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POP - Setor de Imunohematologia
POP - Setor de Imunohematologia
POP - Setor de Imunohematologia
Assinatura:
1. OBJETIVO E APLICAO:
O objetivo da padronizao o melhor aproveitamento tcnico dos reagentes, mais
agilidade e confiabilidade nos exames realizados no setor de imunohematologia da
agncia transfusional do HUJM, obedecendo a (Portaria No1353 de 13 de Junho de
2011).
2. OBJETIVOS GERAIS:
Identificar o Grupo Sangneo, realizar Coombs dirteo e pesquisar anticorpos
irregulares dos pacientes do HUJM.
3. OBJETIVO ESPECFICO:
Apoio tcnico nas investigaes imunohematolgicas para pacientes do HUJM.
4. PRINCPIO:
Determinar o Grupo ABO: A tipagem sangnea direta pesquisa a presena de
antgenos ABO nas hemcias teste e a reversa seus anticorpos correspondentes
utilizando hemcias conhecidas A1 e B. Caso haja necessidade ser feita a pesquisa de
subgrupos de A e AB.
Determinar o Fator Rh: Na determinao do tipo Rho (D), obrigatrio o uso do soro
anti-D e do controle Rh da mesmo fabricante e marca do soro Anti-D em uso, este
ltimo pela possibilidade da presena de auto-anticorpos e /ou protenas sricas
anormais.
Pesquisar Anticorpos Irregulares: Visa detectar anticorpos irregulares clinicamente
significantes no soro/plasma dos recm nascidos ou de suas mes, bem como de
pacientes do HUJM, consiste em testar o soro teste com hemcias conhecidas
(TRIACEL). Nos casos positivos devero ser identificados os anticorpos atravs do uso
de painel.
5. TIPAGEM SANGNEA ABO/ Fator Rh/Subgrupos
AMOSTRAS: Hemcias / soro ou plasma do doador
O tcnico do servio de Hemoterapia - SETOR DE COLETA dever colher s amostras
MTODO EM TUBO
PREPARAR SUSPENSO HEMCIAS:
Identificar um tubo de hemlise 120x100 mm com nmero do Doador
Hemcias suspensa em SALINA 3 a 5%
Identificar 01 tubo de hemlise 120x100 nmero do doador
Colocar - 1000 l Salina soro fisiolgico
Colocar - 75 l Hemcias do Doador no tubo identificado
SEPARAO DO SORO
Centrifugar o tubo sem anticoagulante 3 min / 3400 rpm.
Separar o soro do doador em um tubo de hemlise j identificado.
CLASSIFICAO SANGUNEA ABO/Rh
O sistema ABO primeiro sistema de grupo sangneo descoberto, o nico onde
anticorpos estaro certamente presentes no soro de indivduos que no possuam o(s)
antgeno(s) correspondente(s). o sistema mais importante para a prtica
transfusional. A classificao direta pesquisa a presena dos antgenos ABO nas
hemcias testes, usando anti-soros, enquanto a reversa pesquisa seus anticorpos
correspondentes no soro, utilizando hemcias comerciais.
Identificar os tubos 120 x 100 mm com caneta de retro projetor
DIRETA
AB
Rh
CR
h
HA
HB
REVERSA
1. Colocar
2. Colocar
50 ul hemcias A1 no tubo HA
50 ul hemcias B no tubo HB
50 ul Suspenso Hemcias do doador nos tubos de A a CRh
3.
4.
5.
6.
7.
INTERPRETAO:
Reagentes / Grupo
ABO
A
B
AB
O
Soro
Anti-A
+
+
-
DIRETA
Soro
Anti-B
+
+
-
Soro
Anti-AB
+
+
+
-
REVERSA
Hemcias Hemcias
A1
B
+
+
+
+
PESQUISA de D-fraco:
Pegar os 02 tubos de hemlise identificados Rh e CRh que deram negativos
Incubar os 02 tubos - Rh e CRh em Banho Maria a 37C durante 15 minutos
Retirar os tubos do BM e centrifuga-los a 3400 rpm por 15 segundos
Fazer a leitura para presena ou ausncia de aglutinao
Quando negativo realizar a lavagem 3 x com soro fisiolgico
Desprezar o sobrenadante e secar bem os tubos
Adicionar soro de Coombs (Anti IgG) 100 ul, homogeneizar bem os tubos
Centrifugar a 3400 rpm por 15 segundos
Fazer a leitura
Se houver ausncia de aglutinao nos 02 tubos:
Pingar Controle de Coombs 50 ul cada tubo
Homogeneizar, centrifugar a 3400 rpm por 15 segundos e fazer a leitura.
Para que o teste seja validado os tubos devem dar positivos, caso contrrio reiniciar
todos os procedimentos.
