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Sistema Imunitário - Parte II Fundamentos Da Resposta Imunológica Mediada Por Linfócitos T e B
Sistema Imunitário - Parte II Fundamentos Da Resposta Imunológica Mediada Por Linfócitos T e B
RESUMO
O sistema imunolgico constitudo por uma intrincada rede de rgos, clulas e molculas, e tem por finalidade manter a homeostase do organismo, combatendo as agresses em geral. A imunidade inata atua em conjunto com a imunidade adaptativa e caracteriza-se pela rpida resposta agresso, independentemente de estmulo prvio, sendo a primeira linha de defesa do organismo. Seus mecanismos compreendem barreiras fsicas, qumicas e biolgicas, componentes celulares e molculas solveis. A primeira defesa do organismo frente a um dano tecidual envolve diversas etapas intimamente integradas e constitudas pelos diferentes componentes desse sistema. A presente reviso tem como objetivo resgatar os fundamentos dessa resposta, que apresenta elevada complexidade e constituda por diversos componentes articulados que convergem para a elaborao da resposta imune adaptativa. Destacamos algumas etapas: reconhecimento molecular dos agentes agressores; ativao de vias bioqumicas intracelulares que resultam em modificaes vasculares e teciduais; produo de uma mirade de mediadores com efeitos locais e sistmicos no mbito da ativao e proliferao celulares, sntese de novos produtos envolvidos na quimioatrao e migrao de clulas especializadas na destruio e remoo do agente agressor, e finalmente a recuperao tecidual com o restabelecimento funcional do tecido ou rgo. Palavras-chave: imunidade inata, inflamao, autoimunidade, PAMPs, receptores toll-like.
ORIGEM
Clulas tronco pluripotentes da medula ssea do origem s clulas progenitoras mieloides e linfoides. Os progenitores linfoides, por sua vez, do origem aos linfcitos T, B e clulas NK. As clulas que vo se diferenciar em linfcitos T (LT) deixam a medula ssea e migram para o timo, onde ocorre todo o processo de seleo e maturao. Apenas os linfcitos T maduros deixam o timo e caem na circulao. As clulas, que vo se diferenciar em linfcitos B (LB), permanecem na
medula ssea e, ao final de sua maturao, deixam a medula e entram na circulao, migrando para os rgos linfoides secundrios (Figura 1).
LINFCITOS B
Os LB so inicialmente produzidos no saco vitelino, posteriormente, durante a vida fetal, no fgado e finalmente na medula ssea. As clulas que vo se diferenciar em LB permanecem na medula ssea durante sua maturao e os LB maduros
Recebido em 27/08/2010. Aprovado, aps reviso, em 23/09/2010. Declaramos a inexistncia de conitos de interesse. Universidade Federal de So Paulo UNIFESP. 1. Doutorando em Reumatologia da Universidade Federal de So Paulo UNIFESP 2. Mestre em Reumatologia pela Universidade Federal de So Paulo UNIFESP 3. Mestrando em Reumatologia da Universidade Federal de So Paulo UNIFESP 4. Mdico Assistente da Disciplina de Reumatologia da Universidade Federal de So Paulo UNIFESP 5. Doutorando em Reumatologia da Universidade Federal de So Paulo UNIFESP e Professor-assistente de imunologia dos cursos de Medicina e Biomedicina da Pontifcia Universidade Catlica de Gois PUC-Gois 6. Professor Adjunto da Disciplina de Reumatologia da Universidade Federal de So Paulo (UNIFESP). Endereo para correspondncia: Neusa Pereira da Silva. Rua Botucatu, 740, 3 andar, CEP: 04023-900, So Paulo, Brasil. Tel/fax: 55 (11) 5576-4239. Email: npsilva@unifesp.br.
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dissulfeto. Existem cinco tipos de cadeias pesadas denominadas , , , e , que definem as classes de imunoglobulina IgA, IgG, IgD, IgE e IgM. As cadeias leves so de dois tipos, appa () e lambda (). A especificidade de ligao ao antgeno definida pela poro varivel (Fab) da molcula, constituda pela unio das regies variveis das cadeias leve e pesada da imunoglobulina. As propriedades caractersticas de cada classe de Ig podem ser vistas na Tabela 1.1,3 Tabela 1 Caractersticas bsicas das classes de imunoglobulinas
Classe IgA Estrutura Dimrica Monomrica IgD Monomrica Propriedades Encontrada em mucosas do trato gastrointestinal, respiratrio e urogenital. Previne colonizao por patgenos. Presente tambm na saliva, lgrimas e leite. Imunoglobulina de membrana. Faz parte do receptor de membrana de linfcitos B virgens (BCR). Envolvida em processos alrgicos e parasitrios. Sua interao com baslos e mastcitos causa liberao de histamina. Principal imunoglobulina da imunidade adquirida. Tem capacidade de atravessar a barreira placentria. Faz parte do receptor de membrana de linfcitos B virgens (BCR). Forma encontrada no soro, secretada precocemente na resposta imune adquirida.
