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Índicedetabelas iv
índicedefiguras iv
Introdução 5
EnquadramentoTeórico
6
PreparaçãodascaixasdePetri: 7
Preparaçãodaslâminasparaaobservaçãomicroscópica: 8
Tratamentoderesultados
9
●Visãomacroscópica 9
●Visãomicroscópica 10
Discussãoderesultados 2
1
●Procedimento1-Controloambiental: 12
●Procedimento2-Microbiotadocorpo: 12
●Procedimento3-Microbiotadasmãos: 13
●Procedimento4-TestedeSensibilidadeaosAntibióticos 13
Conclusão 14
Índicedetabelas
Tabela1-Procedimento1 7
Tabela2-Procedimento2e3 7
Tabela3-Procedimento4 8
Tabela4-Observaçãomicroscópicadascolónias 11
índicedefiguras
Figura1-AmbienteA(dia10/10) 8
Figura2-AmbienteB(dia11/10) 8
Figura3-AmbienteC(dia13/10) 8
Figura4-Microbiotadocorpo 8
Figura5-Microbiotadasmãos(antes) 8
Figura6-Microbiotadasmãos(depois) 8
Figura7-TestedeSensibilidadeaAntibióticos 8
iv
Introdução
oâmbitodaUnidadeCurricularMicrobiologia,lecionadapelaProfessoraHelenaCaria,foi
N
proposta a realização de um relatório centrado no estudo de culturas bacterianas, no
primeiro semestre do primeiro ano do Curso de Licenciatura em Enfermagem da Escola
SuperiordeSaúdedoInstitutoPolitécnicodeSetúbal,noanoletivode2022/2023.
Esterelatóriotemcomoobjetivos:
● Analisarsecrescembactériasnonossocorpo;
● Analisarsealavagemdasmãoséeficaz;
● Analisarseamicrobiotadasdiscenteséigualàdosoutros;
● Analisarseamicrobiotadasdiscenteséigualàdomeioambiente;
● Analisar seasbactériaspresentesnasnossasmãos,antesdalavagem,sãoiguais
àsdorestodocorpoe/oudomeioambiente;
● Avaliararesistênciadasbactériasadeterminadosantimicrobianos;
● Observarcolóniasdefungosebactérias(macroscopicamente);
● Observar microscopicamente microrganismos, utilizando diferentes corantes,
identificandoassuasformas;
● Refletirsobreaimportânciadoenfermeiro/atrabalharemassepsia.
ste relatório está dividido em três partes: a introdução, onde se apresenta o tema do
E
trabalho, uma breve contextualização do mesmo e os seus objetivos; o desenvolvimento,
que se irá dividir no enquadramento teórico (onde se apresentam conceitos-chave
necessários para a discussão de resultados), na metodologia (onde todo o procedimento
será explicado) e na discussão de resultados; e ,finalmente, a conclusão onde todas as
questõescolocadasnaintroduçãoserãorespondidas.
este relatório todas as referências bibliográficas serão feitas através da Norma APA -
N
AmericanPsychologicalAssociation7ªEdição.
5
EnquadramentoTeórico
a área da microbiologia uma noção muito importante é a noção de microbiota. A
N
microbiota é o conjunto de microrganismos que habitam numa determinadaregião/tecido.
Estes microrganismos fora do seu habitat natural, tornam-se potencialmente patogénicos,
podendocausarumainfeçãoe,poressarazão,trabalharemassepsiaéessencial.
rabalharemassepsiasignificatrabalhar,commétodo,deformaaevitaracontaminaçãoe
T
reduzindo apercentagemdeerro.Parasetrabalharemassepsia,éimportanteprocederà
desinfeçãoeesterilizaçãotantodanossaáreadetrabalho,comodosmateriaisnecessários.
