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Avanços recentes em vacinas

Tecnologias

Michael James Francis, PhD, EurProBiol, CBiol, FRSB, HonAssocRCVS

PALAVRAS-CHAVE

Vacinas vetor de peptídeo de subunidade atenuada inativada DIVA

Ácido nucleico

PONTOS CHAVE

As tecnologias tradicionais de vacinas baseiam-se em vacinas mortas/inativadas e vivas/atenuadas.

abordagens.

Novas estratégias de vacinação mortas/inativadas incluem vacinas de subunidades de antígeno, proteínas e peptídeos.

Novas estratégias de vacinação viva/atenuada incluem vacina viva modificada, marcadora/diferenciadora

infectados a partir de animais vacinados, vacinas de vetor e de ácido nucleico.

As novas tecnologias de vacinas encontram frequentemente a sua primeira aplicação comercial no sector veterinário.
medicamento.

INTRODUÇÃO

A maioria das vacinas disponíveis hoje depende de tecnologias inativadas (mortas) ou vivas
atenuadas (enfraquecidas). Tais abordagens têm sido usadas com sucesso para
abordar muitas das importantes doenças veterinárias e humanas. No entanto, ambas as
técnicas têm suas limitações e problemas potenciais associados.
As vacinas inativadas devem ser totalmente inócuas e não infecciosas. Problemas com
surtos de campo no passado foram ocasionalmente atribuídos à inativação incompleta. Tais
problemas não deveriam e não existiriam se inativadores, procedimentos de inativação e testes
de inocuidade mais confiáveis fossem usados na produção.
processo. Além disso, porque o fabrico de tais vacinas envolve a cultura
de grandes quantidades do agente infeccioso, existe um risco potencial para o pessoal
envolvidos e o meio ambiente. As vacinas cultivadas em ovos, cultura de tecidos ou
simplesmente meio de cultura podem conter proteínas “estranhas” indesejadas, que podem
afetar a imunogenicidade ou ser potencialmente alergênicas/reatogênicas. Finalmente, as vacinas inativadas
certas limitações no seu modo de apresentação e, como consequência, a natureza
da resposta imunológica que podem provocar. A resposta à vacinação pode ser limitada

O autor não tem nada a revelar.

BioVacc Consulting Ltd, The Red House, 10 Market Square, Amersham, Buckinghamshire HP7
0DQ, Reino Unido
Endereço de e-mail: mike.francis@biovacc.com

Vet Clin Pequeno Anim 48 (2018) 231–241

https://doi.org/10.1016/j.cvsm.2017.10.002 vetsmall.theclinics.com
0195-5616/18/ª 2017 Elsevier Inc. Todos os direitos reservados.
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232 Francisco

e de curta duração com adjuvantes ou imunoestimulantes necessários para melhorar a sua

imunogenicidade/eficácia global.
As vacinas atenuadas devem ser controladas e caracterizadas com precisão para fornecer o nível necessário
de imunidade protetora sem causar doenças significativas.
sintomas no animal hospedeiro. Há também um baixo risco de que o antígeno atenuado
pode reverter para a virulência total, e a reversão cuidadosa para estudos de segurança de virulência deve ser
realizado. Além disso, na cultura do antígeno da vacina, é possível que possam ser introduzidos outros agentes
infecciosos que poderiam, eles próprios, levar a efeitos colaterais indesejados quando a vacina é usada no
campo.
Por estas e outras razões, incluindo a eficácia protetora, a economia de
fabricação e se o agente infeccioso pode ser produzido in vitro, os cientistas
têm voltado cada vez mais a sua atenção para as novas tecnologias de vacinas. Esses
tecnologias de vacinas incluem produto dividido, subunidade, proteína isolada, peptídeo, marcador
abordagens de vacina, vetor vivo e ácido nucleico.

