OBJETIVOS

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a u l a

Receptores de membrana e
princpios de sinalizao celular II

Ao final desta aula, voc dever ser capaz de:

Entender os mecanismos de gerao de mensageiros
secundrios.
Entender a dinmica de uma cascata de sinalizao.
Entender as principais vias de sinalizao
por receptores enzimticos.
Associar fenmenos como a resposta inflamatria
e o cncer a fenmenos de sinalizao.

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Biologia Celular I | Receptores de membrana e princpios de sinalizao celular II

INTRODUO

Na aula anterior, vimos que a comunicao entre as clulas se baseia

no reconhecimento de uma molcula sinalizadora (tambm chamada ligante)
por uma protena receptora. Vimos tambm que um sinalizador que seja
uma molcula pequena e hidrofbica pode atravessar a bicamada lipdica
e ser reconhecido no citoplasma, ou mesmo chegar ao ncleo da clula. J
os ligantes hidroflicos so reconhecidos por protenas expostas na superfcie
da clula-alvo, desencadeando uma cascata de sinalizao no citossol.
Das trs vias de sinalizao desencadeadas por ligantes hidroflicos, j
foram estudadas na Aula 13 os canais ativados por ligantes e os princpios
de sinalizao via protena G. O que estudaremos a partir de agora so os
eventos que a protena G dispara no meio intracelular. A seguir, abordaremos
o funcionamento das vias enzimticas de sinalizao de receptores.

Adenilciclase
Volte Figura 13.10. Note que as protenas ali esquematizadas
parecem estar brincando de telefone sem fio, aquela brincadeira em
que o primeiro da fila diz uma frase para o segundo, que repete para
o terceiro e assim por diante at o ltimo da fila repetir a frase inicial.
Na brincadeira, o engraado a distoro da mensagem inicial; j na
vida celular, a mensagem deve ser encaminhada sem erros para que
o resultado final seja o esperado. A adenilciclase, uma vez ativada
por protena G, hidrolisa ATP de um modo especial, retirando dois
fosfatos de uma vez s (Figura 14.1). O que sobra, o AMP (adenosina
monofosfato), torna-se uma molcula cclica, sendo chamado AMP
cclico (AMPc).

Figura 14.1: A protena G ativa a adenilciclase, levando-a

a formar AMPc a partir de ATP.

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muito baixas no citoplasma das clulas. Assim, quando uma mensagem chega e reconhecida

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por um receptor que ativa protena G, que por sua vez ativa adenilciclase, que produz AMPc,

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O AMPc, como todo mensageiro secundrio, normalmente est presente em concentraes

a elevao sbita da concentrao desse mensageiro prontamente percebida pela clula. Muitas
enzimas citoplasmticas so ativadas por AMPc e reagem a esse pico de concentrao. Para esse
mecanismo funcionar bem, preciso que a concentrao de AMPc baixe to rpido quanto
subiu, assim, a clula poder perceber o prximo sinal. A enzima responsvel por isso a AMPcfosfodiesterase, que faz com que a molcula fique linear (passando a se chamar AMP-5monofosfato),
perdendo a funo. Mas ela no vira lixo, no! Pode mais tarde receber outros fosfatos, voltando
a ser o precioso ATP.

E o AMPc? Faz o qu?

O AMPc dispara uma enorme diversidade de eventos, ativando enzimas, abrindo canais
inicos etc. com muitas conseqncias em termos da atividade celular. Uma das enzimas mais
importantes ativadas por AMPc a protena quinase A (PKA). Uma protena quinase uma
enzima que fosforila outras protenas. A protena quinase A ganhou esse nome por causa de seu
modo de ativao, o A de AMPc.

D uma paradinha!
Esse negcio est ficando confuso, no? Tudo aconteceu por causa de um ligante que nem mesmo
entrou na clula! Vamos resumir a seqncia de eventos para que fique mais claro:

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E que diferena faz uma protena ser fosforilada?

