EXEMPLOS DE PRODUTOS

OBTIDOS POR PROCESSOS

FERMENTATIVOS
 PROCESSO PARA PRODUÇÃO DE
ANTIBIÓTICO POR FERMENTAÇÃO
Procura e isolamento de microrganismos produtores de
antibióticos
Ao se procurar isolar um microrganismo para fins
industriais, deve-se ter em mente as características que
deverá apresentar, quais sejam:
- crescimento rápido em substrato econômico;
- produção das substâncias desejadas em quantidades e
condições econômicas;
- conservação das características biosintéticas sem grandes
riscos de variação;
- baixa produção de substâncias que interfiram com a
extração do antibiótico;
- ausência de patogenicidade, etc.
 PROCESSO PARA PRODUÇÃO DE
ANTIBIÓTICO POR FERMENTAÇÃO
Procura e isolamento de microrganismos produtores de
antibióticos
É cada vez mais difícil encontrar microrganismos capazes de
produzir antibióticos novos;
De 10.000 amostras de actinomicetos isolados de amostras
de terra diferentes, isolam-se 2.500 tipos capazes de produzir
antibiótico;
Destes, apenas 10 fornecem novos antibióticos;
E, desses, apenas 1 mostra por suas propriedades, ter
utilidade clínica.
Conservação da cepa produtora
Congelamento e liofilização são as duas técnicas usadas
preferencialmente na conservação de
estoques industriais. .
 PROCESSO PARA PRODUÇÃO DE
PENICILINA
Processo industrial de produção de penicilina
O primeiro antibiótico produzido industrialmente foi a penicilina;
De início, sua produção era feita em superfície, sendo o meio de cultura
esterilizado em camadas delgadas em frascos, garrafas ou bandejas;
Ao meio esterilizado inoculava-se uma suspensão de esporos de
Penicillium;
Os meios inoculados eram incubados a 24 - 28 0C, sem agitação.
As desvantagens do método eram:
- deficiência na penetração de oxigênio no meio;
- parte aérea do micélio tinha pouco acesso aos nutrientes;
- problemas de contaminação constantes;
- dificuldades de extração do antibiótico do meio.
Selecionando-se amostras de Penicillium, reformulando-se o meio de
fermentação, e adaptando- se o microrganismo para o desenvolvimento
em profundidade em caldo aerado, é possível produzir o antibiótico em
larga escala economicamente.
 PROCESSO PARA PRODUÇÃO DE
PENICILINA

controles operacionais:
A produção de espuma reduz a capacidade útil do
equipamento, dificulta as trocas gasosas entre o
meio de fermentação e o ar e pode causar, por efeito
de flotação, exaustão de alguns dos componentes
do meio de fermentação;
No caso de antibióticos produzidos por meio dE
bactérias, poderia ocasionar concentração de células
na espuma.
 PROCESSO PARA PRODUÇÃO DE
PENICILINA
Controle fisiológico
No caso de produção de penicilina o pH deve ser mantido em limites estreitos;
Por isso,o meio de produção contém Ca, Mg e fosfato como tampão;
além disso, ácido sulfurico e hidróxido de sódio devem ser adicionados durante a
fermentação para se manter o pH próximo a neutralidade;
Além do pH, controla-se as quantidades de açúcares e de nitrogênio, afim de se
manterem condições que favoreçam as atividades metabólicas desejáveis do
microrganismo.
Caldos fermentados contendo fungos e actomicetos apresentam características
não-newtonianas de fluxo;
Comportam-se normalmente como pseudoplásticos
A medida que o caldo apresenta características não-newtonianas, torna-se difícil
dispersar homogeneamente nutrientes no meio e fornecer oxigênio às células;
O aumento da viscosidade do caldo, no decorrer da fermentação, acarreta
diminuição da disponibilidade de oxigênio;
Uma diluição apropriada do meio causa diminuição da viscosidade sem
prejudicar a capacidade de produção.
 PROCESSO PARA PRODUÇÃO DE
PENICILINA
Meios de cultura
Bons rendimentos de antibiótico ocorrem quando quantidades relativamente
grandes de C e de N são fornecidas para as atividades metabólicas do
microrganismo.
O meio de cultura , além de fornecer nutrientes, em condições adequadas para o
desenvolvimento do microrganismo e formação do antibiótico, deve:
- ter capacidade de tamponamento;
- permitir o mínimo de formação de espuma;
- dificultar o crescimento de contaminantes;
- contribuir para a estabilidade genética do agente de fermentação;
- permitir aeração e agitação vigorosa;
- permitir fácil recuperação do produto;
- ser passível de esterilização;
- conter precursores necessários à formação do antibiótico;
- ser economicamente exeqüível.
 PROCESSO PARA PRODUÇÃO DE
PENICILINA
Meios de cultura
As fontes de energia e carbono mais utilizadas são o melaço,
o açúcar e o amido de milho e óleos vegetais, particularmente
os de milho, girassol e soja;
agua de milho, subproduto da fabricação de amido de milho,
é a fonte de nitrogênio muito utilizada em indústrias de
fermentação, por exemplo na produção de penicilina;
além de nitrogênio, a água de milho fornece ácido láctico,
glicose, aminoácidos e vitaminas;
também se utiliza industrialmente como fonte de N, o levedo
de cerveja, que além de fornecer N orgânico é fonte de
vitaminas e fatores de crescimento, a torta de amendoim, a
farinha de peixe, extratos de carne, caseína, etc.
 PROCESSO PARA PRODUÇÃO DE
PENICILINA

