Fisiologia 03/11/2020 genes, uma vez que CREB vai deixar de ir pro
núcleo celular; ou dependendo do gene, se
Sinalização Celular II
Demais vias de sinalização mediadas pela
proteína G alfa i (Gi) e pela proteína G alfa q
(Gq).
*** Temos um receptor com 7TM que está
acoplado a uma proteína G, que tem
subunidade alfa do tipo i (não mais do S), que no
estágio inativo a alfa i esta acoplada ao GDP, e
temos a subunidade beta e uma subunidade
gama. Quando o sinalizador/ligante interage com
esse receptor, esse receptor vai se tornar ativado
e vai ativar a proteína G que está acoplada a
subunidade alfa i, a subunidade alfa i se ativa e
também irá TROCAR GDP OU GTP ficando ativa
e se dissociando das subunidades beta e gama.
Essa subunidade alfa i, agora ativa, vai inibir a
adenilato ciclase (AC), uma vez que ela inibe a
atividade da adenilato, essa enzima AC vai deixar
de converter ATP em AMPc, ou seja o conteúdo
de AMPc intracelular vai diminuir e
consequentemente a atividade da PKA vai ser
diminuída (diminuindo assim tanto suas ações
não genômicas quanto genômicas). E por isso
que essa via é considerada como INIBITORIA.
A ausência da fosforilação vai causar maior ou
menor atividade das enzimas e também vai
causar uma menor expressão de determinados
CREB promover um efeito inibitório sobre ele, ele
não estando no núcleo, a expressão desse gene
vai aumentar.
Esses dois efeitos vão culminar com um efeito
biológico inibitório
No entanto, também temos uma via de
sinalização que é mediada por receptores
acoplados a proteína G, só que nessa proteína G
a subunidade alfa é do tipo q.
Atenção por que alguns detalhes irão mudar:
- Um receptor que tem os 7 domínios
transmembrana por isso que ele é chamado de
GPCR / 7TM, acoplado a uma proteína g que é
trimérica, nessa proteína g a subunidade alfa é
do tipo q, que no estágio inativo também esta
acoplada a uma molécula de GDP. Quando o
sinalizador interage com esse receptor, ele ativa
a proteína G e a subunidade também vai
TROCAR GDP POR GTP FICANDO ATIVA e se
dissociando das subunidades Gbeta e Ggama.
Só que agora, a subunidade alfa q vai ativar uma
enzima chamada de Fosfolipase c que está presa
na membrana plasmática dessa alvo (que
degrada fosfolipídios, e onde tem fosfolipídios?
Na membrana da célula, então essas enzimas
ficam aderidas na membrana). Quando a
fosfolipase c se torna ativa, ela vai clivar
fosfolipídio de membrana, principalmente um
chamado de Fosfatidilinositol bifosfato (PIP2)
gerando DOIS produtos: Diacilglicerol (DAG) e o
Inositol trifosfato (IP3).
O DAG é formado por duas cadeias de ácidos
graxos (componente que está preso a porção
interna da membrana plasmática) e por uma
molécula de glicerol (di de dois, acil de ácidos
graxos e glicerol por conta da molécula de
glicerol). Lembrando que os ácidos graxos são
apolares e por isso permanecem na membrana.
Já o IP3 é formado pelo grupamento que dá
especificidade a esse fosfolipídio (que é o
Inositol) associado a 3 fosfatos. É uma molécula
polar que pode se mover no citoplasma da célula.
Quando o Inositol trifosfato é liberado ele vai
então atuar em um receptor inotrópico (receptor
que é um canal iônico). Esse receptor está na
membrana no reticulo
endoplasmático/sarcoplasmático (nas células
musculares), no interior desse reticulo temos uma
grande quantidade de íons cálcio armazenados.
Estamos falando de receptor inotrópico que é
ativado por um ligante intracelular. Quando temos
a interação do IP3 com esse receptor, ele vai
permitir a abertura desse receptor, o que vai
gerar a passagem dos íons cálcio que estavam
no interior desse reticulo para o citoplasma da
célula alvo, aumentando a concentração de
cálcio Ca2+ intracelular.
