INTRODUO CITOLOGIA A citologia, tambm chamada citopatologia, uma especialidade que analisa microscopicamente a morfologia celular, alm das

s alteraes decorrentes de patologias relacionadas. COLEMAN (1989) relata que seu surgimento ocorreu no sculo XIX, junto de melhores microscpios e teorias celulares, iniciando com anlise de lquidos corporais. Em seguida, alteraes patolgicas foram estudadas atravs da observao de clulas tumorais. Tais estudos contriburam para descrio de pleomorfismo estrutural, alteraes nucleares e relao ncleo citoplasma. Ao comentar o surgimento da citologia, no pode ser esquecido George N. Papanicolaou. Ele iniciou seus estudos com porquinhas da ndia, investigando alteraes cervicais decorrentes de mudanas hormonais. Essa pesquisa foi posteriormente estendida mamferos. Durante seus trabalhos, Papanicolaou desenvolveu uma tcnica de confeco e colorao a qual recebeu seu prprio nome (COLEMAN, 1989). Com a ajuda de outros profissionais com mesmo objetivo, Papanicolaou divulgou a importncia da citologia, tornando-a um mtodo reconhecido pela classe mdica. Atravs de sua tcnica de colorao, a morfologia das clulas cancerosas foi descrita o que o levou a incentivar o uso de tal tcnica como mtodo de rastreamento de cncer no colo do tero. Atualmente, a tcnica de Papanicolaou utilizada em todo o mundo e tem contribudo para a reduo da mortalidade por cncer do colo uterino (COLEMAN, 1989; GOMPEL e KOSS, 1997; TUON, 2002; DERCHAIN, FILHO e SYRJANEN, 2005). De um modo geral, podemos dividir a citologia como ginecolgica e no-ginecolgica. Na primeira temos a anlise da regio cervical feminina, sendo utilizada para triagem populacional no rastreio de leses cervicais, alm de avaliao da secreo vaginal. Em noginecolgica, encontram-se os materiais procedentes de outras reas do corpo como, por exemplo, mama, pulmo e cavidade abdominal (QUEIROZ e LIMA, 2000). As amostras para exame citolgico podem ser obtidas por meio de duas maneiras diferentes, que esto relacionadas com o tipo de citologia chamado. Quando a amostra for coletada por meio de esfoliao, raspado ou abraso, chamamos de citologia esfoliativa. J quando o realizada uma puno, denominamos citologia aspirativa a qual pode ser representada pela Puno Aspirativa com Agulha Fina (PAAF). Os espcimes obtidos tambm podem ser provenientes de outros procedimentos, como por meio de broncoscopia em caso de lavado bronco-alveolar (COLEMAN, 1989; MCKEE, 1997; QUEIROZ e LIMA, 2000; DIGENE, 2004) A citologia crvico-vaginal o principal mtodo utilizado no rastreio do cncer do colo do tero, pois avalia e identifica graus de alterao celular do epitlio escamoso. Seu objetivo identificar leses malignas e pr-malignas, alm de auxiliar no diagnstico de infeces genitais e outras benignidades. O diagnstico feito a partir da anlise de lminas com esfregao de secreo vaginal e material do colo uterino. Com a deteco precoce das leses cancerosas com o auxlio da citologia, a mortalidade por cncer do colo do tero reduziu (TUON, 2002; DIGENE, 2004; ALBRING, BRENTANO e VARGAS, 2006; AMARAL et al, 2006; BUFFON, CIVA e MATOS, 2006). At a obteno de um diagnstico, a citologia compreende diversas etapas de processamento. Basicamente, a amostra coletada sendo posteriormente fixada, corada e analisada microscopicamente. Os fixadores utilizados para citologia ginecolgica so etanol a 95% e de cobertura. A colorao a de Papanicoloau e os laudos so liberados de acordo com o Sistema Bethesda. No Brasil, h um sistema de nomenclatura que e baseado no