ESTRATÉGIAS DE VACINAS MORTAS

Vacinas naturais de subunidades e produtos divididos

Ao identificar antígenos de subunidades, proteínas ou peptídeos adequados como candidatos a vacina,

vacinas naturais de produtos divididos e subunidades devem ser entregues aos animais-alvo
a fim de provocar a resposta imune protetora desejada. O mais simples e básico
A forma de vacina de subunidade é aquela em que o agente infeccioso foi simplesmente desmontado ou
dividido em suas partes componentes. Algumas vacinas atuais contra a gripe,
conhecidas como vacinas de produto dividido, consistem em vírus inativados por formalina que foram
tratado para lisar o envelope viral e liberar tanto as proteínas do envelope externo quanto as proteínas
nucleares e de matriz internas. Um refinamento adicional foi
usar as glicoproteínas de envelope purificadas hemaglutinina e neuraminidase sozinhas em um
vacina de subunidade, a fim de reduzir o risco de quaisquer efeitos colaterais tóxicos. Infelizmente,
As vacinas de produtos divididos e de subunidades para influenza tendem a ter imunogenicidade reduzida
quando comparadas com produtos de vírus inteiros. As tentativas de melhorar esta situação concentraram-se
na modificação da apresentação do antígeno, entregando o vírus
glicoproteínas dentro de vesículas lipídicas, que podem ser compostas por derivados de vírus
lipídios (virossomas) ou lipídios não virais adicionados (lipossomas).1 Dessa forma, “vazios” artificiais
podem ser criados vírus que podem apresentar imunogenicidade melhorada. Preparações poliméricas de
proteínas isoladas na forma de micelas também são mais imunogênicas que as
monômero de proteína.2 Nos últimos tempos, esses sistemas de apresentação multimérica são frequentemente
coletivamente chamadas de partículas semelhantes a vírus ou VLPs.3 Um desenvolvimento que oferece
tanto a apresentação polimérica quanto a atividade adjuvante incorporada, para aumentar ainda mais a
imunogenicidade, é o complexo imunoestimulante ou ISCOM.4 A primeira aplicação veterinária comercial bem-
sucedida desta tecnologia foi para a gripe equina,5 e
essas vacinas foram estudadas para distribuição nas mucosas.6 Produto dividido e cultura celular
vacinas de subunidades também são atualmente comercializadas para a doença do vírus da leucemia felina (FeLV).
Embora cada um tenha demonstrado ser imunogênico, seu grau geral de eficácia
particularmente diante de um desafio oronasal tem sido inconsistente. No entanto,
mais uma vez apresentando a glicoproteína de superfície gp70/85 do FeLV em um ISCOM,
anticorpos neutralizantes foram obtidos em todos os gatos vacinados, e proteção completa
foi demonstrado contra um desafio oronasal subsequente.7
Além destas novas gerações de vacinas veterinárias de subunidades virais, muitas
as vacinas bacterianas são baseadas em subunidades de toxina ou pilus. Embora os anticorpos antitoxina
irá neutralizar os efeitos nocivos da infecção bacteriana, anticorpos antipilus
bloqueará a colonização, evitando o apego. Bons exemplos são o F4 (K88),
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Avanços recentes em tecnologias de vacinas 233

Antígenos de adesão fimbrial F5 (K99), F6 (987P), F7 (F41) e F18 de enterotoxigênicos

Escherichia coli (ETEC), que nas vacinas atuais são utilizadas para prevenir a diarreia neonatal em
bezerros e suínos. Na verdade, as cepas de E. coli projetadas para superproduzir esses antígenos foram
provavelmente os primeiros exemplos do uso da tecnologia de DNA recombinante.
desenvolver vacinas comerciais melhoradas.8

Vacinas de subunidades e proteínas recombinantes

As vacinas produzidas usando proteínas superexpressas recuperadas de E. coli geneticamente

modificadas fornecem uma ligação entre as vacinas de subunidades naturais e aquelas derivadas usando
tecnologia de DNA recombinante. Embora as vacinas de subunidades produzidas a partir de substâncias naturais
Embora o agente infeccioso ainda desempenhe um papel importante, o custo de produção e purificação
do imunogênio pode ser proibitivo. Na verdade, uma vez identificadas as proteínas imunogênicas, torna-
se objetivo de muitos pesquisadores produzir grandes quantidades dessas proteínas.
proteínas numa forma suficientemente pura para gerar vacinas seguras e eficazes. O surgimento da
tecnologia do DNA recombinante significou que genes estranhos poderiam ser inseridos
em vetores de expressão e depois introduzidos em células que atuam como “fábricas de produção” para
as proteínas estranhas codificadas por esses genes. Em muitos casos, isto proporciona uma fonte
relativamente inesgotável e barata de proteína do agente infeccioso.
agente para estudos de vacinação.

