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Instrumentao e ajustes do equipamento de Ressonncia Magntica Nuclear

Marilena Meira

RMN
Espectroscopia de absoro. Campo magntico. Radiao eletromagntica: Radiofreqncia. Caractersticas estruturais da amostra. Determinados ncleos. Por que determinados ncleos?

B0

Absoro de RF por um ncleo


Nem todos os ncleos absorvem RF. 12C, 16O, 32S, no do espectros de RMN. 13C, 1H, 15N, 19F absorvem RF. O que faz um ncleo absorver radiao de RF?

Condio para absoro de RF por um ncleo


Um ncleo absorve radiao de RF se tem nmero de spin diferente de 0. O que nmero de spin?

Nmero de spin: nmero quntico do momento angular


P = I (I + 1). h 2
p

P = momento angular Dipolo magntico ao longo do eixo. = . P = momento magntico

O nmero de spin pode assumir os valores: 0, 1/2, 1, 3/2, 2, 5/2, 3, 7/2, 4, 9/2, 5, 11/2, 6.

Nmero de spin
Ncleos que possuem spin = 0 no giram em torno do eixo. No do espectro RMN. Ncleos com spin = : distribuio de carga esfrica e uniforme. Ncleos com spin igual ou maior que 1: distribuio de carga no esfrica: Ncleos quadrupolares

Nveis de energia em um campo magntico


Nmero de spin: nmero de orientaes em um campo magntico (2I + 1).

Para spin = :

Campo magntico ligado:


Quando o campo magntico est desligado ( B0 = 0 )

+1/2 -1/2 B0

Momentos magnticos orientados aleatoriamente.

Momentos magnticos orientados sob a ao de Bo.

Diferena de populao entre os nveis para um ncleo de spin =


Pequeno excesso de populao no nvel com menor energia (mais estvel)

Equao fundamental da RMN


E = .h.B0 2 E = .h.B0 2 E diretamente proporcional a B0

Movimento de precesso
L
B0

Freqncia de Precesso ou freqncia de Larmor

Momento magntico total

Magnetizao resultante para um conjunto de ncleos. M0 na direo Z (direo do campo B0) Como um ncleo excitado ao nvel de maior energia?

Aplicao de RF

Aplicao de RF: B1 perpendicular ao campo B0. Ressonncia: 1= L O pulso de RF exerce um torque sobre M na direo do plano xy.

Induo de Transio
Transio entre os nveis de energia: Aplicao de RF adequada Ou seja se 1 =L Ressonncia RF

Condio de Ressonncia
Para um ncleo de spin isolado: 1= L = . B0 2 E = h. E = .h.B0 2 h. = .h.B0 2 = .B0 2

Radiofreqncia
Introduo da RF: Ondas contnuas Pulsos de radiofreqncia. 2 tipos de espectrmetros de RMN

Espectrmetros de RMN
Espectrmetro de onda contnua CW Espectrmetro pulsado.

Espectrmetro de onda contnua


Ims permanentes ou eletroms. Lenta varredura da faixa de freqncia. Registro da energia absorvida em funo da freqncia. Baixa sensibilidade, demora da anlise. RMN 1H Amostras concentradas.

Espectrmetro pulsado
Supercondutor. Pulso curto e potente de RF. Excitao simultnea de todos os ncleos. Retorno ao estado de equilbrio: liberam RF. Um detector coleta a energia emitida e produz o FID (Decaimento livre de induo) O que o FID?

FID (Free Induction Decay)


Soma da radiao de todos os ncleos durante o tempo de emisso.
Escala de intensidade x tempo. Transformada de Fourier este sinal convertido para intensidade x freqncia.

FID (Free Induction Decay)


Aps um pulso de 90 a magnetizao rodada para o plano xy. Aps desligado o pulso de RF: magnetizao decai exponencialmente (FID)

Deteco do sinal

A irradiao dos spins com RF: Aumenta a populao de spins anti-paralelos. Magnetizao componente transversal e esta medida por bobinas transversais.

