UNIVERSIDADE FEDERAL DO PAR INSTITUTO DE TECNOLOGIA FACULDADE DE ENGENHARIA QUMICA

Disciplina: Qumica Orgnica Experimental Prof: Eloisa Helena de Aguiar Andrade

Ana Raquel Oliveira Louzeiro Daniel Nascimento dos Santos Eder Jos Pereira Jnior Henrique Fernandes Figueira Brasil Jssica Maria Morais Costa Raimunda Nonata Consolao e Branco

RELATRIO REFERENTE EXTRAO DO LEO ESSECIAL DA CASCA DA LARANJA (Citrus

sinensis) E ANLISE CROMATOGRFICA ACOPLADA A UM ESPECTRMETRO DE MASSA

Belm, 29 de abril de 2010

1. REVISO BIBLIOGRFICA A utilizao e o conhecimento das propriedades dos leos essenciais remontam a 4.500 a.C., aproximadamente, onde os egpcios provavelmente foram os primeiros a destilar plantas com o intuito de extrair os seus leos essenciais, ainda que hoje no se tenha completamente documentado o incio realmente exato das extraes. Naquela poca, o principal intuito dos egpcios em extrair leos era us-los em rituais fnebres, para embalsamar os mortos, assim como em cerimnias religiosas, embelezadores de pele, perfumes, pomadas medicinais, etc. H tambm relatos da extrao de leos essenciais pelos chineses em 2.700 a.C., no livro sobre ervas mais antigo do mundo, o qual se chama Shen Nung. Outro uso documentado de leos essncias se deu em 2.000 a.C., em livros escritos em snscrito, pelos hindus. J havia, na poca, um conhecimento rudimentar de aparatos de destilao. Com o passar do tempo, os mtodos de extrao de leos essenciais diversificaram-se e vem sendo constantemente aperfeioados (site 1). O leo definido como sendo uma parte do metabolismo de um vegetal composto geralmente por terpenos, compostos encontrados em sementes, flores, folhas, razes e madeira de plantas superiores assim como em musgos, algas e liquens, que esto associados ou no a outros componentes. A maioria desses componentes voltil e geram em conjunto o odor do vegetal. Fsico-quimicamente falando, os leos essenciais possuem instabilidade luz, ao oxignio, presena de oxidantes, redutores, meios com pH extremos, ou meios traos de metais que podem catalisar reaes de decomposio. A composio qumica dos leos essenciais depende de vrios fatores, principalmente da origem da planta, por isso cada leo tem uma composio qumica especfica. Sendo que um leo essencial pode ser composto por mais de 300 componentes qumicos diferentes, o que faz dele um produto bastante valorizado. Apesar de alguns autores afirmarem que os leos essenciais constituem-se em uma mistura de substncias volteis, verifica-se que geralmente os constituintes principais do mesmo possuem elevada temperatura de ebulio, na faixa de 150 a 300C, e baixa presso de vapor, indicando assim, menor volatilidade em relao gua pura e aos outros constituintes do leo. Devido a esta caracterstica, recomendam-se

alguns leos essenciais, com temperaturas de ebulio na faixa de 285 a 300C, como fixadores de fragrncias, para retardarem e uniformizarem a velocidade de evaporao dos diversos constituintes odorferos de um perfume (GUIMARES, 2000). Os leos essenciais se designam assim por apresentarem caractersticas fsicoqumicas bem definidas, tais como: serem geralmente lquidos de aparncia oleosa temperatura ambiente; consistem de substncias volteis e fixadoras que apresentam, em sua maioria, aroma agradvel e intenso, o que os diferencia de leos fixos, que so misturas de substncias lipdicas obtidas normalmente de sementes; so ainda solveis em solventes orgnicos apolares, como o ter etlico, recebendo, por isso o nome de leos etreos; possuem ainda uma solubilidade limitada em gua, mas suficiente para aromatizar solues, as quais so chamadas de hidrolatos, ou seja, a gua perfumada que se obtm quando ocorre a destilao da planta na obteno o leo essencial. Os leos essenciais podem estar presentes em diferentes partes do vegetal, que pode ser desde nas flores, bem como nos botes, folhas, ramos, casca, semente, frutos, lenho, razes e rizomas. Devido aos leos essenciais se encontrarem armazenados em estruturas especficas, tais como glndulas finas da epiderme, tubos de leo no pericarpo ou isolados em clulas no tecido da planta, requerido certo tempo para remoo do leo do material da planta, que ir depender fortemente da estrutura do local onde este leo se encontra. Para as tcnicas experimentais que foram realizadas no Laboratrio de Qumica Orgnica da Universidade Federal do Par, sob superviso da professora Eloisa Andrade, o material botnico utilizado para extrao do leo essencial foi a laranja (Citrus sinensis, Rutaceae), da qual se utilizou a sua casca (epicarpo e mesocarpo). As laranjas foram adquiridas em supermercados e feiras livres no municpio de Belm/PA e em mdia elas haviam sido compradas trs dias antes da realizao da extrao. Posteriormente, com auxlio de uma faca, retiraram-se as cascas das laranjas. Aps a separao, as cascas foram cortadas para a realizao do procedimento de extrao do seu leo essencial.