Bethesda, porm, com algumas modificaes (QUEIROZ e LIMA, 2000; JUNIOR, 2003; BUFFON, CIVA e MATOS, 2006; BRASIL, 2006). Cada atividade do manuseio do material citolgico possui caractersticas e observaes que devem ser seguidas, para que seu objetivo seja alcanado. Caso alguma falha durante a obteno e o processamento da amostra ocorra, resultados erroneamente diagnosticados podem ser encontrados. Isso explica o grande problema da citologia, resultados falsonegativos, porm, falso-positivos tambm ocorrem, mas em menor freqncia (GOMPEL e KOSS, 1997; LORETO et al, 1997; QUEIROZ e LIMA, 2000; ARCURI et al, 2002; AMARAL et al, 2006). HISTRICO DA CITOLOGIA Os estudos celulares os quais so a base da citologia iniciaram no sculo XIX com o desenvolvimento industrial do microscpio ptico relacionado ao conhecimento de teorias relacionadas s clulas. Profissionais ligados cincia comearam a analisar microscopicamente materiais humanos como sangue, pus e secrees, descrevendo a morfologia celular observada. Mais tarde, com mais recursos, passaram a ser estudadas as alteraes celulares decorrentes da patologia das doenas e, com isso, foi se instalando a utilizao da citologia como mtodo de diagnstico (COLEMAN, 1989; GOMPEL e KOSS, 1997). Com a anlise das clulas, foram criados atlas os quais contriburam com os estudos posteriores. GOMPEL e KOSS (1997) relatam como primeiras publicaes o atlas Donn, em 1845, e o livro de Pouchet, em 1847, os quais apresentavam desenhos das clulas vaginais. Posteriormente novas imagens foram surgindo e tambm tendo sua qualidade melhorada, uma vez que j demonstravam caractersticas relacionadas patologias. Alm do avano relacionado s imagens, os termos utilizados em citologia tambm foram enriquecendo. Alguns pesquisadores, com o auxlio de suas prprias criaes, complementaram a deciso das caractersticas patolgicas das clulas utilizando a histologia como referncia, demonstrando tambm a importncia da bipsia (GOMPEL e KOSS, 1997). Em 1928 Babs e Papanicolaou tornaram a citologia um mtodo conhecido, porm, a comunidade mdica no o aceitou facilmente sendo necessria muita insistncia. Outros pesquisadores colaboraram demonstrando a importncia da citologia em leses que ficam, de certo modo, ocultas no colo uterino. Nessa poca de divulgao, a citologia se difundiu apenas em pases industrializados, nos quais estudos demonstraram que tiveram sua taxa de cncer invasivo do colo uterino diminuda (GOMPEL e KOSS, 1997). Com o grande entusiasmo devido sucesso na rea ginecolgica, Papanicolaou decidiu iniciar investigao de outros materiais como urina, lavado gstrico, ascite, secreo prosttica e fluido espinhal. Alm dele, outros pesquisadores podem ser citados como importantes contribuintes da citologia, entre eles: Alfred Donne e Lionel S. Beale (analisaram microscopicamente pus, sangue, ascite e urina), Dr F. Donaldson (estudos com clulas da superfcie de tumores), Henri Lebert (observou clulas de tumores slidos e csticos) e Johannes Mller (descreveu critrio de microscopia que diferenciava tumores benignos e malignos de acordo com a quantidade de tecido conectivo) (COLEMAN, 1989). Como resultados dos diversos trabalhos, foram descritos pleomorfismo estrutural, alteraes nucleares e da relao ncleo-citoplasma, porm, no foram esclarecidos a origem das clulas tumorais e os mecanismos de diviso e replicao celular (COLEMAN, 1989). Um

