ISSN 1516-781X Setembro, 2005

Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuria Centro Nacional de Pesquisa de Soja Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento

Documentos 264
Patologia e Tratamento de Sementes: Noes Gerais
Ademir Assis Henning

Londrina, PR 2005

Exemplares desta publicao podem ser adquiridos na: Embrapa Soja Rodovia Carlos Joo Strass - Acesso Orlando Amaral Caixa Postal 231 86001-970 - Londrina, PR Fone: (43) 3371-6000 - Fax: (43) 3371-6100 Home page: http://www.cnpso.embrapa.br e-mail (sac): sac@cnpso.embrapa.br Comit de Publicaes da Embrapa Soja Presidente: Joo Flvio Veloso Silva Secretria executiva: Regina Maria Villas Bas de Campos Leite Membros: Alexandre Magno Brighenti dos Santos Antonio Ricardo Panizzi Clara Beatriz Hoffmann-Campo Dcio Luiz Gazzoni George Gardner Brown Ivan Carlos Corso Lo Pires Ferreira Waldir Pereira Dias Coordenador de editorao: Odilon Ferreira Saraiva Normalizao bibliogrfica: Ademir Benedito Alves de Lima Editorao eletrnica: Neide Makiko Furukawa Capa: Danilo Estevo 1a Edio
1a impresso 08/2004 - tiragem: 2000 exemplares

2a Edio revisada e atualizada

1a impresso 09/2005 - tiragem 2000 exemplares Todos os direitos reservados. A reproduo no autorizada desta publicao, no todo ou em parte, constitui violao dos direitos autorais (Lei no 9.610). Henning, Ademir Assis Patologia e tratamento de sementes: noes gerais / Ademir Assis Henning. 2.ed. Londrina: Embrapa Soja, 2005. 52p. ; 21cm. - (Documentos / Embrapa Soja, ISSN 1516-781X; n.264)

1.Patologia de semente. 2.Soja-Semente-Tratamento. I.Ttulo. II.Srie. CDD 575.6839

Embrapa 2005

Autor
Ademir Assis Henning Engo Agro, MSc, Ph.D., Pesquisador Embrapa Soja Rod. Carlos Joo Strass Caixa Postal, 231 CEP 86001-970 - Londrina, PR Fone: (43) 3371-6261 Fax: 3371-6100 henning@cnpso.embrapa.br

Apresentao
A soja afetada, no campo, por grande nmero de patgenos. Fungos, bactrias e vrus podem causar srios prejuzos agricultura em geral. Muitos desses patgenos utilizam a semente como veculo de sobrevivncia e de disseminao a longas distncias. Na moderna indstria de sementes, o controle de qualidade deve ser exercitado em todas as fases do processo de produo, desde a seleo do campo de produo at a comercializao de um Iote de sementes. Esta publicao aborda, de maneira sucinta, os principais mtodos de anlise sanitria de sementes, com enfase cultura da soja e poder ser um referencial no s para os produtores de sementes, mas para os rgos governamentais orientadores da poltica agricola. A anlise sanitria da semente, juntamente com outros testes fisiolgicos como tetrazlio, germinao e vigor, dentre outros, pode esclarecer as causas de problemas de baixa qualidade da semente, alm de orientar, com maior preciso, a necessidade ou no do tratamento da semente com fungicidas. Este trabalho destina-se, em princpio, a profissionais de laboratrios de anlise de sementes, envolvidos com testes de sanidade, a instituies governamentais e a Escolas de Agronomia que priorizam essa disciplina e, sua grade curricular.

Joo Flvio Veloso Silva

Chefe Adjunto de Pesquisa e Desenvolvimento Embrapa Soja

Sumrio
Resumo ............................................................................................... 9 Abstract ............................................................................................. 11 I. Noes gerais ............................................................................. 13 Histrico........................................................................................ 13 Importncia da patologia de sementes ........................................ 17 Testes de sanidade de sementes ................................................. 18 Fatores de variao nos testes de incubao .............................. 27 II. Soja - Patologia e tratamento de sementes ............................. 31 Introduo .................................................................................... 31 Anlise sanitria de sementes de soja ......................................... 31 Doenas na cultura e patgenos importantes nas sementes ...... 34 Tratamento de sementes ............................................................. 47 Referncias .................................................................................. 50

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Ademir Assis Henning

Resumo
A importncia da patologia de sementes reside no fato de que aproximadamente 90% das culturas utilizadas para a alimentao so propagadas por semente. Dentre essas, nove so consideradas de importncia primordial: soja, trigo, arroz, milho, feijo, amendoim, sorgo, cevada e beterraba aucareira. Todas essas culturas podem ser afetadas por patgenos muito agressivos transmitidos atravs da semente. Assim, o teste de sanidade de semente pode ser considerado como medicina preventiva, tanto nos programas de quarentena quanto no sistema de produo de semente certificada. Nesta publicao, em sua primeira parte, so abordados os principais aspectos da patologia de sementes, como os seus histricos no mundo e no Brasil, os diferentes mtodos utilizados e os fatores que podem causar variao nos resultados dos testes. Em sua segunda parte, so discutidos, em detalhe, os principais patgenos causadores de doenas na cultura da soja que so transmitidos pela semente. Dentre esses, destacam-se, Phomopsis sp. e Fusarium semitectum, causadores de problemas de germinao no laboratrio quando ocorrem chuvas durante as fases de maturao e colheita da semente (podrido de semente); Diaporthe phaseolorum f.sp. meridionalis (Phomopsis meridionalis) (cancro da haste); Colletotrichum truncatum (antracnose); Cercospora kikuchii (mancha prpura); Cercospora sojina (mancha olhode-r); Sclerotinia sclerotiorum (podrido branca); Sclerotium rolfsii (tombamento e morte de plantas); Macrophomina phaseolina (podrido de

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carvo); Rhizoctonia solani (tombamento) e Aspergillus spp. (A. flavus) que, alm de ser considerado fungo de armazenagem, responsvel pela podrido da semente no solo, quando a semeadura feita em solos com baixa disponibilidade de gua, sem o tratamento da semente com fungicida. Finalmente discutida a importncia do tratamento de semente de soja com fungicidas, cuja tecnologia, desde a safra 2001/02, vem sendo utilizada em mais de 93% da rea semeada com soja no Brasil.

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Abstract
Seed pathology and treatment: an overview The importance of seed pathology lies on the fact that approximately 90% the crops used for feeding are propagated through seeds. Among these, nine are of major importance: soybean, wheat, rice, dry bean, peanut, sorghum, barley and sugar beet. All of them can be affected by devastating seed transmitted pathogens. Thus, seed heath testing may be considered as a kind of preventive medicine in quarantine schemes as well as in certified seed production programs. This publication, in its first part covers the main aspects of seed pathology throughout the world and Brazil, discussing the different methods of seed health testing and the factors responsible for the variation in their results. In its second part, a detailed discussion on the main seed-transmitted pathogens affecting soybean in the field is presented. Among those are: Phomopsis sp. and Fusarium semitectum, causing germination problems in the laboratory, when seed maturation and harvest occur under moistweather-conditions; Diaporthe phaseolorum f.sp. meridionalis (Phomopsis meridionalis), the stem canker agent; Colletotrichum truncatum (anthracnose), Cercospora kikuchii (purple seed stain); Cercospora sojina (frog eye leaf spot); Sclerotinia sclerotiorum (white mold); Sclerotium rolfsii (dumping off and southern blight); Macrophomina phaseolina (charcoal rot), Rhizoctonia solani (dumping off); and, Aspergillus spp. (A. flavus), that in addition of being a storage mold may be responsible for seed rot in the soil, when untreated seed is sown in soils with low moisture availability (drought stress). At the end, it is discussed the importance of soybean seed treatment with fungicides, that since the 2001/02 growing season, is used in over 93% of the area planted to soybean in Brazil.

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I. Noes gerais
Histrico
Apesar de relatos anteriores sobre a associao de patgenos com sementes, foi em 1755 que a Patologia de Sementes teve seu incio quando Tillet, na Frana, provou que semente de trigo transmite a crie (Tilletia caries). Posteriormente, outros estudos foram conduzidos por Prevost em 1807, Jensen em 1887, Frank em 1888 e Hiltner em 1917. Entretanto, foi somente em 1927 que o ramo da cincia denominado Patologia de Sementes passou a ser internacionalmente reconhecido, quando a ISTA (International Seed Testing Association) criou o Comit de Fitopatologia. Lucie Doyer (Holanda) foi a primeira coordenadora desse comit at a sua morte, em 1949. Nas Amricas, a Patologia de Sementes tem recebido pouco reconhecimento, especialmente nos Estados Unidos onde a mesma considerada como sub-disciplina da fitopatologia, apesar das relevantes contribuies no campo da epidemiologia e do controle de importantes patgenos transmitidos por sementes, como o vrus do mosaico da alface (LMV). S recentemente, a Patologia de Sementes passou a receber maior ateno, particularmente nos programas de controle de qualidade das indstrias de sementes. No Brasil, o estudo da Patologia de Sementes ganhou impulso a partir de 1977, com a realizao de um workshop1, que reuniu, em Londrina-PR, os maiores especialistas mundiais nessa rea. Juntamente com a criao do Programa Brasileiro de Patologia de Sementes, o programa considerado o marco inicial deste novo ramo da cincia agronmica no pas. Na esteira desse impulso, foi criado na Abrates o Comit de Patologia de

LATIN AMERICAN WORKSHOP ON SEED PATHOLOGY, 1., 1979, Londrina. Seed pathology problems and progress: proceedings. Londrina: IAPAR, 1979. 274p. Editado por J.T. Yorinori, J.B. Sinclair, Y.R. Mehta, S.K. Mohan.