1. Expressão bacteriana: Os primeiros sistemas de expressão recombinantes foram estabelecidos

usando bactérias E coli . Esta foi a escolha natural porque tinha sido usada para
desenvolver os primeiros conceitos e compreensão da biologia molecular. Este sistema de expressão
pode fornecer quantidades relativamente grandes de proteínas definidas e foi
portanto, anunciada como a resposta para muitas vacinas de subunidades. No entanto, por causa
o fato de que as células procarióticas possuem diferentes mecanismos de processamento e
tráfego, as proteínas expressas são frequentemente dobradas incorretamente. Além disso, sequências
de sinal, locais de glicosilação e ligações dissulfeto, que ocorrem em muitos candidatos
proteínas da vacina, pode resultar em toxicidade, insolubilidade ou rápida degradação
dentro da bactéria. No entanto, uma das primeiras vacinas veterinárias recombinantes
a ser produzido com sucesso foi baseado na glicoproteína de superfície gp70 do FeLV
expressa em E coli, conhecida como proteína p45.9
2. Expressão de levedura: O uso generalizado de Saccharomyces cerevisiae, fermento de padeiro
levedura, como microrganismo industrial, tornou-a uma escolha natural para uma alternativa
sistema de expressão de proteínas antigênicas. Tem a vantagem adicional, sobre os procarióticos
sistemas, que a modificação pós-tradução de proteínas é realizada de uma maneira
semelhante ao usado por células eucarióticas superiores e, portanto, proteínas recombinantes
são mais propensos a serem dobrados corretamente. As proteínas expressas em leveduras também
serão glicosiladas, embora esta glicosilação seja distinta daquela realizada pelas células de
mamíferos. Outros desenvolvimentos na expressão de leveduras concentraram-se em
explorando o potencial de outra cepa de levedura (Pichia pastoris), que tem
tem sido usado para expressar vacinas contra hepatite B humana com base no antígeno de superfície
do vírus (HBsAg) em níveis tão altos quanto 400 mg/L. Esses níveis de expressão são 10 vezes
10
níveis superiores aos relatados para esta proteína em S cerevisiae.
3. Expressão de células de insetos: Um sistema de expressão mais recente e altamente novo foi
desenvolvido utilizando células ovarianas de insetos de Spodoptera frugiperda infectadas com um
vetor de baculovírus, vírus da poliedrose nuclear Autographa californica . Esses vírus possuem um
forte promotor que controla a produção de uma proteína poliédrica de 29 kDa, que eventualmente se
acumula para constituir até 50% do total.
proteína celular infectada. Portanto, ao substituir o gene da poliedrina por um gene selecionado
gene estranho, podem ser produzidos níveis elevados de proteína recombinante. Essas proteínas
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234 Francisco

também sofrerá modificação pós-tradução, incluindo glicosilação, fosforilação e clivagem de

peptídeos de sinal. Contudo, mais uma vez sabe-se que o padrão de glicosilação é diferente
daquele observado em proteínas derivadas de células de mamíferos.
Podem ser esperados níveis de expressão tão elevados como 1 g por litro, embora os níveis
reais possam variar consideravelmente de 1 a 600 mg dependendo do antigénio. A expressão
de células de insetos tem sido utilizada com sucesso em vacinas veterinárias contra o circovírus
suíno tipo 211 e a peste suína clássica (PSC).12
4. Expressão de células de mamíferos: Dado que muitos agentes patogénicos veterinários irão
infectar e replicar-se em células de mamíferos cultivadas, eles parecem ser a escolha natural
para um sistema de expressão se se desejar proteínas autenticamente processadas para uma
vacina de subunidades. No entanto, apresentam vários problemas técnicos e os níveis de
expressão podem ser um pouco inferiores aos alcançados utilizando os sistemas de expressão
alternativos descritos acima. No entanto, vários sistemas estão disponíveis para a expressão
de proteínas em células de mamíferos e têm sido utilizados com sucesso para expressar
proteínas candidatas a vacinas para diarreia viral bovina (BVD),13 CSF,14 e VLPs para o vírus
da encefalite japonesa.15 5. Células vegetais
expressão: Um sistema de expressão emergente adicional que merece menção é o uso de células
vegetais. Embora no passado os geneticistas de plantas tenham se concentrado amplamente
no melhoramento de culturas, alguns estudos recentes mostraram que as plantas podem
fornecer um sistema de expressão útil para proteínas de mamíferos. Para expressar genes
estranhos em plantas, é necessário unir um promotor vegetal, um terminador e, geralmente,
uma sequência reguladora no DNA complementar clonado. Marcadores selecionáveis também
podem ser incorporados para facilitar a identificação de recombinantes, e os hospedeiros de
expressão podem ser culturas de células vegetais ou plantas inteiras. A primeira vacina
licenciada para utilizar este sistema de expressão foi contra a infecção pelo vírus da doença de
Newcastle (NDV) em aves,16 e está sendo investigada para muitas outras aplicações de
vacinas, incluindo o vírus da bronquite infecciosa, o vírus da doença infecciosa da bolsa, ETEC, BVD e her