Caldo fermentado Retirada de

solidos

Micélios Recuperação
Fracionamento
Célula do solvente
ou extração
resíduos solidos

concentração
Antibiótico
bruto Purificação do
antibiótico
 PROCESSO PARA PRODUÇÃO DE
PENICILINA
PROCESSO
A extração de antibiótico é dificultada pela baixa concentração de produto
(1 a 2%), sensibilidade ao pH, temperatura, e a presença de diferentes
materiais dissolvidos ou em suspensão no caldo fermentado;

- Retirada dos sólidos no caldo fermentado

A primeira dificuldade na retirada de sólidos de um caldo fermentado
deve-se à presença de partículas em suspensão coloidal;
essa dificuldade pode ser superada:
a) variando-se o pH;
b) adicionando-se agentes floculantes;
c) usando-se colóides de carga contrária;
d) usando-se enzimas clarificantes;
e) controlando-se as condições de fermentação.
 PROCESSO PARA PRODUÇÃO DE
PENICILINA
PROCESSO
Processos de extração
os processos mais empregados são: a precipitação, a extração com solventes e a
adsorsão por meio de resinas de troca iônica
A precipitação pode ser usada para recuperação de vários antibióticos ou ainda
na concentração e purificação dos mesmos;
no caso de tetraciclinas, pode-se fazer a precipitação com água de cal e separar o
produto por filtração ou centrifugação;
A extração por solventes é feita, pelo menos, em duas etapas:
mistura do solvente com o caldo, e separação das fases aquosa e orgânica;
• A mistura deve ser feita em alta turbulência, permitindo o maior contato
possível entre o caldo e o solvente. O tempo de contato deve ser suficiente
para permitir o estabelecimento de equilíbrio na partição do antibiótico entre o
caldo e o solvente. O pH e a temperatura devem ser ajustados de modo a
favorecerem a transferência do antibiótico da fase aquosa para o solvente;
• As duas fases, aquosa e orgânica, são normalmente separadas por
centrifugação.
 PROCESSO PARA PRODUÇÃO DE
PENICILINA
PROCESSO
- Concentração e Purificação de antibióticos
Depois que o antibiótico é extraído do caldo, pode ser ressolubilizado;
é submetido então a uma cristalização (controlando-se pH e temperatura);
precipitação ou reextração com um solvente aquoso;
Na purificação da penicilina por exemplo, pode-se depois de filtrado o
caldo, resfriá-lo e acertar o pH a 2,2 +/- 0,2, com ácido sulfúrico ou
fosfórico;
faz-se a extração com hidrocarbonetos;
eleva- se o pH a 6,7 +/- 0,2 e reextrai com tampão aquoso;
o processo é repetido, de modo a se obter uma purificação do antibiótico,
que é submetido, finalmente a um processo de cristalização ou
liofilização;
a concentração e purificação de antibióticos pode ser ainda por:
1. Resinas líquidas;
2. Membranas
 PROCESSO PARA PRODUÇÃO
ÁCIDO ASCÓRBICO (vit. C)
Trata-se da vitamina que se obtém em maior quantidade
biotecnologicamente;
o processo completo inclui uma síntese mista química-
biotecnológica:
1. D-glicose se transforma por redução catalítica em D-
sorbitol;
2. em processo fermentativo com Acetobacter suboxidan o C2
do sorbitol é oxidado originando L-sorbosa com rendimento
quase estequiométrico;
3. Por tratamento com hidróxido sódico obtem-se o sal de
sódio na forma enólica do ácido 2-oxo-L-glucônico, que se
transforma por acidificação diretamente em ácido L-
ascórbico.
A transformação biotecnológica de D-sorbitol em L-
sorbosa ocorre em tanques de fermentação com cultivo de
Acetobacter suboxidans.
 PROCESSO PARA PRODUÇÃO
ÁCIDO ASCÓRBICO (vit. C)
Condições do processo fermentativo:
Substrato:
Solução de D-sorbitol a 20% e 0,5% de extrato de levedura
ou 0,3% de extrato de grãos de milho.

