PRINCIPAIS INFECÇÕES HUMANAS ASSOCIADAS AS BACTÉRIAS DO

GÊNERO CLOSTRIDIUM SPP.

Maria Cecília Silva Rangel de Oliveira1, Rosilma de Oliveira Araújo Melo2

1 - Discente do curso de Biomedicina do Centro Universitário Maurício de Nassau; 2 – Orientadora, Dra. em Ciências
Biológicas – Biotecnologia, Docente do Centro Universitário Maurício de Nassau.

RESUMO
As bactérias pertencentes ao gênero Clostridium spp. são amplamente
estudadas, principalmente em decorrência da sua capacidade patogênica
ocasionada por potentes exotoxinas. São bastonetes Gram-positivos, anaeróbios,
esporulados, fermentadores e catalase negativos agrupados por suas semelhanças
morfológicas. As espécies C. botulinum, C. tetani, C. difficile e C. perfrigens são
agentes etiológicos de doenças como o botulismo, tétano, colite pseudomembranosa
e gangrena gasosa, respectivamente. Esta revisão tem como objetivo apresentar às
principais infecções humanas associadas as bactérias do gênero Clostridium spp. e
sua sintomatologia. Consistiu em uma busca por artigos científicos nas bases de
dados das plataformas Scientific Electronic Library Online (SCIELO), Biblioteca
Virtual em Saúde (BVS) e PubMed Central (PMC). Os resultados obtiveram
informações relacionadas à forma de contaminação de cada tipo analisado no
gênero, bem como a sua ação no organismo, a importância bioquímica da sua
toxicidade e como isso afeta diretamente o seu diagnóstico. Foram encontradas
controvérsias em relação aos medicamentos utilizados e a queda do uso de
Metronidazol para o tratamento de algumas infecções e projetos acerca da
confecção de uma nova gama de antimicrobianos com maior eficácia em relação ao
gênero. Pode ser considerado, por fim, a importância da caracterização dos
sintomas causados por cada tipo de Clostridium, com o intuito de fechar um
diagnóstico eficaz e seguro.

Palavras-chave: Clostridium. Infecção. Ação tóxica. Profilaxia.

INTRODUÇÃO

Os patógenos são organismos capazes de causar danos à saúde dos seres

humanos em forma de infecções com frequente presença de sintomas, como a
sepse, febre, gangrena e outros relacionados, podendo também ocasionar o óbito.
As bactérias conhecidas pela sua elevada patogenicidade são as do gênero
Clostridium spp. Esse gênero possui mais de 180 espécies, sendo as principais
cepas associadas a infecções: C. botulinum, C. tetani, C. difficile e C. perfrigens¹.
A espécie C. botulinum é uma bactéria Gram-positiva, anaeróbia e apresenta
esporos subterminais, causadora do botulismo, resulta da ingestão de toxina pré-
formada nos alimentos contaminados (intoxicação) ou na multiplicação intestinal. A
toxina botulínica é também utilizada no tratamento de diversas outras doenças e
para fins estéticos².
Por sua vez, a espécie C. difficile é uma bactéria anaeróbica, esporulada,
causadora da colite pseudomembranosa, apresentando como fator predisponente o
uso prolongado de antibióticos no ambiente hospitalar. Da mesma forma a
contaminação de feridas com esporos de C. tetani produz a tetanoespasmina, que
causa espasmos musculares graves, podendo levar o paciente a óbito por
insuficiência respiratória3,4.
De todas as citadas, a espécie C. perfrigens se destaca pelos seus sintomas,
tais como: gangrena gasosa, fasceíte necrosante e infecção alimentar. Faz parte do
grupo das espécies mais resistentes ao estresse ambiental. Também é conhecida
pela produção de diversas toxinas, entre elas a alfa-toxina, a enterotoxina e a
enterite necrótica B5.
As doenças acarretadas pelas bactérias do gênero Clostridium spp. possuem
alta taxa de mortalidade por ter a capacidade de atingir o sistema nervoso central e
periférico, causando imobilidade de membros e falência de órgãos, parada
cardiorrespiratória e sepse. Um estudo demonstrou que a espécie Clostridium
difficile é a que possui maior capacidade de apresentar um alto índice de resistência
a antibióticos8.
O governo federal brasileiro publicou um estudo sobre o tétano acidental,
onde entre os anos de 2012 a 2021, houve o registro de 2.381 casos no país, tendo
como maior porcentagem (cerca de 31,4%), ou 747 casos, concentrados no
Nordeste. Levando em consideração que o gênero também causa outras doenças,
se têm a importância de sua análise10. Diante do exposto, o presente estudo teve
como objetivo apresentar às principais infecções humanas associadas as bactérias
do gênero Clostridium spp.