perodo de entusiasmo, assim definido por GOMPEL e KOSS (1997), se iniciou. A incidncia de cncer cervical invasivo e a mortalidade relacionada diminuram em grandes porcentagens o que fez com que fossem relatados apenas os pontos positivos relacionados citologia. As deficincias foram ignoradas at que estudos passaram a mostrar a subjetividade do exame citolgico, ressaltando os altos nmeros de resultados falso-negativos. Muitos clnicos defendiam que a bipsia proporcionava resultados mais satisfatrios em comparao com a citologia, alm de muitos exames serem diagnosticados erroneamente como inflamatrios devido amostra inadequada (COLEMAN, 1989). Vrios estudos se iniciaram em torno da citologia para corrigir as falhas relacionadas ela como: populao com acesso as campanhas de triagem, tcnicas de colheita e fixao da amostra e estabelecimento de normas para colorao, varredura das lminas e interpretao microscpica (GOMPEL e KOSS, 1997). Aps muito trabalho dos pesquisadores, a citologia passou a ser um mtodo de diagnstico aceito como uma especialidade. Ela se divide de acordo com a tcnica utilizada na coleta do material. Para materiais obtidos por meio de raspados ou escovados, chamamos citologia esfoliativa, enquanto para materiais coletados por aspirados ou puno chamamos citologia aspirativa (DIGENE 2004; COLEMAN, 1989). A citologia esfoliativa teve como seus iniciantes Julius Vogel, o qual examinou e diagnosticou um tumor prximo mandbula, e Lionel S. Beale que diagnosticou 19 um cncer de faringe. Ambos obtiveram o diagnstico por meio da citologia esfoliativa (COLEMAN, 1989). Com o passar dos anos a citologia foi se difundindo para as mais diversas reas como micologia (ARAJO et al, 2003), bacteriologia (CUSTDIO et al, 2003) e patologia anal (SILVA et al, 2005). A citologia crvico-vaginal, principal representante da citologia, se tornou exame de rotina para as mulheres (ARCURI et al, 2002). Atualmente, a tcnica de Papanicolaou utilizada em todo mundo por clnicas e hospitais como primeira linha de investigao de suspeita de doena maligna, contribuindo com a diminuio da incidncia de cncer de colo uterino (COLEMAN, 1989). Para um exame com qualidade importante que as etapas de sua realizao sejam bem feitas, como coleta/colheita, preservao da amostra, preparo das lminas e interpretao diagnstica (DIGENE, 2004). Como o controle de qualidade usual em laboratrios de citologia baseado na reviso de alguns exames, apenas os erros de m interpretao podem ser detectados. Diagnstico falso-negativo por ausncia de material diagnstico no descoberto porque sua fonte de erro a coleta inadequada de material (ARCURI, 2002). COLETA DO MATERIAL Podemos separar a coleta de acordo com o material a ser analisado, ou melhor, de acordo com a procedncia do material. A citologia fica divida em dois grandes grupos: citologia ginecolgica e citologia no-ginecolgica. De um modo geral, os materiais podem ser processados de forma direta, sendo centrifugados ou citocentrifugados. Apesar dos cuidados exclusivos para cada grupo, so indicadas algumas recomendaes para a realizao dos exames citolgicos em geral (MOURA, 1998): - Materiais viscosos, secrees vaginal e prosttica por exemplo, devem ser imediatamente fixados de modo que no sequem ao ar antes; as lminas so mergulhadas em lcool 95%. - Materiais lquidos que necessitam realizao de concentrao celular, como urina, lquido pleural e lquido asctico. Citologia Ginecolgica