IgE
Monomrica
IgG
Monomrica
IgM
Monomrica Pentamrica
Figura 1. Estgios de maturao da clula B na medula ssea a partir da clula tronco pluripotente. Inicialmente os linfcitos B passam por ciclos de proliferao com concomitante expresso das cadeias do receptor da clula B (BCR). Clulas que falham na expresso do BCR so eliminadas e clulas que reconhecem protenas prprias com elevada afinidade so estimuladas a sofrer morte apopttica (seleo negativa). Na parte inferior da figura esto esquematizados os estgios de desenvolvimento das clulas T a partir da migrao de seus precursores da medula ssea para o timo. Na parte inferior direita temos a viso esquemtica de uma molcula de IgG secretada. deixam a medula e entram na circulao, migrando para os rgos linfoides secundrios1,2,3 (Figura 1). As molculas responsveis pelo reconhecimento de antgenos nos LB so as imunoglobulinas de membrana, IgM e IgD. Estas so a contrapartida dos receptores de linfcitos T (TCR) e por analogia so denominadas receptores de linfcitos B (BCR) em alguns contextos.
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Figura 2. Estgios de maturao das clulas B com exemplos de marcadores imunofenotpicos expressos no desenvolvimento normal destas clulas. CyIg - cadeia citoplasmtica; SmIgM - IgM de superfcie; CyIg - imunoglobulina citoplasmtica.
reconhecimento do anticorpo que ser formado, independentemente da poro constante que far parte da cadeia completa. Essa cadeia pesada se associa a uma cadeia invarivel e expressa na superfcie como um pr-BCR, juntamente com as molculas assessrias Ig e Ig. Em seguida ocorre o rearranjo da cadeia leve k e, na falha desta, da cadeia . Cada LB apresenta, portanto, um nico tipo de cadeia leve associado cadeia pesada. O sucesso na expresso de uma IgM completa na superfcie do LB leva progresso da maturao com subsequente produo de IgD de membrana.3 importante ressaltar que todo rearranjo gnico ocorre no incio da maturao do LB, no estgio pr-B, ainda na medula ssea, e de modo totalmente independente de qualquer contato com antgeno.2 O processo combinatrio dos diferentes segmentos que compem as pores variveis das cadeias pesadas e leves e as diferentes possibilidades de associao entre elas resultam em cerca de 1011 especificidades diferentes de reconhecimento pelas imunoglobulinas.1 A fim de restringir esse repertrio, mecanismos de seleo positiva e negativa atuam durante a maturao dos LB. Na
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seleo positiva, os LB imaturos expressando molculas funcionais de Ig de membrana recebem sinais de sobrevivncia para prosseguir a maturao. No processo de seleo negativa, os LB imaturos, ainda na medula ssea, que reconhecem antgenos prprios com alta afinidade sofrem apoptose ou entram em um processo denominado edio de receptor, no qual os genes RAG so novamente ativados e outra combinao V-J de cadeia leve gerada em substituio anterior, auto-reativa.1,2,3 Alguns detalhes da dinmica de maturao das clulas B esto apresentados na Figura 1.
CARACTERIZAO IMUNOFENOTPICA
Os estgios de maturao dos LB so caracterizados por um padro especfico de expresso de genes de imunoglobulinas e de outras protenas de membrana que servem como marcadores fenotpicos desses estgios de desenvolvimento (Figura 2). Essas molculas de superfcie cumprem funes especficas importantes nas diferentes fases de maturao do LB. A existncia de anticorpos monoclonais especficos para cada um desses marcadores permite que sejam feitos estudos
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sobre a distribuio e a dinmica da linhagem de LB. Ademais, monoclonais contra algumas dessas molculas de superfcie tambm podem ser utilizados com finalidade teraputica, atingindo determinadas subpopulaes de clulas da linhagem B.