MÉTODOS

Foi realizado um estudo qualitativo do tipo revisão de literatura com o intuito

de analisar informações já publicadas, a fim de trazer embasamento teórico para a
pesquisa. Portanto, consistiu em uma busca eletrônica por artigos científicos nas
bases de dados das plataformas Scientific Electronic Library Online (SCIELO),
Biblioteca Virtual em Saúde (BVS) e PubMed Central (PMC). Trinta e seis artigos
foram selecionados para a elaboração deste trabalho.
A partir da consulta aos Descritores da Ciência da Saúde (Decs), foram
selecionadas palavras-chaves que auxiliaram na busca bibliográfica: “Clostridium”,
“Infecção por Clostridium”, “diagnostico”; “profilaxia”. A pesquisa considerou artigos
publicados entre os anos de 1999 a 2022, com a prevalência de estudos com menos
de 5 anos de publicação, no intuito de obter informações sobre o tema do estudo,
bem como, aqueles que possuírem idiomas em português e inglês. Como critério de
exclusão, a pesquisa desconsidera conteúdos de livros, teses e monografias, assim
como artigos focados em outros tipos de bactérias, pois não são estes os objetivos
da presente análise.

RESULTADOS E DISCUSSÃO

Características morfológicas do gênero Clostridium spp.

O gênero Clostridium spp. é formado por bactérias gram-positivas, anaeróbias
e formadoras de esporos, capazes de causar patologias como tétano, gangrena
gasosa e botulismo. É de importância mundial no que diz respeito à capacidade
mutagênica e de resistência a antibióticos, uma vez que a Clostridium Difficile vem
sido relacionada a infecções hospitalares graves3,7,9.
As espécies de Clostridium são capazes de formar endosporos e seu formato
compreende os bastonetes. Seus esporos podem variar, projetando diversos
apêndices e protuberâncias em fita, tendo como característica principal a formação
de estruturas clostridiais, onde estes concentram-se em partes da bactéria,
dependendo da fase de esporulação em que se encontra. Ocorre uma deformação
da parede celular e os endosporos podem se concentrar na posição central,
subterminal ou terminal do citoplasma11.
Algumas espécies tem a capacidade de continuar o seu crescimento em
temperaturas maiores de 40 graus e menores que 30, sendo importantes termófilos
utilizados na obtenção de enzimas fermentativas. Tendem também a crescer em PH
variado entre 4-7,5, uma vez que o meio tende a se modificar à medida que a
bactéria consome metabólitos12,13.
Na análise realizada, compreende-se a vantagem da bactéria ao atingir o
organismo com a ação das exotoxinas, como no caso do tétano (tetanospasmina) e
de sua incapacidade em reduzir sulfatos. A produção de ácidos torna-se uma parte
importante de sua fisiologia, assim como a degradação de aminoácidos, purinas,
polímeros, entre outros. Essas bactérias também são anaeróbias obrigatórias,
dependendo assim, da sua tolerância ao O² para causar patologias4,7,10,11.

Principais espécies patogênicas humanas do gênero Clostridium spp.