A desinfeção reduz a população microbiana enquanto que, a esterilização, destrói
completamentetodasasformasdevidamicroscópica.
correta lavagem das mãos também é muito importante para o controloeprevençãode
A
infeções.Esteprocessodevedurarcercade60segundos,seforfeitacomáguaesabão,e
cercade20a30segundos,seforfeitacomumasoluçãoantisséptica.
smeiosdeculturapodemsersólidos(numaplacaoucaixadePetri,selheforadicionada
O
o Agar, que é um agente solidificante) ou líquidos (observados pela turvação e/ou pela
formação desedimentos/deumapelícula)edevemproporcionarosnutrientesnecessários
e ascondiçõesambientaisapropriadasparaocrescimentodeculturas.Paraseobteruma
cultura microbiana é necessário transferir o inóculo (número de células) para o meio
previamente esterilizado. Após este processo, o meio de cultura é transferido para uma
estufa de forma a que este meio de cultura possa alcançar a fase exponencial de
crescimento.
os meiosdeculturasólidosépossívelobservarcolónias(massavisíveldecélulas,todas
N
elas descendentes da mesma célula inicial) macroscópicamente, que diferem no seu
tamanho,forma,texturaecor.Aavaliaçãodestascaracterísticaséimportanteparaquese
consigaidentificarasdiferentesespéciesexistentesnummeiodecultura.
m antibiograma ou Teste de Sensibilidade aos Antibióticos (TSA) é ummétodorápidoe
U
eficaz utilizado para estudar a sensibilidade de certas bactérias a determinadas doses e
tipos de antimicrobianos. Os discos de papel, embebidos em diversos tipos de
antimicrobianos(adiferentesconcentrações)sãocolocadosnosmeiosdecultura.Assim,a
realizaçãodestetesteédeextremaimportânciaumavezquenospermiteavaliaraeficácia
quedeterminadosantimicrobianostêm,acombatercertasinfeções.
m antimicrobiano é um medicamento utilizado com a finalidade de tratar infeções
U
causadas por bactérias, isto é, é um medicamento cuja finalidade é destruir e impedir o
desenvolvimentodebactériascausadorasdeinfeções.
6
Metodologia
PreparaçãodascaixasdePetri:
urante esta atividade laboratorial, todos os procedimentos foram iniciados da mesma
D
forma. Primeiro procedeu-se à identificação das caixas de Petri, onde se colocou (nos
limites curvos da caixa) a data, o nome dos elementos do grupo, a escola, a turma e a
identificação do trabalho. Depois, e ainda para todos os procedimentos (à exceção do
procedimento1),foiefetuadaalavagemdabancadacomlixíviaeadesinfeçãodamesma
com álcool a 70º, utilizando-se papel absorvente, fazendo linhas paralelas e semi
sobreponíveis no sentido distal→proximal. De seguida, colocou-se o bico de Bunsen no
centro da bancada, ligou-seogáseacendeu-seachama,criandoassimumperímetrode
segurança(paraserpossíveltrabalharemassepsia).
Procedimento1-ControloAmbiental
Procedimento2-Microbiotadocorpo Procedimento3-Microbiotadasmãos
1. C olocou-se a caixa de Petri com 1. C olocaram-se duas caixas de Petri
meio de cultura LA, identificadae com meio de cultura LA, uma
dividida em três partes, no identificada como "antes" e outra
perímetro de segurança, identificada como "depois" (ambas
previamente desinfetado e divididas em três partes), no
esterilizado; perímetro de segurança,previamente
2. Com a zaragatoa, cada membro desinfetadoeesterilizado;
do grupo, recolheu uma amostra 2. Cada elemento do grupo pressionou
da microbiota do seu corpo (o umdedonacaixadePetriidentificada
nosso grupo escolheu a nuca, a com"antes",numadasdivisões;
pele da região do nariz e o 3. Realizou-seahigienizaçãodasmãos;
pescoço); 4. Cada elemento do grupo pressionou
3. Cadamembrodogrupofriccionou umdedonacaixadePetriidentificada
azaragatoanacaixadePetri; com"depois",numadasdivisões;
4. Colocou-se a caixa de Petri, 5. Colocaram-se as duas caixas de
invertidamente,naestufaa37ºC. Petri, invertidamente, na estufa a
37ºC.