Figura 3. A. Complexo BCR e ativao da clula B. A partir da ligao cruzada das imunoglobulinas na superfcie do LB so desencadeados eventos bioqumicos que iniciam com a fosforilao dos ITAMS (Motivos de ativao de imunoreceptores baseado em tirosina) com consequente ativao de enzimas e intermedirios bioqumicos que culminaro na ativao de fatores de transcrio que promovem a ativao celular. B. Interao do linfcito B com linfcito T auxiliar aps processamento antignico pelas clulas B. A produo de citocinas pelos linfcitos T auxiliares resultar na ativao da Resposta Imune Humoral. Destaque para as molculas de superfcie envolvidas no processo de ativao.
microorganismos e antgenos que ativam o complemento. Esse tambm um mecanismo de amplificao da resposta imune humoral, uma vez que anticorpos capazes de ativar o complemento vo resultar em maior estmulo dos LB.1,8 Recentemente tem sido destacado o potencial dos LB em desempenhar suas funes aps ativao de outros receptores relacionados resposta imune inata, tais como os Toll-Like Receptors (TLRs). Foi demonstrado que os LB expressam a maioria dos TLRs, tais como TLR-2, TLR-3, TLR-5 TLR-7 e TLR-9, respondendo a uma enorme variedade de ligantes que podem ser proteicos, polissacardicos, lipdicos e outros.8
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A resposta dos LB a antgenos peptdicos requer a ajuda dos LT auxiliares e esses antgenos so, por isso, denominados antgenos T dependentes. Muitos antgenos no proteicos, com eptopos repetitivos, no necessitam da cooperao dos LT e so denominados antgenos T independentes.1
MATURAO DA AFINIDADE
No incio da resposta, h Ag suficiente para interagir com LB tanto de alta quanto de baixa afinidade e os anticorpos produzidos so heterogneos. No decorrer da resposta, quantidades maiores de anticorpos se ligam ao Ag diminuindo sua disponibilidade. Nessa fase, os LB com Ig de maior afinidade, que interagem melhor com o determinante antignico, so preferencialmente estimulados. Esse processo denominado maturao da afinidade. O aumento da afinidade de anticorpos para um dado Ag, durante a progresso da resposta humoral T dependente, resultado de mutao somtica nos genes de Ig durante a expanso clonal. Algumas destas mutaes vo gerar clulas capazes de produzir anticorpos de alta afinidade, contudo, outras podem resultar na diminuio ou mesmo na perda da capacidade de ligao com o antgeno. A seleo positiva garante a sobrevivncia seletiva de LB produtores de anticorpos de afinidade progressivamente maior. Nesse processo fundamental a interao CD40/CD40L bem como a presena de fatores solveis derivados dos linfcitos T e por isso a maturao de afinidade ocorre somente na resposta aos antgenos T dependentes.1,2,3 Pelo fato de que persistem LB de memria aps uma exposio a antgenos T dependentes, os anticorpos produzidos numa resposta secundria apresentam afinidade mdia mais alta que os produzidos na primria. Esse processo importante na eliminao de antgenos persistentes ou recorrentes.1,2
Resposta Primria
O primeiro contato com um antgeno, por exposio natural ou vacinao, leva ativao de LB virgens, que se diferenciam em plasmcitos produtores de anticorpos e em clulas de memria, resultando na produo de anticorpos especficos contra o antgeno indutor. Aps o incio da resposta, observase uma fase de aumento exponencial dos nveis de anticorpos, seguida por uma fase denominada plat, na qual os nveis no se alteram. Segue-se a ltima fase da resposta primria, a fase de declnio, na qual ocorre uma diminuio progressiva dos anticorpos especficos circulantes.1,2
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Figura 4. Viso esquemtica das fases primria e secundria da resposta imune adaptativa humoral. As clulas B virgens nos tecidos linfoides perifricos so ativadas a partir do contato com o antgeno, proliferam e diferenciam-se em clulas secretoras de anticorpos e clulas B de memria. A resposta secundria mais rpida e ocorre a partir da ativao das clulas B de memria promovendo a produo de maiores quantidades de anticorpos.
Resposta Secundria
Ao entrar em contato com o antgeno pela segunda vez, j existe uma populao de LB capazes de reconhecer esse antgeno devido expanso clonal e clulas de memria geradas na resposta primria. A resposta secundria difere da primria nos seguintes aspectos: a dose de antgeno necessria para induzir a resposta menor; a fase de latncia mais curta e a fase exponencial mais acentuada; a produo de anticorpos mais rpida e so atingidos nveis mais elevados; a fase de plat alcanada mais rapidamente e mais duradoura e a fase de declnio mais lenta e persistente (Figura 4).1,2,3 A magnitude da resposta secundria depende tambm do intervalo de tempo desde o contato inicial com o antgeno. A resposta ser menor se o intervalo for muito curto ou muito longo. Se for muito curto, os anticorpos ainda presentes formam complexos Ag/Ac que so rapidamente eliminados; se for muito longo, possvel que as clulas de memria tenham diminudo gradualmente com o tempo, embora a capacidade para deflagrar uma resposta secundria possa persistir por meses ou anos. O perodo timo para a induo de resposta secundria logo aps a queda do nvel de anticorpos da resposta primria abaixo dos limites de deteco.1,2
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Nos dois tipos de resposta, primria e secundria, h a produo dos istipos IgM e IgG, porm, na resposta primria IgM a principal Ig e a produo de IgG menor e mais tardia. Na resposta secundria, a IgG a imunoglobulina predominante. Nas duas respostas, a concentrao de IgM srica diminui rapidamente de maneira que, aps uma ou duas semanas, observa-se queda acentuada enquanto a produo de IgG persistente.1,2 Vale a pena enfatizar que os testes imunoenzimticos muito sensveis podem registrar nveis baixos ou residuais de IgM por meses em alguns casos.