Diversos estudos constataram o aumento de casos relacionados a doenças
como o botulismo e o tétano, demonstrando preocupação com a capacidade
mutagênica das bactérias do gênero Clostridium spp., uma vez que houve
diminuição dos índices de vacinação, trazendo mais pesquisas focadas nos perigos
que estas bactérias representam e, em especial, a sua relação de multirresistência
aos antimicrobianos3,7,9.
Pesquisas demonstram que a Clostridium Botulinum é a produtora da mais
potente toxina conhecida, a toxina botulínica (ou Botulinum Toxin, BT), uma vez que
de 30 a 100 ng desta substância pode ser potencialmente fatal. Essa toxina não é
secretada, e sim, liberada no organismo com a autólise bacteriana. É também a
responsável pela inibição da acetilcolina nos neurônios, causando a paralisia
muscular flácida2,8.
Essa correlação é primordial para a compreensão da forma de ação do
botulismo, doença causada pela bactéria. Alguns sintomas relacionados a redução
dos níveis de acetilcolina são: Perda dos reflexos tendinosos profundos, paralisia
respiratória, constipação, problemas da visão, da fala e reflexivos2,8.
 As exotoxinas produzidas por este gênero são resumidas em enzimas
proteolíticas, tendo diferentes formas de ação no organismo ao atravessar órgãos e
a circulação sanguínea. No caso da Clostridium Botulinum, suas exotoxinas são
acopladas a proteínas auxiliares resistentes ao PH ácido, protegendo-as da
protease. A absorção destas toxinas ocorre por transporte ativo e as leva até o
sangue por meio de células epiteliais especializadas13.
De acordo com os dados revisados, pode-se considerar que a Clostridium
Botulinum tem complexos meios bioquímicos de ação no organismo, podendo estar
presente na forma de botulismo alimentar, infantil, por feridas, de maneira
iatrogênica ou na flora intestinal do ser humano e de algumas espécies de animais2,6.
No botulismo alimentar a bactéria é ingerida em alimentos e têm neles a sua
toxina pré-formada, assim como o infantil, uma vez que há o consumo de mel ou
outros derivados alimentares por crianças menores de 1 ano. No Brasil, essa
bactéria foi responsável por 45 casos de botulismo alimentar no ano de 2018, sendo
muito maior do que os casos notificados no ano de 2006, onde foram obtidas 7
confirmações2,6,8.
Os estudos realizados também trouxeram dados em outras localidades do
mundo: Um deles relacionou as cepas da Clostridium Botulinum com os casos de
botulismo que ocorreram no Reino Unido e o outro complementou dados japoneses
que falam sobre um incidente que ocorreu em uma escola da cidade de Osaka,
levantando uma comparação sobre a influência das questões sanitárias e
alimentares nos três países, incluindo o Brasil8,14,15.
Estes demonstraram que entre os anos de 1978 a 2001 foram obtidos apenas
5 casos da doença no Reino Unido, considerando também que cepas de C.
Botulinum tipo B foram encontradas em uma lata de fórmula infantil próxima à
validade de 3 anos, mostrando a importância da rastreabilidade da doença, já que a
mesma lata foi vendida de forma industrial, aumentando o risco da contaminação
alimentar em grande escala14.
No artigo que constatou os casos da doença em uma pequena escola do
Japão, também se obtivera novas informações sobre modificações genéticas do tipo
B da Clostridium Botulinum, uma vez que testes por eletroforese mostraram
modificações nas sequências do gene BoNT/B, tanto no ano de 2005 (Nomeando a
cepa como Osaka05) como no ano de 2006 (Osaka06), que foi considerada um
segundo subtipo B, o mesmo isolado em um caso em 1995. O subtipo B apenas foi
encontrado no Japão, demonstrando mutações do gênero para a sobrevivência ao
sistema imunológico dos seres humanos naquela época15.
Até o presente momento existem 7 tipos de C. Botulinum, mas as principais
causadoras de patologias humanas são a tipo A, B e E. Os sorotipos podem ser
divididos por meio do teste ELISA e o tipo A é o mais conhecido por sua letalidade,
uma vez que 1ng/kg de sua toxina causa o comprometimento de órgãos vitais,
também sendo utilizada durante a história em armas focadas no bioterrorismo15.
Sua toxina é formulada como uma cadeia polipeptídica que sofre proteólise
para transformar-se em uma proteína madura, sendo responsável pela ligação