Esse cálcio tem diversas funções nessa célula
alvo:
- Interagir com uma proteína quinase (PKC - que
realiza fosforilação – Proteína Quinase
dependente de Cálcio), vai ativar essa PKC
aumentando a quantidade de PKCs ativadas,
elas poderão realizar fosforilações em diversos
alvos produzindo efeitos não genômicos.
A PKC pode fosforilar diversas proteínas que já
existem nessa célula alvo (produzindo um efeito
não genômico, que é um efeito rápido). E a
adição desse grupamento fosfato vai modular a
atividade dessas proteínas (ou aumentando ou
diminuindo, depende da proteína).
A PKC também pode se ligar ao DAG que está
preso na membrana plasmática, quando isso
ocorre a atividade do Diacilglicerol aumenta ainda
mais, então tanto o cálcio quanto a ligação a
molécula de DAG potencializam a atividade da
PKC (que agora vai poder fosforilar uma gama
ainda maior de proteínas).
Então, quando falamos de uma sinalização
mediada por receptores acoplados a proteína Gq,
estamos falando de um aumento do conteúdo
Diacilgricerol, Inositol trifosfato e principalmente
de Cálcio intracelular (e é esse cálcio que vai
disparar essa cascata de sinalização).
Pra finalizar essa sinalização, é necessário
remover esse excesso de cálcio intracelular, ou
esse cálcio retorna ao reticulo
endoplasmático/sarcoplasmático ou ele é
eliminado pro meio extracelular, e dessa forma a
atividade da PKC vai retornar a níveis basais
(normais).
Sinalizador extremamente importante: Ocitocina,
que induz a contração da musculatura lisa,
principalmente a musculatura lisa uterina,
fazendo com que esse útero contraia e expulse o
feto. Assim como esta presente na musculatura
lisa mamaria, para induzir a ejeção do leite.
Lembrar que o mecanismo de contração da
musculatura lisa depende do aumento de cálcio
intracelular, e como a ocitocina faz isso?
Induzindo a via de sinalização que é dependende
de G-a-q que aumenta cálcio intracelular e esse
cálcio intracelular vai induzir o mecanismo de
contração que vai induzir o deslizamento de
actina e miosina fazendo com que a fibra
muscular lisa contraia;
Entendendo um pouco mais sobre fosfolipídios:
- Fosfolipídios de membrana são formados por
duas cadeias de ácidos graxos (que podem ter
comprimentos maiores ou menores), essas
cadeias são ligadas a uma molécula de glicerol
(que possui 3 carbonos, sendo que o terceiro
carbono é ligado a um grupamento fosfato (que
confere polaridade a essa região) e esse
grupamento fosfato é ligado a um segundo
grupamento chamado de R, que é quem vai
conferir a especificidade desse fosfolipídio e
nesse caso o grupamento é a Colina, por isso o
nome fosfatidilcolina, se o grupamento R fosse
uma Serina seria chamado de Fosfaditilserina. E
no caso de grupamento R Inositol temos o
fosfatidilinositol.

Relembrando a finalização da resposta na célula

Fosfatidilinositol bifosfato:
- Temos molécula de glicerol com seus 3
carbonos, os dois primeiros carbonos ligados
cada um a uma cadeia de ácidos graxos (que
tem suas caudas formadas principalmente por
hidrocarbonetos, ou seja é uma região apolar que
estará voltada para o interior da membrana
plasmática) e o terceiro carbono do glicerol
estará ligado ao grupamento fosfato e o
grupamento fosfato é ligado/está ligado ao
grupamento R que é o Inositol.
Chamado de Fosfatidilinositol 4,5 bifosfato ou
PIP2, porque além do Inositol, do grupamento
fosfato, do glicerol e dos dois ácidos graxos, ele
ainda tem mais dois grupamentos fosfato, então
quando a fosfolipase c cliva essa molécula, ela
vai separar a região da cabeça do fosfolipídio
(que é polar devido a presença dos 3
grupamentos fosfato) da região da cauda do
fosfolipídio (que é apolar).
alvo:
- Ocorre principalmente retornando o cálcio pro
interior do reticulo
endoplasmático/sarcoplasmático mas também
pode ser eliminando pro meio extracelular. Quem
realiza esse transporte de volta pro reticulo é
uma proteína transportadora chamada de cálcio
atpase (ela vai realizar o transporte desse cálcio
pro interior do reticulo
endoplasmático/sarcoplasmático contra um
gradiente de concentração ou seja, é um
transporte ativo primário, porque o cálcio já é
mais concentrado no interior do reticulo e a
tendência natural desse cálcio é sair do reticulo,
então pra colocar mais cálcio dentro do reticulo
nós precisamos gastar energia e quem faz isso é
a proteína transportadora cálcio atpase ou
BOMBA DE CALCIO.