Vacinas Peptídicas

Ao identificar e sequenciar locais imunogénicos importantes em agentes infecciosos, estes podem,

em muitos casos, ser imitados utilizando cadeias curtas de aminoácidos (péptidos). A primeira
indicação de que tais peptídeos tinham potencial vacinal foi demonstrada em 1963, utilizando um
vírus vegetal, o vírus do mosaico do tabaco. Neste estudo, um fragmento hexapeptídeo isolado
quimicamente da proteína do revestimento do vírus foi acoplado à albumina sérica bovina e usado
para induzir anticorpos de coelho que neutralizariam o vírus infeccioso. Dois anos depois, uma
forma sintética do mesmo peptídeo foi utilizada para confirmar esta observação. No entanto,
passaram-se mais de 10 anos até que o próximo exemplo de um peptídeo que desencadeou
anticorpos antivírus aparecesse após o trabalho de Sela e colegas sobre um vírus que infecta
bactérias, o bacteriófago MS2.19 O surgimento de técnicas mais acessíveis para sequenciamento
de proteínas em 1977 , juntamente com a capacidade de sintetizar prontamente peptídeos
desenvolvidos por Merrifield em 1963,20 levaram a um aumento na pesquisa experimental de
vacinas peptídicas na década de 1980.21 Foi obtida a primeira demonstração de que os peptídeos
poderiam provocar imunidade protetora in vivo, além da atividade neutralizante in vitro. em 1982,
usando um vírus animal, o vírus da febre aftosa (FMDV).22 Um estudo detalhado de fragmentos da
proteína viral 1 (VP1) clivados enzimicamente e quimicamente do vírus da febre aftosa sorotipo 0
identificou 2 regiões entre os aminoácidos 138 a 154 e 200 a 213, que foram encontrados na
superfície do vírus, e fragmentos contendo essas regiões foram capazes de induzir anticorpos
neutralizantes contra o vírus homólogo. Estudos utilizando peptídeos sintetizados quimicamente
correspondentes a várias regiões de VP1 levaram à identificação de locais semelhantes na molécula
(141-160 e 200-213), que quando acoplados a um transportador de proteína, hemocianina de lapa
(KLH), e inoculados em
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Avanços recentes em tecnologias de vacinas 235