neuroespecífica, pela endocitose mediada por receptores e pela translocação para o
citosol da célula, sendo distribuída pelo sangue até atingir o cérebro15.
Um dos autores traz de forma clara como ocorre a paralisia flácida causada
pelas toxinas presentes no botulismo: A acetilcolina é inibida nos terminais
colinérgicos periféricos e origina uma paralisia flácida. As proteínas agem ligando-se
aos receptores dos terminais e permitindo que ocorra a fusão das vesículas
sinápticas, desencadeando o processo de contratura muscular13.
Ainda de acordo com este, tem-se sinais claros deste processo mediante
alguns sintomas como a cefaleia e a fraqueza muscular, a disfunção ocular, que é
ocasionada por problemas nos nervos oculares, redução dos movimentos da língua,
respiratórios e capacidade de erguer ou movimentar o pescoço e membros. A
contratura é simétrica e os reflexos profundos são diminuídos ou somem13.
Estas contraturas são reversíveis, uma vez que não ocorre dano a nível de
célula neuronal. A duração e a gravidade destas está relacionada com o tipo de
toxina, onde geralmente há a dificuldade de retomada do paciente em casos graves
e a necessidade de ventilação mecânica, revelando a importância do diagnóstico no
início da infecção13.
No caso das infecções mais leves e com o tratamento feito de forma correta,
os danos acarretados pela bactéria podem ser revertidos com o uso de terapias
como a fisioterapia, fonoaudiologia e com reposição de vitaminas, sendo raros os
casos onde há a recuperação do paciente, pois a forma mais utilizada para
diagnóstico clínico são as contraturas provenientes da forma grave13.
Dentre os estudos analisados tem-se à atenção voltada para a importância da
identificação e reconhecimento de outro tipo de Clostridium, a Clostridium Tetani,
causadora do tétano. Apesar de poder ser reduzida de forma escalonar com a
presença da vacinação, houve o retorno do aumento de casos no Brasil, uma vez
que a despreocupação formulou o habitat ideal para a remissão da doença,
especialmente em casos acidentais de perfuração4.
Os esporos do C.Tetani estão presentes em diversos habitats, como solo, ar e
água, apesar da maior quantidade de casos estar localizado em regiões com baixo
índice de desenvolvimento, como ocorre por exemplo, na falta de estrutura e do uso
de instrumentos médicos impróprios para cirurgias ou cortes de cordão umbilical de
recém-nascidos. Em 2015, de acordo com a OMS, houveram aproximadamente
35.000 vítimas do tétano neonatal4.
Um dos estudos revela detalhes precisos: Morfologicamente o C. Tetani é
diferente das outras bactérias do gênero, uma vez que possui mobilidade por
flagelos que são perdidos após o desenvolvimento dos endosporos. Esses estão
presentes no terminal do seu corpo, dando-lhe o aspecto de raquete. Além disso,
são resistentes a altas temperaturas, podendo inclusive sobreviver ao processo de
autoclavagem se não for realizado de maneira correta (Temp.<120C/ 15min)13.
A partir da germinação dos esporos, são produzidas duas toxinas: A
tetanolisina e a TeNT. A tetanolisina é associada a diversas formas de lise celular,
tendo como destaque as hemácias. Além disso, é captada pelos sinais nervosos do
sistema nervoso periférico e causa a inibição da liberação da GABA e da glicina,
essenciais para o controle dos neurônios motores, causando a contração total e
involuntária da musculatura esquelética4,13.
O GABA é um dos principais transmissores e é formulado a partir do
glutamato por meio da ação da glutamato descarboxilase. Sua regulação está
intimamente ligada à capacidade de estimulação neuronal, enquanto a glicina, que é
um aminoácido, pode atuar como neurotransmissor inibitório. O GABA, com a ajuda
de outras substâncias, também é responsável por abrir os canais de cloro e a
hiperpolarização neuronal, o que também ocorre no caso da glicina, entretanto, a
hiperpolarização ocorre por meio de infusões de íons de cloreto13.
Todos os artigos analisados que falam sobre o tétano concordam sobre as
formas de transmissão da Clostridium Tetani, uma vez que as feridas são a principal
forma de entrada da bactéria no organismo e tecidos necrosados ou previamente