Deteco do sinal

O retorno dos spins ao equilbrio. Na defasagem dos spins ocorre um decaimento do sinal que corresponde ao FID.

Resumo da tcnica pulsada


1. Alinhamento dos spins no campo magntico: com ou contra o campo. Nvel de menor energia: ligeiro excesso de populao. 2. Por aplicao de um pulso forte de RF todos os ncleos se excitam simultaneamente. 3. Quando os ncleos retornam ao equilbrio emitem radiao de RF que pode ser detectada (FID) 4. Transformada de Fourrier: FID no espectro convencional.

HISTRICO
1946: F. Bloch e E. Purcell observaram o fenmeno RMN pela primeira vez (Prmio Nobel de Fsica de 1952). Dcada de 50: Importncia em anlises qumicas. Sinal de RMN refletia o ambiente qumico. Restrita ao 1H. Baixa sensibilidade da tcnica. Como o problema foi superado?

HISTRICO
1966: Ernst e Andrew: Tcnica de pulsos e transformada de Fourier (TF). Aumento da sensibilidade da tcnica. Espectros acumulados.

HISTRICO
1991: R. Ernst Prmio Nobel de Qumica de desenvolvimento da RMN multidimensional. 2002: Kurt Wthrich determinao de estruturas tridimensionais de macromolculas biolgicas em soluo por RMN. Prmio Nobel de Qumica.

Varian 60 MHz CW (Continuous Wave)

Os primeiros equipamentos utilizavam ims permanentes e a energia de radiofreqncia era introduzida por ondas contnuas (CW). Ncleo de H.

Modernos espectrmetros
Varian 900 MHz Oxford 900 Mhz BRUKER 1 GHz

Transformada de Fourier: Maior sensibilidade, menor nvel de rudo, menor tempo de anlise, menor massa de amostra. Magnetos supercondutores: maior campo, mais homogneo, maior resoluo, maior sensibilidade. Tcnicas multidimensionais: maior resoluo, maior facilidade na interpretao de espectros.

reas de aplicao da RMN


A tcnica RMN vem evoluindo e ampliando sua aplicao em vrias reas do conhecimento.

Componentes bsicos de um espectrmetro de RMN pulsado


Magneto Probe (Sonda) Programador de Pulsos Sintetizador de RF Transmissor de RF Receptor de RF Amplificador Digitalizador Computador

Diagrama de um espectrmetro de RMN

Espectrmetro de RMN de 9,4 tesla, 400 MHz

Magneto
Funo: produzir campo magntico B0 forte, homogneo e estvel. Gerado pela corrente eltrica circulando por um supercondutor refrigerado temperatura de 4K por meio de hlio lquido.

Por que buscar campos magnticos mais intensos?

Efeito do campo magntico

Maior campo. Maior resoluo Maior sensibilidade

Campos magnticos Mais intensos


Melhor RESOLUO devido ao maior afastamento dos sinais. Maior SENSIBILIDADE, diminuindo ainda mais a massa usada da amostra.espectro.

Magneto

Magneto
1. Entrada de Nitrognio: completa 1 vez/semana. 2. Entrada de hlio: completa a cada 2-8 meses. 3. Vcuo 4. Supercondutor imerso em hlio lquido 5. Levantador de amostra e spinner. 6. Tubo de amostra. 7. Shim 8. Cabea da sonda

Objetos afetados pelo campo magntico


O poderoso campo magntico afeta cartes magnticos (cartes de crdito, CD, disquetes), implantes metlicos (pinos ortopdicos, marcapassos, etc. Manter objetos metlicos, relgios e celulares distantes. No mnimo 3 m: 500MHz No mnimo 1,8 m: 300 MHz

Quench
Perda da supercondutividade do magneto. A sala deve ser completamente evacuada ao se observar sada dos gases criognicos. Pode haver asfixia. Em condies normais de manuteno isto no ocorre.

Sonda ou probe
Aceita a amostra Envia sinais de RF para a amostra. Detecta sinais de RF emitidos pela amostra. Conexo a no mnimo 3 canais: freqncia do 2H lock, freqncia 1H e freqncia de X (13C, 15N). Gira a amostra ao longo do eixo z Controla temperatura.