as cobaias criariam anticorpos neutralizantes que poderiam proteger contra infecções experimentais.
Embora nestes primeiros estudos o péptido tivesse uma actividade imunogénica que era apenas
1% ou menos daquela observada com a partícula de vírus inactivada numa base de peso igual, os
níveis de anticorpo neutralizante produzidos foram várias ordens de grandeza superiores aos
obtidos com o todo. Molécula VP1. Esta observação em modelos animais de laboratório foi
subsequentemente apoiada pela demonstração de imunidade protectora à vacinação com péptidos
tanto em bovinos23 como em suínos.24 Uma vez identificado ou
previsto um péptido candidato, então deve ser entregue ao sistema imunitário de uma forma
adequada para para provocar não apenas uma resposta antipeptídica de alto título, mas também
anticorpos antipeptídicos que reconhecerão e neutralizarão o agente infeccioso. De facto, tem
havido uma opinião generalizada de que, devido ao seu tamanho molecular relativamente pequeno,
os péptidos são imunogénios fracos e, portanto, requerem acoplamento de transportadores para
aumentar a sua imunogenicidade. Por causa disso, existem muitos exemplos de peptídeos
elegantemente definidos, que, tendo sido acoplados de maneira descontrolada a grandes proteínas
transportadoras indefinidas, produziram anticorpos antipeptídicos que falharam totalmente em
reconhecer a proteína nativa.
Peptídeos definidos, que, tendo sido acoplados de maneira descontrolada a grandes proteínas
transportadoras indefinidas, produziram anticorpos antipeptídicos que falharam totalmente em
reconhecer a proteína nativa.25 O conceito de que os peptídeos se comportam como haptenos é,
em muitos casos, equivocado. Experimentos usando o peptídeo 141 a 160 do FMDV demonstraram
que o papel do KLH como transportador na iniciação para uma resposta peptídica é
fundamentalmente diferente de seu papel na iniciação do hapteno porque um peptídeo desacoplado
ou um peptídeo acoplado a um transportador diferente (toxóide tetânico) poderia aumentar uma
resposta em animais estimulados com peptídeo-KLH. Esta observação levou à demonstração de
determinantes de células T auxiliares e células B neste peptídeo relativamente pequeno.26 Na
verdade, está agora claro que peptídeos desacoplados podem ser imunogênicos, desde que
contenham locais apropriados de reconhecimento de anticorpos (epítopos de células B ), bem
como locais capazes de obter ajuda de células T para a produção de anticorpos (epítopos de
células Th). Esses epítopos de células Th devem interagir com moléculas do complexo principal de
histocompatibilidade (MHC) de classe II na superfície de células apresentadoras de antígeno e
células B e subsequentemente se ligar a um receptor de células T na forma de um complexo
trimolecular. As células Th fornecerão sinais na forma de mensageiros químicos (linfocinas) para
células B específicas, que resultam em diferenciação, proliferação e produção de anticorpos. Com
este conhecimento, os peptídeos sintéticos podem ser construídos com locais apropriados para a
produção de anticorpos, além de epítopos adicionais de células T.27,28 Esta abordagem foi ainda
explorada usando um peptídeo contendo epítopos de células B dentro de uma sequência de
consenso baseada nos resíduos 129 a 169 de vírus asiáticos do tipo O ligados a um local promíscuo
de células Th artificiais do vírus do sarampo, que agora foi comercialmente licenciado para uso como vacina peptídi
A necessidade de apresentação de múltiplas cópias de peptídeos foi investigada usando
tecnologia de DNA recombinante, fundindo pequenas sequências peptídicas aos genes que
codificam proteínas maiores, a fim de produzir várias novas construções. O uso de sequências
peptídicas fundidas a proteínas bacterianas como imunógenos tem a vantagem potencial de uma
estrutura completamente uniforme e definida em comparação com a natureza não caracterizada
e variável dos conjugados peptídeo/transportador preparados por reticulação química. Esta
abordagem tem sido utilizada para expressar péptidos de FMDV fundidos com o terminal N da B-
galactosidase em células de E. coli . A B-galactosidase foi escolhida porque foi demonstrado que
anticorpos podem ser produzidos contra proteínas estranhas localizadas no terminal N, e era
conhecido por conter vários locais de células T auxiliares. Experimentos preliminares com proteínas
de fusão B-galactosidase e TrpLE indicaram que múltiplas cópias da sequência peptídica inserida
podem ser benéficas. Posteriormente, a imunogenicidade de 1, 2 ou 4 cópias do peptídeo VP1 do
FMDV 137 a 162 fundido ao terminal N do
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236 Francisco

A B-galactosidase foi estudada tanto em animais de laboratório como em espécies-alvo. A proteína

contendo uma cópia do determinante viral provocou apenas baixos níveis de anticorpo neutralizante,
enquanto os níveis protetores foram provocados por proteínas contendo 2 ou 4 cópias do
determinante.30 Além disso, inoculações únicas do pro de 2 cópias e 4 cópias -teínas contendo
apenas 2 mg ou 0,8 mg de peptídeo, respectivamente, foram suficientes para proteger todos os
animais de laboratório contra infecção de desafio. O equivalente a 40 mg de peptídeo na proteína de
4 cópias também protegeu os porcos contra a infecção de desafio após uma inoculação. Assim, a
imunogenicidade das proteínas de fusão peptídeo de múltiplas cópias/B-galactosidase é semelhante
àquela obtida utilizando um sistema sintético de peptídeo de antígeno múltiplo.31