infectados proporcionam o local de maior índice de contaminação, uma vez que há a
ausência da oxigenação. A germinação dos esporos não ocorre imediatamente,
podendo existir por diversos dias aguardando a ambientação ideal para seu
crescimento4,9,13,15.
Em um aprofundamento geral, pode-se compreender que os sintomas do
tétano diferem dos sintomas do botulismo devido a forma como cada doença atinge
sistematicamente o sistema nervoso. No tétano generalizado, há o bloqueio da
mandíbula e a contração dos músculos da face, gerando o que é chamado de “Riso
sardônico”. A rigidez também pode acometer as costas, forçando uma posição
chamada de opistótono, onde o corpo fica ligeiramente virado para trás. À medida
que progride, a doença acomete o sistema respiratório e o SNA, causando a morte 13.
Estudos realizados em diversos países concluíram que a Clostridium Difficile
é uma bactéria patológica encontrada em diversas localidades. Há relatos de óbitos
causados por doenças que ela provoca, como a colite pseudomembranosa, na
América do Norte, na Europa e em alguns países asiáticos3,7.
A preocupação geral está relacionada a esse tipo específico de Clostridium
ser um excelente produtor de enterotoxinas e citotoxinas e por causar doenças
relacionadas ao uso de antibióticos por sua multirresistência. Muitas vezes, a
Clostridium Difficile está presente no sistema gastrointestinal dos seres humanos e o
uso contínuo de antibióticos pode acarretar na redução da biomassa que regula a
microbiota intestinal, provocando o seu aumento e o acometimento de Infecções
alimentares e/ou Colite pseudomembranosa3,7.
De acordo com os estudos apresentados, pode-se entender que a Colite
Pseudomembranosa é uma doença caracterizada por infecção da Clostridium
Difficile, tendo como fator principal o uso de antimicrobianos. As toxinas geradas por
essa bactéria causam a inflamação da parede do intestino, formando pústulas
esbranquiçadas chamadas pseudomembranas, podendo causar sepse, necrose e
morte3,7,17.
Compreende-se por meio da análise de outro estudo que a Clostridium
Difficile tem um difícil diagnóstico devido a sua sintomatologia inicial ser inespecífica,
podendo até ser assintomática em alguns casos. Seus sintomas mais típicos são:
Diarreia aquosa, anorexia, náuseas, leucocitose com predominante neutrofilia,
hipoalbuminemia, sensibilidade abdominal, lesão renal aguda, febre, danos
intestinais e taxa de mortalidade entre 20 a 30%, aumentando no caso de pacientes
idosos ou imunossuprimidos7.
 Um outro artigo complementar explica como ocorre a ação das toxinas da
Clostridium Difficile quando em contato com o sistema digestório: O patógeno
produz três toxinas formadas de proteínas, a TcdA, a TcdB e a toxina transferase
CDT. As duas primeiras são responsáveis pela sua virulência, sendo internalizadas
pelas células ao entrar em contato com proteínas de membrana. Por meio de sinais
as proteínas conseguem inativar o sistema Rho, perturbando as funções da barreira
epitelial, induzindo a apoptose a inflamação18.
Essa inflamação cria pústulas repletas de líquido com a presença de
macrófagos, linfócitos, mastócitos e a consequente liberação de seus mediadores,
como fatores de agregação plaquetária e leucotrienos. Em pacientes
imunossuprimidos e idosos, geralmente há a retirada cirúrgica do local afetado,
podendo ter casos de gangrena ou patologias secundárias18.
As taxas relacionadas a esse tipo de Clostridium vêm sofrendo aumento
desde o ano de 2000, em especial em idosos internados ou em residentes de longa
permanência hospitalar. O transporte dessa bactéria ocorre naturalmente em 5 a
15% dos adultos, mas pode chegar a 84,4% em recém-nascidos e lactentes. A
transmissão resulta da contaminação ambiental e transporte manual por meio da
equipe médica ou outros pacientes infectados. A exposição a antibióticos e
condições como cirurgias gastrointestinais e medicamentos redutores de ácido
gástrico estão intimamente ligados ao aumento dos casos19.
Um dos artigos, em contrapartida, considera um outro lado da Clostridium
Difficile: O transplante de microbiota fecal. Embora os pacientes consigam reagir
bem a boa parte dos tratamentos existentes, cerca de 30% desenvolvem infecções
recorrentes. Para estes casos pode ser realizado o transplante de microbiota fecal,