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Um exemplo da importncia da resposta a antgenos T independentes a imunidade humoral frente a polissacardeos bacterianos, um mecanismo decisivo na defesa do hospedeiro contra infeces por bactrias encapsuladas. Por essa razo, indivduos com deficincias congnitas ou adquiridas que prejudiquem a resposta humoral so especialmente suscetveis a infeces, muitas vezes fatais, por bactrias encapsuladas. Outro exemplo de resposta aos antgenos T independentes so os anticorpos naturais, presentes na circulao de indivduos normais e produzidos aparentemente sem exposio antignica. Muitos destes anticorpos naturais reconhecem carboidratos com baixa afinidade e acredita-se que sejam produzidos por LB peritoneais, isto , clulas B1, estimuladas por bactrias que colonizam o trato gastrointestinal, e por LB da zona marginal dos rgos linfoides. Anticorpos contra antgenos glicolipdicos A e B do grupo sanguneo so outro exemplo de anticorpos naturais.1,3
Figura 5. Mecanismos de regulao da resposta imune induzidos por clulas B reguladoras (BREGs). Os mecanismos de supresso sobre diferentes alvos celulares so dependentes da secreo de IL-10 e TGF-.
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O estudo dos LBREGS em modelos animais deixa claro o papel regulador dessas clulas nas diferentes enfermidades. A comprovao da existncia dessas clulas no homem ser de grande relevncia para a compreenso das doenas autoimunes. Mais do que entender a diversidade de efeitos das citocinas anti-inflamatrias que asseguram as funes dos LBREGS, o seu estudo refora as evidncias da produo de autoanticorpos de modo fisiolgico com finalidade protetora.11,12,13
Os LB1 expressam baixos nveis dos marcadores B220/ CD45R, CD19, Mac-1 e IgD de superfcie, altos nveis de IgM de superfcie e so subdivididos em 2 grupos principais: B1a e B1b. Os LB1a expressam a molcula CD5 de superfcie em nveis intermedirios, enquanto os LB1b so CD5- e capazes de diferenciao em clulas com caractersticas mielomonocticas com funo e morfologia semelhante ao macrfago. Foi verificado que a secreo de IL-10 pelos LB1 modula a atividade fagoctica do macrfago in vitro, e a apresentao de antgenos na presena de IL-10 induz tolerncia ou diferenciao de LT em clulas supressoras, indicando um possvel papel imunomodulador dessa populao celular.
LINFCITOS B1
Os LB1 constituem uma subpopulao distinta dos LB convencionais (B2). Possuem forte capacidade autorrenovadora e so encontrados principalmente na cavidade pleural, peritoneal e em menor quantidade no bao. So responsveis pela produo da maior parte das IgM naturais e tambm da maioria dos anticorpos de classe IgM, incluindo anticorpos contra LT, dsDNA, eritrcitos e anticorpos que reconhecem constituintes bacterianos comuns. Tem sido sugerido que os LB1 representam uma relquia evolutiva originada de uma linhagem primitiva da imunidade inata que se tornou uma clula linfoide do sistema adaptativo, mas ainda mantm muitas caractersticas de uma clula do sistema inato. Os LB1 parecem representar a primeira linha de defesa contra infeces sistmicas por vrus e bactrias e so de fundamental importncia para o equilbrio homeosttico do organismo. Produzem anticorpos polirreativos e de baixa afinidade, importantes para remoo de clulas envelhecidas e/ou que sofreram estresse celular e proteo contra o desenvolvimento de doenas autoimunes e arterosclerose.15,16
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LINFCITOS T
As clulas pr-T entram no crtex tmico pelas artrias e durante o processo de seleo e maturao migram em direo medula, de onde saem para a circulao. O processo
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de maturao dos LT envolve a expresso de um receptor de clulas T (TCR) funcional e dos co-receptores CD4 e/ou CD8.1 Os LT s reconhecem antgenos processados, apresentados por molculas de MHC na superfcie de uma clula apresentadora de antgeno. O TCR expresso na membrana dos LT em associao com um complexo denominado CD3, composto por cinco diferentes protenas da famlia das imunoglobulinas. O TCR responsvel pelo reconhecimento do complexo peptdeo-molcula de MHC, e o CD3, pela sinalizao celular subsequente.1