Um desenvolvimento adicional do conceito de proteína de fusão para apresentação de múltiplos

peptídeos levou à produção de estruturas particuladas com epítopos repetidos em toda a sua
superfície, semelhantes às VLPs. Os primeiros exemplos destes são baseados em HBsAg, antígeno
central da hepatite B (HBcAg) e proteínas Ty de levedura, que se automontam espontaneamente em
partículas de 22, 27 e 60 nm, respectivamente. Foi demonstrado, utilizando partículas de fusão
HBcAg (CFPs), que a imunogenicidade do peptídeo do FMDV pode se aproximar da do vírus
inativado. Na verdade, apenas 0,2 mg do peptídeo VP1 142 a 160 do FMDV correspondente a 10%
da proteína de fusão, apresentado na superfície dos CFPs, deu proteção total às cobaias.32 Em
experimentos subsequentes, os CFPs N-terminais demonstraram ser 100 vezes mais imunogênicos
do que peptídeos sintéticos de dímero dissulfeto livre contendo determinantes de células B e T e 10
vezes mais imunogênicos do que peptídeos ligados a transportadores. Esta atividade parece
depender tanto do fornecimento de ajuda de células T do HBcAg quanto da formação de partículas.
Os CFPs também são imunogênicos com ou sem adjuvantes de vacinas convencionais em uma
ampla gama de espécies.
Além disso, as respostas sistêmicas podem ser desencadeadas por administração oral ou nasal e
de maneira independente das células T. Esta última propriedade dos CFP oferece a possibilidade de
desenvolvimento de terapias baseadas em vacinas para indivíduos imunocomprometidos infectados
com vírus da imunodeficiência.33
Embora apenas um número limitado de vacinas à base de péptidos tenha sido licenciado até à
data, elas oferecem a oportunidade de transferir vacinas de entidades biológicas relativamente
indefinidas para produtos semelhantes a farmacêuticos mais definidos, e têm sido agora utilizadas
para induzir respostas imunitárias contra uma ampla variedade de vacinas. de vírus veterinários,
incluindo vírus da raiva, FeLV, rotavírus bovino, enterovírus bovino, parvovírus canino, vírus sincicial
respiratório, vírus do herpes equino e vírus da leucemia bovina.21

ESTRATÉGIAS DE VACINAS AO VIVO

Marcador Vivo Modificado/Diferenciando Vacinas de Animais Vacinados e Infectados

As vacinas de novas tecnologias também podem ser utilizadas como uma ferramenta valiosa em
programas de controlo e erradicação de doenças, permitindo ao utilizador diferenciar animais
infectados de animais vacinados. Estas vacinas marcadoras ou DIVA (diferenciando animais
infectados de vacinados) podem ser mutantes de deleção recombinantes de patógenos de tipo
selvagem ou vacinas de subunidades/peptídeos. Exigirão um teste de diagnóstico de acompanhamento
para o rastreio e poderão tornar possível que as vacinas sejam utilizadas mais facilmente em situações não endé
Os primeiros exemplos de tais mutantes de deleção de glicoproteínas racionalmente atenuados
foram utilizados para o controle de pseudo-raiva e LCR em porcos e rinotraqueíte infecciosa bovina
em bovinos.34

Vacinas Vetorizadas Vivas

As vacinas vivas atenuadas oferecem diversas vantagens distintas em relação às vacinas

convencionais inativadas e de subunidades. Ao replicar no host, eles
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Avanços recentes em tecnologias de vacinas 237

imitam infecção natural e muitas vezes são fáceis de administrar, proporcionam vida longa
imunidade e estimular uma resposta imune mais “abrangente”, incluindo anticorpos humorais, anticorpos
secretores e células T citotóxicas. Por estas razões,
cientistas investigaram maneiras de fornecer vacinas de subunidades ou peptídeos usando
vetores vivos.

