Universidade Regional Integrada do Alto Uruguai e das Misses Campus Santo ngelo Departamento de Cincias Exatas e da Terra Curso

o de Qumica Industrial Disciplina: Microbiologia e Controle de Qualidade

MTODO DE PREPARO DE MEIO DE CULTURA RELATRIO I

Acadmicas: Daniele Perin Ariane de Lara

Professora: Claudia

Santo ngelo, agosto de 2012.

Introduo Meios de cultura consistem da associao qualitativa e quantitativa de substncias que fornecem os nutrientes necessrios ao desenvolvimento (cultivo) de microrganismos fora do seu meio natural. Tendo em vista a ampla diversidade metablica dos microrganismos, existem vrios tipos de meios de cultura para satisfazerem as variadas exigncias nutricionais. Alm dos nutrientes preciso fornecer condies ambientais favorveis ao desenvolvimento dos microrganismos, tais como pH, presso osmtica, umidade, temperatura, atmosfera (aerbia, microaerbia ou anaerbia), dentre outras. Os meios de cultura (preparaes slidas, lquidas ou semi-slidas que contm todos os nutrientes necessrios para o crescimento de microrganismos) so utilizados com a finalidade de cultivar e manter microrganismos viveis no laboratrio, sob a forma de culturas puras. Os meios de cultura devem ter na sua composio, os nutrientes indispensveis ao crescimento do organismo em questo, sob forma assimilvel e em concentrao no inibitria do crescimento. Alm disso, aps a sua preparao, cada meio de cultura deve ser submetido a esterilizao, por forma a eliminar qualquer organismo vivo contaminante. Por outro lado, para manter uma cultura pura, necessrio que o meio de cultura que se pretende utilizar seja mantido desprovido de qualquer organismo vivo contaminante. Para a preveno de contaminaes durante a manipulao de culturas puras recorre-se a tcnicas de assepsia. De um ponto de vista geral, os meios de cultura podem ser classificados tendo em conta o seu estado fsico, a sua composio qumica e os objetivos funcionais a que se destinam. A especificidade dos meios de cultura muito importante, nomeadamente no isolamento e identificao de certos microrganismos (por exemplo, no isolamento de microrganismos do solo) ou em testes de sensibilidade a antibiticos ou na anlise microbiolgica de guas, de alimentos, etc. Estado fsico dos meios de cultura Um meio de cultura lquido contem todos os nutrientes necessrios ao crescimento do microrganismo, dissolvidos em gua. Uma vez preparado, este pode ser inoculado com uma cultura pura do microrganismo que se pretende cultivar e ser colocado a incubar em condies ptimas (temperatura e arejamento) para o crescimento do microrganismo em causa.

Por forma a averiguar o grau de pureza do inculo preparado, recorre-se, normalmente, transferncia de uma amostra do inculo para a superfcie de um meio de cultura slido com a mesma composio, contido numa placa de Petri. Os meios de cultura slidos so preparados a partir da adio, ao meio lquido correspondente, de um agente solidificante (o Agar - com uma concentrao de cerca de 1,5 - 2% p/v), antes da esterilizao do meio. Os meios de cultura podem ainda ter um estado fsico intermdio (semi-slido), que obtido atravs da adio de uma quantidade reduzida de agente solidificante (0.3 a 0.5% de gar). A consistncia menos firme destes meios permite a mobilidade de microrganismos que sejam mveis. Aplicao dos Meios de Cultura De acordo com a finalidade bacteriolgica ou micolgica os meios especiais podem ser classificados em: Meios de pr-enriquecimento - so aqueles que permitem a dessensibilizao de microrganismos injuriados, para amostras que sofreram algum tipo de tratamento (trmico ou qumico). Ex. gua peptonada, caldo lactosado (isolamento de salmonelas de leite em p). Meios de Enriquecimento - quando proporcionam nutrientes adequados ao crescimento de microrganismos presentes usualmente em baixos nmeros ou de crescimento lento, bem como microrganismos exigentes e fastidiosos. Esses meios tm a propriedade de estimular o crescimento de determinados microrganismos, mas existem alguns que tambm podem inibir o crescimento de outros. Ex. Caldo Tetrationato e Selenito-Cistina para cultivo de Salmonelas (lquidos), Caldo Tioglicolato para Clostridium perfringens. Diferenciais - quando contm substncias que permitem estabelecer diferenas entre microrganismos muito parecidos, tais como meio de Teague ou Eosina Azul de Metileno (diferencial para coliformes), gar MacConkey para a diferenciao de enterobactrias, gar sangue, agar Baird-Parker para isolamento e diferenciao de cocos Gram positivos (slidos). Seletivos - os que contm substncias que inibem o desenvolvimento de determinados grupos de microrganismos, permitindo o crescimento de outros. Exemplo: meios com telurito de potssio (para isolamento de Corynebacterium diphtheriae), gar Salmonella-Shigella (SS) e gar MacConkey, meios com sais biliares e verde brilhante para isolamento seletivo de Salmonella, meios com 7,5% de cloreto de sdio, meio Baird-Parker, para isolamento de Staphylococcus aureus, meios com antibiticos para isolamento de diversos microrganismos (TSC, SFP, , meio de Blaser, meio de Skirrow, etc.). A maioria deles tambm diferencial, permitindo diferenciar as colnias (slidos) dos microrganismos. Meios de triagem - meios que avaliam determinadas atividades metablicas permitindo caracterizao e identificao perfunctria ou presuntiva de muitos microrganismos (gar trplice acar e ferro, meio Instituto Adolfo Lutz, uria, etc.);