Sonda ou probe
Rotao Amostra

Gabinete do espectrmetro
No mnimo 3 canais de RF. Sintetizador: seleciona a freqncia. Transmissor: transmite RF para a sonda ou probel. Amplificador: amplifica o sinal. Conversor ADC: Converte sinal analgico em digital e transmite ao computador. Controlador do lock: regula a freqncia/campo.

Gabinete do espectrmetro

Computador
Comanda o equipamento, controla a programao de pulsos, a aquisio de dados, capta e processa os sinais de RMN.

Preparao da amostra
Escolha do solvente e da quantidade de solvente. Pouco solvente torna difcil o lock e shimming. Escolha da massa de amostra: RMN 1H: 1 a 40 mg (maiores concentraes, sinais alargados) RMN 13C e 2D: Quanto mais melhor. 100 a 300 mg bom espectro com nt = 128

Tubo de RMN e porta-amostra

Varian software: VNMR


Botes de comando e linha de comando

Dg:

Comandos iniciais
e [enter] ejeta a amostra i [enter] insere a amostra jexpx escolhe a experincia [Main Menu] [Setup] [1H, CDCl3] ou [ 13C, CDCl3] [Nucleus, solvent] Exemplo: [1H] [D2O]

Ajustes do equipamento: Lock:


Funo: manter o campo magntico em um valor constante durante o experimento. Monitora a freqncia do deutrio do solvente e ajusta o campo mantendo esta freqncia constante. Resultado: linhas mais estreitas.

Ajustes do equipamento: Lock:


Lock power: controla a potncia do lock Lock gain controla a amplificao do sinal recebido da amostra

Lock
Digite ou clique Acqi. Abre-se a janela a seguir. Clique em lock.

Lock
Lock on Clique spin on. Lockpower ajustar Clique lock off. para 24 ou 28. Lockpower no mximo. Lockgain ajustar para 10 ou 20. no Lockgain mximo. Clicar Z0 at o sinal estourar.

Ajustes do equipamento: Shimming


Funo: corrigir diferenas do campo magntico em diferentes pontos da amostra. timo shimming = alta resoluo timo ajuste do shimming: tubos de boa qualidade, nvel de amostra adequado e sem partculas. Shimming deve ser feito a cada troca de amostra e a cada troca de sonda ou probe.

Shimming

Shimming
Z1C ajuste grosso Z2C ajuste grosso Z1 ajuste fino Z2 ajuste fino [Close] nt=1 ga. Observa um sinal. Se no estiver bom, ajusta: Z3 Z1 Z4 Z2

Uso do auto-shimming
Espectrmetro de alto campo so mais difceis de ajustar o shim. Aps shimming manual use o autoshimming: Adjuste the lock phase Shim Z1C and Z2C, Adjuste the lock phase e ento Z3.

Shimming

Bons ajustes de shimming

Ajustar Z1

Necessita ajustar Z2

Shimming

Obteno de espectro de RMN 1H


Aps o lock e shimming. Digite: nt=16 ga [enter] Digite: aph [enter] Para imprimir, digite: pl pscale page

Obteno de espectro de RMN 13C


Aps selecionar ncleo, solvente e ajustar lock e shimming: Digite: time (60*X) [enter] onde X o nmero de horas. d1= 2 (para amostras com carbonos quaternrios) ga [enter] Digite; wft [enter] (para realizar transformada de Fourier a qualquer tempo) Para imprimir digite: pl pscale page

Obteno de espectro de DEPT


Faa um espectro de carbono com nt =16 para ajustar o pico do solvente. Mova o FID para outro experimento: mf (x,y) Transforme o FID no exp y: digite jexpy [enter], wft [enter] Digite: dept Digite: time (60*X) [enter] ga [enter]

Processando espectro DEPT


Digite: ds(1) para mostrar o 1 espectro. Digite: dssa para mostrar os dois espectros.

Para imprimir, digite: pl(all) pscale ppa page