**** Se estivermos pensando que nesse exemplo
é uma célula muscular (seja lisa, cardíaca ou
esquelética), essa proteína (cálcio atpase /
bomba de cálcio), ela é chamada de SERCA
(nome pra cálcio atpase do reticulo
sarcoplasmático).
RECEPTORES COM ATIVIDADE ENZIMATICA
INTRINSECA
- Como o próprio nome diz, significa que além de
reconhecer um sinalizador especifico, esses
receptores vão funcionar como enzimas, uma vez
que eles tem atividade enzimática intrínseca.
- Todos esses receptores são formados por e
sempre vão funcionar por dímeros (duas porções
do receptor que vão se associar pra produzir
aquele efeito biológico no interior daquela célula
alvo). Dimeros podem ser iguais (homo dímeros)
ou como no caso do grupo 2, temos hetero
dímeros (dois receptores (dímeros) mas com
estrutura diferente).
São vários:
1º Grupo – Receptores com atividade Guanilato
ciclase. Principal receptor: Receptor pro hormônio
Peptídeo natriurético atrial (sigla dele: ANP -
peptídeo que induz o aumento da excreção de
sódio lá no nosso rim)
2º Grupo – Receptores com atividade
Serina/Treonina quinase. Principal receptor:
Receptor de interleucinas e de citocinas
(sinalizadores químicos estudados em
imunologia).
3º Grupo – Receptores com atividade Tirosina
Quinase. Principal receptor: receptor de insulina
4º Grupo - Não tem atividade enzima intrínseca
mas são associados a uma enzima – no caso, a
Tirosina Quinase.
Receptores de INSULINA
Lembrando que são do 3º Grupo mas quem são
eles?
- São homo dímeros (duas porções totalmente
iguais). Esses receptores apresentam uma
porção extracelular (porção ALFA – que é o onde
vai reconhecer a molécula de insulina (que é o
sinalizador)) e uma porção que atravessa a
membrana plasmática e que termina do lado
intracelular (cadeia BETA – é essa porção
intracelular da cadeia beta que produz a atividade
enzimática, que é uma atividade tirosina quinase)
“É uma atividade tirosina quinase” implica dizer
que esse receptor vai fosforilar proteínas alvo
especificamente em AMINOÁCIDOS TIROSINA,
(só vai adicionar grupamento fosfato e
aminoácidos tirosina daquelas proteínas alvo que
ele for capaz de fosforilar).
*** Quando a insulina interage com esse
receptor, esse receptor vai se auto fosforilar = ele
vai fosforilar a parte beta (marcada com * seja de
um lado ou do outro), vai fosforilar tirosinas dessa
outra porção do receptor. Essas auto
fosforilações são extremamente direcionadas.
Esse receptor pra insulina é uma proteína de
peso molecular MUITO grande (formada por
vários resíduos de aminoácidos diferentes,
inclusive por aminoácidos tirosina), quando esse
receptor é ativado, ele fosforila especificamente
tirosinas que estão em posições especificas:
Ex.: Esse receptor é formado por 500
aminoácidos, e a gente tem tirosina na posição
490, é só nessa tirosina que esse receptor vai se
auto fosforilar. Se ele se auto fosforilar em uma
tirosina que não seja essa, essa via de
sinalização NÃO acontece.
- Existem diversos casos de resistência a insulina
(diabetes melitus) – a insulina não consegue
interagir/produzir efeito naquela célula alvo
porque existe um problema genético/mutação
que faz com que esse receptor não fosforile
aminoácidos tirosina que estão nas posições
adequadas. Hoje conhecemos a posição de
todos os aminoácidos que são fosforilados por
esse receptor.