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Sementes (COPASEM), livros foram editados e o Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento (MAPA) criou o Grupo Tcnico Permanente em Sanidade de Sementes (GTPSS). A associao desses fatores proporcionou ao Brasil uma posio de destaque nos assuntos relacionados patologia de sementes e os conhecimentos gerados foram gradualmente sendo incorporados ao sistema produtivo, repercutindo na maior sustentabilidade e lucratividade da agricultura. O GTPSS criado atravs da Portaria n 27 de 7 de agosto de 2000, tem por objetivo propor metas para o Programa de Sanidade em relao a Pragas no Quarentenrias Regulamentveis, anlise e emisso de parecer tcnico relativo aos estudos tcnico-cientficos que justifiquem as proposies de nveis de tolerncia para as citadas pragas, principalmente, para estudar a produo e comercializao de sementes no territrio nacional. O grupo, liderado pela Coordenao de Proteo de Plantas (MAPA/CPP/DDIV) constitudo por membros representantes das seguintes instituies/rgos: 1) Servio Nacional de Proteo de Cultivares (MAPA/SARC/SNPC); 2) Coordenao de Laboratrio Vegetal (MAPA/CLAV/DDIV); 3) Comit de Patologia de Sementes da ABRATES (COPASEM); 4) Universidades (ESALQ/USP - Piracicaba) e (ESAL - Lavras); 5) Embrapa Cerrados; 6) Embrapa Negcios Tecnolgicos; 7) Associao Brasileira de Sementes - ABRASEM); 7) Representante das CESMs - Comisso Estadual de Sementes e Mudas do Paran - CESM/PR) e 8) Associao Brasileira de Tecnologia de Sementes - ABRATES, alm de outros rgos representantes do setor agropecurio. O objetivo do GTPSS estudar e propor padres e tolerncias de sanidade de sementes para diversas culturas, comeando pelas grandes culturas. A importncia da comisso reside em sua composio, que rene os mais diversos segmentos envolvidos no agronegcio. Desta maneira, praticamente todos os aspectos, tanto quantitativos como qualitativos e de logstica, so contemplados. J foram propostos nveis de tolerncia de patgenos em sementes para algumas espcies, como trigo, soja, feijo, arroz e algodo (Tabela 1). Isto para (PNQR) - as Pragas NoQuarentenrias Regulamentadas (pragas que o pas j tem e que podem

7DEHOD 1.  Pragas Pragas No No Quarentenrias Quarentenrias Regulamentadas Regulamentadas (PNQR) (PNQR) Potenciais Potenciais // cultura cultura e seus respectivos Tabela nveis de tolerncia, tolerncia,aprovados aprovados pelo GTPSS. nveis de pelo GTPSS.
Nvel (%) Nvel de de tolerncia t

Cultura Cultura

Algodo

PNQR Potenciais PNQR Potenciais )XVDULXP R[\VSRUXP f.sp. YDVLQIHFWXP &ROOHWRWULFKXP JRVV\SLL var FHSKDORVSRULRLGHV ;DQWKRPRQDV D[RQRSRGLV pv. PDOYDFHDUXP 6FOHURWLQLD VFOHURWLRUXP**

Zero / lote Zero / lote Zero / campo Zero / lote 5 / lote 5 / lote 5 / lote 1 / lote 5 / lote 1.000 UFC*/3

Arroz (sequeiro)

3\ULFXODULD JULVHD %LSRODULV RU\]DH

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Trigo

%LSRODULV VRURNLQLDQD 6WDJRQRVSRUD QRGRUXP 'UHFKHVOHUD WULWLFLUHSHQWLV ;DQWKRPRQDV FDPSHVWULV pv. XQGXORVD

Feijo

&ROOHWRWULFKXP OLQGHPXWKLDQXP ;DQWKRPRQDV D[RQRSRGLV pv. SKDVHROL 6FOHURWLQLD VFOHURWLRUXP** )XVDULXP R[\VSRUXP f.sp. SKDVHROL )XVDULXP VRODQL f.sp. SKDVHROL

Zero / lote 0 / lote 0 / lote 0 / lote 0 / lote 0 / lote 0 / lote 0 / lote

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Soja

6FOHURWLQLD VFOHURWLRUXP** +HWHURGHUD JO\FLQHV***

Girassol

6FOHURWLQLD VFOHURWLRUXP**

*UFC = Unidade Formadora de Colnia; **Esclerdio/500 g; ***Torro com cisto/500 g.

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oferecer risco). Para essas pragas necessria a elaborao da Anlise de Riscos, baseada em normas internacionais, com o objetivo de evitar barreiras comerciais no tcnicas. Porm, uma vez estabelecido o nvel de tolerncia de determinado patgeno, fica implcito que todos os lotes de sementes daquela espcie devem ser submetidos anlise sanitria. Entretanto a ABRATES (Associao Brasileira de Tecnologia de Sementes) e a ABRASEM (Associao Brasileira de Sementes) colocaram objees a esse conceito, por entender que o pas ainda no est estruturado em termos de laboratrios credenciados para tal fim - hoje so menos de 30, dos quais nem todos esto aptos para realizar anlise sanitria de todas as espcies. A posio da ABRATES e da ABRASEM foi favorvel ao estabelecimento dos padres de sanidade de sementes, desde que sua implantao seja gradativa, para no inviabilizar o programa de produo de sementes do Brasil. Felizmente essa sugesto foi acatada por parte do MAPA/SDA/DDIV, sendo que no anexo da Portaria no 3, de 5 de janeiro de 2004, publicada no Dirio Oficial da Unio, o projeto da Instruo Normativa SDA, que encontra-se em consulta pblica, estabelece em seu Art. 3 que ...A implantao dos padres sanitrios de sementes estabelecidos no Art. 1 desta Instruo Normativa, bem como as aes dos rgos fiscalizadores, obedecero aos seguintes critrios e cronograma: s primeiro ano: estruturao da cadeia produtiva de sementes, mediante o credenciamento e adequao de laboratrios, capacitao tcnica de pessoal, validao das metodologias de anlise e amostragem, e o estabelecimento e adequao dos procedimentos de fiscalizao por parte dos rgos fiscalizadores, com monitoramento, ao acaso, das sementes aprovadas no Art. 1; s segundo ano: fiscalizao dos nveis de tolerncia estabelecidos em sementes bsicas; s terceiro ano: fiscalizao dos nveis de tolerncia estabelecidos em sementes bsicas; s quarto ano: fiscalizao dos nveis de tolerncia estabelecidos em sementes bsicas e sementes certificadas de primeira gerao C1;

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s quinto ano: fiscalizao dos nveis de tolerncia estabelecidos em sementes bsicas e sementes certificadas de primeira gerao C1; s sexto ano: fiscalizao dos nveis de tolerncia estabelecidos em sementes bsicas, sementes certificadas de primeira gerao C1 e sementes certificadas de segunda gerao C2; s a partir do stimo ano fiscalizao dos nveis de tolerncias estabelecidos para todas as classes de sementes. Art. 4. Os nveis de tolerncia aprovados e suas respectivas metodologias de anlise, bem como a incluso de novas cultluras, podero ser alterados ou includos, a qualquer tempo, mediante estudos tcnicos-cientficos (Anlise de Risco de Pragas - ARP) e parecer favorvel do Grupo Tcnico Permanente de Sanidade de Sementes, os quais sero fixados por ato administrativo da Secretaria de Defesa Agropecuria. Art. 5. Esta Instruo Normativa entra em vigor na data da sua publicao.

Importncia da patologia de sementes

Aproximadamente 90% das culturas utilizadas para alimentao so propagadas por sementes. Dentre essas, nove so consideradas de importncia primordial: soja, trigo, arroz, milho, feijo, amendoim, sorgo, cevada e beterraba aucareira. Todas podem ser afetadas por patgenos devastadores transmitidos atravs da semente (Neergaard 1979). Assim, o teste de sanidade de semente pode ser considerado como medicina preventiva, tanto nos programas de quarentena quanto no sistema de produo de semente melhorada. Mas para que os testes de sanidade de sementes se tornem eficientes, devem predizer, com relativa preciso, o comportamento dos principais patgenos associados s sementes.

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Testes de sanidade de sementes

Requisitos bsicos
0 teste de sanidade deve fornecer informaes confiveis acerca da qualidade sanitria da semente destinada semeadura ou aos servios de quarentena. Os resultados, alm de serem reproduzveis, devem estar disponveis em curto espao de tempo, mantendo, dentro de limites aceitveis, os custos da mo de obra e dos equipamentos.

Objetivos dos testes de sanidade

Os testes de sanidade tm como objetivo determinar a condio sanitria da amostra de sementes e, por inferncia, a qualidade do Iote, fornecendo informaes para: s o servio de quarentena; s os esquemas de certificao de sementes; s a avaliao do valor cultural; s a determinao da necessidade do tratamento de sementes; s a avaliao da eficincia do tratamento de sementes; s os testes de qualidade dos gros armazenados (fungos de armazenagem); e s a avaliao da resistncia de cultivares.