pois sua taxa de eficácia beira os 90% e nele há a presenta de microbiota produtora
de butiratos protetores da mucosa e inibidores do C.Difficile, assim como outras
bactérias saudáveis para o organismo que acabam sendo eliminadas pelo sintoma
da diarreia. Pode ser administrado por via endoscópica, colonoscópica, enemas,
entre outros, dependendo do estado do paciente e da escolha do médico20.
De acordo com diversos autores, a Clostridium Perfrigens é um patógeno de
alta toxicidade causadora da gangrena gasosa ou mionecrose clostridial. Essa
bactéria não contém flagelos e sua motilidade é um dos fatores de diferenciação,
uma vez que há um deslizamento mediado pelo pili, que também é responsável por
sua aderência em biofilmes. Sua toxicidade depende da cepa encontrada,
entretanto, a cepa do tipo A não possui plasmídeos codificadores de proteínas e é
responsável por sua histotoxicidade21-23.
A mionecrose clostridial, mais conhecida como gangrena gasosa, é a infecção
dos tecidos moles profundos causada pela C. Perfrigens. Geralmente ocorre em
ferimentos não tratados, podendo ter sua inoculação em algumas horas ou em dias,
desta forma, dificultando a recuperação do tecido e até causando a completa perda
de suas funções. A gangrena gasosa recebe esse nome devido à produção de
gases da bactéria, tendo como sinal de sua presença a separação das fibras
musculares na lâmina histológica22.
Neste mesmo estudo, há dados relacionados à presença da Clostridium
Perfrigens em mionecroses nos EUA, anualmente: Cerca de 1.000 casos. Leva em
conta, também, a necessidade de atendimento hospitalar e acesso básico à higiene
e saúde, uma vez que em países menos desenvolvidos há a mesma problemática
de outros estudos sobre outros tipos de Clostridium; os números tendem a ser
maiores em países subdesenvolvidos22.
Levando em consideração outros artigos revisados, há um consenso sobre a
forma de ação da Clostridum Perfrigens no organismo, com ênfase na maior
capacidade de histotoxicidade da toxina CPA em humanos. A CPA é causadora da
gangrena gasosa e geralmente a relação com o organismo humano é mediado por
receptores de membrana, que resulta na ativação das vias intracelulares, como a
morte celular23,24.
Fora relatado também que a C. Perfrigens produz diversas toxinas e enzimas,
como a colagenase, a protease alfa-clostripaína e sialidades. Todas estavam
envolvidas na morte das células epiteliais mediadas pela bactéria, sendo a alfa-
toxina responsável por adentrar a célula e causar a citólise, causando assim, uma
reação em cadeia mediada por receptores de membrana e na formação da ceramida
como resultado de ações químicas. Essas concentrações podem acarretar na
liberação da lactato desidrogenase, produto característico da necrose23,24.
Um estudo mais específico relatou com detalhes a forma como o organismo
age de acordo com o processo histotóxico da bactéria em um caso letal,
descrevendo que em lesões com presença de C. Perfrigens, há a ausência de
células derivadas de inflamação, mas há a presença de neutrofilia em aderência ao
endotélio, pois o corpo reproduz as moléculas de adesão em completo descontrole25.
 Já em um caso mais leve, observou-se um infiltrado inflamatório muscular
com a presença de neutrófilos agregados e outros dispersos. Esse estudo conclui e
identifica que a recuperação das células esqueléticas está intimamente ligada à
capacidade da C. Perfrigens não apenas de causar lesões nas células, mas também
da sua capacidade de desregular o sistema inflamatório com a ajuda de toxinas25.
Levando em consideração a sistemática dos artigos estudados, pode-se levar
em consideração a alta patogenicidade deste tipo de Clostridium. Não apenas há a
entrada da bactéria por uma lesão, mas também há a sua capacidade de
aproveitamento e sobrevivência em tecidos onde a presença de O 2 é deficiente ou
completamente inexistente, derivando destes fatores o seu alto poder histotóxico.
Fisiologicamente, a gangrena gasosa tem como características a coloração escura
da pele afetada com a presença de bolhas repletas de gás com cheiro pútrefo, onde
em quase todos os casos há a necessidade de amputação do membro afetado ou
morte do paciente21-25.