Procedimento4-TestedeSensibilidadeaosAntibióticos
1. C olocou-seacaixadePetricommeiodeculturaMH,identificada,noperímetrode
segurança,previamentedesinfetadoeesterilizado;
2. Passou-seatampadotubodeensaio,comasuspensão,pelachamadobicode
Bunsenantesdeseabriramesma;
3. Distribuiu-se1mLdeumasuspensãodeE.colinacaixadePetri;
7
. E
4 spalhou-semuitobemestasuspensãoportodaacaixadePetri;
5. Fechou-seotubodeensaioepassou-senovamenteotopodotubopelachama;
6. Passou-se a pinça pela chama e retirou-seumdiscodeantimicrobianos,quefoi
colocadonacaixadePetri;
7. Repetiu-seesteprocessoparaosegundoeterceirodisco;
8. Colocou-se esta caixa de Petri, na estufa a 37°C, com muito cuidado e sem
inverteracaixa.
Preparaçãodaslâminasparaaobservaçãomicroscópica:
1. P rocedeu-se à descontaminação e à desinfeção da bancada (com já foiexplicado
anteriormente);
2. Ligou-seogáseacendeu-seachama,deformaacriarumperímetrodesegurança;
3. Limpou-seumalâminaeumalamelaecolocaram-seasmesmassobreumafolhade
papel;
4. Procedeu-seàmarcaçãodalâminacomumacanetadeacetato;
5. Colocou-seumagotadecorante(safranina,violetadecristalouazuldemetileno)no
centrodalâmina;
6. Passou-seaansapelachama;
7. Retirou-seumapequenaamostradoinóculo,comaajudadaansa,emisturou-sea
mesmacomagotadecorante;
8. Colocou-sealamelae,deseguida,voltou-seapassaraansapelachama;
9. Observou-seapreparaçãoaomicroscópiocomaampliaçãode100x,parasefocar
amesmae,deseguida,observou-senumaampliaçãode1000x;
10.Repetiu-seesteprocessoasvezesnecessárias.
8
Tratamentoderesultados
● Visãomacroscópica
1. ControloAmbiental
4.TestedeSensibilidadeaosAntibióticos
9
● Visãomicroscópica
Filamentosas
1 Creme Lisa Plana (Ampliação: Safranina
1000x)
Estreptococos Azulde
2 Salmão Lisa Elevada (Ampliação: etileno
m
1000x)
Levedurasem Azulde
3 Vermelha Lisa Elevada reprodução etileno
m
(Ampliação:
1000x)
Estreptococos ioleta
V
4 Amarela Lisa Elevada (Ampliação: decristal
1000x)
Cocos
(Ampliação: Safranina
5 Branca Lisa Elevada 1000x)
Estafilococos Violeta
(Ampliação: decristal
6 Branca Lisa Plana 1000x)
Cocos
(Ampliação: Safranina
7 Amarela Lisa Plana 1000x)
Cocos
8 Laranja Irregular Elevada (Ampliação: Safranina
1000x)
ungoque
F
apresentahifas
9 Preto Irregular Plano (Ampliação: Safranina
1000x)
Cocos
10 Branco Irregular Elevado (Ampliação: Safranina
1000x)
10
ungoque
F
apresenta
Brancae levedurase Azulde
11 astanha Irregular
c Plana esporângio etileno
m
(centro) (Ampliação:
1000x)
on-
C acilos
B zulde
A
tami- Branco Irregular Plano (Ampliação: metileno
nação 1000x)
11
Discussãoderesultados
● Procedimento1-Controloambiental:
os dias 10, 11 e 13 de outubro de 2022 foram preparadas três caixas de Petri, que
N
funcionaramcomoControloAmbiental,ouseja,duranteasaulasdecorridasnestestrêsdias
havia uma uma caixa dePetriqueestavaexpostaaosmicrorganismospresentesnomeio
ambiente.Combasenosresultadosobtidos,podemosobservarqueasplacasdosdias11e
13 de outubro,apresentamumamaiordiversidadedemicrorganismos.Naplacadedia10
de outubro são observadas maioritariamente colónias amarelas, lisas e elevadas, que ao
microscópio foram identificadas como estreptococos, apesar de existirem outras, não tão
abundantes,como:
- Colónias creme, lisas eplanas,identificadascomofilamentosas,aomicroscópio(colónia
1);
- Colónias brancas, lisas e planas, identificadas, ao microscópio, como estafilococos
(colónia6);
- Colónias brancas, lisas e elevadas, identificadas como cocos, na visão microscópica
(colónia5);
-Colóniasamarelas,lisaseplanas,designadascomococos,navisãomicroscópica(colónia
7).