Importncia
0 inculo presente na semente poder resultar em aumento progressivo de uma dada doena no campo, podendo reduzir o valor comercial da cultura. Alm disso, sementes infectadas podem introduzir patgenos importantes como Peronospora tabacina (mofo azul do tabaco), Plasmopara halstedii (mldio do girassol), Diaporthe phaseolorum f.sp. meridionalis (cancro da haste da soja), dentre outros, em reas antes livres dessas

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doenas. Os dois ltimos so exemplos tpicos do que ocorreu no Brasil. 0 mldio do girassol foi introduzido, via semente, no incio da dcada de 80 (Ferreira et al., 1983) e, em 1989, o agente causal do cancro da haste foi detectado na regio de Ponta Grossa (PR). A doena rapidamente se alastrou por todas as regies produtoras de soja do Brasil e outros pases da Amrica do Sul causando enormes prejuzos aos produtores (Yorinori, 1990). Os testes de sanidade de sementes tambm podem esclarecer as causas da baixa germinao, comum em amostras com elevados ndices de infeco. Um exemplo tpico dessa situao fornecido pelo DIACOM (diagnstico completo) que esclarece a baixa germinao de sementes de soja nos testes de germinao em laboratrio, quando estas esto com altos ndices de Phomopsis spp. (Henning & Frana Neto, 1980, 1984).

Mtodos utilizados
A escolha de determinado mtodo, entre os vrios existentes, depende do tipo de patgeno envolvido, das condies disponveis e dos propsitos do teste (Neergaard, 1979). A ISTA, atravs do seu Handbook on Seed Health Testing, tem publicado metodologias para diferentes patgenos, em diversas culturas. Alm disso, excelente fonte de referncia em portugus o livro Patologia de Sementes editado per Soave & Wetzel e publicado, em 1987, pela ABRATES/COPASEM, com apoio da Fundao Cargill. Mtodos sem incubao a) Inspeo direta: as sementes so examinadas a seco para determinar impurezas (material inerte, esclerdios, galhas, insetos); sintomas tpicos de determinadas doenas, a mancha caf (VMCS) e mancha prpura (Cercospora kikuchii); deformaes e sinais de infeco tais como picndios, crosta de oospros, etc. A inspeo a seco pode, algumas vezes, ser efetuada sob luz ultraviolata onde alguns organismos produzem fluorescncia caracterstica. Ascochyta pisi causa

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fluorescncia verde-amarelada em ervilha ( Pisum sativum ); Pseudomonas syringae pv. phaseolicola e Xanthomonas campestris pv. phaseoli produzem fluorescncia azul-esbranquiada, em feijo branco ou de cor creme (Phaseolus vulgaris); e, Septoria nodorum produz fluorescncia esverdeada, em sementes de trigo ( Triticum aestivum). b) Sementes imersas em gua ou lactofenol: mtodo usado para facilitar a identificao de Septoria nodorum, em trigo (picndios exudam esporos) e dos nematides Aphelenchoides besseyi e Ditilenchus angustus, em arroz. c) Exame da suspenso aps a lavagem des sementes: uma quantidade de semente agitada por determinado perodo de tempo em uma quantidade de gua que poder conter detergente ou dispersante. A centrifugao opcional. Os espros so contados em hemacitmetro. 0 uso de espectofotmetro para a determinao dos espros em suspenso, aps a calibrao, muito mais fcil e rpido do que o do hemacitmetro. 0 exame, aps a lavagem da semente, um mtodo muito usado para determinar a quantidade de espros de carvo (Ustilago spp.) em cereais, porm pode ser usado para outros fungos. 0 mtodo e rpido e barato, pois no necessita de equipamento especial nem de incubao. As principais limitaes so: 1) s pode ser usado para espros que aderem fracamente na parte externa da semente; 2) o teste de viabilidade de espros necessrio; e 3) a sensibilidade do teste deixa a desejar. d) Exame depois de lavagem e sedimentao: mtodo usado somente para sementes de trevo, leucena e cebola, para detectar Ditylenchus dipsaci. As principais Iimitaes do teste so a baixa sensibilidade e a mo de obra. e) Mtodo de lavagem de embrio: usado, principalmente, para o carvo voador da cevada e do trigo. Uma das limitaes deste teste que a presena do fungo no embrio nem sempre resulta em infeco nas plntulas. Cultivares resistentes podem apresentar este tipo de reao. Alm disso, poucos patgenos podem ser detectados por este mtodo.

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Mtodos com incubao Estes testes empregam a incubao das sementes sob condies controladas, para permitir o crescimento e a esporulao dos fungos, permitindo a sua identificao, ao nvel de espcie. a) Mtodo do papel-de-filtro (teste de blotter): este mtodo apresenta uma srie de vantagens e algumas desvantagens. Dentre as vantagens destacam-se: 1) a combinao dos princpios in vivo e in vitro que, segundo Neergaard (1979), uma das maravilhas do teste, uma vez que ele permite a observao dos fungos que se desenvolvem no hospedeiro in situ, sem perturbao, numa condio natural de crescimento; 2) basicamente, o mtodo do papel-de-filtro uma combinao da cmara mida, da fitopatologia, com o teste de germinao, da tecnologia de sementes; e 3) o teste pode ser empregado para todos os tipos de sementes. Como desvantagens, este mtodo apresenta: 1) fungos de crescimento rpido podem encobrir os de desenvolvimento mais lento; 2) o teste no detecta patgenos importantes como Peronospora manshurica, Plasmopara halstedii e outros parasitas obrigatrios; e 3) a contaminao com saprfitas (Rhizopus spp., Mucor sp., Trichoderma spp., Cladosporium spp., entre outros) pode dificultar a anlise. Nessas amostras, a desinfestao superficial das sementes com soluo de hipoclorito de sdio a 1,05% (Q-boa a 20%) facilita a leitura. 0 mtodo do papel-de-filtro pode ser empregado com algumas variaes como: a) adio de 2,4-D (0,1% a 0,2%) na gua utilizada para umedecer o papel, visando inibir a germinao das sementes de dicotiledoneas para facilitar a leitura; e, b) o congelamento rpido, introduzido por Limonard, em 1966, apresenta vantagem para sementes de forrageiras e cereais, facilitando a leitura e favorecendo o desenvolvimento de certos fungos [Fusarium, Drechslera (Helminthosporium), Septoria e Phoma, entre outros]. Porm, para a soja, o congelamento rpido inadequado pois torna a leitura difcil devido intensa proliferao de bactrias saprfitas. Mais detalhes sobre o mtodo do papel-de-filtro sero fornecidos no item 5, que trata do teste de sanidade para sementes de soja. b) Mtodo da placa com gar: neste teste, as sementes so desinfestadas

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superficialmente numa soluo de hipoclorito de sdio a 1,05%, por perodo de tempo que pode variar de um a 10 minutos, dependendo da cultura. Posteriormente, as sementes so colocadas em placas de Petri contendo meio de cultura. Existem diversos meios de cultura, porm os mais utilizados so o BDA (batata dextrose gar) com sua variao acdica (ABDA) e o extrato de malte gar (MEA). Outro meio de cultura muito utilizado para fungos de armazenamento (Aspergillus spp. e Penicillium spp.) o extrato de malte sal (NaCI 18%) e gua (MSA). Esses organismos, por serem haloflicos, crescem em meio salino que pode inibir o desenvolvimento dos outros fungos, facilitando assim a leitura. Outras modificaes do teste de gar so usadas, tornando os meios seletivos para determinados organismos. A adio de 2% de PCNB (penta cloro nitro benzeno) ao BDA aconselhvel para restringir o desenvolvimento do miclio de Macrophomina phaseolina, tornando, assim, mais fcil a sua quantificao. 0 mtodo de Magano (Neergaard 1979) utilizado para Phoma betae, em sementes de beterraba. De modo geral, o mtodo de gar utilizado quando o teste em papel-defiltro no oferece condies adequadas para o crescimento e a esporulao de determinados patgenos ou quando estes produzem colonias caractersticas no meio de cultura, sendo, deste modo, identificados macroscpicamente, sem a necessidade do preparo de lminas. Algumas desvantagens desses testes incluem os custos dos equipamentos e dos meios de cultura, alm de serem mais trabalhosos e requererem laboratrios melhor equipados. Uma outra desvantagem o fato de que os fungos de crescimento rpido encobrem os de desenvolvimento mais lento, tornando difcil a sua identificao, semelhana do mtodo do papel-de-filtro. Mtodos de sintoma em plntulas Ao contrrio dos mtodos anteriores, que utilizam meios de cultura artificiais, estes testes empregam a semeadura das sementes em solo, areia ou outros substratos semelhantes, previamente autoclavados. A finalidade principal dar condies para que as plntulas desenvolvam sintomas