afinidade adequada recebem estmulo para sobreviver (seleo positiva). Os timcitos cujo TCR no apresenta afinidade pelo MHC prprio sofrem apoptose pela falta de estmulo (morte por negligncia).17 A i nterao com molculas MHC de classe I ou II determina a diferenciao do timcito em LT CD8+ ou CD4+, respectivamente. Continuando a maturao, os timcitos que sobreviveram seleo positiva e expressam apenas CD4 ou CD8 entram em contato na medula com clulas dendrticas e macrfagos, clulas apresentadoras de antgenos (APCs) extremamente eficientes, que apresentam Ag prprios associados ao MHC. Os timcitos imaturos que interagem com muita afinidade com esses complexos morrem por apoptose (seleo negativa). As clulas que sobrevivem tornam-se LT maduros, prontos para deixarem o timo e exercerem suas funes na periferia. Apenas cerca de 5% das clulas que entram no timo tornam-se LT maduros17 (Figura 1). Este processo de educao tmica visa garantir que os LT circulantes sejam tolerantes aos Ag prprios, mas capazes de reconhecer Ag estranhos ao organismo quando apresentados pelo MHC prprio. Entretanto, os mecanismos centrais de tolerncia no so absolutos uma vez que LT autorreativos podem ser encontrados na periferia. Entre outros mecanismos de regulao perifrica, destacam-se diferentes populaes de LT reguladores que atuam na periferia impedindo o desenvolvimento de autoimunidade.17
LT EFETORES
Existem diversos subtipos de LT efetores. Classicamente os dois principais subtipos so os auxiliares (Th) e os citotxicos, que apresentam um receptor TCR e as molculas correceptoras, CD4 ou CD8, respectivamente. Os LT CD4 (Th) so responsveis por orquestrar outras clulas da resposta imune na erradicao patgenos e so tambm muito importantes na ativao dos LB, macrfagos ou mesmo LT CD8. Os LT CD8 esto envolvidos principalmente nas respostas antivirais e possuem tambm atividade antitumoral. Ambos os subtipos apresentam papel muito importante no controle de patgenos intracelulares. Outros subtipos de LT efetores, encontrados especialmente nas barreiras de mucosa e na pele, so os LT . Essas clulas so importantes nas respostas imunes contra antgenos comumente encontrados nesses stios anatmicos e representam um elo entre a resposta imune inata e adaptativa (Figura 6).18
APC, um linfcito precursor Th0 pode se tornar um linfcito Th1, Th2 ou Th17, na dependncia do ambiente de citocinas presente. Embora morfologicamente indistinguveis essas clulas apresentam distintos padres de citocinas secretadas e, consequentemente, diferentes respostas efetoras19 (Figura 6).
Linfcitos Th1
Os LTh1 produzem grandes quantidades de IL-2, que induz proliferao de LT (incluindo os prprios LTCD4 de maneira autcrina) e tambm induz a proliferao e aumenta a capacidade citotxica dos LT CD8. A outra citocina produzida em grandes quantidades pelos LTh1 o INF-, uma citocina muito importante na ativao de macrfagos infectados com patgenos intracelulares como micobactrias, protozorios e fungos, que apresenta tambm um papel relevante na ativao de LT CD8.18 Os pacientes com sndrome de imunodeficincia em que o receptor de INF- est ausente sofrem de infeces graves por micobactrias.20 Existe um ciclo de retroalimentao positiva na ao do INF- sobre outros LTh0, induzindo sua polarizao para a via de diferenciao Th1 e inibindo a via Th2.19 A resposta Th1 essencial para o controle de patgenos intracelulares, sendo possvel que contribua para a patognese de doenas reumticas autoimunes como artrite reumatoide (AR) e esclerose mltipla (EM). Entretanto, nos ltimos anos, uma nova subpopulao de LT, os LTh17, tem sido responsabilizada pelo processo fisiopatolgico dessas enfermidades.21
Linfcitos Th2
A segunda populao Th muito importante nas respostas imunes humorais o LTh2, que produz IL-4, IL-5, IL-6 e IL-10, favorecendo a produo de anticorpos.18 As respostas Th2 esto associadas com as doenas alrgicas e infeces por helmintos, uma vez que a IL-4 induz a troca de classe de imunoglobulinas nos linfcitos B para IgE e a IL-5 induz a produo e ativao de eosinfilos. De forma anloga ao INF-, a IL-4 tambm promove retroalimentao positiva para a via Th2 e suprime a via Th1. Em situaes de hipersensibilidade imediata, como nas doenas alrgicas, a terapia visa a dessensibilizao imune Th2 e induo de respostas Th1 alrgeno-especficas.18,19 J em doenas sabidamente causadas por LTh1, as citocinas Th2 tm sido consideradas protetoras, portanto a busca pela alterao no padro de resposta imune de Th1 para Th2 tem sido muito estudada, visando a melhora ou o restabelecimento da tolerncia imunolgica. Entretanto, este paradigma bipolar tem sido reformulado recentemente em funo do reconhecimento de novos subtipos de LT, principalmente as clulas Th17.18,19
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Figura 6. Caractersticas gerais das clulas T com destaque para os linfcitos T auxiliares (subtipos TH1 e TH2), clulas TH17, linfcitos T citolticos, linfcitos T e clulas T reguladoras naturais (TREGs) e induzidas (TR-1 e Th3).
