DE POTENCIAIS DE ACÇÃO

Registo em axónio

nC/cm2

Simulação

mV