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semelhantes aos encontrados em condies de campo. Em muitos casos, esses testes so mais adequados para simularem o desempenho de determinados lotes de semente no campo. Alguns dos mtodos mais utilizados so discutidos a seguir. a) Teste de Hiltner: (mtodo do tijolo modo), que empregado para alguns cereais como o trigo, a cevada e a aveia. As partculas devem ter tamanho mdio de 3 a 4 mm para oferecerem boa capilaridade e reteno de umidade. Aps o umedecimento, coloca-se uma camada de mais ou menos 8 cm em uma bandeja onde so semeadas 100 sementes distribudas equidistantemente e cobertas por outra camada de 3 cm de espessura. Aps o perodo de incubao de duas semanas em temperatura ambiente e sem iluminao, faz-se a avaliao das plntulas. O teste permite que as plntulas menos vigorosas sejam infectadas por patgenos transmitidos pela semente, como o Fusarium nivale por exemplo, simulando, assim, as condies de campo. b) Teste de emergncia em areia: mtodo muito utilizado na Alemanha para cereais, hortalias e sementes de essncias florestais. No Brasil, o mtodo foi recomendado pelo LANARV (Laboratrio Nacional de Referencia Vegetal) para lotes de sementes de soja que apresentem altos ndices de Phomopsis spp. e/ou Fusarium semitectum (mais detalhes no item 5). Alm desses, outros testes, utilizando misturas de solos padronizadas e esterilizadas, so empregados para detectar Drechslera (Helminthosporium), Fusarium e Septoria em sementes de cereais. As principais desvantagens desses mtodos so o perodo prolongado de incubao, a mo de obra e o fato de no detectarem os patgenos de final de ciclo. Neste ltimo caso, so necessrios os testes que vo alm do estdio de plntula. Porm, por serem onerosos e demorados, tais testes no so empregados em anlises de rotina. Testes bioqumicos A utilizao do inculo presente nas sementes para a inoculao em plantas indicadoras auxilia a identificao de bactrias e vrus. Existem

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metodologias refinadas para Xanthomonas campestris pv phaseoli (em feijo) e Erwinia stwartii (em milho). No caso de viroses, apesar do grande nmero de plantas indicadoras j conhecidas, o teste pouco usado em anlises de rotina, principalmente pela dificuldade na obteno de plantas indicadoras (Lucca Filho, 1987). Outro teste tambm empregado para a deteco de algumas bactrias importantes o mtodo da placa de lise por bacterifagos. Apesar de muito utilizado na pesquisa, devido a sua eficincia e alto grau de sensibilidade, este mtodo pouco usado em anlises de rotina. Uma das principais razes a falta de disponibilidade de bacterifagos especficos para as bactrias importantes que precisam ser identificadas. Testes sorolgicos As tcnicas de sorologia, que so comumente utilizadas em medicina e veterinria, tm sido recentemente empregadas na fitopatologia para detectar e identificar patgenos, especialmente vrus e bactrias fitopatognicas. H pouco mais de duas dcadas, a maior parte dos testes para esses patgenos requeriam o uso de plantas indicadoras ou os testes grow out que, alm de demorados, demandavam muita mo-deobra. Atualmente, os, testes sorolgicos abriram novas perspectivas no campo da fitopatologia para a identificao de fungos, vrus e bactrias. As principais vantagens desses testes so rapidez, alta sensibilidade e especificidade. Porm, as desvantagens incluem altos custos, equipamentos sofisticados, qualidade do antisoro e, principalmente, a impossibilidade da distino entre inculo vivel e invivel. Os principais testes utilizados so discutidos suscintamente a seguir. a) Aglutinao: em cada extremidade de uma lamina de microscpio so colocadas uma gota do extrato (antgeno) da semente a ser avaliada e uma gota do extrato de semente reconhecidamente livre do patgeno (testemunha). A seguir, sobre cada uma delas, adicionada uma gota do antisoro, observando a reao. A presena do antgeno promove a aglutinao, indicando reao positiva. 0 mtodo eficaz para viroses em alta concentrao nos tecidos, como o TMV (vrus do mosaico do tabaco).

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b) Esferas de ltex sensibilizadas com gama-globulina: neste mtodo, minsculas esferas de ltex so sensibilizadas com globulina do antisoro, para facilitar a visualizao do precipitado (floculado) formado pela reao positiva entre o antgeno (extrato) e o antisoro. Segundo Lucca Filho (1987), esta tcnica tem sido usada para a deteco do vrus do mosaico comum da soja (VMCS), utilizando plmulas e cotildones de plntulas. c) Microprecipitao: mtodo utilizado para testar tanto plntulas quanto sementes. 0 extrato (antgeno) obtido de semente ou folha. Em tubo capilar de 1,3 a 1,5 mm de dimetro por 100 mm de comprimento, so introduzidos o antisoro (aproximadamente13 mm) e, posteriormente, o antgeno, na mesma quantidade. A mistura dos dois se d por agitao circular do tubo e a formao de cogulos (microprecipitao) observada sob microscpio estereoscpico, empregando uma fonte de luz incidente nos tubos. d) Difuso em gar: 0 mtodo pode ser vertical (em tubo de ensaio) ou horizontal (em placa de Petri). Em ambos os casos, a difuso pode ser simples ou dupla, dependendo da maneira com que o antisoro introduzido. d.1) Difuso simples: 0 antgeno misturado ao gar e o antisoro (extrato) adicionado aos tubos (vertical) ou em seis orifcios, na placa de Petri, contendo agar + antisoro (horizontal). No caso da difuso horizontal, a vantagem reside no fato de se poder colocar diferentes diluies do antisoro, em trs orifcios e mais as testemunhas (extrato de planta ou semente sadia). A reao positiva caracterizada pela formao de bandas branco-opacas, horizontais, no tubo-deensaio e, em forma de arco, na placa de Petri. d.2) Difuso dupla: pode ser utilizado extrato de folha de plntula ou da semente. No mtodo vertical (tubo de ensaio), o antgeno separado do antisoro por uma camada de gar solidificado. No mtodo horizontal, tambm conhecido por Ouchterlony Test, em placa de Petri contendo gar previamente solidificado (1 % gar, 0,85% de cloreto de sdio e 0,02% de azida de sdio), so feitos seis orifcios em torno de um orifcio central onde colocado o antisoro. Nos outros orifcios, so colocados, alternadamente, o extrato do material

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(antgeno), em trs diluies e o extrato do material sadio (testemunha). Aps a incubao, em temperatura ambiente por um ou mais dias, feita a avaliao. A reao positiva se caracteriza pela formao de uma zona de precipitao, arco branco-opaco. e) Imunofluorescncia: o anticorpo especfico conjugado com um corante fluorescente. 0 extrato de semente (antgeno) colocado em placas especiais com alvolos pequenos. Posteriormente, adicionado o anticorpo conjugado com o corante. Aps a secagem, observar ao microscpio. Uma modificao deste mtodo a imuno-adsorvente imunofluorescncia. Nesse caso, as placas especiais so codificadas com o anticorpo (gama-globulina). Aps a adio do extrato da semente, somente o patgeno (antgeno) permanece aderido. Posteriormente, adicionar novamente o anticorpo, desta vez conjugado com o corante fluorescente, o qual adere s partculas do patgeno, produzindo fluorescncia. f) ELlSA - enzyme linked immunosorbent assay: o mtodo apresenta grande sensibilidade para a idenfificao de patgenos. Para este teste, so utilizadas placas especiais com alvolos pequenos, os quais so sensibilizados pelo antisoro especfico. As placas, aps incubao a 37C e por aproximadamente quatro horas, so enxaguadas com gua destilada e os alvolos preenchidos com o antgeno e incubadas por 16 horas, a 6C. Novamente as placas so enxugadas e as partculas do antisoro (extrato) conjugadas enzima so retidas pelo antgeno, fixado s paredes dos alvolos. Posteriormente, adicionado o substrato enzimtico acrescido de um buffer. 0 substrato ser hidrolizado pela enzima originando uma colorao amarelada que indica a reao positiva entre o antgeno e o antisoro. A sensibilidade do mtodo permite detectar uma semente infectada em uma populao de 1.000 sementes sadias. g) Radio-imuno-assay: este processo vem sendo utilizado pela Universidade Estadual de Iowa, para a quantificao do vrus do mosaico comum da soja (VMCS). Minsculas esferas so sensibilizadas com o anticorpo especfico que ir reter as partculas do vrus presentes no extrato da semente. A seguir, adicionar novamente o anticorpo, desta

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feita conjugado com um material radioativo, o qual se fixar s partculas de vrus. A medio da intensidade de radioatividade permite a quantificao do vrus. Maiores detalhes sabre testes sorolgicos podero ser obtidos na recente publicao de Almeida (1995). Microscopia eletrnica Algumas tcnicas so hoje utilizadas em microscopia eletrnica. A mais simples consiste na preparao direta, negative staining, onde metais pesados so utilizados para produzir uma imagem negativa das partculas de vrus, formando zonas escuras ao redor das mesmas. As vantagens do mtodo se resumem na possibilidade de medio do tamanho das partculas e na possvel estimativa da concentrao do vrus. Alm deste mtodo, pode-se empregar o ISEM lmmunosorbent Electron Microscopy ou o SSEM Serological Specific Electron Microscopy, onde antisoros so utilizados para sensibilizar os grids (telas), possibilitando a deteco de uma semente infectada em um Iote de 1.000 sementes sadias.