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Linfcitos Th17
Os LTh17 representam um novo subtipo de LT efetores importantes na proteo contra infeco por microorganismos extracelulares. Foram originalmente descritos em modelos experimentais de doenas autoimunes como encefalite autoimune e artrite induzida por colgeno, que antes se acreditava serem mediadas predominantemente por clulas Th1. Esta nova via de diferenciao Th comeou a ser elucidada com a descoberta da citocina IL-23 que, juntamente com IL-1 e IL6, pode levar ao desenvolvimento de doenas autoimunes em modelos murinos por seu importante papel pr-inflamatrio e indutor da diferenciao e ativao de LTh17.21 Os LTh17 produzem citocinas IL-22, IL-26 e citocinas da famlia IL-17. As citocinas da famlia IL-17 so potentes indutoras da inflamao, induzindo infiltrao celular e produo de outras citocinas pr-inflamatrias.21,22 A produo desregulada de IL-17 est associada a vrias condies autoimunes, como: esclerose mltipla, doena intestinal inflamatria, psorase e lpus. Em pacientes com artrite reumatoide, nveis aumentados de IL-17 foram encontrados na sinvia, onde atua como um importante fator na ativao dos osteoclastos e reabsoro ssea.21,22 A via de diferenciao Th17 antagonizada pelas citocinas Th1 e Th2 e, em alguns modelos experimentais de autoimunidade causada por LTh17, as citocinas Th1 e Th2 tm se mostrado protetoras. A exata compreenso dos mecanismos de polarizao Th em humanos fundamental para um melhor entendimento dos mecanismos fisiopatolgicos das doenas inflamatrias crnicas e para o possvel desenvolvimento de formas mais eficazes de imunoterapia.21
LT
Uma pequena populao de LT perifricos possui TCR com diversidade limitada, composto por cadeias . Essas clulas so comumente encontradas nas primeiras linhas de defesa do organismo, como as barreiras mucosas e a pele, onde atuam como verdadeiras sentinelas de reconhecimento de padres moleculares, reconhecendo e apresentando antgenos, respondendo a eles e contribuindo tambm para ativao e proliferao de clulas do sistema imune.23 Essas clulas diferem dos LT , pois seu TCR pode reconhecer antgenos mesmo na ausncia de apresentao pela molcula de MHC, sendo ento consideradas verdadeiras sentinelas do organismo.23,24 Os LT apresentam tambm memria imunolgica, respondendo mais vigorosamente em um segundo encontro antignico. Os LT exercem suas funes efetoras de maneiras variadas, podendo, por exemplo, apresentar citotoxicidade (caracterstica primria de LTCD8). Estudos teraputicos tm explorado esta caracterstica citotxica contra antgenos tumorais. Os LT exercem tambm funo auxiliadora liberando citocinas como INF- (Th1) ou IL-4 (Th2), podendo inclusive atuar como APCs eficientes, pois possuem alta capacidade de apresentar antgenos aos LT, mediando sua ativao e proliferao. Os LT so tambm capazes de ativar clulas dendrticas e LB, ampliando assim tanto a resposta imune celular como humoral. Os LT trazem tona a discusso de um dos dogmas contemporneos da imunologia, a diviso do sistema imune em sistema inato e adaptativo. O sistema imune inato responde rapidamente ao reconhecer padres moleculares derivados de patgenos e capaz de induzir repostas imunes adaptativas pela liberao de citocinas e apresentao de antgenos. Em contraste, a reposta adaptativa age lentamente em um encontro antignico inicial, mas desenvolve memria imunolgica e responde rpida e vigorosamente em um encontro subsequente (Figura 4). Os LT podem ser includos em ambos os braos da resposta imune, uma vez que exercem tanto as funes de clulas da imunidade inata como da resposta adaptativa. Sua participao nos dois tipos de resposta sugere que essas clulas representam uma forma primitiva e conservada de imunidade.23
