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com
Efeitos somticos
Do ponto de vista biolgico Efeitos genticos (hereditrios)
Reparo correto
DNA restaurado
DNA Lesado
DNA mutado
Apoptose
Clula Somtica
Clula Germinativa
Detectores Fsicos
Detectores Biolgicos
Limitao
DANO NO REPARADO
Ensaio Cometa
Dosimetria Biolgica
Dosmetros biolgicos
Altamente radiossensveis Populao naturalmente sincrnica de clulas Facilmente coletadas in vitro = in vivo
REPARO
DANO
DNA
DANO NO REPARADO
TCNICAS (EM NVEL CELULAR) Aberraes cromossmicas Microncleos Troca entre cromtides irms Cometa Hibridizao in situ Dosimetria biolgica Gentica toxicolgica Biomonitoramento Instabilidade genmica
Citogenticas
Bioqumicas Moleculares
QUEBRA EM G1
REJUNO
METFASE
FRAGMENTO ACNTRICO
REPLICAO
ESTIMATIVA DE DOSE ABSORVIDA frequncia de aberraes encontadas em linfcitos de indivduos expostos Curvas dose - resposta LINFCITOS dosmetros biolgicos frequncia observada em lifcitos irradiados in vitro com doses conhecidas
- altamente radiossensveis - populao naturalmente sincrnica de clulas -ampla distribuio corprea - facilmente coletadas - in vitro = in vivo
Moorhead et al. (1960) - desenvolvimento de tcnicas de cultivo de linfcitos humanos in vitro, utilizando um mitogno. Linfcitos (G0 G1) clulas blsticas MITOSE
Bender e Gooch (1962) - propuseram a anlise de aberraes cromossmicas para a avaliao quantitativa de dose absorvida de radiao. Colcemid bloqueia a mitose na metfase
- Coleta do sangue (5 mL) - Fracionamento de amostras sanguneas e irradiao com vrias doses (10-500 cGy) - Cultivo a 37oC sangue total + meio de + soro fetal + mitognico + antibitico (0,5 mL) cultura bovino PHA - Adio de colchicina (2h antes da fixao) - Adio de soluo hipotnica (KCl 0,075 M) - Fixao com metanol + cido actico (3:1) - Preparao de l6aminas: fixao a 65oC - Colorao com Giemsa a 2% 1a diviso em cultura: 40 54 h -BrdU -critrios 48h padronizao da tcnica obteno de curva - padro 2a diviso: 72 h
Cada laboratrio
- Sensibilidade da tcnica: estimativa de dose, da ordem de 5 cGy de radiao de baixo LET - para cada dose de radiao: pelo menos 100 metfases analisadas
CROMOSSOMOS
Trocas entre cromtides irms em cromossomos mitticos. Corados com Hoechst 33238 e acridine orange, observados ao microscpio de fluorescncia
Todos os tipos de radiao ionizante mesmo tipo de aberraes cromossmicas em clulas expostas Frequncia de aberraes induzidas depende da dose, depende do tipo de radiao LET = quantidade de E depositada na matria por unidade de comprimento do trajeto (keV/m)
xxxxxxxx x x x x x x x x
Ilustrao diagramtica da densidade de ionizao relativa por alvo de uma trajetria simples para radiao de alta e baixa LET
Curva dose resposta para dicntricos induzidos em linfcitos sanguneos humano, expostos in vitro ao 60 Co com taxa de dose de 5 cGy.min.-1
y = + D+ D2
Origem
Tamanho- 1
Indicadores - agentes clastognicos - agentes aneugncios Schmidt (1975) clulas da medula ssea de camundongos Countryman e Heddle (1976) relao quantitativa entre a dose e a frequncia de MN em linfcitos humanos
METFASE
CLULA MICRONUCLEADA
CLULA NORMAL
CLULA MICRONUCLEADA
Fenech & Morley (1985) cytokinesis block method Citocalasina B Helminthosporum dematoideum inibe a citocinese, mas no a carciocinese clula binucleada (1 diviso nuclear) Cultivo: adio de cito B, 44 horas aps tratamento isotnico preservao do citoplasma para cada dose 500 clulas binucleadas Desvantagem - no oferece toda a informao - 10 a 12 MN / 1000 binucleadas Vantagens - relativamente simples e sensvel - anlise mais rpida - bom indicador de dano gentico - magnitude do dano ocorrido
Microncleos
Origem
Teste do MN
Agentes Clastognicos
Agentes Aneugnicos
Biomarcador
Curto ciclo de vida Fcil manuteno em laboratrio Resposta rpida e precisa Boa reproduo
MNZINGER 1987; MOTTA, 1997; CANTINHA, 2008
33
CRESCIMENTO
FENT, 2004
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MONITORAMENTO
Anlises qumicas
Biomonitoramento
Tcnicas Biomonitoramento
Teste do MN
BARSIENE et al., 2006, CAJARAVILLE et al., 2000
35
Dosimetria Citogentica
Biomonitoramento Ambiental
Mundo
Brasil
Acidente de Chernobyl
Microncleo
Aberraes Cromossmicas 36
UNSCEAR, 2000; IAEA, 2001; RIBEIRO et al., 2003; RAMALHO; NASCIMENTO, 1991; CRISTALDI et al,1991
37
38
39
Ostling & Johanson (1984) tcnica eletrofortica de microgel condio neutra quebra na dupla fita
stios lcali-lbeis
Rpida
Tipo de leso Quebra fita dupla (dsb) Quebra simples fita (ssb) Dano na base Dano no accar ligaes cruzadas (crosslinks) DNA DNA ligaes cruzadas DNA protenas Stos lcali lbeis
Nmero por gray 40 500 1000 1000 2000 800 1600 30 150 200 - 300
-DNA nuclear altamente organizado -Molcula de DNA de clulas de eucarioto -(50 100 cm de comprimento)
105 x
ncleo (5-10 m
DNA do nucleide
-
rea do Cometa Tail moment = quantidade DNA X comprimento na cauda da cauda intensidade de
fluorescncia
Anlise direta do dano no DNA em nvel de clula individual Quantidade pequena de clulas ( da ordem de L) Relativa facilidade na obteno de dados Anlise de 50 clulas / dose Sensibilidade: 5 cGy de radiao de baixa LET Estudo de danos no DNA e reparo: danos oxidativos, dosimetria biolgica, biomonitoramento e estudos de apoptose
Radiao de 60Co
Radiao de 60Co
Radiao de 90Sr
As clulas, englobadas em gel e espalhadas sobre uma lmina, so submetidas a uma corrente eltrica que age como uma fora proporcionando a migrao dos segmentos de DNA livres, resultantes de quebras, para fora do ncleo.