Identificao - prestam-se para a realizao de provas bioqumicas e verificao de funes fisiolgicas de organismos submetidos a identificao (meios Oxidao/Fermentao, gar Citrato, Caldo nitrato, meio semi-slido, caldo triptofano, meio de Sulfito Indol Motilidade, etc.; Dosagem aminocidos; empregados nas determinaes de vitaminas, antibiticos e

Contagem - empregados para a determinao quantitativa da populao microbiana (Agar de Contagem em Placas, TSC, Agar Batata Dextrose, gar BairdParker, etc.); Estocagem ou manuteno - utilizados para conservao de microrganismos no laboratrio, i.e. garantem a viabilidade de microrganismos (gar Sabouraud, Meios com leite, gar suco de tomate, gar sangue, gar Simples, meio semi-slido, etc.).

Descrio da atividade Materiais utilizados: - gar MacConkey - Isolamento e diferenciao de Enterobactrias Composio: Peptona de gelatina (17g), peptona de casena (1,5g), Peptona de carne (1,5g), lactose (10,0g), Sais biliares (1,5g), Cloreto de sdio (5,0g), vermelho neutro (0,03g), Cristal violeta (0,001g) e Agar (13,5g) - Erlenmeyer 250 mL - Esptula de metal - Papel alumnio - Balana analtica - gua destilada - Placas de Petri - Bico de bunsen - Bucha de gaze

Preparo do meio de cultura Selecionou-se um meio de cultura para cada grupo - gar MacConkey Pesou-se 5g de Agar MacConkey sobre um papel alumnio em uma balana analtica Aps transferiu-se para um erlenmeyer de 250 mL Adicionou-se 100 mL de gua destilada

Dissolveu-se no microondas a 100C por alguns minutos at que se observou a diluio total dos grumos Aps seria preciso esterilizar na autoclave, a 121C (1 atm), durante 15 minutos; (Em nossa aula prtica no foi possvel esperar que a esterilizao ocorresse, pelo curto espao de tempo) Aps esterilizao, deixou-se esfriar o meio at cerca de 50-55C, em condies de assepsia (junto chama do bico de Bunsen) em uma capela de fluxo laminar, esta operao necessria para no placar com o meio muito quente, pois condensa muito na placa. Para placar o meio foi utilizado cerca de 15 ml em cada uma das placas de Petri previamente esterilizadas. importante o cuidado para no agitar bruscamente o meio de cultura no erlenmeyer para no formar bolhas de ar. Caso os meios preparados no sejam imediatamente utilizados, guardar sob refrigerao (4C).

Concluso

Pode-se concluir que os cuidados de esterilizao e preparao so essenciais para a preparao do meio de cultura de qualidade. imprescindvel seguir todas as recomendaes contidas no rtulo do reagente, pois estas informaes variam de acordo com o tipo de meio de cultura utilizado. Tambm foi verificada a necessidade de desenvolver a habilidade para manusear os objetos para evitar alguma condio desfavorvel que possa comprometer o trabalho. Concluiu-se que o meio de cultura que contenha maior concentrao de Agar na composio, ficar mais rapidamente solidificado (em forma gelatinosa), e que tambm existem meios de culturas lquidos (com baixa concentrao de Agar).