or outro lado, nas restantes placas, para além de existirem as colónias mencionadas
P
anteriormente,épossívelencontrartambémoutrosmicroorganismoscomo:
- Colónia branca e castanha, irregular e plana, identificada como fungo que apresenta
leveduraseesporângios,quandoobservadaaomicroscópio(colónia11);
- Colónias vermelhas, lisas e elevadas, na visão microscópica, identificadas como
leveduras,emreprodução,porgemulação(colónia3);
- Colónias salmão lisas e elevadas, identificadas como estreptococos, ao microscópio
(colónia2);
-Colóniaslaranjas,irregulareseelevadas,identificadascomococos,navisãomicroscópica
(colónia8);
- Colónia preta, irregular e plana, na visãomicroscópica,identificadacomoumfungocom
hifas(colónia9);
-Colóniabranca,irregulareplana,designadacomobacilos,aomicroscópio(colónia10).
diferençaentreaquantidadedemicrorganismospresentesentreas3placas,deve-seao
A
facto de que, até ao dia 10 de outubro, o laboratório onde se realizou esta atividade
laboratorial, não era frequentado por muitas pessoas. A partir desse dia, o laboratório
começou a ser mais frequentado e isso levou ao aumento da diversidade de
microrganismospresentesnomeioambiente.
Tendo por base estes resultados, é possível perceber que, quanto mais um espaço é
utilizado e partilhado por diferentes pessoas, maior a quantidade e diversidade de
microrganismos existentes no ar que respiramos e maior é a importância do controlo de
infeção.
● Procedimento2-Microbiotadocorpo:
ara este procedimento foram retiradas três amostras das microbiotas das trêsdiscentes
P
pertencentesaogrupo-umaamostradanuca,outradapeledonarizeaoutradopescoço.
Aoobservaraplaca,pudemosobservarqueapenascresceramcolóniasnoslocaisdaplaca
onde a discente roçouazaragatoa.Estascolóniaseramamarelas,lisaseplanas(comoa
colónia 7 - cocos) e colónias brancas, lisas e planas (como a colónia 6 - estafilococos).
Deste modo, é possível comparar a microbiota do corpo com a do ambiente. Estas duas
microbiotas são semelhantes, uma vez que existem colónias com as mesmas
características (como as colónias 6 e 7) em ambos os ambientes e por isso, podemos
concluir que osmicrorganismosexistentesnanossamicrobiotadocorpo,tambémexistem
namicrobiotadoar.
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● Procedimento3-Microbiotadasmãos:
ara este procedimento foram utilizadas duas caixas dePetri:umaparao“antes”eoutra
P
parao“depois”dalavagemdasmãos.Nacaixautilizadaparaasamostrasrecolhidasantes
da lavagemdasmãos,épossívelidentificaralgumascolóniasdebactériasquepodemser
classificadas como contaminações do meio ambiente. Estas colónias são brancas,
irregulares e elevadas e quando observadas as observámos ao microscópio, pudemos
identificá-las como cocos. Estas contaminações existem porque, no momento em que foi
feitaadedada,adiscentenãoestavaatrabalharemassepsiaeporisso,asbactériasdoar
contaminaramacaixadePetriecomeçaramasuaproliferação.Combasenascolóniasde
bactérias existentesnestacaixa,tambémépossívelcompararamicrobiotadasmãoscom
as do resto do corpo e do meio ambiente. Deste modo, conseguimos observar colónias
comoascolónias4(estreptococos),5(cocos),6(estafilococos)e7(cocos)nasduasplacas
da microbiota das mãos, que também se encontram presentes no meio ambiente e na
microbiota do corpo (colónias 6 e 7). Com a realização do processo de higienização das
mãos, os resultados esperados seriam a ausência de colónias de bactérias na caixa do
“depois”, mas como se registou e observou, não foi isso que aconteceu. O facto de
existirem colónias de bactérias na caixa de Petri do “depois” pode dever-se a uma má
realização da técnica da lavagemdasmãos;aoscuidadosapósalavagemdasmãosnão
teremsidoosmaisadequadoseàpresençadegestosparasitas(ajeitarocabelo,óculose
roupa,utilizargestosnumaconversa,entreoutros).