QUEIROZ e LIMA (2000) relatam que Bebes, em 1928, utilizava uma ala de platina para a coleta cervical, sendo esse o primeiro instrumento utilizado. J Papanicolaou e Traut, por meio de uma pipeta de vidro, aspiravam o fluido vaginal, sendo ele a amostra a ser observada. Anos mais tarde, em 1944, o mdico canadense Ayre, criou uma esptula de madeira para realizar uma bipsia de superfcie, mtodo que foi utilizado aps sua publicao, em 1947. A esptula projetada por Ayre apresenta um pequeno problema que a coleta insuficiente de clulas endocervicais. Com o objetivo de corrigir a deficincia da coleta com a esptula de Ayre, Koss e Hicklin propuseram usar swab umedecido em salina como complemento para coletar as clulas endocervicais. O resultado no foi atingido devido suavidade e formato do cotonete (swab) (QUEIROZ e LIMA, 2000). O swab foi ento substitudo pela escovinha que, alm de apresentar bons resultados na coleta do material endocervical, preserva melhor as clulas devido a presena do muco que coletado junto, evitando dessecao. A utilizao da esptula de Ayre junto da escovinha, possibilita a observao de maior nmero de clulas endocervicais se comparada utilizao exclusiva da esptula ou combinada com o swab (QUEIROZ e LIMA, 2000). A citologia ginecolgica pode ser utilizada para diferentes finalidades, como (GOMPEL e KOSS, 1997; MOURA, 1998; QUEIROZ e LIMA, 2000): - Estudo oncolgico: compreende a anlise de alteraes morfolgicas que podem anteceder e/ou demonstrar uma patologia, como um tumor. Podem ser encontradas clulas prneoplsicas e neoplsicas, alm de ser possvel avaliar a presena de neoplasia primria ou metasttica. O material coletado obtido de trs regies: orifcio cervical, ectocrvice e parede da vagina, sendo este ltimo pouco utilizado. Pode ser realizada coleta nica (material das trs regies coletados simultaneamente com mesmo instrumento) ficando trs esfregaos em uma lmina, ou trplice (mais de um instrumento utilizado), podendo ser feito o esfregao de cada regio em uma lmina ou os trs em uma nica lmina. - Estudo hormonal: verificar alteraes morfolgicas decorrentes de mudanas hormonais, ou seja, avaliar a funo ou atividade hormonal. O material colhido do tero superior da parede lateral da vagina, sendo feito apenas um esfregao por lmina. Alm dos objetivos acima citados, a citologia ginecolgica tambm utilizada para contribuir como diagnstico de infeces genitais por Papiloma vrus, Cndida spp, Herpes vrus, Trichomonas vaginalis, Actinomyces spp, Gardnerella vaginalis e outras bactrias inespecficas. Outras benignidades como adenose vaginal e endometriose, por exemplo, podem tambm ter seu diagnstico auxiliado pela citologia (QUEIROZ e LIMA, 2000). Para qualquer caso, so preparadas duas lminas para cada paciente (QUEIROZ e LIMA, 2000). GOMPEL e KOSS (1997) dividem a colheita do material ginecolgico em relao ao local de procedncia: - Esfregao vaginal: feito com abaixador de lngua, ou parte arredondada da esptula de Ayre ou da pipeta de vidro. So obtidas secrees contendo clulas descamadas das mucosas vaginais e cervicais, muco, leuccitos, macrfagos e detritos celulares necrticos em vias de eliminao; bactrias, vrus e parasitas tambm podem aparecer. possvel obter uma diversidade das clulas do trato genital, porm, permanece uma pobreza de clulas malignas quando h um tumor cervical. O esfregao vaginal considerado mais eficaz que o cervical na deteco de tumores endometriais, tubrios, ovarianos ou metastticos, os quais so todos raros.

- Esfregao cervical: utilizao da esptula de Ayre a qual, devido sua forma, permite coletar da superfcie da ectocrvice (parte chata), da endocrvice (brao alongado) e tambm da zona de transio (regio cncava). Tambm pode-se usar a escova Cervex pois coleta simultaneamente material da endo e ectocrvice. Deve ser lembrado que QUEIROZ e LIMA (2000) indicam o uso combinado da esptula com a escova para obteno de melhores resultados. Para a realizao de um exame citolgico com qualidade, algumas recomendaes devem ser seguidas como: abstinncia sexual por 24 horas pelo menos, no fazer higiene vaginal no dia do exame, no usar ducha vaginal desde a vspera e nem medicamentos por no mnimo 48 horas. Alm disso, o especulo vaginal no pode ser lubrificado (MOURA, 1998). Os laboratrios que realizam esse tipo de exame fornecem as informaes adequadas s pacientes, oralmente ou por meio de um manual. Como exemplo, orientaes fornecidas pelo laboratrio Criesp em sua pgina na internet as quais se encontram no Anexo I. Em citologia ginecolgica so utilizados dois tipos de coleta do material: esfoliao ou abraso. A citologia esfoliativa compreende a coleta das clulas que descamaram espontaneamente sendo realizada com uma esptula. J na citologia abrasiva realizado um raspado da mucosa com o objetivo de soltar as clulas do epitlio o que feito com uma escova (GOMPEL e KOSS, 1997; ILLESCAS, 2006) Colorao O mtodo de colorao mundialmente utilizado em citologia ginecolgica o Papanicolaou o qual possui o nome do seu prprio criador, George N. Papanicolaou. Ele composto de um corante nuclear (hematoxilina) e dois corantes citoplasmticos (Orange G e EA) (COLEMAN, 1989; QUEIROZ e LIMA, 2000; JUNIOR, 2003; DIGENE, 2004). A colorao de Papanicolaou baseada na diferena do tamanho das molculas dos corantes, onde quanto menores elas forem, mais fcil sua entrada e sada das clulas, ou seja, sua penetrao e remoo (QUEIROZ e LIMA, 2000). Existem dois meios de colorao com o mtodo de Papanicolaou (CUNHA, 1987; QUEIROZ e LIMA, 2000; JUNIOR, 2003): - Progressivo: a colorao ocorre progressivamente at a intensidade de cor desejada ser encontrada, eliminando a descolorao com cido clordrico e gua. Esse mtodo utiliza hematoxilina de Mayer, Delafieilds, Gill-Baker-Mayer e Gill. mais utilizado para materiais no ginecolgicos, porm, usada para todos os materiais na maioria dos laboratrios. - Regressivo: realizada uma sobrecolorao, ou seja, colorao excessiva com hematoxilina no acidificada, sendo o excesso posteriormente removido com cido clordrico diludo. A hematoxilina de Harris o tipo de corante utilizado para esse mtodo o qual pouco utilizado nos laboratrios. CUNHA (1987), QUEIROZ e LIMA (2000) e JUNIOR (2003) relatam as vantagens da tcnica de Papanicolaou, as quais justificam seu uso: transparncia celular o que permite diferenciao das clulas mesmo quando esto sobrepostas, definio de detalhes nucleares e diferenciao celular. De um modo sucinto, as etapas da colorao so: 1 Fixao 2 Hidratao 3 Colorao nuclear