Fatores de variao nos testes de incubao

Diversos so os fatores que podem ocasionar variaes nos resultados dos testes de sanidade. Dentre os principais destacaremos alguns. a) Amostragem: a amostra deve ser coletada adequadamente, de acordo com os procedimentos prescritos pelas Regras de Anlise de Sementes. A amostra deve ser representativa do Iote de sementes, contendo todos os materiais e nas mesmas propores encontradas no Iote. b) Condies de armazenamento das amostras: o controle da temperatura e da umidade relativa do ar indispensvel para preservar a viabilidade da semente e dos patgenos. A durao e as condies de armazenagem podem levar a resultados completamente diferentes entre laboratrios, devido a perda da viabilidade dos patgenos de cam-

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po ou a proliferao de fungos de armazenagem (Penicillium spp. e Aspergillus spp.). c) Pr-tratamento: quando utilizado, o pr-tratamento da amostra deve eliminar somente os fungos saprfitas e no erradicar patgenos importantes. A concentrao de hipoclorito de sdio e o tempo de exposio so fatores importantes a serem considerados. d) Nmero de sementes testadas: normalmente, o nmero de sementes necessrias para os testes de sanidade estabelecido pelas Regras de Anlise de Sementes. Esse nmero pode variar, dependendo da sensibilidade do teste e da importncia do patgeno, do ponto de vista epidemiolgico. Por exemplo, para 0 vrus do mosaico da alface (LMV), so testadas 30.000 sementes. 0 nvel de tolerncia, neste caso, de 0,003%. Para algumas brassicas, este nmero cai para 1.000 sementes. Porm, para a maioria das grandes culturas normalmente testam-se 400 sementes por amostra, de acordo com as regras. e) Espaamento das sementes no gerbox ou na placa de Petri: fator importante para evitar a contaminao de sementes sadias pelo inculo proveniente de sementes infectadas. 0 espaamento depender do tamanho da semente e da taxa de desenvolvimento do patgeno em relao ao perodo de incubao. f) Meio de cultura: para o teste de blotter (papel-de-filtro) este fator tem pouca importncia. Porm para os mtodos que utilizam meios de cultura (BDA, MEA, etc.) a escolha do meio apropriado fator primordial para a uniformizao dos resultados. g) Temperatura: fator importante para o crescimento e a reproduo dos organismos. As temperaturas timas, mnimas e mximas para o crescimento e a reproduo (esporulao) variam de acordo com o patgeno. A temperatura tima para o crescimento do miclio pode ser diferente daquela para a esporulao do mesmo patgeno. h) Contedo de umidade: a quantidade de gua deve ser adequada para propiciar a germinao e o desenvolvimento dos patgenos, durante o transcorrer do teste. No teste de blotter (papel-de-filtro), a quantidade de gua regulada pelo nmero de folhas de papel-de-filtro. 0

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excesso de gua favorece o desenvolvimento de Alternaria spp. e bactrias, que podem exercer efeitos antagonsticos sobre outros fungos. A falta de umidade poder impedir a germinao das sementes ou o desenvolvimento dos microrganismos, afetando drasticamente os resultados do teste. i) Umidade relativa (UR %): tem pouca importncia nos testes normais de incubao, exceto nos testes de sintoma em plntulas. j) Luz: a qualidade e os ciclos de escurido/luz so importantes para a esporulao de muitos patgenos. A luz prxima do ultravioleta (NUV), com comprimento de onda de 365 nm, desejvel para a esporulao de alguns patgenos (Alternaria spp., em sementes de girassol). Porm, na maioria dos casos, a quantidade de raios ultravioleta presentes na luz branca fluorescente suficiente para estimular a esporulao da maioria dos patgenos nas sementes. I) Perodo de incubao: basicamente, depende da velocidade de crescimento do patgeno, que influenciada pela temperatura. 0 perodo de incubao deve ser adequado para permitir o grau mximo de infeco pelo patgeno. m) Condies de leitura na placa ou no gerbox: de acordo com a ISTA, uma das maiores fontes de variao nos resultados dos testes de sanidade o erro humano, devido a fontes de luz deficientes ou microscpios estereoscpicos inadequados. As duas fontes de luz (de preferncia fria) devem ser colocadas a uma distncia que permita boa iluminao das placas sem aquecer e desidratar as colonias dos fungos. Os microscpios estereoscpicos devem possuir aumentos de 6, 12, 25 e 50 vezes. n) Habilidade e experincia do analista: em testes de rotina, envolvendo a anlise de grande nmero de amostras, importante que o analista possua habilidade para reconhecer e identificar os patgenos, mesmo em estadios iniciais de desenvolvimento. Analistas com pouca experincia freqentemente confundem patgenos importantes com saprfitas (exemplo: Colletotrichum truncatum com Chaetomium sp., em sementes de soja).

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II. Soja Patologia e tratamento de sementes

Introduo
A soja [Glycine max (L.) Merrill] atacada por um grande nmero de doenas fngicas e algumas bacterianas, alm de viroses e nematides. Dentre estas, as doenas causadas por fungos so consideradas muito importantes, no somente devido ao maior nmero, mas pelos prejuzos causados, tanto no rendimento quanto na qualidade das sementes. Alm disso, muitos desses microrganismos tm, na semente, o seu principal veculo de disseminao e de introduo em novas reas de cultivo, onde, sob condies favorveis de ambiente, podero causar srios danos cultura. No Brasil, com a expanso da cultura da soja para as regies Central e Norte, os problemas para a produo de sementes de alta qualidade tm aumentado. A ocorrncia de condies climticas desfavorveis, como chuvas e altas temperaturas durante as fases de maturao e colheita, afeta, alm da qualidade fisiolgica, a sanidade das sementes. At o presente, foram identificados inmeros microrganismos em sementes de soja, porm, poucos so os que merecem destaque por serem economicamente importantes. A Tabela 2 cita os patgenos (ou saprfitas) comumente encontrados nas sementes; porm, alm desses, outros fungos podem ocasionalmente aparecer nas sementes. Todavia, no existe evidncia suficientemente documentada de que os mesmos so comuns ou causam doenas nessa leguminosa. Patgenos importantes como Phakopsora pachyrhizi (ferrugem) e Erysiphe diffusa (odio), no so transmitidos por sementes.

Anlise sanitria de sementes de soja

O principal mtodo utilizado na anlise de sementes de soja o do papel-

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7DEHOD (ou saprfitas) saprfitas) comumente comumente associados associados com com Tabela  2. Principais Principais patgenos patgenos (ou sementes sementesde desoja. soja. Fungos................................................................................................................... 0XFRU1 $OWHUQDULD1 2 3 0\URWKHFLXP URULGXP $VSHUJLOOXV 3 3 1HPDWRVSRUD FRU\OL %RWU\RGLSORGLD 1 1 3HQLFLOOLXP %RWU\WLV 1 1 &HSKDORVSRULXP 3HULFRQLD 3 3 3HURQRVSRUD PDQVKXULFD &HUFRVSRUD VRMLQD 3 4 3KLDORSKRUD JUHJDWD &HUFRVSRUD NLNXFKLL 1 3 3KRPRSVLV &KDHWRPLXP 1 1 3KRPD &ODGRVSRULXP 1 4 3K\OORVWLFWD &ROOHWRWULFKXP 3 4 3K\WRSKWKRUD PHJDVSHUPD & GHPDWLXP var. WUXQFDWD 1 1 3LWKRP\FHV &RU\QHVSRUD 3 3 & FDVVLLFROD 5KL]RFWRQLD VRODQL 1 1 5KL]RSXV &XUYXODULD 4 3,4 6HSWRULD JO\FLQHV 'LDSRUWKH SKDVHRORUXP var.FDXOLYRUD 4 3 6FOHURWLQLD VFOHURWLRUXP 'LDSRUWKH SKDVHRORUXP var. VRMDH 1 3 6FOHURWLXP UROIVLL 'UHFKVOHUD +HOPLQWKRVSRULXP 1 1 6WHPSK\OLXP (SLFRFFXP 3 1 7ULFKRGHUPD )XVDULXP 1 1 7ULFKRWKHFLXP *OLRFDGLXP 3 1 *ORPHUHOOD JO\FLQHV 8ORFODGLXP 3 1 9HUWLFLOOLXP 0DFURSKRPLQD SKDVHROLQD 1 0RQLOLD Bactrias................................................................................................................ 4  %DFLOOXV VXEWLOLV 3VHXGRPRQDV WDEDFL 4  ;DQWKRPRQDV JO\FLQHV &RU\QHEDFWHULXP IODFXPIODFLHQV 4 3VHXGRPRQDV VRORQDFHDUXP Vrus....................................................................................................................... 3 Vrus do mosaico comum da soja (SMV) Vrus da necrose anelar do fumo (Tobaco Ringspot Vrus-TRV) Vrus da necrose branca do fumo (Tobaco Streak Virus-TSV) Nematides............................................................................................................ 3 4 +HWHURGHUD JO\FLQHV (torres de solo misturados s sementes)
Contaminantes e/ou saprfitas; $VSHUJLOOXV: importante fungo de armazenagem; Patgenos 4 comumente causadores de doena em soja; Relatos no exterior (Richardson, 1979, 1981)
1 2 3