● Procedimento4-TestedeSensibilidadeaosAntibióticos
ara este procedimento foram utilizados três discos de diferentes antimicrobianos, a
P
diferentesconcentrações-S10(estreptomicinaa10μg),N30(neomicinaa30μg)eAM10
(ampicilina a 10 μg) - sendo o objetivo deste procedimento avaliar a resistência das
bactérias a determinados antimicrobianos.Quandoseprocedeuàobservaçãodacaixade
Petriforammedidososhalosdeinibiçãodecadaumdosantimicrobianos.Aestreptomicina
a 10 μg apresentava um halo de inibição de 1,5 cm, no entanto este halo estava a ser
recolonizado por bactérias resistentes (isto porque, apesar de não ser muito perceptível,
existeumacircunferênciaamareladadentrodohalodeinibiçãoque,indicaqueasbactérias
já colonizaram novamente o espaço entre o limite do halo de inibição e a circunferência,
porque ganharam resistência ao antimicrobiano em questão); a neomicina a 30 μg
apresentavaumhalodeinibiçãode1,2cmeaampicilinaa10μgapresentavaumhalode
inibição de 1,1 cm, no entanto este halo também estava a serrecolonizadoporbactérias
resistentes (devido ao referido anteriormente). Podemos então concluir que, no caso de
umainfeçãoporE.colideveserutilizadoaneomicinaumavezqueesteantimicrobianoéo
que apresenta um maior halo de inibição e é o único, dos três utilizados, que não foi
recolonizado por bactérias resistentes, ou seja, é o único que será realmente eficiente a
combaterainfeção.
13
Conclusão
ste relatório foi muito importante para a consciencialização das discentes sobre a
E
quantidade e variedade de microrganismos presentes tanto no meio ambiente, como no
nossoprópriocorpo,eparaacompreensãodaimportânciadalavagemehigienizaçãodas
mãosbemcomodocontroloeprevençãodeinfeções,emcontextoclínico.
ma vez que o nosso corpo está constantemente em contacto com o meio ambiente,as
U
bactériasexistentesnoar,estãotambémpresentes,tantonamicrobiotadasnossasmãos,
como na restante microbiota do corpo, como pudemos observar pelos resultados obtidos
nosprocedimentos1,2e3.Comefeito,foipossívelconcluirqueasbactériasestãoemtodo
o lado. No entanto, estas só são potencialmente patogénicas fora do seu habitat natural
(razãopelaqualotrabalhoemassepsiaéextremamenteimportante).
epois do procedimento 3, concluiu-se que as bactérias que crescem nas nossas mãos,
D
sãoaquelasqueseencontramnomeioambienteenorestodocorpo.Aincorretalavagem
das mãos não elimina as bactérias existentes nas nossas mãos, ou seja, a lavagem das
mãos só é eficaz no controlo e prevenção de infeções se a mesma for corretamente
realizada(istoenglobaoantes,oduranteeodepoisdoprocessodehigienização/lavagem
dasmãos).
om os procedimentos 2 e 3 foi possível entender que as bactérias não apresentam
C
mobilidade, uma vez que, estas sócresceramnoslocaisdacaixadePetriondepassoua
zaragatoaeondeadedadafoifeita,àexceçãodascontaminaçõespresentes.
nquantofuturasenfermeiras,arealizaçãodestaatividadelaboratorial,bemcomoado
E
relatório,contribuíramparaaconsciencializaçãodasdiscentesrelativamenteàimportância
dotrabalhoemassepsiaedocontrolo/prevençãodeinfeções.Aténoscontextosmais
simplesdodiaadiaestãopresentesmicrorganismos,queemcontextodeprestaçãode
cuidados(onde/quandoaspessoastêmasdefesasmaisbaixas)podemcausarinfeções.
Comefeito,trabalharemassepsia,deformaaevitaracontaminação,éfundamentalpara
seocontroloeprevençãodeinfeções.
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