COLORAES USUAIS EM HEMATOLOGIA

COLORAES PANTICAS OU COLORAES SEGUNDO ROMANOWSKY

Antonio Altair M. Oliveira
Domenico H.G.P. Barbieri
Lcia Helena M. Bruneri
Primavera Borelli

MTODOS DE COLORAO
1. PRINCPIO
Romanowsky idealizou um mtodo em que uma soluo de corantes poderia corar
diferentes estruturas. Misturas dos corantes eosina e azul de metileno so preparadas
segundo proposio de vrios autores: Leishman, May-Grunwald, Giemsa, Wright e
outros (que do os respectivos nomes ao corantes, segundo Leishman, Giemsa, etc....).
Estes corantes so dissolvidos em lcool (em geral metanol). Na soluo
envelhecida, o azul de metileno se oxida em gradaes diferentes, originando diversos
azures de metileno. Teremos ento uma soluo alcolica de um complexo eosinato
de azul e azures de metileno.
2. FASES DA COLORAO
Fixao: a preparao a ser corada dever ser previamente fixada. O fixador
rotineiro mais usado em hematologia o metanol, que deve ser aplicado sobre a lmina
por 01 a 03 minutos. O corante, preparado em soluo alcolica, quando aplicado sobre
a lmina (nesse perodo de tempo) realiza esta etapa que a de fixao.
Colorao: adicionando-se gua de colorao (gua tamponada, pH=7,0 ou gua
destilada, recentemente fervida) sobre o corante, ionizam-se os sais contidos na soluo.
Lavagem: aps a colorao, as lminas so lavadas sob jato de gua corrente e em
seguida secas ao ar.
3. NOMENCLATURA USUAL
Quando uma estrutura se cora, revelando a mesma cor do corante, diz-se que uma
colorao ortocromtica; quando a estrutura toma uma cor diferente daquela do
corante, diz-se que uma colorao metacromtica;
As estruturas celulares que tem afinidade pelo azul de metileno so chamadas
basfilas, corado-se em azul; as que tem afinidade pelos azures so chamadas
azurfilas, corando-se em prpura (metacromasia); as que tem afinidade pela eosina
so chamadas acidfilas, corando-se em rosa e as que tem afinidade pela mistura
complexa so chamadas neutrfilas, corando-se em salmo.
4. METODOS
Mtodo de Leishman ou May-Grunwald-Giemsa, mod. por Rosenfeld (*)
- Fixao: sobre a extenso de sangue, dessecada ao ar, colocar um nmero x de
gotas (por ex. 30 gotas) do Corante de Leishman ou de Rosenfeld e aguardar alguns
minutos (tempo padronizado).
- Colorao: sem desprezar o corante, acrescentar um igual nmero de gotas de

gua de colorao, homogeneizar e aguardar alguns minutos (tempo padronizado).

Lavar sob jato de gua corrente. Secar ao ar.
Mtodo de May- Grunwald-Giemsa
- Fixao: sobre a lmina, colocar um nmero de gotas do Corante de MayGrunwald e aguardar alguns minutos (tempo padronizado).
- Colorao (1): acrescentar um igual nmero de gotas de gua de colorao,
homogeneizar e aguardar alguns minutos (tempo padronizado).
- Colorao (2): desprezar o corante anteriormente colocado sobre a lmina e, sem
lav-la,acrescentar uma soluo do Corante de Giemsa, recentemente preparado (3 gotas
de corante para cada 2 ml de gua de colorao). Aguardar de 20 a 30 minutos. Lavar
sob jato de gua corrente. Secar ao ar.
OBS: 1. A fixao poder ser realizada somente com metanol durante 1 a 3 minutos.
2. Para casos em que se necessite refinamento tcnico, aps a fixao em metanol,
a lmina poder ser corada, colocando-a novamente sobre um vidro de relgio, no qual
existe a mistura corante mais gua de colorao. O contacto do sangue estendido com a
mistura far-se- por capilaridade.
3. gua de colorao (gua tamporada pH = 7,0)
KH2PO4.................................................
1g
Na2HPO4. 2H2O....................................
3g
H2O destilada q.s.p................................
1000 ml.
(*) Corante de May-Grunwald-Giemsa , mod. por Rosenfeld:
Giemsa...................................................
0,97 g
May-Grunwald.......................................
0,53 g
Mentanol (p.a).qsp.......................................
1000ml
Homogeneizar. Armazenar em frasco mbar. Filtrar antes do uso.