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Ouro Branco
Novembro/2010
Resumo
O experimento teve como objetivo aplicar o método de Lowry a um material
biológico, no caso, soro de leite, para dosagem de proteínas totais. Para que o objetivo
fosse atingido foram realizados alguns cálculos em conjunto com os resultados
experimentais. Os resultados obtidos estão um pouco fora dos valores esperados, mas
pode ter sido causado por algum sistemático durante o experimento.
Introdução
As proteínas são as moléculas orgânicas mais abundantes e importantes nas
células, uma vez que são fundamentais sob todos os aspectos da estrutura e função
celulares. Existem muitas espécies diferentes de proteínas, cada uma especializada para
uma função biológica diversa. Além disso, a maior parte da informação genética é
expressa pelas proteínas. Pertencem à classe dos peptídeos, pois são formadas por
aminoácidos ligados entre si por ligações peptídicas [1].
As proteínas do soro do leite, também conhecidas como whey protein, são
extraídas durante o processo de fabricação do queijo. Possuem alto valor nutricional,
contendo alto teor de aminoácidos essenciais, especialmente os de cadeia ramificada.
Também apresentam alto teor de cálcio e de peptídeos bioativos do soro [2].
A Tabela 1 apresenta o teor de proteínas em alguns alimentos de origem animal
[3].
Materiais e métodos
Para a realização do experimento, primeiramente foram preparadas seis soluções
de BSA de 0,2 mL cada uma com concentrações diferentes. Adicionou-se a cada
solução um reagente E e o reagente de Folin – Ciocalteau.Em seguida, fez-se a leitura
de absorbância nas seis soluções de BSA e anotou-e os resultados que estão
representados na Tabela 2.
Foram preparadas também duas amostras. Para a amostra 1, mediu-se 5 mL de
leite e adicionou-se 30 mL de H2O em um béquer de 100 mL. Em seguida, acrescentou-
se ácido clorídrico 5M com uma pipeta de 2 mL até ocorrer a coagulação do leite.
Anotou-se o volume de ácido gasto. Filtrou-se a solução. O material retido no papel de
filtro foi descartado, o filtrado foi utilizado no experimento como amostra 1.
Para a amostra 2 diluiu-se o leite em 1/80 com H2O destilada ( 1 mL de leite +
79 mL de H2O).
Enumerou-se três tubos de ensaio em duplicata e preparou-se as soluções de
acordo com o volume estabelecido na Tabela 1.
Resultados e discussão
O primeiro passo para calcular a concentração de proteínas totais no soro do leite
foi construir a curva padrão de BSA (concentração de BSA versus absorbância).
A Tabela 3 mostra o volume que foi gasto de solução de BSA e de água
destilada na preparação dos seis tubos de ensaio, a absorbância e a concentração em
cada tubo.
Tabela 3 – Volume gasto de solução de BSA e de H2O para o preparo dos tubos, absorbância e
concentração das soluções.
Tubo Volume de solução Volume de H2O Absorbância a
µL
1 0 200 0
2 40 160 0,187 / 0,190
3 80 120 0,323 / 0,326
4 120 80 0,430 / 0,442
5 160 40 0,536 / 0,547
6 200 0 0,623 / 0,630
Com esses valores foi construiu-se a curva padrão da proteína BSA, que está
mostrada na Figura 1.
Amostra 1
A concentração de proteínas na amostra 1 foi calculada a partir da
equação da reta da curva padrão de BSA. Portanto, de forma a obter a concentração,
empregou-se:
x=y-ba mg/mL
x=0,4355-0,0450,307 mg/mL
x=1,272 mg/mL
Por se tratar de uma amostra diluída foi preciso encontrar o fator de diluição, que
é dado por:
Fator de diluição = volume totalvolume inicial
Amostra 2
A concentração de proteínas na amostra 2 foi calculada a partir da
equação da reta da curva padrão de BSA. Portanto, de forma a obter a concentração,
empregou-se:
x=y-ba mg/mL
x=0,3165-0,0450,307 mg/mL
x = 0,884 mg/mL= 0,884 g/L
Por se tratar de uma amostra diluída foi preciso encontrar o fator de diluição, que
é dado por:
Fator de diluição = volume totalvolume inicial
O volume total é dado por:
[1]http://www.enq.ufsc.br/labs/probio/disc_eng_bioq/trabalhos_pos2003/const_microor
g/proteinas.htm, acessado em 28/10/2010.
[4]http://www.molecularstation.com/pt/protein/lowry-protein-assay, acessado em
29/10/2010.
[5]http://www.moodle.ufba.br/mod/forum/discuss.php?d=23032, acessado em
29/10/2010.