Tecnologia do DNA Recombinante & Aplicaes

Identificao Gentica - Fingerprinting

Complementaridade de Cadeias

Tm Estringncia

Clonagem

Inserto

Amplicao do Clone em Bactria

Utilizaes do DNA Clonado

Utilizaes do DNA Clonado

Retrotranscrio

Vetor & Inserto

Enzimas de Restrio

4 bases

Corte & Ligao

Vetores
Plasmdios
Pequenos fragmentos circulares de DNA Replicao independente do DNA bacteriano Presena ou ausncia dentro da bactria Quantidade varivel Resistncia a drogas e outras caractersticas Bom mtodo para amplificar o DNA clonado Fragmentos clonveis at 20kb Fragmentos grandes so perdidos Plasmdios clssicos
pBR322 pUC18

Modos de introduo de DNA recombinante em bactrias.

Vetores: pBR322 & pUC18

polylinker

Seleo de vetores com clone

Vetores
Fago Lambda
Acomoda um total de 45-50kb Inserto de cerca de 15kb DNA automaticamente embalado em partcula infectante

Fagos Unifilamentares
DNA unifilamentar convertido dentro da bactria para replicao Facilidade para sequnciamento dos clones

Fago Lambda

Deteco de Gene de Interesse Plaqueamento de Fagos

Uso de sondas de DNA e RNA para identificar o clone portador do gene de interesse.

Vetores
Cosmdios
Hbridos de fago e plasmdio Replicao em bactrias ou embalados como fagos Sequncias virais eliminadas permitindo introduo de DNA exgeno de at 45kb entre os stios cos Partcula viral penetra na bactria, mas no tem potencial replicativo

Vetores de Grande Porte

BAC: Bacterial Artificial Chromosome
Cromossomo Artificial de Bactria Inserto mdio de 150kb Inserto mximo de 400kb Se replica como um plasmdio dentro da bactria Utilizado amplamento pelo Projeto Genoma

Vetores de Grande Porte

Cromossomo Artificial de Levedura
Se comporta como um pequeno cromossomo que se replica dentro do eucarionte e carrega seu DNA de interesse Tamanho mdio do inserto: 500Kb Tamanho mximo do inserto: 1Mb Contm todas os elementos necessrios para se replicar e segregar dentro da levedura

Cromossomo Artificial de Levedura

Introduo de DNA Exgeno

DNA Shotgun

Polimerase Chain Reaction - PCR

Gel de Agarose

Southern e Northern Blots

Mapas de Restrio - RFLP

Sequenciamento Capilar - Eletroferograma

Manipulao em Cultura de Clulas e Semeadura

Produo de Camundongos Transgnicos

Transgnico para Hormnio do Crescimento

Diagnstico Pr-Natal