1. Vetores de vírus: A maioria dos estudos de vetores de vírus concentrou-se em DNA relativamente grande
vírus, em particular, poxvírus, herpesvírus e adenovírus. O vetor viral mais comum a ser aplicado
experimentalmente é o ortopoxvírus vaccinia, utilizado com sucesso na campanha de vacinação para
erradicar a varíola.35 O
observação de que um segmento de 9.000 pares de bases do genoma do vírus vaccinia poderia
ser excluído sem afetar sua infectividade ou sua capacidade de replicação levou a
o desenvolvimento de vírus vaccinia recombinantes com genes estranhos inseridos.
Na verdade, foi demonstrado que até 25.000 pares de bases de ADN estranho podem ser inseridos no
vírus, o que oferece o potencial para inserir vários genes num único vector para produzir uma vacina
multicomponente. Apesar destes numerosos aspectos positivos
observações, existem vários problemas potenciais associados ao uso de
vacina. Ao produzir o recombinante inicial, é possível que o tropismo celular e
a patogenicidade pode ser afetada. Devido à sua ampla gama de hospedeiros, também pode haver
haver problemas com a disseminação do vírus e recombinação com outros poxvírus em condições de
campo. No entanto, a maior questão é, sem dúvida, a da segurança.
Apesar do seu excelente historial na campanha de erradicação da varíola, a vacina
foi conhecido, em ocasiões muito raras, por causar reações adversas graves. Apesar
Destas reservas, os recombinantes vaccinia têm sido utilizados sob estrita supervisão no terreno,
numa tentativa de controlar a propagação da raiva na vida selvagem na Europa e
América do Norte. Devido às suas propriedades promissoras, muita atenção tem sido dada
para uma maior atenuação racional do vírus vaccinia. Por exemplo, a inserção no
Foi demonstrado que o gene TK produz uma redução acentuada na patogenicidade e
outras deleções ou inserções foram investigadas para produzir um vetor mais seguro
para fins de vacinação geral. Um desses vetores é conhecido como vacínia modificada
vírus Ankora, e isso foi recentemente usado para desenvolver uma vacina contra o Médio
Infecções por coronavírus da síndrome respiratória oriental em camelos.36 Uma alternativa
A abordagem que está a ser activamente seguida para fins veterinários é a utilização de poxvírus, que
têm uma gama de hospedeiros mais restrita. Grande parte deste trabalho concentrou-se no uso de
avipoxvírus, em particular, varíola aviária e varíola canária, como
vetores para diversas espécies veterinárias. Estes foram explorados com sucesso
para diversas doenças, incluindo doença de Newcastle, gripe aviária, gripe equina, raiva, FeLV e
cinomose canina.37,38 Outros poxvírus que foram
estudados como vetores de vacinas veterinárias incluem o vírus capripox para peste bovina, varíola de
guaxinim para raiva, parapox para pseudoraiva, suipox para gripe suína e vírus mixoma para doença
hemorrágica de coelhos.35,39 Vírus de herpes veterinário (por exemplo, infeccioso
vírus da rinotraqueíte bovina, vírus do herpes felino e vírus da pseudo-raiva) e adenovírus (por
exemplo, adenovírus canino, equino, aviário e chimpanzé) também estão sendo
desenvolvidos como vetores. Um exemplo particularmente notável é o herpesvírus dos perus, que tem
sido aplicado com especial sucesso como vetor nas aves.
indústria para vacinas bivalentes contra a doença de Marek e IBR, IBD ou NDV.40 Em
Além disso, uma vacina comercial de vetor trivalente foi recentemente desenvolvida
contra Marek, NDV e IBD.41
2. Vetores bacterianos: Estudos recentes sobre a atenuação racional de bactérias para
produzir vacinas orais seguras adequadas introduziram a possibilidade de usar o
cepas de vacina geradas como vetores vivos para proteínas estranhas. Maioria dos
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238 Francisco