Diagnóstico das doenças relacionadas ao gênero Clostridium

Autores indicam diversas formas de diagnóstico para cada doença associada
neste estudo às bactérias do gênero Clostridium. Um meio de crescimento seletivo
foi desenvolvido para detectar a Clostridium Botulinum tipo A, B e F. O meio
consistia em ágar peptona-glicose-extrato de levedura suplementado, além de
inibidores de anticorpos botulínicos para a diferenciação na imunodifusão. No caso
do botulismo, no geral, o diagnóstico é feito por meio de achados neuromotores e
histórico do paciente, tendo como um dos achados principais os resultados de
eletrodiagnósticos26-28.
Por outro lado, um dos autores leva em consideração que o diagnóstico
laboratorial do botulismo pode ser resultante da detecção de BoNts em espécimes
ou em amostras de alimentos ou fezes por meio de camundongos, observando se a
infecção dará ao animal algum sintoma relacionado, teste esse chamado de
bioensaio de letalidade em camundongos in vivo. No ano de 2021 houve a presença
do diagnóstico de algumas aves contaminadas com a bactéria por meio do teste
ELISA e de rt-PCR, abrindo novas possibilidades para o estudo sobre a Clostridium
Botulinum28,30.
Outros pesquisadores da área da zootecnia vem desenvolvendo novos
métodos para diagnosticar as bactérias do gênero Clostridium spp. Como forma de
evitar a contaminação humana por meio alimentar, utilizando também o método de
ELISA para detectar a presenta da C. Difficile em porcos, trazendo uma comparação
em relação à forma que a C. Botulinum foi encontrada nas aves, formulando um
meio de especificação de resultados baseado em um banco de dados30,36.
Outro autor discute sobre como a C.Tetani foi isolada por meio da inoculação
de forma direta em caldo tioglicolato e incubadas a 37 graus por 48h. Os isolados
foram purificados em meio Cooked Meat Medium, ou meio carne cozida, que é ideal
para anaeróbios. Foram identificados posteriormente pela coloração de gram, além
de testes bioquímicos como a redução do nitrato, produção de sulfeto de hidrogênio
e produção de lipase. Esse teste foi feito após o diagnóstico clínico do tétano por
meio de sintomatologia, abrindo possibilidade para um maior entendimento do
diagnóstico microbiológico29.
Analisando os resultados obtidos até o momento sobre o diagnóstico dos
tipos de Clostridium, pode-se compreender que o mais avançado até o momento é o
diagnóstico da Clostridium Difficile por meio de PCR direto e robotipagem. É um
método que se baseia na heterogeneidade da região intergênica ribossomal,
utilizando meios de cultura realizadas a partir de fezes dos infectados, abrindo
assim, uma discussão sobre as formas de utilizar o isolamento dos tipos de
Clostridium em conjunto com os testes de ELISA e PCR para fechar diagnósticos
laboratoriais31.
Em um dos presentes estudos há uma comparação sobre os métodos de
diagnóstico da Clostridium Perfrigens, argumentando que o método de inoculação
das bactérias provenientes de coletas de ferimentos em culturas é mais proveitoso
do que testes como o de amplificação de ácido nucleico (NAAT) e como
imunoensaios, pois este se mostrou mais eficaz. Entretanto, o autor deixa claro que
sempre há a possibilidade e necessidade de se utilizar diversos tipos de testes para
a confirmação de doenças como a Gangrena gasosa, uma vez que achados
histológicos também podem ser utilizados, garantindo assim, mais segurança para o
diagnóstico32.
Um dos autores elaborou uma comparação acerca de um novo maquinário da
VITEK ® MS e de outros métodos baseados em DNA, como o PCR inespecífico de
genes. Foi observado que para a escolha do primer utilizado fez-se necessária uma
suposição sobre qual seria a espécie esperada da Clostridium baseada em
sintomatologias anteriores, como também fora argumentado nos outros estudos
citados. Desta forma, ele conclui que a técnica MALDI-TOF MS parece ser uma
complementação para a problematização da identificação das espécies de
bacterianas6.
Esta técnica é resumida na dessorção/ionização a laser assistida por matriz
seguida de espectrometria de massa por tempo de voo (MALDI-TOF MS). Utilizando
um meio de cultura específico como ocorre no diagnóstico da C.Tetani, por exemplo,
as colônias bacterianas são colocadas sobrepostas em uma placa de metal na
máquina, que induzirá o espectrômetro de massa bombardeado com laser. As
moléculas liberadas atingem um detector, que é responsável por mandar para o
instrumento dados sobre a bactéria, selecionando-a em um banco de dados. Tem-
se, dessa forma, a importância da junção de métodos alternativos de diagnóstico
para uma maior segurança laboratorial6,29.

