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Relatrio de Bioqumica e Enzimologia Clnicas Colesterol

Carolina Moioli Larissa Aguiar de Almeida Leda Yumi Hori Ndia Aline Freitas Lara

2013 Introduo

O colesterol est presente na alimentao e produzido por praticamente todas as clulas humanas. Ele importante para a composio das membranas celulares, produo de hormnios esteroides, sais e cidos biliares e vitamina D. Para ser transportado no sangue, o colesterol se liga a diversos tipos de lipoprotenas, sendo estas classificadas de acordo com a sua densidade: o HDL (lipoprotenas de alta densidade ou High Density Lipoproteins), responsvel pelo transporte do colesterol dos tecidos extra-hepticos para o fgado, o chamado transporte reverso do colesterol, diminuindo a quantidade de colesterol no sangue e celular livre; o LDL (lipoprotenas de baixa densidade ou Low Density Lipoproteins) capaz de transportar o colesterol do fgado at as clulas de vrios outros tecidos, assim pode ter ao danosa, pois pode formar placas aterosclerticas nos vasos sanguneos; e o VLDL (lipoprotena de muito baixa densidade ou Very Low Density Lipoprotein), que transporta principalmente triglicrides, convertido em LDL, na corrente sangunea. O VLDL nascente circula no sangue e pega apolipoproteinas doadas pelo colesterol HDL. Nesse ponto o VLDL nascente torna-se um VLDL maduro. Uma vez na circulao, o VLDL fica em contato com lipoprotena lipase (LPL) nos capilares. O LPL remover triglicerdeos do VLDL para armazenamento ou produo de energia. medida que mais triglicerdeos so removidos do VLDL a composio da sua molcula muda e ele torna-se lipoprotena de densidade intermediria (IDL). Parte desta IDL, posteriormente se transforma em colesterol LDL. Assim, torna-se importante determinar a dosagem do colesterol, uma vez que nveis altos do colesterol LDL e VLDL, e consequentemente triglicrides, causam complicaes cardiovasculares, como aterosclerose, ataque cardaco e AVC. Dosagem de colesterol total Princpio A intensidade da cor vermelha formada diretamente proporcional concentrao de colesterol na amostra. Reagentes Reagente 1: tampo 50 mmol, pH 7,0, fenol 24,0 mmol/L, colato de sdio 500 mol, azida sdica 15 mmol/L, 4 aminoantipirina 500 mol/L, colesterol esterase 250 U/L, colesterol oxidase 250 U/L e peroxidase 1000U/L. Padro 200mg/dL: azida sdica 15 mmol/L.

Procedimentos Usou-se 3 tubos de ensaio e procedeu como a seguir: Amostra gua Padro Reagente 1 branco 0,01 mL 1,0 mL teste 0,01 mL 1,0 mL Padro 0,01 mL 1,0 mL

Misturou-se no vrtex e colocou em banho-maria 37C em 10 min. O nvel da gua no banho deve ser superior ao nvel de reagente nos tubos de ensaio. Determinou-se as absorbncias do teste e padro em 500nm, acertando o zero com o branco. A cor estvel por 60 min. Clculos Colesterol total (mg/dL) = absorbncia do teste x 200 Absorbncia do padro fator = 200________ Absorbncia do padro

A absorbncia do padro 0,3115; o fator 642,05 Sabendo que a AA absorbncia da amostra do aluno; A2 e A3 so absorbncias das amostras, em duplicata, e CTA, CT2, CT3 so, respectivamente, o clculo do colesterol total do aluno, e da amostra, em duplicata, tem-se: AA= 0,260 CTA=166,93 A2= 0,387 CT2= 248,47 A3= 0,339 CT3=217,65 Dosagem de triglicrides Princpio A intensidade da cor vermelha formada diretamente proporcional concentrao dos triglicrides da amostra. Reagentes Reagente 1: tampo 50 mmol; ph 6,9; acetato de magnsio 4 mmol/L; 4-clorofenol 5 mmol/L; 4 aminoantipirina 300 mol/L; ATP 1.0 mmol/L; lipase da lipoprotena 1400 U/L; glicerolquinase 1000 U/L e azida sdica 7 mmol/L.

Padro 200mg/dL: triglicrides 200mg/L e azida sdica 7 mmol/L. Procedimentos Usou-se 6 tubos de ensaio, sendo 2 para determinao do padro, pois o grupo foi o primeiro a fazer essa dosagem, ento foi incubido a realizar a duplicata do padro; e procedeu como a seguir: Amostra gua Padro (n 2) Reagente 1 Branco 0,01 mL 1,0 mL Teste 0,01 mL 1,0 mL Padro 0,01 mL 1,0 mL

Misturou-se no vrtex e colocou em banho-maria 37C em 10 min. O nvel da gua no banho deve ser superior ao nvel de reagente nos tubos de ensaio. Determinou-se as absorbncias do teste e padro em 505nm, acertando o zero com o branco. A cor estvel por 60 min. Clculos Triglicrides (mg/dL) = absorbncia do teste x 200 Absorbncia do padro fator = ________200________ Absorbncia do padro As absorbncias do padro so 0,246 e 0,263, resultando no valor mdio de 0,2545; o fator 785,85 Sabendo que a AA absorbncia da amostra do aluno; A2 e A3 so absorbncias das amostras, em duplicata, e TA, T2, T3 so, respectivamente, o clculo do triglicrides total do aluno e da amostra, em duplicata, tem-se: AA= 0,124 TA=97,44 A2= 0,144 T2=113,16 A3= 0,118 T3=92,73