D fraco
A caracterstica de reagir de modo atpico com anti-D apresentada por algumas clulas
foi descrita por Stratton, em 1946, como sendo tais clulas portadoras do fentipo
D-fracas. De acordo com a descrio original, esse fentipo no reagia ao mtodo de
aglutinao direta, mas podiam ser expressos com o uso da tcnica de AGH indireto
(Coombs Indireto). Atualmente sabemos que a diferena entre D Positivo e D-fraco
quantitativa, no qualitativa. A maioria dos soros monoclonais utilizados regularmente
nas rotinas capaz de detectar a maioria das amostras que foram at ento
classificadas como D-fraco.
D Parcial
As hemcias que ao ser testado com antisoros monoclonais apresentarem resultados
negativos para o antgeno D, ou seja, Rh negativo devero ser testadas novamente
utilizando-se reagentes de origem humana, policlonais para determinao da
possibilidade de tratar-se de um D categoria. Sabe-se que a presena de epitopos de
um antgeno D parcial capaz de determinar a formao de um anticorpo
correspondente.
II
II
A. Negativo
ao
MT-
REAGENTES:
Estojo contendo no mnimo 10 hemcias de adultos em pool de hemcias de cordo de
grupo O, contendo a maior combinao de 3/5%, obtidas comercialmente ou preparadas
diariamente no laboratrio a partir de uma populao de doadores locais (no
aconselhvel).
Soluo fisiolgica.
Soro anti-humano (poli especfico).
Reagente comercial de hemcias controle, recobertas por anticorpos IgG
Albumina bovina a 22% (opcional).
MATERIAIS:
Centrfuga sorolgica de mesa.
Estante de metal, porta tubos.
Pipeta automtica 50 l e 100 l e 1000 l.
Tubos de ensaio 10 x 75 mm.
Negatoscpio para leitura.
PROCEDIMENTO:
1. Identificao de Anticorpos Irregulares (mtodo tubo)
2. Identificar 11 tubos de 10x75 mm, dispensar 50 ul das hemcias de painel
correspondente. Incluir tambm 01 tubo de autocontrole, dispensando 1 gota das
hemcias testes, em suspenso de 3-5%.
PROCEDIMENTO:
1. Preparar uma bateria de tubo 10x75 mm identificando-os como: 1/1, 1/2, 1/4, 1/8,
1/16, 1/32, 1/64, 1/128, 1/256, 1/512, 1/1024, 1/2048 e 1/4096, para uma titulao
seriada.
2. Com exceo do tubo 1/1, adicionar 100 l de salina em todos.
3. Adicionar 100 l do soro a ser testado aos tubos 1/1 e 1/2.
4. A partir do tubo 1/2 transferir 100 l da mistura para o tubo seguinte
sucessivamente.
5. Reservar a ponteira no tubo 1/4096, caso seja necessrio continuar as diluies.
6. Com exceo do tubo 1/4096, adicionar 50 ul da suspenso de hemcias contendo o
antgeno correspondente a tipagem reserva do soro teste.
7. Incubar em temperatura ambiente por 20 minutos.
8. Centrifugar por 15 segundos a 3400 R.P.M.. ou 1 minuto a 1000 R.P.M..
9. Realizar leitura e anotar os resultados.
INTERPRETAO: Considerar como titulo a maior diluio do soro onde se observa
aglutinao fidedigna. Em caso de soro teste O, efetuar uma bateria para Anti-A e
outra para Anti-B. Soros de grupo AB, no tero titulo de isohemaglutininas.
10. DIFERENCIAO ENTRE AGLUTINAO E FNOMENO DE ROLEAUX
OBJETIVO: Descartar uma reao de falsa aglutinao
PRINCPIO: O fenmeno de Roleaux, confundido com o de aglutinao, pode ser
identificado microscopicamente e caracterizam-se por aderncia das hemcias umas as
outras se assemelhando uma pilha de moedas. importante tambm conhecer o
diagnstico do paciente e o meio diluente dos reagentes usados (protico ou salino).
Pois, sabe-se que as globulinas normalmente esto aumentadas quando a proporo 2:1
de albumina: globulina est invertida.
MATERIAIS:
Centrfuga sorolgica de mesa.
Estante de metal, porta tubos.
Pipeta automtica 50 l e 100 l e 1000 l.
Tubos de ensaio 10 x 75 mm e Negatoscpio para leitura.
REAGENTES: Soluo fisiolgica.
Bioqumico
Tcnico de laboratrio.
Auxiliar de analises clinica.
13. COMENTRIOS: Este manual foi elaborado e implantado para ser seguido por
todos os profissionais envolvidos, padronizando todas as atividades desenvolvidas
neste setor.