LT CITOTXICOS (CD8)
Os LT CD8 reconhecem antgenos intracitoplasmticos apresentados por molculas MHC de classe I, que so expressas por praticamente todas as clulas nucleadas. Clulas infectadas por vrus e clulas tumorais normalmente so reconhecidas pelos LT CD8.18 Aps adeso s clulas alvo apresentando um antgeno associado ao MHC e coestmulo adequado, os LT CD8 proliferam e, em um encontro subsequente, podem eliminar por citotoxicidade qualquer clula que apresente esse antgeno especifico, independente da presena de molculas coestimulatrias. Os LT CD8 induzem a via de morte celular programada (apoptose) na clula alvo pela ao de perforinas e granzimas e tambm podem levar apoptose pela expresso do receptor Fas L (CD95) que interage com a molcula Fas nas clulas alvo.18
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LT REGULADORES
Vrias evidncias demonstram a importncia das diferentes populaes de LT reguladores na manuteno da autotolerncia imunolgica e no controle das respostas autoimunes. Assim, h grande interesse no estudo dessas clulas e de sua potencial aplicao no tratamento das doenas autoimunes.25
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As clulas com funo imunorreguladora apresentam como caracterstica bsica a capacidade de produo de citocinas imunossupressoras, como IL-4, IL-10 e TGF-. Atuam em uma complexa rede de mecanismos reguladores destinados a assegurar a modulao das respostas imunolgicas frente aos diversos antgenos provenientes de agentes infecciosos, tumores, aloantgenos, autoantgenos e alrgenos. Entre os LT com funo reguladora esto os LT reguladores de ocorrncia natural (TREGS CD4+CD25+), descritos por Sakaguchi et al (1995),26 os LTR1 que produzem IL-10 e suprimem o desenvolvimento de algumas respostas de LT in vivo, e os LTh3, capazes de impedir o desenvolvimento de enfermidades autoimunes mediante a produo de TGF- (Figura 6) (27) . Outros LT com funo reguladora so os LT , clulas CD8+Qa-1+, os LT CD8+CD28- (CD8+ TR), as clulas NK/T e os LT duplo-negativos.23,28,29
como nos transplantes, na doena do enxerto versus hospedeiro (GVHD), nos processos alrgicos e outras condies. Nessas situaes, uma abordagem teraputica seria estimular o nmero e a funo dessas clulas a partir da administrao de frmacos, citocinas, molculas coestimulatrias ou outros elementos que potencialmente atinjam esta finalidade.25
Linfcitos T Reguladores CD8+CD28As clulas caracterizadas imunofenotipicamente como CD8+CD28- reconhecem especificamente antgenos expressos
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principalmente por APCs em associao ao MHC de classe I, mas no so ativadas por carecerem do receptor CD28. Ao invs, suprimem a resposta proliferativa de LTCD4+ aloreativas nas imediaes. Este efeito supressor no mediado por citocinas, mas requer a interao clula-clula entre LTh CD4+, LT supressores CD8+CD28- e APCs apresentando antgenos alogeneicos.33 O mecanismo de ao das clulas reguladoras CD8+CD28no est completamente esclarecido e poucos estudos tm caracterizado a funo dessas clulas regulatrias in vitro.