4 Desidratao 5 Colorao citoplasmtica com contracorantes 6 Clareamento e montagem das lminas. Diversos autores demonstram protocolos para a colorao de Papanicoalou onde o que os diferencia, na maioria das vezes, o tempo de mergulho nas cubetas. QUEIROZ e LIMA (2000) destacam ser muito importante ter um roteiro de colorao, com tempos de permanncia em hematoxilina e EA bem definidos, para serem obtidos resultados satisfatrios. No Anexo III so observados alguns protocolos de colorao com sua respectiva referncia. O xilol presente nas ltimas etapas de colorao a soluo responsvel pela etapa de clareamento, a qual fica entre a desidratao e a montagem, e proporciona a transparncia celular (QUEIROZ e LIMA, 2000). A determinao do uso e da ordem de aplicao das substncias est ligada ao exercida por elas na colorao. QUEIROZ e LIMA (2000) explicam sucintamente tais critrios: - Aps os corantes, as lminas so mergulhadas em seus solventes: hematoxilina destilada (remove a hematoxilina no ligada); orange G e EA lcool; gua

- O HCl remove hematoxilina do citoplasma uma vez que retm o corante apenas no ncleo. Essa etapa chamada de diferenciao e resulta com o citoplasma descorado. Ela seguida pela gua destilada a qual interrompe sua ao. A concentrao do HCl varia, podendo ser 0,2%, 1%, 0,25% ou 0,5%; - Se for utilizada gua corrente no lugar de gua destilada, deve-se medir o pH e a concentrao de cloro, pois se presente em grande quantidade altera o pH, podendo desbotar a colorao das amostras; - O lcool aps o Orange G e Policromo tem como funo retirar o corante no ligado ao citoplasma. Os ltimos mergulhos em lcool absoluto removem toda gua do esfregao e, por isso, essa etapa chamada de desidratao a qual deixa a lmina pronta para a montagem; - O xilol no corado e nem quimicamente reativo e seu ndice de refrao eleva o do esfregao, tornando ele transparente. No seu primeiro banho ele remove o lcool enquanto no segundo ele aumenta a transparncia do esfregao e o prepara para a fase de montagem. Comercialmente, existem substitutos para o xilol, porm, devem ser feitas adaptaes para uso deles nas etapas de montagem e clareamento. O Clearium um clareador de uso corrente que permite a passagem direta, da lmina, do ltimo lcool para o meio de montagem, eliminando o xilol (QUEIROZ e LIMA, 2000). Ao final da colorao, as lminas passam por uma etapa chamada montagem na qual utilizada uma substncia que liga de modo permanente lmina e lamnula. Os agentes normalmente utilizados so blsamo de Canad e Entelam (CUNHA, 1987; GOMPEL e KOSS, 1997; JUNIOR, 2003). Os corantes utilizados para a colorao de Papanicolaou so detalhados a seguir. Os mtodos de preparao deles so apresentados no Anexo IV. Hematoxilina de Harris