Quando esse receptor se auto fosforila, ele então
vai permitir que outras proteínas que estão livres
no citoplasma dessa célula interajam com ele e
dispare a cascata de sinalização que vai produzir
o efeito biológico da insulina.
Dentre esses alvos que interagem com esse
receptor da insulina quando ele está fosforilado
em resíduos específicos, nós temos:
*** IRS-1: Substrato pro receptor de insulina.
Essa parte azul é a que está em contato com o
receptor (os outros dois domínios não importam
nesse momento). Y = tirosina
Y608 Y658 Y727 – Tirosina (Y) está em uma
dessas posições e etc.
Quando o receptor se auto fosforila, o IRS vai
poder se ligar ao receptor e também vai ser
fosforilado por ele, e vai ser fosforilado em
aminoácidos tirosina específicos. Ex.: Se a Y608
for fosforilada, a gente consegue disparar uma
via de sinalização que vai produzir um efeito
biológico da insulina, como por exemplo, a
diminuição da glicemia; Ex.: Se a Y895 for
fosforilada nós teremos outro efeito biológico da
insulina, por exemplo, aumentando o crescimento
celular; Se a Y1172 for fosforilada nós teremos
outro efeito biológico da insulina, por exemplo,
inibição de morte celular. Por isso é
extremamente importante que a gente conheça
qual resíduo Tirosina foi fosforilado.
**** Receptor pra insulina (formado por suas duas
subunidades – porção extracelular ALFA que
reconhece a insulina e a cadeia beta/porção
intracelular que tem atividade tirosina quinase) 
Quando a insulina interage com o receptor, ele se
auto fosforila em resíduos de aminoácidos
tirosina específicos  Quando esse receptor é
fosforilado, ele vai fazer com que o IRS (que é o
substrato do receptor de insulina) se ligue nele
quando IRS se liga no receptor que foi
fosforilado, o próprio receptor de insulina também
vai fosforilar IRS  IRS agora fosforilado, vai se
ligar com várias outras proteínas, dependendo da
região onde IRS foi fosforilado: A via clássica da
insulina, que é a que produz a maioria dos efeitos
biológicos da insulina faz com que esse IRS
quando fosforilado, interaja com uma proteína
que é chamada de PI 3 Quinase (fosfatidilinositol
3 quinase – que fosforila fosfolipídios de
membrana), que é formada por duas
subunidades (p85 e p110) =  IRS ativa a PI 3
Quinase, que vai fosforilar fosfolipídios de
membrana como o fosfatidilinositol bifosfato (PIP
2 - adicionando um grupamento fosfato nele),
gerando fosfatidilinositol trifosfato (PIP 3)  PIP
3 vai disparar a via de sinalização.
O PIP 3 continua preso na membrana plasmática
dessa célula, quando temos fosfatidilinositol
trifosfato, ele agora vai poder ancorar uma
quinase (que fazem
fosforilação/transferência/adição de grupamento
fosfato) chamada de PDK (tanto a PDK1 e a
PDK2).
PDK = Proteína Quinase dependente de
fosfatidilinositol. Então pra essa PDK se tornar
ativa ela precisa se ligar a membrana plasmática
onde eu tenho PIP3.
A PDK então fica ativa e vai poder fosforilar (já
que ela é uma proteína quinase) uma outra
enzima chamada de PKB/AKT (É A PROTEÍNA
CHAVE NA VIA DE SINALIZAÇÃO DA INSULINA
– A maioria das ações da insulina é mediada por
essa enzima). Quando PKB/AKT é fosforilada
pela PDK1/PDK2 ela vai se tornar ativa e ai sim
podemos ter o efeito biológico da insulina, desse
hormônio pancreático.
Once Again:
- Receptor pra insulina (com sua porção extra e
intracelular (que é onde tem atividade tirosina
quinase)); Quando a insulina interage com seu
receptor, ele se auto fosforila, ancora IRS (que é
o substrato do receptor de insulina) e também
fosforila ele, IRS agora fosforilado vai ativar a
enzima PI3K (fosfatidilinositol 3 quinase); essa
enzima fosforila fosfatidilinositol bifosfato (PIP2),
gerando agora fosfatidilinositol trifosfato (PIP3),
PIP agora vai ancorar a PDK1 ativando ela, que
agora vai poder fosforilar AKT ou PKB, tornando
a AKT ou PKB ativa.