Clulas NK/T
Praticamente todas as clulas que expressam TCR so restritas ao MHC, ou seja, reconhecem o antgeno apenas em associao a molculas do MHC prprio, e expressam co-receptores CD4 ou CD8. Uma pequena populao de LT expressa marcadores encontrados em clulas NK e so conhecidas como clulas NK/T, que parecem tambm ter papel importante na regulao da resposta imune. As clulas NK/T apresentam expresso de TCR com cadeias de diversidade limitada. Esse TCR reconhece lipdeos ligados a molculas no-polimrficas, denominadas CD1 e semelhantes ao MHC da classe I.34 As clulas NK/T parecem surgir do mesmo precursor que origina LT convencionais, mas so selecionadas positivamente aps interaes de alta avidez com glicolipdeos associados a molculas CD1d expressas por clulas epiteliais ou medulares do tecido tmico.35 Apesar do repertrio limitado, as clulas NK/T apresentam duas estratgias diferentes no reconhecimento de patgenos. A primeira, observada no reconhecimento de bactrias Gramnegativas, ocorre pela sinalizao de receptores do tipo Toll (TLR) pelo LPS. A segunda ocorre pelo reconhecimento especfico de glicosilceramidas presentes na parede celular bacteriana, apresentadas por CD1d. Essa ltima via de sinalizao assegura o reconhecimento de patgenos que no apresentam ligantes para TLRs em sua parede celular.36 Devido ao reconhecimento de glicolipdios conservados, tanto endgenos (iGbeta3) quanto exgenos, essas clulas esto envolvidas em respostas alrgicas, inflamatrias, tumorais e na autoimunidade, alm de participarem da regulao da resposta imune.36
captura do antgeno, sua degradao proteoltica a fragmentos menores, transporte e acomodao dos peptdeos antignicos na fenda das molculas do MHC e finalmente na transposio do complexo MHC-peptdeo para a superfcie celular para reconhecimento pelo TCR. Os LT reconhecem o complexo MHC-peptdeo via TCR, independente do compartimento celular onde esse antgeno foi captado.37 Normalmente os antgenos exgenos, fagocitados ou endocitados, so acomodados em molculas de MHC classe II, que interagem com o TCR e o co-receptor CD4 na superfcie celular de LT.1 No processamento de antgenos intracelulares, molculas proteicas do citosol, como por exemplo os antgenos virais, so integradas protena ubiquitina e direcionadas para o proteassomo, uma unidade cataltica capaz de converter os antgenos citoslicos em peptdeos. Os peptdos assim produzidos so conduzidos para o retculo endoplasmtico e associados s molculas de MHC I. Os complexos MHC I e peptdeo so transportados para a superfcie celular para posterior apresentao aos LT CD8+38. Para que ocorra a ativao dos LT, aps o reconhecimento do peptdeo pelo TCR, h necessidade de um segundo sinal, que mediado pela interao de vrias outras molculas coestimulatrias presentes na superfcie do LT e da APC. Por sua importncia na regulao da resposta imune, destacamos as molculas coestimuladoras participantes da interao CD28-CD80 ou CD28-CD86, que resulta em sinais estimuladores, e da interao CD28-CTLA4, que promove sinalizao inibitria.(39,40)
CONSIDERAES FINAIS
Existem diferentes populaes de clulas B maduras, que podem ser encontradas em diferentes stios anatmicos, com funes muitas vezes diversificadas. As clulas B-1 e MZ-B parecem ser pr-selecionadas para reagirem a antgenos capazes de gerar respostas T independentes, atuando como clulas B de memria inata. As clulas B foliculares atuam como percussoras das repostas imunes T dependentes e podem sofrer adaptaes celulares e moleculares em resposta ao estmulo antignico. Como resultado, temos as repostas mediadas por plasmcitos maduros de vida longa capazes de sintetizar uma quantidade substancial de anticorpos de alta avidez por vrios anos. Estas respostas T dependentes tambm elaboram um compartimento de clulas B de memria no secretoras de anticorpos, que responde vigorosamente reexposio antignica. As clulas T tm como uma de suas principais caractersticas a atividade efetora auxiliar na ativao de outros subtipos celulares, principalmente via secreo de citocinas e ao
Rev Bras Reumatol 2010;50(5):552-80
efetora direta sobre clulas alvo, cujos exemplos emblemticos so os LT CD8 citotxicos. Vrias subpopulaes de LT, classificadas principalmente pelo padro de citocinas secretado, vm sendo descritas. Os principais subtipos efetores so os LTh1 (secretor de INF- e IL-2), LTh2 (secretor de IL-4,IL-10 e IL-13) e LTh17 (secretor de IL-17, IL-21 e IL-22). Outras subpopulaes como os linfcitos NKT e LT representam populaes muito heterogneas quanto a sua capacidade funcional, atuando ora como efetoras, ora como reguladoras. LT reguladores so fundamentais no controle de praticamente todas as respostas imunes, atuando sobre todos os subtipos celulares da imunidade inata e adaptativa. As TREGS naturais originadas no timo e as populaes de LT reguladoras induzidas na periferia, incluindo as clulas CD8+Qa-1+, LT CD8+CD28- e LT duplo-negativas, fazem parte deste diverso pool de linfcitos imunomoduladores.
No somente os LT podem exercer imunoregulao, mas muitas vezes durante uma reposta efetora as clulas B podem se comportar tanto como clulas efetoras ativas quanto como clulas imunomoduladoras, denominadas BREGS. Estas ltimas so capazes de controlar a magnitude da resposta humoral e celular, trazendo de volta a homeostase imune e auxiliando na manuteno da tolerncia perifrica. Assim, compartimentos distintos de clulas T e B antgenoespecficas podem ser recrutados na resposta efetora aps um estmulo local ou sistmico. Os eventos moleculares necessrios para seu desenvolvimento, seleo, migrao e ativao ainda esto sendo investigados e a compreenso destas vias permitir no futuro a manipulao especfica de vias efetoras celulares e humorais, facilitando a imunidade a microorganismos e prevenindo doenas.
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