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de-filtro (Blotter). A experincia tem comprovado que este mtodo perfeitamente vivel, sendo o mais eficaz para a cultlura. Em casos especficos, o mtodo pode ser alterado, variando a temperatura e o perodo de incubao, para detectar patgenos como Sclerotinia sclerotiorum (mofo branco). Para a execuo do teste, as caixas plsticas (gerbox) podem ser utilizadas por muito tempo, bastando que as mesmas sejam lavadas com detergente, aps cada uso, enxaguadas e secas. Antes da utilizao, as mesmas devem ser desinfestadas com hipoclorito de sdio a 1,05% (Q-Boa a 20%). O papel-de-filtro (80g/m2) deve ser cortado em folhas de 10,5 cm x 10,5 cm, acondicionado em sacos de papel e esterilizado em estufa a 160C, por 20 minutos. Aps esse perodo, aguardar o resfriamento da estufa antes de abr-la. Para a montagem, colocar quatro folhas de papel-de-filtro em cada gerbox previamente esterilizado e adicional gua (autoclavada de prefncia), suficiente para umedecer o papel, (evitar excessos que favorecem a ocorrncia de bactrias e Alternaria spp.). Posteriormente, tomar, aleatoriamente, 20 sementes que so dispostas no gerbox, na forma de 5 x 4. Montar 20 gerbox (total de 400 sementes) por amostra. Aps a montagem, o material deve ser mantido em incubao por sete dias a 202C (Brasil, 1992). A Avaliao feita em cada semente, sendo anotada, em ficha apropriada a ocorrncia dos diversos patgenos. Aspergillus flavus e Penicillium spp., apesar de considerados saprfitas por alguns autores, devem ser contados por serem fungos de armazenagem, responsveis pela completa deteriorao das sementes, quando as condies de armazenagem so inadequadas (umidade e temperatura elevadas). Vale ressaltar que a luz no fator limitante nos testes de sanidade de sementes de soja. Bons resultados so obtidos com luz branca fluorescente ou mesmo com luz natural. Todavia, laboratrios credenciados pelo LANARV/MAPA devero seguir as Regras para Anlise de Sementes (Brasil, 1992) empregando ciclos alternados de 12 h de luz e 12 h de escurido.

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Doenas na cultura e patgenos importantes nas sementes

Queima da haste e da vagem - Phomopsis sp.
Esta doena ocorre naturalmente na maioria das lavouras de soja, sem causar srios prejuzos ao rendimento. Porm, pode reduzir a qualidade das sementes, especialmente quando ocorrem perodos chuvosos associados com altas temperaturas durante a fase de maturao. Os sintomas da doena na planta aparecem durante a fase final do ciclo, sendo caracterizados por pontuaes pretas (picndios), que so formados linearmente na haste e pecolos e, ao acaso, sobre as vagens. As sementes infectadas, aps o perodo de incubao apresentam normalmente o miclio branco, compacto, sob o qual aparecem os picndios. No raramente, Phomopsis sp. apresenta apenas picndios sobre a semente. Nesses casos, a identificao segura deve ser feita com o auxlio do microscpio biolgico, usando-se aumentos de at 400 vezes, para observar a presena dos esporos alfa e beta. Muitas vezes, ambos os tipos de esporos so produzidos no mesmo picndio (caracterstica da espcie), porm, algumas vezes, so produzidos apenas alfa ou beta num picndio. O fungo torna o teste padro de germinao (rolo de papel, 25C) invivel em lotes de sementes com altos ndices de infeco. Todavia, o mesmo no afeta a germinao em areia ou a emergncia de plntulas no solo, quando a semente possui boa qualidade fisiolgica. Por essa razo, deve-se, em tais circunstncias, substituir o teste padro de germinao pelo de germinao em areia ou pelo teste de tetrazlio, que em conjunto com o teste de sanidade, fornece um diagnstico completo da qualidade da semente (Figura 1). Durante a armazenagem em condio ambiente, Phomopsis sp. perde viabilidade rapidamente, ocorrendo, ao mesmo tempo, um aumento gradual na porcentagem de germinao em laboratrio (Figura 2). Este aumento na germinao depende tambm da qualidade fisiolgica da semente. Danos mecnicos, deteriorao por umidade e danos por percevejo, so freqentemente, responsveis pela baixa qualidade da semente e, no raramente, esto associados com Phomopsis sp. Nesses casos, mesmo que o fungo tenha perdido sua viabilidade durante a armazena-

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Figura 1. DIACOM: diagnstico completo (patologia + tetrazlio)

100 80 60 Semente sadia Phomopsis sp Germinao Emergncia em casa de vegetao

%
40 20 0 Junho Setembro Dezembro

Foto: Ademir Assis Henning

Meses de armazenagem

Figura 2. Efeito do perodo de armazenagem sobre o ndice de sementes infectadas por Phomopsis sp. e a qualidade fisiolgica de sementes de soja Paran. Embrapa Soja. Londrina, PR. 1981

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100 80 60 Semente sadia Phomopsis sp Germinao Emergncia em casa de vegetao

%
40 20 0 Junho Setembro Dezembro

Meses de armazenagem

Figura 3. Efeito do perodo de armazenagem sobre o ndice de sementes infectadas por Phomopsis sp. e a qualidade fisiolgica de sementes de soja Bossier. Embrapa Soja

gem a germinao poder no alcanar o padro mnimo necessrio para sua comercializao (Figura 3).

Cancro da haste - Diaporthe phaseolorum f. sp. meridionalis (Phomopsis meridionalis) - Morgan-Jones

O cancro da haste (Figura 4) foi constatado pela primeira vez na safra 1988/1989 no Sul do Paran e em uma pequena rea em Mato Grosso. Sua disseminao foi bastante rpida, sendo encontrado na safra seguinte, em todas as regies produtoras de soja do pas sendo que na safra 1991/1992, milhares de hectares de soja dos Estados do Paran, Santa Catarina e, inclusive, do Paraguai, foram dizimados pelo cancro da haste. A taxa de transmisso do fungo pela semente (Figura 5) bastante baixa porm, se as sementes no forem tratadas com fungicidas adequados (Tabela 2), o fungo pode ser introduzido em reas antes livres do patgeno. As poucas plantas infectadas no primeiro ano multiplicaro o inculo podendo resultar em grandes perdas na safra seguinte se a cultivar for suscetvel e as condies climticas forem favorveis, perodo chuvoso nos primeiros 30-40 dias aps a emergncia das plntulas.

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Figura 4. Cancro da haste da qualidade da semente

Foto: Jos Tadashi Yorinori

Figura 5. Agente do cancro da haste (Dpm) em sementes

Foto: Jos Tadashi Yorinori

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Antracnose - Colletotrichum dematium (Pers. ex. fr.) Grove var. truncata (Schw.) - Von Arx.
A antracnose, causada por C. dematium var. truncata (C. truncatum), foi responsvel por srios prejuzos s lavouras de soja, especialmente na regio do Cerrado. Os sintomas desta doena podem ser observados visualmente, desde as fases iniciais de desenvolvimento da planta, ocasionando leses nos cotildones (Figura 6), na haste e nos ramos, os quais aps secarem ficam tomados por pontuaes escuras, os acrvulos, onde so observadas inmeras setas escuras, que tambm a caracterstica utilizada para a identificao do patgeno nas sementes, aps o perodo de incubao. O fungo pode causar deteriorao da semente, morte de plntulas e infeco sistmica em plantas adultas. Com a expanso da cultura para a regio do Brasil central, em algumas safras, tem sido observado um aumento na ocorrncia de C. truncatum em sementes de soja principalmente quando ocorre atraso na colheita, devido a chuvas, especialmente em lavouras com populao excessiva de plantas. De modo geral, o uso extensivo do tratamento de sementes com fungicidas, a melhor qualidade da semente e o desenvolvimento de cultivares mais adaptados regio, fizeram com que a importncia da antracnose e do fungo na semente diminusse.
Foto: Ademir Assis Henning

Figura 6. Plntula com C. truncatum no cotildone

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Mancha Prpura - Cercospora kikuchii (Matsu & Tomoy) Gardner

Embora o sintoma caracterstico causado por C. kikuchii na semente seja a mancha-prpura (Figura 7), nem todas as sementes infectadas apresentam esta colorao do tegumento. O fungo pode tambm atacar as vagens, hastes e pecolos, causando manchas castanho-avermelhadas, e as folhas, causando crestamento foliar. A fase de crestamento foliar, que provoca a desfolha prematura e ocorre simultaneamente com Septoria glycines (doenas de final de ciclo), pode causar reduo da produtividade. Apesar de ser o fungo mais freqente em sementes de soja, no Brasil, trabalhos conduzidos pela Embrapa Soja, no demonstraram efeito negativo do fungo sobre a qualidade da semente, em ensaios conduzidos no Estado do Paran. Sementes de soja dos cultivares Paran, Davis e Bossier, com 0, 5, 10, 20 e 40% de mancha-prpura no diferiram entre si com relao germinao (25C rolo de papel), emergncia a campo e rendimento. O maior ndice de infeco por C. kikuchii observado na semente colhida foi de 2,12%, indicando que, nas condies em que o estudo foi realizado, a taxa de transmisso semente-planta-semente foi bastante baixa. Por esse motivo, o padro de tolerncia de sementes com mancha prpura, antes exigido por lei, foi retirado pelo SNPC/SARC/MAPA.

Foto: Ademir Assis Henning

Figura 7. Mancha prpura em sementes (C. kikuchii)

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O tratamento das sementes com fungicidas sistmicos (Tabela 3), pode ser adotado como medida preventiva na disseminao do patgeno para novas reas, onde sob condies adequadas de temperatura e umidade, poder causar severos danos soja e permanecer vivel nos restos de cultura.