AKT/PKB é a proteína chave da sinalização da
insulina.
A AKT ativa, vai poder produzir efeitos genômicos
e não genômicos:
- Vai fosforilar fatores de transcrição da família
FOXO (que quando NÃO estão fosforilados,
estão no núcleo celular). Quando FOXO é
fosforilado, ele SAI do núcleo, se ele sai do
núcleo a atividade transcricional dele diminui (se
ele não está mais interagindo com o DNA dessa
célula alvo, não tem como estimular a expressão
genica (facilitando a abertura do DNA) nem ele
inibir outro gene (empacotar ainda mais).
- A AKT pode fosforilar diversas outras proteínas
que já existem naquela célula, através de um
efeito NÃO genômico. Elas já estão prontas e a
AKT só vai fosforilar acrescentando um
grupamento fosfato o que torna esse processo
rápido (por elas já estarem prontas e só ter
ocorrido o remodelamento da atividade delas).
Ex.: Se estivermos falando de uma célula
muscular estriada, a insulina é o principal
hormônio anabólico (que induz crescimento
muscular/hipertrofia muscular) – como que ela
faz isso? Quando ela interage com seu receptor,
ela vai ativar a AKT (que é a enzima chave nesse
processo de sinalização), quando a AKT agora
ativada, fosforila fatores de transcrição FOXO,
FOXO sai do núcleo, ele deixa de induzir a
transcrição de determinadas proteases que
degradam proteínas e o musculo esquelético é
formado principalmente por proteínas estruturais
(actina, miosina e etc.), então FOXO saindo do
núcleo, a expressão dessas enzimas que
degradam actina, miosina diminuem,
consequentemente a degradação proteica
diminui e esse musculo vai ficar mais preservado.
Do mesmo modo a AKT fosforila diversas
proteínas que induzem o aumento da síntese
proteica muscular, então temos um estimulo
anabólico e o musculo vai crescer (temos inibição
do efeito catabólico e estimulo ao efeito
anabólico).
Ex.: Mesma coisa se estivéssemos falando do
tecido hepático, sabemos que o tecido do fígado
é extremamente importante tanto pra acumular
glicose (na forma de glicogênio) quanto para
produzir glicose quando estamos numa situação
de demanda energética alta e a não temos uma
reserva suficiente. Ex.: Paciente diabético,
paciente muito tempo em jejum: a secreção de
insulina está baixa, se a secreção de insulina
está baixa, a atividade da AKT também está
baixa, se a AKT está baixa o FOXO está mais no
núcleo, se FOXO está mais no núcleo, todas
aquelas enzimas que induzem a neoglicogenese
vão estar aumentas (a síntese de novo de glicose
a partir de precursores que NÃO são açucares)
(ou seja, FOXO estimula a expressão dessas
enzimas). Do mesmo jeito, se não temos a AKT
ativa, ela vai deixar de fosforilar as proteínas e
vamos ter uma maior atividade delas.
Ex.: Se estivermos alimentados, se a insulina
consegue atuar corretamente nessa célula, a
AKT fica ativa, inibe FOXO, FOXO sai do núcleo
e todas essas enzimas que estavam fazendo de
novo a produção de glicose (neoglicogenese)
achando que o nosso corpo não tinha energia, a
produção delas vai cair porque agora já não faz
mais sentido estimular uma via de produção de
glicose sendo que tenho ela recebendo por via
exógena, através da alimentação.
RECEPTORES INTRACELULARES
- Classicamente eles reconhecem ligantes que
são LIPOSSOLUVEIS, porque se eles estão no
interior dessa célula alvo, necessariamente esses
sinalizadores químicos/ligantes vão precisar
atravessar a membrana plasmática da célula pra
interagir com os receptores
*** Sinalizador químico que é um hormônio.
*** Esse receptor (dois negocinhos azuis na
imagem) está associado a uma proteína
chamada Chaperona ou Proteína de choque
térmico ou Hit Shook Protein.