Muita! Protenas que podem ser fosforiladas alternam entre
um estado ativado e outro inativo, um deles com fosfato e outro sem.
o mesmo mecanismo liga/desliga da protena G em relao ao GTP,
lembra (Figura 13.9)? Essa mudana de estado das protenas que vai
mudar finalmente o comportamento da clula, em resposta quela
mensagem que ela recebeu do ligante l na membrana. A PKA tambm
pode entrar no ncleo e ativar genes que passaro a ser transcritos,
o que tambm vai mudar o comportamento celular, s que mais
lentamente, j que depende de mudanas de expresso gnica.
A seqncia de eventos entre o receptor e a mudana de comportamento da clula chamada cascata de sinalizao (Figura 14.2).

Figura 14.2: Cascata de eventos entre

o reconhecimento pelo receptor de
superfcie e a resposta final.

Bonita e cheirosa? Depende da protena G.

Uma das funes mais interessantes do AMPc servir de mensageiro em neurnios olfativos. Esses
neurnios possuem centenas de receptores acoplados protena G (cada neurnio tem receptores para
apenas um tipo de odor). Quando as molculas odorficas se ligam aos receptores, eles ativam uma
protena G especial, que ativa adenilciclase, que produz AMPc (at aqui, tudo igual). Esse mensageiro
abre canais de sdio especiais desses neurnios, despolarizando-os e levando o impulso nervoso adiante
at que o cheiro atinja o crebro.
Os impulsos nervosos do sistema visual tambm so gerados por fotorreceptores acoplados protena
G em neurnios especiais da retina, mas ao invs de ativar adenilciclase ela interfere com a atividade de
guanilil ciclase (que forma GMP cclico, GMPc) e a fosfodiesterase correspondente. Os bastes, neurnios
responsveis pela viso na penumbra, tm canais de sdio ligados GMPc permanentemente abertos
no escuro. Quando os fotorreceptores (que tm o nome especial de rodopsina) recebem um fton,
a protena G acoplada ativa a GMPc fosfodiesterase, que lineariza o GMPc, soltando-o dos canais de sdio,
que se fecham. Com isso, o neurnio hiperpolariza, transmitindo o impulso. Quantos GMPcs ser que sua
retina produziu enquanto voc lia isto aqui?

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Outra enzima freqentemente ativada por protena G a fosfolipase C. Como seu nome
est dizendo, essa enzima hidrolisa um fosfolipdio. Uma fosfolipase classificada como A, C ou
D de acordo com o local onde ela corta o fosfolipdio. A fosfolipase C corta entre o fosfato e o
glicerol (para lembrar a estrutura do fosfolipdio, veja a Aula 7). No qualquer fosfolipdio que pode
ser clivado pela fosfolipase C. O alvo da fosfolipase C ativada por protena G um fosfolipdio
da face interna da membrana plasmtica, o fosfatidilinositol 4,5 bifosfato, mais conhecido pela
sigla PIP2. A clivagem gera duas molculas: 1) o diacilglicerol, tambm conhecido como DAG,
um glicerol com duas caudas de cido graxo, que permanece na membrana; e 2) o inositol
trifosfato (IP3), que liberado para o citoplasma (Figura 14.3).

Figura 14.3: Modo de ao

da fosfolipase C ativada por
protena G.

DAG e IP3, separados, mas trabalhando em conjunto

As duas molculas produzidas, DAG e IP3, tero funes diferentes em locais diferentes.
O DAG permanece na bicamada interna da membrana plasmtica, onde se movimenta com
grande velocidade e vai recrutar do citoplasma uma protena quinase ainda no estado inativo.
Ela s ser ativada por clcio depois de recrutada, por isso se chama protena quinase C (PKC).
E de onde vem o clcio que vai ativ-la? Isso funo da outra molcula produzida pela fosfolipase,
o IP3. Ele difunde rpido pelo citoplasma e vai encontrar seu receptor na membrana do retculo
endoplasmtico. Esse receptor do tipo canal, e quando o IP3 se liga ele abre um canal que deixa
vazar clcio para o citoplasma, ativando a PKC e vrias outras protenas (Figura 14.3).
Nesse tipo de cascata de sinalizao, o clcio o mensageiro secundrio e pode afetar
diretamente componentes do citoesqueleto, como os microtbulos, disparar mecanismos de
secreo ou prosseguir a cascata, ativando diretamente enzimas como protena quinase C, que
vai fosforilar outras protenas passando o sinal adiante.
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Fosfolipase C, outra enzima ativada por protena G

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Favorea-me com sua ausncia!