Mancha olho-de-r - Cercospora sojina Hara

Nas folhas, o sintoma mais caracterstico da doena a presena de leses castanho-cinza claro com bordas avermelhadas, as quais aparecem prximo fase de florao. O fungo pode atacar tambm as hastes, vagens e as sementes. Nas hastes, as leses so alongadas, com bordas pardas, as quais so mais evidentes no final do ciclo. As sementes infectadas podem possuir colorao cinza esverdeada no tegumento que, freqentemente, apresenta rachaduras. A utilizao de cultivares resistentes doena tornou espordica a presena do patgeno em lotes comerciais de semente. Para reduzir a possibilidade de transmisso e introduo de novas raas do patgeno em novas reas de cultivo, o tratamento da semente (Tabela 3) recomendado.

Podrido negra das razes - Macrophomina phaseolina (Tassi) Goid

A doena ocorre com bastante freqncia e pode causar prejuzos, em condio de clima seco. Este problema pode ser agravado em lavouras onde o preparo do solo no adequado, permitindo a formao do p-degrade e, conseqentemente, as plantas desenvolvem sistema radicular mais superficial, no suportando veranicos. A transmisso por semente, embora ocorra, no importante, uma vez que o inculo existe na maioria dos solos. As plantas atacadas no campo apresentam deteriorao do sistema radicular, com formao intensa de microesclercios sob a epiderme, os quais matam as plantas prematuramente (Figura 8). Na semente, aps o perodo de incubao em gerbox, o fungo normalmente apresenta forma-

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7DEHOD  e respectivas doses, para o tratamento de sementes de soja. Tabela 3.Fungicidas Fungicidas e respectivas doses, para o tratamento de semenXXVI Reunio de Pesquisa de Soja da Regio de Central Brasil. Corntes de soja. XXVII Reunio de Pesquisa Sojado da Regio lio Procpio, Agosto/2005. Central do PR. Brasil. Cornlio Procpio, PR. Agosto/2005.
Nome Nome comum comum 2 y Produto Produto comercial comercial2 Dose/100 kg de semente Dose/100 kg de semente1 Ingrediente ativo ativo (gramas) Ingrediente (gramas) y Produto Produto comercial comercial (g (g ou ou ml) ml)
1

I. Fungicidas de contato.................................................................................................................... Captan 90 g y Captan 750 TS y 120 g Thiram 70 g (SC) ou 144 g (TS) y Rhodiauran 500 SC y 140 ml y Thiram 480 TS y 300 ml Tolylfluanid 50 g y Euparen M 500 PM y 100 g II. Fungicidas sistmicos................................................................................................................... Carbendazin 30 g y Derosal 500 SC y 60 ml Carbendazin + Thiram 30 g + 70 g 4 y Derosal Plus y 200 ml Carbendazin + Thiram 30 g + 70 g 4 y Protreat y 200 ml 75 g + 75 g ou 50 + 50 g Carboxin + Thiram 4 y Vitavax + Thiram PM y 200 g 3,4 y Vitavax + Thiram 200 SC y 250 ml Difenoconazole 5g y Spectro y 33 ml Fludioxonil + Metalaxyl M 35 g + 10 g 4 y Maxim XL y 100 ml Thiabendazole 17 g y Tecto 100 (PM e SC) y 170 g ou 31 ml Thiabendazole + Thiram 17 g + 70 g 4 y Tegram y 200 ml Tiofanato metlico 70 g y Cercobin 700 PM y 100 g y Cercobin 500 SC y 140 ml y Topsin 500 SC y 140 ml
As doses dos produtos isolados so aquelas para a aplicao seqencial (fungicida de contato e sistmico). Caso contrrio utilizar a dose do rtulo. 2 Podero ser utilizadas outras marcas comerciais, desde que sejam mantidos a dose do ingrediente ativo e o tipo de formulao. 3 Fazer o tratamento com pr-diluio, na proporo de 250 ml do produto + 250 ml de gua para 100 kg de semente. 4 Misturas formuladas comercialmente e registradas no MAPA/DDIV/SDA. &8,'$'26 devem ser tomadas precaues na manipulao dos fungicidas, seguindo as orientaes da bula dos produtos.
1

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Figura 8. Sintoma de Macrophomina phaseolina na raiz (presena de microesclerdios).

o de miclio escuro com abundante produo de microesclercios pretos sobre a semente mas, que podem espalhar-se sobre o papel-de-filtro. Esta caracterstica permite a identificao do patgeno com bastante segurana, mesmo a olho nu (Figura 9).

Figura 9. Microesclerdios de M. phaseolina sobre o papel-de-filtro - semente infectada.

Foto: Ademir Assis Henning

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Tombamento e morte e reboleira - Rhizoctonia solani (Kuhn)

Este fungo pode causar doena tanto na fase de plntula (tombamento) quanto na fase adulta (morte em reboleira), durante o perodo de florao. Os sintomas nas plntulas so caracterizados por leses marromavermelhadas, na regio do colo (Figura 10). A doena pode ocorrer tambm em plantas adultas, principalmente em reas recm desmatadas onde as reboleiras (Figura 11) comeam a aparecer aproximadamente durante a fase de florao com o amarelecimento das folhas, clorose ao longo das nervuras, murchamento das folhas jovens e broto apical. Finalmente, ocorre murcha e morte das plantas, que retm os pecolos voltados para baixo. O fungo um habitante do solo, permanecendo vivel em restos de cultura. Em algumas regies do sul, em reas novas de cultivo, tm sido relatadas severas perdas em lavouras, porm, de modo geral, aps dois ou trs anos de cultivo, a incidncia da doena diminui tendendo a desaparecer na maioria dos casos. A taxa de transmisso do fungo por semente baixa e sua importncia questionvel, j que o mesmo ocorre naturalmente nos solos. A identificao do fungo no teste de sanidade de semente feita com base na caracterstica do miclio marrom, onde as hifas septadas possuem ramificao em 90C, j que o mesmo no produz esporos.
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Figura 10. Tombamento por Rhizoctonia solani

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Fidgura 11. Morte em reboleira R. solani, rea nova em Canoinhas, SC

Podrido branca da haste e da vagem - Sclerotinia sclerotiorum Lib. (De Bary)

A doena pode causar severas perdas em anos chuvosos e com temperaturas amenas em algumas regies do sul do Paran e Minas Gerais. As plantas atacadas apresentam o miclio branco, algodonoso, que se desenvolve sobre a haste e ramos da soja, onde, posteriormente, so formados os esclercios (Figura 12). Tais estruturas de resistncia podem igualmente ser produzidas no interior da haste, adquirindo a forma cilndrica. Durante a colheita, os esclercios so misturados s sementes e espalhados no solo, onde podem permanecer viveis por vrios anos. A transmisso por semente pode ocorrer tanto atravs de miclio dormente (interno) como esclercios misturados s sementes. A chance da transmisso do fungo atravs de esclercios misturados s sementes pode ser reduzida, ou praticamente eliminada, durante o beneficiamento da semente pelo emprego do separador espiral seguido da mesa de gravidade. Quanto transmisso por miclio dormente, ainda que a taxa seja bastante baixa num lote de semente, a sua importncia reside na possibilidade de introduo do inculo em novas reas de cultivo. O fungo, devido formao de estruturas de resistncia (esclercios), de difcil

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Figura 12. Mofo branco em hastes

erradicao aps introduzido numa rea. O tratamento de sementes com os fungicidas do grupo dos benzimidazis (Tabela 3), poder ser adotado como medida de segurana para reduzir tal risco.

Fusarioses - Fusarium semitectum (Berk. & Rav.)

Diversas espcies de Fusarium tm sido relatadas, porm, em nossas condies, Fusarium semitectum o mais comum em sementes de soja. Este fungo, considerado por alguns autores como parasita fraco ou saprfita, foi propositadamente includo entre os fungos fitopatognicos, por causar problemas de germinao em laboratrio, de maneira semelhante ao Phomopsis sp (Figura 13). O fungo est comumente associado s sementes que sofreram atraso de colheita ou deteriorao por umidade no campo. Fusarium semitectum, apesar de isolado de cotildones de

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Figura 13. Fusarium semitectum

plntulas anormais, oriundas de sementes naturalmente infectadas, no produziu nenhum sintoma de doena, quando inoculado em plantas de soja e girassol, em casa-de-vegetao. O sintoma tpico de Fusarium semitectum em sementes de soja, aps o perodo de incubao, a presena de miclio normalmente branco, porm variando do amarelo-pssego at o marrom (dependendo da idade da cultura) e com aspecto algodonoso e denso. Outras espcies fitopatognicas de fusarium como: Fusarium solani (causa da sndrome da morte sbita (SDS) ou podrido vermelha das razes (PVR) (Figura 14) e Fusarium oxysporum (podrido de sementes e morte de plntulas), so fungos de ocorrncia espordica em sementes de soja. Alm desses patgenos, outros como Myrothecium roridum (mancha-demirotcio), Corynespora cassiicola (mancha-alvo e podrido radicular) e

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Figura 14. Podrido vermelha da raiz

Sclerotium rolfsii (murcha-de-esclercio), podem eventualmente ocorrer nas sementes.