Figura 1 - Laranja

O mtodo de isolamento do leo essencial a partir de plantas depende principalmente, entre outros fatores, do tipo de material a ser processado. Dentre os mtodos existentes, destacam-se a destilao com gua (hidrodestilao), a destilao por arraste com vapor, a destilao com gua e vapor, a prensagem, a extrao por microondas, a extrao com CO2 supercrtico, a macerao (eufleurage) e a extrao com solventes orgnicos. O mtodo utilizado no Laboratrio de Qumica Orgnica Experimental foi o de hidrodestilao. A hidrodestilao um mtodo de extrao simples e consiste em um sistema onde a matria prima colocada juntamente com gua. O balo contendo a mistura ligado a um condensador por onde h fluxo de gua para refrigerao. A mistura gua e matria prima so aquecidas diretamente. O vapor produzido na destilao condensa-se no condensador e recolhido. A separao se faz facilmente pelo fato do leo e gua no serem miscveis. Aps a extrao do leo essencial, de grande importncia a realizao de anlises de carter fsico e qumico no leo obtido. Fisicamente, os leos essenciais podem ser analisados quanto a sua massa especfica (relao massa por volume), umidade (quantidade de gua existente no leo), viscosidade (resistncia que o leo apresenta ao escoamento, calorimetria (estudo de sua cor), ndice de refrao (capacidade do leo em refratar a luz polarizada). Com relao s anlises qumicas, pode ser usada a cromatografia em camada delgada, a cromatografia lquida de alta eficincia, a cromatografia gasosa acoplada espectrometria de massas, entre outras. A cromatografia faz parte de um importante grupo de mtodos de separao, que permite separar, isolar, identificar e quantificar substncias qumicas, mesmo em misturas muito complexas.

Foi realizada a anlise qumica no Laboratrio de Instrumentao Cientfica (LABIC), situado no Laboratrio de Engenharia Qumica na Universidade Federal do Par, a qual consistiu na anlise cromatogrfica gasosa acoplada espectrometria de massas. A cromatografia gasosa acoplada espectrometria de massas aquela em que a fase mvel um gs e a estacionria, um slido ou um lquido. A cromatografia gasosa isoladamente apenas identifica as substncias presentes, j a espectrometria de massa tambm as quantifica, por isso utilizou-se um cromatgrafo gasoso acoplado a um espectrmetro de massa. As principais caractersticas dessa tcnica so as seguintes: I. A fase mvel um gs quimicamente inerte. II. Nas condies cromatogrficas escolhidas para a anlise s possvel analisar substncias volteis (ou derivados volteis gerados a partir de reaes qumicas apropriadas). A funo do gs usado como fase mvel apenas a de carrear os componentes da amostra atravs da coluna, sem participar dos processos de interao. Por este motivo chamado gs de arraste. Exemplos de gases mais utilizados nessa tcnica so o He, H2 e o N2 (CIOLA, 1973). O registro das substncias presentes no leo ser expresso a partir de um cromatograma, que mostrar o sinal da substncia presente em funo do tempo, sendo que essas substncias aparecem no cromatograma como picos com rea proporcional sua massa, o que possibilita a anlise quantitativa. A partir da anlise cromatogrfica gasosa acoplada a um espectrmetro de massa, pode-se confirmar a deteco de aproximadamente 28 substncias no leo essencial da casca de laranja, dentre as quais apenas trs apresentaram quantidades significativas na amostra, so elas: limoneno, mirceno e linalol. Classifica-se o limoneno (C10 H16, 1-metil-4-isopropenilcilohex-1-eno) como um hidrocarboneto natural, cclico e insaturado, fazendo parte da famlia dos terpenos. Apresenta-se temperatura ambiente como um lquido, lmpido, incolor e oleoso. Ocorre naturalmente em certas rvores e arbustos, sendo o maior constituinte de muitos leos essenciais, nomeadamente dos pinheiros e dos citrinos. tambm o principal