Todo mensageiro secundrio que se preza normalmente est presente em
baixssimas concentraes no citoplasma. Quando ocorre uma sinalizao,
a sbita elevao de concentrao (um pico de concentrao) prontamente
percebida e provoca modificaes no comportamento celular.

O clcio pode ser apenas um intermedirio na cascata

Nem sempre o efeito do clcio direto, ele tambm modifica o
comportamento de vrias outras protenas depois de se complexar com
protenas ligadoras de clcio. A mais importante delas a calmodulina:
uma vez ligada ao clcio, ela modifica o comportamento de muitas
enzimas, inclusive quinases.
Como todo mensageiro de verdade, a concentrao do clcio tem
de baixar rpido para que a clula esteja pronta a perceber o prximo
sinal. Voc sabe como o on clcio rapidamente expulso do citossol?
um verdadeiro "salve-se quem puder" com vrias vias de escape
distribudas na clula. Veja na Figura 14.4 como o clcio tanto pode
ser expulso para fora da clula como pode ficar escondido no retculo
endoplasmtico e na mitocndria ou mesmo desaparecer ao associar-se
a uma protena citoslica.

Figura 14.4: A concentrao intracelular de clcio mantida baixa por vrios

mecanismos, como trocadores inicos e ATPases clcio dependentes presentes
na membrana plasmtica (MP) e na membrana do retculo endoplasmtico, ou
tambm por transporte ativo da membrana mitocondrial interna ou protenas que
se ligam ao clcio no citossol.

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A concentrao de clcio de cerca de 10-7M no citoplasma e

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da ordem de 10-3M no meio extracelular. Uma diferena de 10.000

vezes! Para manter essa diferena, vrios mecanismos funcionam
permanentemente. Na membrana plasmtica, h uma protena
trocadora de clcio por sdio que usa a energia do gradiente de sdio
gerado pela bomba de sdio e potssio para, sem gasto suplementar
de energia, botar clcio para fora. Alm dela, h uma outra bomba de
clcio na membrana plasmtica que hidrolisa ATP para obter a energia
necessria (a sim, transporte ativo) e protenas ligadoras de clcio no
citoplasma que tornam o on indisponvel para outras reaes.
Quando ocorre um pico de clcio proveniente de sinalizao,
a concentrao normal aumenta 100 vezes, chegando a 10-5M. Nessa
situao, alm das bombas na membrana plasmtica, entra em
funcionamento a bomba de clcio do retculo endoplasmtico, que
recolhe de volta o clcio liberado, mas se surgir algum problema,
como uma leso na membrana plasmtica (que logo ser selada), e
a concentrao subir mais, chegando a 10-3M, a mitocndria passa a
bombear clcio para dentro usando a energia do gradiente de prtons,
deixando temporariamente de produzir ATP. Isso um mecanismo de
emergncia, que raramente ocorre.

Mitocndrias e clcio, uma relao questionada

Durante muito tempo se pensou que as mitocndrias eram as principais (seno as nicas) responsveis
pela manuteno da baixa concentrao citoplasmtica de clcio, j que essas organelas deixavam
at de fazer ATP para seqestrar clcio. Essa idia estava baseada em experimentos em que
mitocndrias isoladas eram colocadas em solues com concentrao fisiolgica de clcio, ou seja, os
mesmos nveis do plasma sanguneo, 5x10-3M. Como resultado, as mitocndrias bombeavam clcio
para dentro, formando precipitados de fosfato de clcio. O detalhe que essa situao experimental
est muito longe da fisiolgica. O que podemos concluir desse exemplo que a biologia da clula
est muito longe de ter todos os seus mistrios solucionados, o que mais um estmulo para seu
estudo: h sempre novidades surgindo nesta rea!

Resumimos na Figura 14.5 as duas principais vias de sinalizao

ativadas por protena G: a da adenilciclase e a da fosfolipase C. Repare
que, apesar dos nomes diferentes, h muita analogia entre os dois
processos.

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Figura 14.5: Uma vez acoplados ao

ligante, receptores ativam diferentes
protenas G, que ativam adenilciclase,
que gera AMPc, ou fosfolipase C que
gera IP3 e libera clcio do retculo
endoplasmtico.