*** Quando o receptor está inativo, ele está
associado a uma proteína chaperona; Esse
ligante/sinalizador que é lipossolúvel (esteroide,
testosterona, estrógeno e etc.) consegue
atravessar a membrana plasmática da célula e
vai interagir com esse receptor, quando ele
interage com esse receptor ele faz com que esse
receptor se dissocie da proteína chaperona,
formando um complexo sinalizador receptor
(bolinha preta encima do coisinho azul) que esta
ativado.
*** Esse receptor, vai então se dimerizar/se ligar
com outro receptor que também já foi ativado,
então teremos duas porções de um mesmo
receptor ligados ao sinalizador, formando um
dímero. Esse dímero então SAÍ do citoplasma da
célula e vai lá pro núcleo celular e vai interagir
com o DNA dessa célula alvo, funcionando como
um fator de transcrição. Ou seja, esse receptor
agora na forma de dímero, vai pro núcleo celular
e funciona como fatores de transcrição = eles vão
regular a expressão de determinados genes, em
alguns genes eles vão produzir efeito inibitório ou
vão produzir um efeito estimulatório, e isso vai
depender do gene, do receptor e do sinalizador.
Ex.: Se a região em que esse receptor dímero se
ligou no DNA tem um efeito estimulatório, então
esse receptor vai facilitar a abertura dessa fita
dupla de DNA estimulando a geração de RNAm,
esse RNAm vai pro citoplasma celular, é
traduzido, gerando uma proteína que vai dar a
característica do efeito biológico desse
sinalizador/ligante.
Ex.: Considerando o sinalizador sendo uma
Testosterona, ela quando chega na célula
muscular, interage com o receptor, ativa esse
receptor, esse receptor se conjuga com outro
receptor pra testosterona que também foi ativado,
formando um dímero, quando esse dímero é
formado ele vai pro núcleo celular e estimula a
formação de enzimas que induzem a síntese
proteica, induzindo então o crescimento dessa
célula muscular.
- Todos os receptores intracelulares basicamente
atuam através desse mecanismo.
- Receptores intracelulares tem um mecanismo
comum: estão associados a proteínas
chaperonas, quando o hormônio interage ele se
dissocia dessa chaperona, o receptor se conjuga
com outro (formando um homo dímero ou hetero
dímero), vão pro núcleo e funcionam como um
fator de transcrição.
**** CROSSTALK: UM ÚNICO SINALIZADOR
PRODUZIR VARIAS AÇÕES DENTRO DE UMA
CÉLULA ALVO MESMO ATIVANDO UMA VIA
CLÁSSICA, ELA PODE INTERAGIR COM
DIVERSAS OUTRAS VIAS DE AÇÃO E
CUMINAR COM DIVERSAS AÇÕES NAQUELA
CÉLULA ALVO ****

*** Existem sinalizadores lipossolúveis que não

são derivados de lipídios, por exemplo,
hormônios tireoidianos como o T3 e T4. Atenção
especial ao T3 que é um hormônio biológico, que
é derivado de aminoácido mas é lipossolúvel
então necessariamente ele precisa adentrar a
essa célula alvo, nessa célula alvo ele interage
com seu receptor (que é chamado de TR), esse
receptor TR normalmente não interage/forma
HOMO dímero com outro TR, mas sim com
OUTRO receptor que NÃO é pra hormônio
tireoidiano (hetero dímero), chamado de RXR,
que é um receptor pra ácido retinóico, esse
receptor pra ácido retinóico é chamado de
receptor ÓRFÃO (isso significa que nós não
conhecemos qual que é o ligante endógeno/qual
que é a substancia que interage com esse
receptor e estimula ele), no caso desse, ele é
chamado de receptor pra ácido retinóico porque
sabemos que EM LABORATORIO, o ácido
retinóico *estimula* ele, mas não conhecemos
um ligante ENDÓGENO que estimula ele por isso
é chamado de órfão. Essa junção TR/RXR, esse
receptor hetero dímero vai se ligar no DNA da
célula produzindo então a resposta biológica que
é a ação clássica dos hormônios tireoidianos
naquele tecido.