componente voltil existente na casca da laranja e do limo, sendo um dos responsveis pelo odor caracterstico dessas frutas. O limoneno uma substncia qumica muito verstil, o qual tem inmeras aplicaes prticas. Pode ser usado diretamente como solvente ou como um produto dissolvido em gua. Como solvente direto, o limoneno pode substituir uma larga variedade de produtos, incluindo metil etil cetona, acetona, tolueno, glicol teres e solventes orgnicos clorados ou com flor. Como a maioria dos solventes orgnicos, este composto no solvel em gua, por isso pode ser usado em unidades de separao de gua. Esta substncia frequentemente usada como aroma e/ou fragrncia nos alimentos, em perfumes e em produtos domsticos de limpeza ( extremamente seguro e mais eficaz que as solues de limpeza tpicas). tambm usado como um intermedirio qumico, bem como na fabricao de resinas de politerpeno, e um bom repelente de insectos. Utiliza-se ainda como na tinta solvente, para limpar metais antes de uma pintura industrial, para limpar na industria electrnica e de impresso (site 2).

Figura 2 - Estrutura molecular do limoneno

Outro componente presente em quantidade significativa no leo essencial da casca da laranja o mirceno ou -mirceno (C10H16, 7-Metil-3-metileno-

1,6-octadieno), que um composto orgnico oleofnico natural. classificado mais precisamente como um monoterpeno, que um dmero do isopreno. O mirceno um componente do leo essencial de algumas plantas incluindo loureiro, verbena, laranjeira, pinheiro e outras plantas. produzido principalmente semi-sinteticamente das plantas do gnero Myrcia (do qual toma seu nome). um intermedirio chave na produo de diversas fragrncias.

Figura 3 - Estrutura molecular do mirceno

O terceiro componente presente em aprecivel quantidade no leo essencial da casca da laranja o linalol (C10H16O, 3,7-dimetil-octa-1,6-dien-3-ol), o qual se

classifica tambm como um monoterpeno, referido como um componente prevalente nos leos essenciais em vrias espcies de plantas aromticas. um importante componente qumico aromtico largamente usado como fixador de fragrncias na indstria cosmtica mundial. O linalol apresenta vrias atividades farmacolgicas sobre o sistema nervoso central, entre elas, sedativa, hipntica e anticonvulsivante (site 3).

Figura 4 - Estrutura molecular do linalol

2. MATERIAL E MTODOS Extrao do leo essencial

Material: extrator de Clevenger, balo de destilao, manta aquecedora, pedras de porcelana, material botnico (casca de laranjas) Procedimento: O material botnico a ser extrado foi cortado em pequenos pedaos, pesado e transferido para um balo de destilao de 1L. A massa pesada foi de 204,6 g. A este balo, foram adicionadas pedras de porcelana a fim de se evitar o superaquecimento e uma ebulio tumultuosa. Adicionou-se gua destilada num volume que corresponde metade do volume do balo (500 mL). Ao balo foi conectado o alonga e a este, o extrator de Clevenger. Esta aparelhagem foi acoplada a um sistema de refrigerao (10C - 20C) que objetiva preservar os componentes mais volteis do leo. Iniciou-se o aquecimento.

Figura 5 - Extrator de Clevenger

No extrator de Clevenger, as substncias mais volteis destilam com o vapor dgua e condensam no sistema de refrigerao. Ao condensar, o leo extrado separado da gua ao colidir com uma modificao na estrutura do extrator. medida que o condensado retorna ao extrator, ele causa a coobao da gua, isto , seu retorno ao balo de destilao e faz com que o processo ocorra em ciclos. A extrao inicia quando o vapor dgua com o leo condensa. Aps o incio da extrao, percebeu-se que o leo extrado possui uma colorao esbranquiada, quase incolor. Sendo menos denso que a gua, ficou na parte superior, sobre a gua.

Aps 1 hora do incio da extrao, desligou-se o aquecimento e fez-se a leitura do volume do leo obtido (2,8 mL). Para eliminar traos de gua que ainda esto presentes no leo, o mesmo coletado em um tubo de centrfuga e levado centrifugao por 3 minutos. Depois, adicionou-se uma pequena quantidade de Na2SO4 e realizou-se uma filtrao simples. O filtrado foi levado novamente centrifugao. O leo extrado deve ser armazenado em refrigerador. Se a armazenagem for feita de forma adequada, a composio do leo permanecer a mesma independente do tempo em que for armazenado.