A hematoxilina um corante bsico que cora cido, o que explica sua afinidade pela cromatina. , portanto, um corante nuclear o qual natural e possui diversas formulaes. Para torn-la um corante nuclear de uso, alm de ser diluda em gua, so necessrios os componentes a seguir (QUEIROZ e LIMA, 2000; JUNIOR 2003): - Agente oxidante: transforma a hematoxilina em hematena, ou seja, torna o corante ativo, porm, ainda com pouca afinidade nuclear. Exemplos: xido de mercrio e sdio iodato; - Mordante: agente que induz a cor do corante, formando uma ligao da hematena com cidos nuclicos e protenas nucleares o que revela a cromatina nuclear. composto por ons metlicos como o sulfato de alumnio, conhecido como Alumen; - Solvente: dissolve a hematena na soluo e reduz a taxa de oxidao; - Acidificante: garante a seleo do material nuclear e ajuda na preveno da oxidao do corante. O modo que a hematoxilina cora, pode ser representado da seguinte forma (QUEIROZ e LIMA, 2000):

Orange G um corante cido que cora a queratina de laranja. composto de: soluo aquosa ou alcolica do corante aninico orange G, cido fosfotngstico, lcool etlico a 95% e, opcionalmente, cido actico glacial (CUNHA, 1987; GOMPEL e KOSS, 1997; QUEIROZ e LIMA, 2000; JUNIOR, 2003). O Orange G uma pequena molcula com capacidade de penetrar nas hemcias e nas clulas com ceratina ou precursores de ceratina, corando-os de laranja intenso e brilhante. O cido fosfotngstico atua como mordente, intensificando a cor alcanada. Esse corante deve ser guardado em frasco escuro, ao abrigo da luz, e deve ser filtrado no momento do uso (QUEIROZ e LIMA, 2000; JUNIOR 2003). EA um corante policrmico o qual cora estruturas celulares de rosa pela ao da eosina Y ou de verde ou azul atravs do verde brilhante. Seus componentes bsicos (QUEIROZ e LIMA, 2000; JUNIOR 2003): - Verde luz ou verde brilhante SF: conhecido como light green; um corante cido que cora de verde-azul o citoplasma de clulas com metabolismo ativo, como: OXIDAO* clulas intermedirias, parabasais, colunares, histicitos, leuccitos, carcinomas indiferenciados de grandes e pequenas clulas e clulas de adenocarcinoma. - Eosina Y: corante cido o qual cora de rosa citoplasma de clulas escamosas superficiais, nuclolos, mucina endocervical, eritrcitos e clios.

A frmula original continha ainda como componente o Pardo de Bismark. Ele no adiciona uma colorao caracterstica ao citoplasma, o que o eliminou em vrias formulaes. Seu uso, portanto, considerado opcional. No preparo do corante, ele encontrado associado com cido fosfotngstico e cido actico, em alguns protocolos (QUEIROZ e LIMA, 2000). Existem trs formulaes desse corante: EA 36, EA 50 (frmula comercial) e EA 65 que se diferenciam de acordo com a intensidade da cor da colorao. possvel utilizar qualquer frmula para qualquer material, o que depende da preferncia do profissional. EA 36 a frmula original de Papanicolaou (QUEIROZ e LIMA, 2000; JUNIOR 2003). A formulao EA 65 possui metade da quantidade do verde brilhante do EA, mas eosina e pardo de Bismark em mesma quantidade. Sua composio especfica para preparados no ginecolgicos, principalmente espessos. Para amostras ginecolgicas, pode ser usado para ajudar na diferenciao de adenocarcinomas endocervicais dos endometriais (QUEIROZ e LIMA, 2000). Para citologia ginecolgica o EA 36 o tipo normalmente utilizado. Em sua formulao, alm dos componentes acima citados, ele possui o cido fosfotngsticoo qual um cido de competio que contribui na colorao pelo verde brilhante SF (GOMPEL e KOSS, 1997; QUEIROZ e LIMA, 2000). Fonte: Monografia - Gabriela Tramontina

Citologia Crvico-vaginal normal e Citologia Hormonal. Prof. Dr. Halbert Villalba Citologia Genital Normal Clulas Escamosas Superficiais Intermedirias Parabasais Clulas basais quase nunca so observadas em citologia.

Clulas Escamosas Superficiais: Geralmente so observadas de forma isolada e raramente em aglomerados. Dimetro de 40 a 60um Ncleo denso e picntico (dimetro de 5 a 7um), com halo claro estreito Citoplasma: achatado, transparente, poligonal e eosinoflico, geralmente com grnulos pequenos e perinucleares (lipdios). Fase estrognica so melhor observadas.