Dosagem de colesterol-HDL Princpio

As lipoprotenas de muita baixa densidade (VLDL) e as lipoprotenas de baixa densidade (LDL) so quantitativamente precipitadas e, aps centrifugao, o colesterol ligado s lipoprotenas de alta densidade (colesterol HDL) determinado no sobrenadante. Reagentes Precipitante: cido fosfotngstico 1,5 mmol/L e cloreto de magnsio 54 mmol/L. Padro 20mg/dL Procedimentos Em um tubo colocou-se 0,1 mL da amostra com 0,2 mL de precipitante, agitou-se vigorosamente por 30 segundos. Centrifugou a 3500 rpm por pelo menos 15 min para obter um sobrenadante lmpido. Pipetou-se o sobrenadante lmpido imediatamente aps a centrifugao, tomando o cuidado para no ressuspender o precipitado, a fim de evitar resultados falsamente elevados. Usou-se 3 tubos de ensaio e procedeu como a seguir: Sobrenadante gua Padro n2 Reagente 1 Branco 0,1 mL 1,0 mL Teste 0,1 mL 1,0 mL Padro 0,1 mL 1,0 mL

Misturou-se no vrtex e colocou em banho-maria 37C em 10 min. O nvel da gua no banho deve ser superior ao nvel de reagente nos tubos de ensaio. Determinou-se as absorbncias do teste e padro em 500nm, acertando o zero com o branco. A cor estvel por 60 min. Clculos HDL (mg/dL) = Absorbncia do teste x 40 Absorbncia do padro fator = ________40________ Absorbncia do padro A absorbncia do padro 0,201; o fator 199.

Sabendo que a AA absorbncia da amostra do aluno; A2 e A3 so absorbncias das amostras, em duplicata, e HDLA, HDL2, HDL3 so, respectivamente, o clculo do colesterol-HDL do aluno, e da amostra, em duplicata, tem-se: AA= 0,432 HDLA=85,97 A2= 0,299 HDL2= 59,50 A3= 0,437 HDL3=86,97 Determinao do fator de risco cardaco Clculo da concentrao do colesterol VLDL e LDL A concentrao do colesterol VLDL e LDL pode ser calculada utilizando a equao de Friedewald, que vlida somente para amostras cujas concentaes de triglicrides no utapassem 400 mg/dL e no pertenam a pacientes portadores de lipoproteinemia do Tipo III. Equao de Friedewald colesterol VLDL (mg/dL)= triglicrides (mg/dL) 5 colesterol VLDL (mg/dL)=colesterol total (mg/dL)--[HDL (mg/dL) + VLDL (mg/Dl)] Dosagem Colesterol total(mg/dL) HDL(mg/dL) LDL (mg/dL) VLDL (mg/dL) Amostra 2 (A2) 248,47 59,50 166,34 22,63 Amostra 3 (A3) 217,65 86,97 138,87 18,55 Amostra aluno (AA) 166,93 85,97 61,47 19,49

Clculos do fator de risco a) Risco= colesterol total(mg/dL) Colesterol- HDL(mg/dL) AA= 1,94 A2= 4,18 A3= 2,5

b) Risco= LDL (mg/dL) HDL (mg/dL) AA= 0,72 A2= 2,8 A3= 1,6 Dentre os clculos dos fatores de risco, a melhor relao a do item a, pois o mais preciso, devido ao colesterol total e colesterol-HDL terem sido dosadas; e no item b, apenas o colesterol-HDL foi dosado, o colesterol-LDL foi apenas calculado, no tendo tanta preciso. Em posse dos resultados de A2 e A3, previamente realizados, e das amostras AA(mdia), fornecidos por outros grupos, e dos testes realizados pelo grupo, construiu-se a tabela: Dosagem Amostr a aluno (AA) Colesterol 135,47 total(mg/d L) Triglicrid 135,42 es (mg/dL) HDL(mg/d 78,92 L) LDL 29,45 (mg/dL) VLDL 27,08 (mg/dL) Resulta do obtido 166,93 97,45 85,97 61,47 19,49 Amostr Resulta a2 do (A2) obtido 241,4 118,5 39,8 177,9 23,7 248,47 113,15 59.50 166,34 22,63 Amostr Resulta a3 do (A3) obtido 197,5 115,5 62,8 111,6 23,1 217,65 92,75 86,97 138,87 18,55

Da tabela, como era de se esperar, h valores prximos aos valores previamente obtidos. Entretanto, os valores distantes dos anteriormente realizados e da mdia de AA devem-se, possivelmente, a erros de pipetagem. Em posse dos resultados dos fatores de risco de A 2 e A3, previamente realizados, e das amostras AA(mdia), fornecidos por outros grupos, e dos fatores de risco calculados pelo grupo, construiu-se a tabela:

AA 2,17 (baixo)

Resultado A2 obtido 1,94 6,06 (baixo) (moderado)

Resultado A3 obtido 4,18 3,14 (padro) (baixo)

Resultado obtido 2,5 (baixo)

Tais resultados, prximos, devem-se, possivelmente, como j mencionado, erros de pipetagem nos clculos de colesterol total e colesterol-HDL, assim, esses erros aparecem tambm nos fatores de riscos.