Tratamento de sementes
A rpida expanso da cultura da soja, nas ltimas trs dcadas, quase sempre feita sem o mnimo cuidado fitossanitrio, permitiu que a maioria dos patgenos fosse disseminada a todas as regies produtoras, atravs da semente, seu principal veculo de disseminao e introduo em novas reas de cultivo. Na cultura da soja, a obteno de uma lavoura com populao adequada de plantas depende da correta utilizao de diversas prticas. O bom preparo do solo, a semeadura na poca adequada, em solo com boa dispo-

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nibilidade hdrica, a utilizao correta de herbicidas e a boa regulagem da semeadora (densidade e profundidade) so prticas essenciais, estando o seu sucesso condicionado utilizao de sementes de boa qualidade. Todavia, freqentemente, a semeadura no realizada em condies ideais, o que resulta em srios problemas na emergncia da soja, havendo, muitas vezes, a necessidade de ressemeadura. Em tais circunstncias, o tratamento da semente com fungicidas (sistmico e contato) oferece garantia adicional ao estabelecimento da lavoura a custos reduzidos (menos de 0,5% do custo de instalao da lavoura). O tratamento de sementes, com fungicidas, uma prtica que vem sendo utilizada por um nmero cada vez maior de sojicultores. O volume de sementes tratadas com fungicidas, que, na safra 1991/92, no atingia 5% da rea semeada, passou para 93% na safra 2001/02.** Alm de controlar patgenos importantes transmitidos pela semente, o tratamento de sementes uma prtica eficiente para assegurar populaes adequadas de plantas, quando as condies edafoclimticas durante a semeadura so desfavorveis germinao e rpida emergncia da soja, deixando a semente exposta por mais tempo a fungos habitantes do solo como: Rhizoctonia solani., Fusarium spp. e Aspergillus spp. (A. flavus) e Pythium spp. (principalmente no sul) que, entre outros, podem causar a sua deteriorao no solo ou a morte de plntulas.

Como tratar a semente

A funo dos fungicidas de contato proteger a semente contra fungos do solo e dos fungicidas sistmicos, principalmente do grupo dos benzimidazis, controlar fitopatgenos presentes nas sementes. Desse modo importante que os fungicidas estejam em contato direto com a semente. O tratamento de semente com fungicidas, a aplicao de micronutrientes (cobalto e molibdnio) e a inoculao podem ser feitos

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Conforme informado pelo Engenheiro Agrnomo Antonio Carlos Roessing e o Economista Heveraldo Camargo Mello, no Seminrio Interno da Embrapa Soja Sistemas de Produo de Soja no Brasil em 30.08.02.

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de forma seqencial, com mquinas especficas de tratar sementes, desde que essas disponham de tanques separados para os produtos, uma vez que foi proibida a mistura de agrotxicos em tanque (Instruo Normativa N 46/2002 de 24 de julho de 2002, que revoga a portaria SDA N 67 de 30 de maio de 1995).

Tratamento utilizando mquinas de tratar sementes

Dentre as diversas vantagens que essas mquinas apresentam em relao ao tratamento convencional (tambor) destacam-se: a) menor risco de intoxicao dos operadores, uma vez que os fungicidas so utilizados via lquida; b) melhores cobertura e aderncia dos fungicidas, micronutrientes e do inoculante s sementes; c) rendimento em torno de 60 a 70 sacos por hora; e d) maior facilidade operacional j que o equipamento pode ser levado ao campo, pois possui engate para a tomada de fora do trator. Obs.: existem hoje no mercado mquinas para tratamento industrial, com capacidade de at 12-13 toneladas/hora.

o!! n Ate O produtor deve tomar cuidado ao adquirir os

fungicidas, micronutrientes e inoculantes, optando por formulaes lquidas ou p que possibilitem que o volume final da calda no ultrapasse a 300 mL/50 kg de sementes.

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Referncias
FERREIRA, L.P.; LEHMAN, P.S.; ALMEIDA, A.M.R. Doenas da soja no Brasil. Londrina: EMBRAPA-CNPSo, 1979. 41p. (EMBRAPA-CNPSo. Circular Tcnica, 1). FRANA NETO, J. de B.; COSTA, N.P. da; HENNING, A.A.; ALMEIDA, A.M.R.; BARRETO, J.N. Efeito da aplicao de fungicidas foliares, sobre a maturao fisiolgica de sementes de soja. In: SEMINRIO NACIONAL DE PESQUISA DE SOJA, 2, 1984, Campinas. Resumos... Londrina: EMBRAPA-CNPSo, 1984a. p.136. FRANA NETO, J. de B.; HENNING, A.A. Qualidade fisiolgica e sanitria de sementes de soja. Londrina: EMBRAPA-CNPSo, 1984b. 39p. (EMBRAPA-CNPSo. Circular Tcnica, 9). FRANA NETO, J. de B.; HENNING, A.A. DIACOM: diagnstico completo da qualidade da semente de soja. EMBRAPA-CNPSo, 1992. 22 p. (EMBRAPA-CNPSo, Circular Tcnica, 10). HENNING, A.A. Patologia de sementes. Londrina: EMBRAPA-CNPSo, 1996. 43 p. (EMBRAPACNPSo, Documentos, 90). HENNING, A.A.; FRANA NETO, J. de B. Problemas na avaliao de germinao de sementes de soja com alta incidncia de Phomopsis sp. Revista Brasileira de Sementes, Braslia, v.2, n.5, p.9-22, 1980. HENNING, A.A.; FRANA NETO, J. de B. Effect of Phomopsis spp. on soybean seed quality in Brazil. In: CONFERENCE ON THE DIAPORTHE / DIAPORTHE DISEASE COMPLEX OF SOYBEAN, 1984, Fort Walton Beach. Proceedings... Springfield, 1984. p.66-7. HENNING, A.A.; FRANA NETO, J. de B.; COSTA, N.P. da. Avaliao dos efeitos de diferentes nveis de sementes com mancha-prpura, sobre a qualidade fisiolgica e sanitria das sementes. In: EMPRESA BRASILEIRA DE PESQUISA AGROPECURIA. Centro Nacional de Pesquisa de Soja. Resultados de pesquisa de soja 1980/81. Londrina, 1981. p.290-294. HENNING, A.A.; FRANA NETO, J. de B.; COSTA, N.P. da. Recomendaes de fungicidas para o tratamento de sementes de soja. Londri-

Patologia e tratamento de sementes: noes gerais

51

na: EMBRAPA-CNPSo, 1984. 4p. (EMBRAPA-CNPSo. Comunicado Tcnico, 31). HENNING, A.A.; FRANA NETO, J. de B. Control of Sclerotinia sclerotiorum (Lib) de Bary and Alternaria spp., in sunflower seeds. In: INTERNATIONAL SUNFLOWER CONFERENCE, 11., Mar del Plata. Proceedings... Mar del Plata, 1985. p.475-478. HENNING, A.A.; MATSUDA, J.M. Efeito do ambiente e do perodo de armazenamento sobre a viabilidade de Colletotrichum truncatum em sementes de soja. Informativo ABRATES, v.3, n.3, p.101, 1993. Edio de Resumos do VIII Congresso Brasileiro de Sementes, Foz do Iguau, ago. 1993. HENNING, A.A.; CATELLAN, A.J.; KRZYZANOWSKI, F.C.; FRANA NETO, J. de B. Tratamento e inoculao de sementes de soja. Londrina: EMBRAPA-CNPSo, 1994. 4p. (EMBRAPA-CNPSo. Comunicado Tcnico, 54) NEEGAARD, P. Seed pathology. 2ed. London: McMillan Press, 1979. 2v. RICHARDSON, M.J. An annotated list of seed-borne diseases. 3ed. Kew: Commonwealth Mycological Institute, 1979. 320p. RICHARDSON, M.J. Supplement to an annotated list of seed-borne diseases. 3ed. Zurich: International Seed Testing Association, 1981. 78p. SINCLAIR, J.B.; BACKMAN, P.A. (Ed.). Compendium of soybean diseases. 3ed. St. Paul: APS Press, 1989. 106 p. WALTERS, H.J. Purple seed stain and Cercospora leaf blight caused by Cercospora kikuchii. In: WORLD SOYBEAN RESEARCH CONFERENCE, 3., 1984, Iowa. Program and Abstract. Ames: Iowa State University, 1984. p.5. WALTERS, H.J. Soybean leaf blight caused by Cercospora kikuchii. Plant Disease, St. Paul, v.64, p.961-962, 1980. WILCOX, J.R.; ABNEY, T.S. Effects of Cercospora kikuchii on soybeans. Phytopathology, St. Paul, v.63, 796-797, 1973.

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YORINORI, J.T. Avaliao de danos causados por Septoria glycines em cultivares de soja. In: EMPRESA BRASILEIRA DE PESQUISA AGROPECURIA. Centro Nacional de Pesquisa de Soja. Resultados de pesquisa de soja 1982/83. Londrina: 1983. p.213-221 YORINORI, J.T. Tratamento de sementes de soja para controle da disseminao de Cercospora sojina Hara (mancha olho-de-r). In: SEMINRIO NACIONAL DE PESQUISA DE SOJA, 3., 1984, Campinas. Resumos... Londrina: EMBRAPA-CNPSo, 1984. p.33. YORINORI, J.T. Cancro da haste da soja. Londrina: EMBRAPA-CNPSo, 1990. 8p. (EMBRAPA-CNPSo. Comunicado Tcnico, 44).