 Pode-se observar clulas escamosas superficiais anucleadas ou escamas extrema queratinizao celular colorao amarelada ou alaranjada clara. Grande quantidade dessas clulas deve-se considerar queratinizao excessiva epitelial leucoplasias (leso branca clinicamente visvel colposcopia).

Clulas Escamosas Intermedirias: Medem cerca de 30 a 40um Isoladas, lminas ou aglomerados celulares. Fase ltea do ciclo mestrual comum observar aglomerados de clulas intermedirias. Ncleo aberto (vesicular) redondo a ovalado (8 a 10um). Cromatina finamente granulada. Configurao elptica a esfrica (alongadas e fusiformes). Citoplasma rico em glicognio cianoflico, raramente eosinoflico e com vacolos pequenos. Parte perifrica mais escura que a central, pregueado durante a fase ltea do ciclo menstrual. A quantidade de glicognio depende da situao hormonal da paciente. Gravidez ncleo deslocado para periferia (gnulos corados em amarelo Pap.) forma de barco clulas naviculares. Podem formar prolas crneas: Ncleos normais normalidade.

Anomalias nucleares carcinomas. Citlise clulas com ncleos ns. Presena de numerosos ncleos isolados e detritos celulares, muitas vezes pela ao de bastonetes e lactobacilos, os quais metabolizam o glicognio. Fase pr-menstrual e gravidez.

Clulas Escamosas Parabasais: Medem cerca de 15 a 30um. Ncleo volumoso, ocupa grande poro celular idntico ao das clulas intermedirias. Apresentam-se isoladamente. Formato ovalado a esfrico (esfoliao espontnea).

 Alongamento ou deformao em casos de remoo traumtica (esfregaos) formam lminas ou agrupamentos celulares. Citoplasma cianoflico e bem demarcado. Em mulheres em menopausa podem ser as clulas dominantes nos esfregaos, ou em mulheres jovens por infeco ou trauma.

Clulas Endocervicais: O aspecto das clulas endocervicais, nos esfregaos vaginais, bastante varivel e depende da forma que esto posicionadas. Maior eixo clulas colunares, com 20 a 30um de comprimento e 8 a 10um de dimetro. Citoplasma transparente e o ncleo esfrico. Podem formar arranjos em paliada. Favos de mel agrupamentos poligonais, clulas em forma aplainada. Parmetro de boa tcnica de esfregao. Dependem do ciclo menstrual: Perodo estrognico citoplasma relativamente denso e cianoflico e o ncleo elptico ou esfrico. Fase secretora citoplasma distendido por muco claro e abundante, deslocar o ncleo em direo base da clula presena de pequenas projees nucleares (papilas) ncleo irregular. Bordas ciliadas grande nmero de clulas significa metaplasia tubria. Corpsculo ciliado ciliocitoftoria.

Clulas Endometriais: O endomtrio d dois tipos de clulas: Colunares ou cubides provenientes da superfcie e das glndulas endometriais. Clulas pequenas provenientes do estroma endometrial. O aspecto dessas clulas depende da tcnica empregada, sendo diferentes quando ocorre descamao espontnea da remoo por esfregaos. Mulheres em idade frtil: Nos esfregaos o nmero de clulas diminuiu at o 12 dia do ciclo.

 Aps 12 dias ou em mulheres na menopausa a presena de clulas endometriais nos esfregaos deve ser considerada patolgica. Durante o fluxo menstrual elas aparecem isoladas, agrupadas ou em lminas, juntamente com eritrcitos e clulas inflamatrias. Clulas pequenas, formato ovalado, cubide ou raramente cilndrica. Ncleo esfrico. Citoplasma cianoflico com vacuolizao fina ou grosseira (praticamente invisvel). So mais comuns nos 10 primeiros dias do ciclo. Do 5 a 7 dia do ciclo ocorre o xodo agrupamentos de clulas estromais do endomtrio junto com histicitos. Quando as clulas endometriais so aspiradas, apresentam morfologia melhor preservada. Fase proliferativa grupos celulares em forma de favo de mel ou em paliada semelhante s clulas endocerivicais (difcil diferenciao ou impossvel); Fase secretora Aumentam de tamanho, passam a apresentar ncleos maiores e acumulam depsitos de glicognio no interior de vacolos citoplasmticos. Clulas Endometriais: Endomtrio ps-menopausa: Quando observadas em mulheres ps-menopausa, so patologias como hiperplasias ou carcinomas de endomtrio, ou podem surgir decorrente ao tratamento com estrognios. Aconselha-se nesses casos seguir a investigao.