Tratamento farmacológico associado a doenças causadas por bactérias do

gênero Clostridium spp.
Em relação ao desenvolvimento de novos medicamentos para o tratamento
de infecções pelo gênero clostridium, tem-se alguns estudos em relação à interação
do metronidazol e da vancomicina, medicamentos até então utilizados em larga
escala, e o desenvolvimento de antibióticos específicos para grupos separados.
Alguns destes exemplos são o uso do Metronidazol, da Vancomicina, da
Fidaxomicina, da Cacaoidina e da Branimicina B e C33,34,35.
Um dos estudos analisados trouxe uma comparação entre o uso da
Fidaxomicina (que é um antibiótico macrocíclico de espectro estreito) e do
Metronidazol em infecções relacionadas à Clostridium Difficile, demonstrando que a
fidaxomicina e a vancomicina tiveram melhores resultados no que diz respeito ao
tratamento de casos leves a moderados, enquanto o metronidazol não se mostrou
eficaz. A Fidaxomicina também pode ser utilizada para evitar a recorrência da Colite
pseudomembranosa33.
Em comparação, um dos artigos traz um novo tipo de tratamento: A
cacaoidina, um antibiótico glicolisado isolado em cepas de Streptomyces cacaoi. A
cacaoidina exibiu excelente atividade inibidora de bactérias gram-positivas, incluindo
alguns tipos de Clostridium, tendo sua capacidade antimicrobiana relacionada à
presença de anéis de metillantionina e lantionina em sua composição. Ainda não
muito difundida, também é uma opção que se mostrou melhor do que o tratamento
com uso de Metronidazol, utilizado ainda em praticamente todas as infecções pelo
gênero34.
Diversos pesquisadores fizeram parte de um estudo responsável pela
exploração da capacidade antimicrobiana das branimicinas B e C. Esses antibióticos
foram produzidos pela fermentação da bactéria Pseudonocardia Carboxidivorans,
isolada em fossas abissais. Esses compostos exibiram atividade antimicrobiana
contra cerca de 21 bactérias gram-positivas, incluindo a Clostridium Perfrigens.
Ainda em testes, esses antimicrobianos foram estudados utilizando os métodos de
diagnóstico citados nesta revisão, com a elaboração de meios de cultura
provenientes de pacientes infectados, principalmente pela coleta de fezes35.

Medidas preventivas relacionadas ao gênero Clostridium spp.

Diversos autores chegam em consenso quanto à necessidade da prevenção
das doenças causadas pelo gênero Clostridium spp., tanto pela dificuldade
encontrada no tratamento das doenças relacionadas quanto pela capacidade de
multirresistência que essas bactérias possuem. No caso da Clostridium Botulinum, é
importante salientar a importância das medidas sanitárias relacionadas à
alimentação e a produção em larga escala de produtos para consumo, uma vez que
o botulismo alimentar é a patologia mais difundida globalmente2,8,13,14,15.
Outros pesquisadores também citam a importância da vacinação como meio
de prevenção nos casos de tétano, causado pela Clostridium Tetani. A vacinação é
a forma mais difundida e a mais importante para a diminuição em larga escala dos
casos, uma vez que o tétano é potencialmente letal, com difícil tratamento e difícil
diagnóstico. Além da vacinação, há a preocupação com a biossegurança hospitalar,
demonstrando a necessidade da higiene e do acesso a materiais devidamente
estéreis nos centros cirúrgicos ou nos instrumentos utilizados em neonatais4,11,13.
Biossegurança é a palavra-chave quando se cita a Clostridium Perfrigens ou a
C. Difficile, uma vez que ambas estão relacionadas a infecções hospitalares por via
de perfurocortantes, cirurgias, presença da bactéria em alimentos e até mesmo nos
leitos de enfermagem. No caso da C. Difficile, há também a necessidade de maiores
políticas públicas para que a população compreenda o perigo relacionado ao uso
indiscriminado de antibióticos e também para os médicos, uma vez que este tipo de
bactéria pode residir no intestino das pessoas de forma comum e causar uma
patologia de difícil tratamento3,7,19-27.
CONSIDERAÇÕES FINAIS
Levando em consideração que o gênero Clostridium spp. continua crescendo
com o descobrimento de novas bactérias relacionadas as suas patologias, assim
como sua multirresistência e a sua capacidade de causar sintomas graves em um
curto espaço de tempo, tem-se a necessidade de expor o perigo de sua
patogenicidade. Compreende-se que as novas tecnologias devem avançar para que
haja o melhoramento do tratamento relacionado a essas bactérias e de seus
respectivos diagnósticos. O tratamento com Metronidazol deve abrir espaço para a
especificidade dos casos, uma vez que já existe a presença de outros
antimicrobianos mais eficazes.

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