Inoculo:
O inoculo Acetobacter suboxidan representa 3% do substrato.
Fermentação:
A fermentação transcorre a 30-35 0C com aeração e agitação
vigorosas e termina após 2 a 3 dias;
O processo é então interrompido elevando-se a temperatura
a 50 oC.
 PROCESSO PARA PRODUÇÃO
ÁCIDO ASCÓRBICO (vit. C)
Separação purificação e concentração
A solução contendo L-sorbosa é separada das
células mediante sucessivas filtrações;
a descoloração do filtrado se processa em filtros de
carvão ativo e a concentração é feita lentamente
até que ocorra a cristalização;
assim procedendo se consegue cristais de L-sorbosa
muito puros que após transformação química se
obtêm o ácido L-ascórbico.
 PROCESSO PARA PRODUÇÃO
ÁCIDO ASCÓRBICO (vit. C)
Separação purificação e concentração
A solução contendo L-sorbosa é separada das
células mediante sucessivas filtrações;
a descoloração do filtrado se processa em filtros de
carvão ativo e a concentração é feita lentamente
até que ocorra a cristalização;
assim procedendo se consegue cristais de L-sorbosa
muito puros que após transformação química se
obtêm o ácido L-ascórbico.
 PROCESSO PARA PRODUÇÃO
COBALAMINA (vitamina B12)
Ao final da fermentação o caldo de cultivo pode ser
empregado para a obtenção de concentrado ou cristais de
vitamina B12 O concentrado é obtido por evaporação.
Para a obtenção de preparados puros se acidifica o caldo de
cultivo com H2SO4 e Na2 SO3 a um pH 5,0 para
estabilizar a cobalamina e separá-la das células. Depois a
solução é filtrada e se purifica a solução com carvão ativo.
O passo seguinte consiste na concentração por evaporação
seguido da adição de solventes
orgânicos, cristalização e purificação.
 PROCESSO PARA PRODUÇÃO DE
DEXTRANA
As dextranas que se utiliza como substitutos do plasma tem
que ter um peso molecular médio de 40.000 a 80.000.
Uma solução 6% de dextrana com esse peso molecular, tem
a viscosidade e pressão osmótica muito próximas ao
plasma sangüíneo.
Na maioria das vezes os dextranos se formam com peso
molecular elevado.
Com o cultivo bacteriano ou soluções enzimáticas obtem-se
dextranos de elevado peso molecular e a partir destes por
hidrólise o peso molecular desejado.
O melhor é estabelecer as condições de processo de modo a
se obter dextranos de peso molecular na faixa desejada.
 PROCESSO PARA PRODUÇÃO DE
DEXTRANA
Os substratos preparados com sais inorgânicos, 2% de
extrato de milho, 10% de sacarose e pH de 6,5 a 7,0 é
filtrado, esterilizado, resfriado, adicionado ao fermentador
sob agitação e inoculado com Leuconostoc ou
Xanthomonas. Após 2-4 dias a 25 0C o processo está
concluído com a formação de uma massa gelatinosa com o
pH baixando para 4,0 devido à formação de ácido láctico.
O conteúdo do fermentador é então bombeado à tanques de
precipitação e resfriado a 1,0 0C.
Os dextranos se precipitam pela adição de metanol que se
recupera por destilação a partir da solução resultante.
A fração precipitada de elevado peso molecular é hidrolisada
com ácido clorídrico a 100 0C, controlando se a
viscosidade e se resfria gradativamente até se obter
as cadeias de PM desejada, e se neutraliza com NaOH.