Cromatografia gasosa acoplado a espectrometria de massa

Material: cromatgrafo automtico, espectrmetro de massa, leo essencial da casca de laranja, hexano. Procedimento: Primeiramente, um volume de leo de 2 L foi misturado com 1 mL de hexano e armazenado em um frasco pequeno, bem fechado, que foi levado para a anlise cromatogrfica. A caracterizao das substncias na amostra foi realizada atravs da cromatografia gasosa de alta resoluo e espectrometria de massa, tcnica amplamente utilizada na anlise de aromas. O cromatgrafo do tipo automtico, com coluna capilar de 0,250 mm de dimetro e 30 m de comprimento, sem detector, com linha de transferncia e multiplicador de eltrons, utilizando-se o gs hlio, o volume da injeo foi de 0,1 L e o tempo de reteno de 20min. A temperatura do injetor era de 250C.

3. RESULTADOS E DISCUSSO Clculo do rendimento da extrao do leo essencial

volume de leo o tido massa de material ot nico a ser extrado , m x 100 , g

%=

x 100

%=

% = 1,37 % (mL/g) O rendimento obtido est de acordo com outras literaturas que utilizaram o mesmo mtodo, como a de ASTOLFI et al. (2007) e FERNANDES (2006), isto evidencia que as condies de extrao foram favorveis e maximizaram o processo. Quanto s caractersticas organolpticas do leo, observou-se um aroma agradvel e muito semelhante fruta original, o que confere ao leo grande potencial de uso como aromatizante ou perfume. No final da anlise, foi obtido o cromatograma abaixo:
RT: 2,15 - 17,14 100 95 90 85 80 75 70 65 60 55 50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0 4,08 4 4,72 6,20 7,62 6 8 7,70 10,15 11,93 12 12,29 14,54 15,84 14 16 5,30 NL: 1,17E9 TIC F: MS EQ12

Relative Abundance

10 Time (min)

No cromatograma cada pico representa uma substncia e a rea sob a curva de cada constituinte proporcional sua quantidade na amostra. Abaixo esta a tabela com as porcentagens de rea dos 3 principais constituintes.

EQ.RAW TR (4,7) (5,3) (6,2)

Constituintes principais 1 Mirceno 2 Limoneno 3 Linalol %rea 2,38 93,57 2,25

Na analise cromatogrfica com espectrometria de massa, utilizando-se um tempo de reteno de 20min, foram detectadas ao todo 28 substncias, dentre as quais apenas 3 apresentaram quantidades significativas na amostra, so elas: Limoneno (93,57%), Mirceno (2,38%) e Linalol (2,25%). O Limoneno, 1-metil-4-isopropenilciclohex-1-eno; o Mirceno, 7-Metil-3metileno-1,6-octadieno; e o Linalol, 3,7-dimetil-octa-1,6-dien-3-ol, so todas substncias volteis pertencentes a classe dos moterpenos. O Limoneno a substancia mais abundante tem grande papel na industria farmacutica e alimentcia.

4. REFERNCIAS Site 1: www.copper-alembic.com Site 2: www.dq.fct.unl.pt Site 3: www.qprocura.com.br ASTOLFI, V.; BORGES, L. R.; RESTELLO, R. M.; MOSSI, A. J.; CANSIAN, R. L. Estudo do efeito repelente e inseticida do leo essencial das cascas de Citrus sinensis L. Osbeck no controle de Zeamais mots em gros de milho (Zea mays L.) In: VIII Congresso de Ecologia do Brasil. Caxambu, 2007. CAROL, H. C.; BRAGA, G. L.; BONATO, P. S. Introduo a Mtodos Cromatogrficos, Ed. UNICAMP, Campinas, 4 Ed., 1990 CIOLA, R.; Introduo Cromatografia em Fase Gasosa, Ed. Edgard Blucher, So Paulo, 1973 EWING, Galen W. Mtodos Instrumentais de Anlise Qumica.So Paulo, 2002. Editora Edgar Blcher. FERNANDES, R. E.; CARDOSO, M. G.; HOFFMANN, R. S. Aproveitamento da casca da laranja atravs da extrao de leos essenciais. In: XXI Congresso de Iniciao Cientfica e Tecnologia em Engenharia, VI Feira de Prottipos. Itu, 2006. GUIMARES, Pedro Ivo Canesso; OLIVEIRA, Raimundo Elito Conceio; DE ABREU, Rozana Gomes. Extraindo leos essenciais de plantas. Qumica nova na escola, N 11, maio 2000.

ANEXO I RESOLUO DAS QUESTES DO ROTEIRO DE QUMICA ORGNICA EXPERIMENTAL PAG 42 1. Qual a diferena entre a hidrodestilao e a destilao por arraste de vapor? Na hidrodestilao, o material botnico a ser extrado fica em contato com a gua no balo de destilao, enquanto que na destilao por arraste de vapor, eles so inseridos em diferentes espaos, onde somente o vapor dgua entra em contato com o material fazendo um arraste do leo essencial e estes so encaminhados para o sistema de refrigerao.