Protenas-alvo

Receptores enzimticos
Um receptor desse tipo passa a informao recebida por meio de
atividade enzimtica, e para faz-lo tem de ter dois domnios especiais:
o que reconhece o ligante, exposto na superfcie da clula, e o stio
cataltico, voltado para o citoplasma (Figura 14.6). Quando o ligante
reconhecido pela parte exposta do receptor, a mudana conformacional
resultante torna ativo o stio cataltico intracelular. como o ferro de
passar: liga em cima e esquenta embaixo...

Figura 14.6: Esquema de operao de um receptor enzimtico.

Tirosinas quinase, receptores enzimticos da maior importncia

O principal tipo de receptor enzimtico so os receptores tirosina
quinase. Estes so enzimas que fosforilam (adicionam um radical fosfato)
ao aminocido tirosina em cadeias laterais de protenas. Curiosamente,
seu primeiro substrato uma molcula igual a ela: os receptores
tirosina quinase formam dmeros em que uma molcula fosforila a
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outra, reciprocamente (Figura 14.7). Depois que um receptor fosforila o

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outro, vrias protenas so recrutadas do citoplasma pelas fosfotirosinas dos

receptores. Esse fenmeno dura apenas alguns segundos, j que a fosforilao
pelas tirosina quinases logo revertida por protenas tirosina fosfatases.
As protenas recrutadas passam a estar ativas e vo, assim, passar o sinal adiante.

Figura 14.7: Funcionamento dos receptores tirosina quinase.

Um exemplo de sinalizao por tirosina quinase: a protena Ras

Algumas das protenas recrutadas pelas tirosinas fosforiladas no
tm atividade enzimtica, so apenas adaptadoras que vo permitir o
encaixe com outras protenas. A mais importante dessas protenas a
Ras, uma protena associada ao folheto interno da membrana capaz de
hidrolisar uma molcula de GTP a GDP (Figura 14.8). Quando certos
receptores tirosina quinase so fosforilados, eles recrutam protenas
adaptadoras e uma ativadora de Ras, que vai fazer com que ela libere o
GDP, que logo ser substitudo por um GTP. A Ras-GTP fica ativa e vai
propagar um sinal em cascata que terminar por promover, na maioria
das vezes, a proliferao ou a diferenciao celular.
Os receptores que ativam essa via so os receptores de fatores
de crescimento, como o EGF (fator de crescimento epidrmico),
NGF (fator de crescimento neuronal), o PDGF (fator de crescimento
derivado de plaquetas), o VEGF (fator de crescimento vascular, que
estimula a angiognese).

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Figura 14.8: Ativao

de Ras por receptores
tirosina quinase.

Entretanto, a Ras no permanece muito tempo no estado ativo. Logo

ela hidrolisa o GTP, voltando ao seu estado ligado a GDP, que inativo.

Ras defeituosa? Desastre vista

Justamente por induzir mudanas celulares to importantes, quando
as vias de sinalizao mediadas por Ras tm defeitos, as conseqncias so
muito graves. Se esses defeitos impedirem a atividade GTPsica, a Ras
permanecer no estado ativado, fazendo com que as clulas portadoras da
molcula defeituosa no parem de proliferar, o que pode gerar um cncer.
De fato, cerca de 30% dos tumores possuem clulas com Ras defeituosa.
Defeitos em outros componentes dessa cascata de sinalizao tambm
levam tumorizao.

A fosforilao de outros aminocidos tambm sinalizadora

Alm dos receptores com atividade tirosina quinase, h os que
tm atividade de fosforilao dos aminocidos serina ou treonina
(receptores serina/treonina quinases). A ativao desses receptores leva
ativao de protenas reguladoras de expresso gnica.
Em algumas vias importantes, os mecanismos de fosforilao
em tirosina esto fortemente associados aos de fosforilao em serina/
treonina, que so mais duradouros. Assim, receptores de fatores de
crescimento com atividade tirosina quinase ativam serina/treonina
quinases citoplasmticas, que formam uma cascata de sinalizao com
vrios passos at chegar ao ncleo e modificar a expresso gnica.