Citologia Hormonal Prof. Dr. Halbert Villalba

O processo de amaturao do epitlio escamoso no queratinizado que reveste a poro infravaginal do colo e a vagina controlado por hormnios. Estrognios induz maturao epitelial completa com predominncia de clulas escamosas superficiais maduras nos esfregaos. Progesterona efeitos contrrios ao estrgeno inibe o processo de maturao.

 Queda ou ausncia de estrgeno leva a atrofia reduo do nvel de maturao do epitlio escamoso. O epitlio glandular endocervical tambm reflete as condies hormonais, mais discretamente e de difcil avaliao. A avaliao hormonal da mulher por meio de citologia esfoliativa deve ser realizada s de material retirado da parede vaginal lateral. Os espcimes citolgicos devem ser acompanhados de dados clnicos, idade, data da ltima menstruao, tratamento hormonal, cirrgico ou radioativo. Fixao normal com lcool absoluto.

Condies que impedem a avaliao hormonal: Infeces Vaginose bacteriana Presena de escamas anucleadas devido a hiperqueratose Citlise

Indicaes para citologia hormonal: Avaliao de funo ovariana em mulheres histerectomizadas Avaliao de funo ovariana em mulheres com desrodens menstruais Avaliao de funo ovariana na infncia Avaliao de prognstico e guia de conduta de gravidez, com possvel desequilbrio hormonal e abortos habituais. Diagnstico de persistncia folicular. Avaliao da funo ovariana em mulheres climatricas e ps-menopausa. Guia de Terapia de Reposio Hormonal (TRH) quanto durao do efeito e eficcia. Diagnstico de tumor produtor de hormnio na infncia e ps-menopausa. Bipsias so mais precisas quanto ao diagnstico.

ndices para avaliao cito-hormonal: ndice cariopicntico relao entre clulas superficiais maduras com clulas intermeditias maduras.

 ndice eosinoflico relao entre clulas eosinoflicas com clulas cianoflicas. ndice de clulas dobradas relao de clulas maduras dobradas, com clulas escamosas maduras planas. ndice de clulas agrupadas relao de clulas escamosas em grupos de 4 ou mais clulas, com clulas isoladas ou em pequenos grupos menores de 4 clulas. ndice de maturao (de Frost) relao de clulas parabasais com intermedirias e superficias expressas em nmeros relativos (IM = parabasais: intermedirias: superficiais).

Padro cito-hormonal: Recm-nascida semelhante ao da me ao tempo do parto (predominncia de clulas intermedirias com poucos leuccitos PMN); 10 semanas a fase pr-pbere padro de imaturidade (microbiota cocide, leuccitos PMN e clulas parabasais [padro atrfico]) Esperado ser visto tambm no climatrio e na ps- menopausa. 10 semanas a fase pr-pbere, climatrio e ps-menopausa. Menacme (perodo entre a menarca e a menopausa) apresenta padro citolgico cclico, com duas fases separadas pelo perodo ovulatrio. Crescente de maturidade celular (at a ovulao); Decrescente de maturidade celular (aps a ovulao).

Leitura do esfregao hormonal: O efeito estrognico estimado pela observao da maturao do epitlio vaginal. Para este propsito, a contagem diferencial feita. S clulas escamosas morfologicamente normais so contadas. Clula superficial = 1,0 Clula intermediria = 0,5 Clula parabasal = 0,0 Valor de Maturao = percentagem de cada uma dessas clulas multiplicado pelo nmero correspondente e o resultado somado. VM = (parabasais x 0) + (intermedirias x 0,5) + (superficiais x 1). Exemplos de achados normais para valores de maturao. Recm- nascida = VM (60 70)

 Infncia = VM (0 30) Puberdade = VM (50 60) Menacme = VM (60 90) Gravidez = VM (50 69) Lactao = VM (0 40) Menopausa = VM (0 40).