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recombinante:
Bibliotecas de DNA
DNA Genômico
Bibliotecas de DNA
cDNA
Biblioteca de DNA genômico
Purificação do RNA
Degradação do RNA
Genômico cDNA
Representa uma - Contém moléculas que foram
amostra aleatória de transcritas em mRNA;
- Produção de grande
todas as sequências
quantidade de mRNA por
de DNA de um células especializadas;
organismo - Varia de acordo com o tipo e
estado fisiológico da célula;
- mRNA é processado
Vantagens da cDNA
✓ Não tem introns, o que facilita a identificação e a caracterização dos genes, não
havendo perigo de que peças de um determinado gene sejam recuperadas por
outros genes;
✓ O cDNA apenas representa os genes que estão a ser ativamente utilizados pela
célula, pois a RNA polimerase apenas transcreve genes ativados;
✓ A biblioteca de cDNA fique enriquecida para esse determinado gene, porque, em
vez de termos uma ou duas cópias, temos tantas cópias quantos mRNAs a célula
conseguir produzir para esse gene;
✓ As bibliotecas de cDNA são mais fáceis de construir porque o cDNA, tal como o seu
mRNA molde, é relativamente pequeno, portanto um cDNA inteiro pode ser
inserido num único vector.
Apesar disso, mantém-se a necessidade de construir uma biblioteca uma vez que as
células produzem dezenas de milhares de mRNAs diferentes ao mesmo tempo, e
portanto, depois de usarmos a trancríptase reversa, continuamos com uma grande
quantidade de diferentes cDNAs.
Triagem de uma biblioteca
Hibridização com SONDAS
Marcação fluorescente para cada ddNTP – toda reação pode ocorrer em um mesmo tubo.
Tecnologia do DNA
recombinante:
Bibliotecas de DNA