o trabalho nesta área concentrou-se na produção de cepas invasivas de salmonela

que são suficientemente atenuados para não causarem quaisquer sintomas de doenças patogênicas
quando administrados por via oral ao hospedeiro. Estudos iniciais analisaram a geração de
mutantes auxotróficos através da remoção ou modificação de genes importantes envolvidos na
vias de síntese aromáticas (aro) ou purinas (pur). A atenuação auxotrófica depende
na ausência do nutriente necessário no tecido hospedeiro, por exemplo no
caso dos mutantes aro, os compostos críticos são provavelmente o ácido p-aminobenzóico
e 2,4-dihidroxibenzoato. Tanto aro duplo quanto aro combinado, mutantes puros
foram gerados. Os resultados da vacinação são um tanto mistos; no entanto, a indução de
anticorpos locais e sistêmicos e respostas mediadas por células após a imunização oral destaca o
potencial desta abordagem, e atenuação bem-sucedida
foram produzidas vacinas contra salmonela em aves.42 A salmonela tem
também tem sido usado experimentalmente para vetorar vários antígenos, incluindo E. coli, Shigella
disenteria, Helicobacter pylori e vírus da gastroenterite transmissível.43 A
um maior desenvolvimento neste campo veio de estudos sobre o uso de Bacille
Calmette-Guerin, um bacilo vivo atenuado da tuberculose bovina atualmente usado para
imunizar humanos contra a tuberculose, como vetor. Esta micobactéria é conhecida
ser seguro e imunogênico. Além disso, pode ser administrado em dose oral única; isto
é bastante estável ao calor e sua produção é barata. Como resultado, ele foi projetado para
superexpressão de Ag85b homóloga, bem como de E. coli heteróloga.
e proteínas do enterovírus 71. Outros potenciais vetores bacterianos incluem Vibrio
cólera, Yersinia enterocolitica, Listeria monocytogenes, Lactobacillus casei,
44
e Streptococcus gordonii.
3. Vetores protozoários: Outra tecnologia de vetores altamente inovadora baseia-se na
uso de um parasita protozoário vivo (Eimeria) que foi geneticamente modificado para
entregar antígenos homólogos ou heterólogos às aves. Essas vacinas seriam
usar as cepas atenuadas comerciais atualmente licenciadas que foram desenvolvidas
para vacinar galinhas contra a coccidiose. Genes estranhos seriam expressos
dentro dos vetores atenuados usando integração mediada por enzima. O resultante
cepas transgênicas poderiam então ser entregues a fim de fornecer proteção mais ampla
contra infecções por coccidiose ou dupla proteção contra coccidiose e outra doença infecciosa de
galinhas. A prova de conceito para esta abordagem foi recentemente
foi relatado pela engenharia de uma cepa modificada de Eimeria tenella para fornecer o
Proteína CjA de Campylobacter. Esta vacina recombinante demonstrou fornecer entre 86% e 91%
de proteção imunológica contra o desafio de Campylobacter jejuni quando comparada com E
tenella não vacinada e vacinada de tipo selvagem.
controles (P<0,001).45

Vacinas de ácido nucleico

Uma tecnologia de vacina relativamente nova que fica entre as abordagens viva e morta é a
vacina de ácido nucleico. Estas vacinas são baseadas em DNA clonado em um plasmídeo de entrega
ou a injeção direta de RNA mensageiro. Eles podem ser produzidos de forma econômica e
a síntese proteica endógena imita uma infecção natural. Assim, os antígenos são
apresentados em sua forma nativa e provocarão respostas de células T do MHC de classe I e classe
II, bem como uma resposta de anticorpos. Além disso, não há risco de infecção,
e essas vacinas podem ser usadas para contornar a imunidade passiva.46 As primeiras aplicações
licenciadas desta tecnologia em 2005 foram para o controle de doenças hematopoiéticas infecciosas.
doença do vírus da necrose no salmão do Atlântico canadense47 e para o controle do oeste
Vírus do Nilo em cavalos.48 Vacinas de DNA também foram licenciadas na Europa para salmão
doença do pâncreas.49
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Avanços recentes em tecnologias de vacinas 239

RESUMO

O campo da vacinação veterinária tem registado muitos avanços tecnológicos significativos nos últimos 25
anos, com a introdução de várias vacinas baseadas em novas tecnologias de ADN recombinante. Essas
vacinas são concebidas para oferecer ao agricultor, proprietário e médico alternativas mais seguras e
eficazes às tecnologias de vacinas existentes.
Além disso, podem ter a vantagem adicional de facilidade de administração e estabilidade melhorada. Na
verdade, muitas novas tecnologias de vacinas encontram frequentemente a sua primeira aplicação
comercial na medicina veterinária e, com o interesse actual nas abordagens de Uma Saúde para os seres
humanos, os animais e o ambiente, as vacinas veterinárias têm um papel importante a desempenhar no
desenvolvimento de novas tecnologias. abordagens. Este artigo abordou algumas das muitas novas
estratégias de vacinação inativada/morta e atenuada/viva que estão agora disponíveis para o pesquisador
veterinário. Ainda há muito a ser compreendido sobre a natureza das respostas necessárias para obter
imunidade protetora total contra diversas doenças. Esse conhecimento deverá possibilitar o desenvolvimento
e a construção de novas gerações de vacinas com propriedades mais definidas. É já evidente que a
medicina veterinária desempenhará um papel fundamental em tais desenvolvimentos, e é evidente que
esta área de investigação muito activa oferece um grande potencial para o desenvolvimento de novas
tecnologias de vacinas no futuro.

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