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A reao a uma infeco por vrus disparada por tirosina quinases

Existem, porm, mecanismos mediados por receptores enzimticos que modificam a expresso
gnica mais rapidamente. Um dos mais notveis o mecanismo disparado por -interferon (citocina
secretada por glbulos brancos em resposta infeco viral, principalmente). O -interferon
produzido por clulas infectadas reconhecido por receptores de -interferon que ativam uma via
de tirosina quinases citoplasmticas chamadas Janus quinases (Jaks), em referncia ao deus romano
de duas faces. As Jaks fosforilam uma srie de protenas reguladoras de expresso gnica (as STATS),
que rapidamente entram no ncleo e ativam a transcrio de vrios gens que codificam protenas
que aumentam a resistncia infeco viral. Alm do -interferon, tambm os receptores para interferon (que ativa macrfagos), eritropoeitina (que estimula a produo de hemcias), prolactina
(que estimula a produo de leite) e hormnio do crescimento usam a via de Jaks e STATS.
Receptores enzimticos na resposta inflamatria: a poderosa NF-B
Fatores que induzem inflamao em resposta a infeces ou leses tambm usam receptores enzimticos.
O fator de necrose tumoral (TNF-) produzido por macrfagos reconhecido por receptores em muitas
clulas e ativa uma protena citoplasmtica, a NF-B, que se desloca para o ncleo e liga mais de 60 gens
que participam da resposta inflamatria.

Amplificao de sinais
Pensando bem, qual a vantagem de existirem cascatas de sinalizao intracelular? Elas
parecem to complicadas, com tantos componentes, tantas passagens de informao, que devem
ser altamente suscetveis a erro! Mas se esse mecanismo se manteve evolutivamente conservado,
estando presente tanto
em leveduras como no
homem,

deve

haver

uma grande vantagem!

Examinando todo
o processo, sem dvida
alguma essa vantagem
a enorme amplificao do
sinal inicial, como podemos ver na Figura 14.9.

Figura 14.9: Amplificao

de sinais nas cascatas de
sinalizao.

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Integrao de sinais
Como voc j deve ter imaginado, freqentemente as cascatas de sinalizao iniciadas por
diferentes receptores se cruzam na clula, isto , tm componentes em comum. Dois exemplos
bem simples esto esquematizados na Figura 14.10. preciso que estejam presentes os dois
ligantes, A e B, reconhecidos por seus respectivos receptores, para que a sinalizao possa
prosseguir numa via comum.

Figura 14.10: Alguns processos

dependem da ativao inicial
de duas cascatas de sinalizao
que convergem para um mesmo
processo.

Figura 14.11: O mecanismo da propagao

de sinais por receptores de superfcie pode
ser resumido nesse esquema: a partir do
reconhecimento entre um receptor e um
ligante, uma cascata de eventos se propaga
e se amplifica.

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RESUMO
A ativao da protena G ativa por sua vez adenilciclase ou fosfolipase C.
Ambas geram mensageiros secundrios: AMPc, no caso da adenilciclase, e
IP3, que libera estoques intracelulares de clcio, no caso da fosfolipase C.
Ambos, clcio e AMPc, so mensageiros secundrios ou mediadores
intracelulares.
Mensageiros secundrios ou mediadores intracelulares so sempre molculas
muito pequenas e presentes normalmente em baixssima concentrao, sendo
degradados ou recolhidos imediatamente aps o pico de sinalizao.
Receptores enzimticos tm o stio de reconhecimento voltado para o meio
extracelular e o stio cataltico voltado para o citoplasma. Na sua maioria so
tirosina quinases que se fosforilam reciprocamente e depois atraem muitas
outras protenas que passam a informao adiante.
Depois de receber o ligante, receptores disparam uma cascata de sinalizao
celular que amplifica o sinal e acaba por modificar o comportamento celular
(Figura 14.11).

EXERCCIOS
1. Onde esto os receptores de ligantes pequenos e/ou hidrofbicos?
2. E os de ligantes hidroflicos?
3. Quais os tipos de receptores de superfcie?
4. Cite exemplos de cada um desses receptores.
5. O que uma protena quinase?
6. Como age a adenilciclase? E a fosfolipase C?
7. O que so mensageiros secundrios?
8. Como regulada a concentrao citoplasmtica de clcio?
9. O que uma cascata de sinalizao?
10. Qual a vantagem da sinalizao em cascata?
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