UNIFESP

Disciplina de Reumatologia

Curso de Boas Prticas Laboratoriais

Preparo de solues
parte I I
Silene Peres Keusseyan
Abril / 2011
Nenhum trabalho to importante e to urgente que
no possa ser planejado e executado com segurana

Protocolo (logstica para seus experimentos)

Anote todos clculos e informaes sobre os reagentes
todas solues devem estar prontas para o uso pelo menos 1 dia
antes doa realizao dos ensaios
Preparando solues, determine:
- reagentes
- segurana (luvas, mscara, etc..)
- que gua usar
- utenslios plsticos e vidraria
- como e onde preparar
- como e onde estocar
GUA NO LABORATRIO
gua no Laboratrio
gua com Grau Reagente
Empregada como reagente qumico
No preparo de solues para realizao de ensaios clnicos

Processos para obteno de gua com Grau Reagente

1. FILTRAO:

pr-filtros de fibra de vidro ou algodo retm 98% de partculas

Pr- filtros de carvo ativado removem grandes quantidades de

material orgnico e cloro
2. DESTILAO:
Processo mais antigo de purificao da gua
Envolve mudanas de fase: lquida para vapor e vapor para lquida
Materiais volteis ficam no frasco de ebulio
Remove basicamente sais e outros compostos
 3. DEIONIZAO:

Processo usado para produzir solventes

Puros (principalmente gua) isentos de ons

A. Resina de troca inica =

polmeros orgnicos derivados de
estireno e divinilbenzeno, sob a forma
de pequenas partculas esfricas (
<0,5mm)
a) catinica = trocam seus ons hidrognio
(H+) por contaminantes catinicos
b) aninica = trocam seus ons hidroxila
(OH+) por contaminantes aninicos
B. Osmose reversa

passagem da gua sob presso

atravs de membrana que remove
95 a 97% das substncias
orgnicas, bactrias e outras
substncias particuladas

Remove tambm 90 a 97% de

minerais dissolvidos e ionizados

gua (solvente)
Aucar (soluto)
Sistema para obteno de gua pura para uso em
Laboratrio
Combinao de processos:
1. Filtro de carvo ativado para eliminar matria orgnica
2. Deionizador para reter ons
3. Filtro para reter partculas e bactrias

Milli Q Direct-Q 3
UV
Preciso e
exatido
 Exatido
Propriedade do mtodo analtico de fornecer valores
muito prximos do valor real da amostra
a habilidade que o procedimento analtico tem para
fornecer o valor verdadeiro do analito

Preciso
Propriedade do mtodo analtico de fornecer resultados
muito prximos entre vrias repeties
Concordncia entre medidas repetidas realizadas
simultaneamente ou no
Balanas
Balana
Instrumento para medir massa de um corpo = quantidade de matria
contida em um corpo = unidade de medida kilograma - Kg)

Qualidades de uma balana

Sensibilidade e preciso

Sensibilidade (d) indica o valor mnimo de massa necessrio para

deslocar uma diviso na escala
Preciso (e) fornece o desvio dos valores obtidos para a mesma
massa
Preciso
ambiente em que se encontra e habilidade do operador
correntes de ar
variaes de temperatura
vibraes
resguardar a balana do p e de vapores ou sais corrosivos
nunca colocar materiais diretamente no prato da balana =
recipientes adequados
materiais a temperatura ambiente
no final da pesagem limpar a balana e a rea circundante com
pano macio ou pincel
aps a determinao da massa levar a balana a zero
Balana de Roberval

Inventor Gilles Personne de

Roberval matemtico e fsico
francs 1669
2 pratos sustentados por uma haste
Utilizada principalmente para verificar
equilbrio entre tubos para centrifuga
com preciso
Deve estar no ponto zero de equilbrio
antes de se iniciar a medida
Balana eletrnica
Digimed DG2000 0,5g-2000g
e=0,1g e d=0,01g
Medidas com preciso
Prato ou bandeja material a ser
pesado
Clulas de carga sobre a qual o
prato exerce compresso
sinal eltrico da compresso
microprocessador recebe o sinal
eltrico e o interpreta
mostrador exibindo a massa
calculada
Tara = zero

Nunca apoiar nada sobre o

Marte A500 prato em repouso!
carga mxima 500g
Balana eletrnica analtica

Usada para se obter massas com

preciso e exatido
relacionadas com sua localizao
= sala de pesagem com uma s
entrada, poucas janelas, sem luz
solar direta, sem correntes de ar
e pouco suscetvel a choques e
vibraes
Tara = zero

Usar para pesar at 1 grama

Mettler Toledo AB 204
e=1mg e d=0,1mg
Cuidados na pesagem
Nvel de bolha circular Esptulas e barquinhas
Como misturar
Misturar corretamente Velocidade !

Escolha o recipiente correto

Adicione aproximadamente 70 - 80% do solvente
Utilize bastes de vidro ou plstico para homogeneizar
Solues mais concentradas demoram mais para dissolver.
agitador magntico e barras magnticas (im)
Verifique se a soluo pode ou no ser aquecida
S aps acertar o pH complete o volume em frasco com aferio
Vidraria de laboratrio
 Becker

usados para preparar solues simples,

dissolver diversas substncias slidas
vidro borissilicato (mais resistentes ao
calor e a maioria dos produtos qumicos)
ou plstico
variedade de tamanhos e capacidades
volumtricas (desde 10mL at vrios litros)
lateral com escala graduada que
auxilia nas medies mas no precisa
indica volume aproximado
Balo de fundo chato

usado para aquecer e preparar solues,

realizar reaes com desprendimento
de gases (destilao)
normalmente de vidro
volume varivel, sem preciso
 Erlenmeyer
armazenar e misturar solues, cultivo de
organismos e tecidos, titulaes
vidro ou plstico
parede em forma de cone invertido e
boca estreita, evita evaporao e
respingos
escala lateral graduada sem preciso
Balo volumtrico
envolve a medio de determinada
quantidade de lquido ou diluio de
solues com volumes precisos e
exatos - trao de aferio
tamanhos variam de 5mL a 10L
vidro ou plstico
no usado para aquecer substncias
Proveta

plstico ou vidro
sua principal caracterstica a presena
de escala graduada em toda a sua
extenso
utilizada para medio de volumes de
lquidos, com escala de preciso
diferentes volumes e graduaes
Trao de aferio (menisco)

As anlises volumtricas que utilizam balo

volumtrico, proveta, pipeta graduada = com
linha de aferio, necessitam ateno
especial na hora de definir o menisco

A superfcie do lquido assume uma forma

curva, a que chamamos menisco.
medida correta - recipiente em superfcie
nivelada

parte de baixo do menisco = cncavo

tangenciando a linha de graduao
 Funil Frascos para reativos
Usado em transferncias para armazenamento de
de lquidos e em solues
filtraes de laboratrio cor mbar (substncias que se
decompem em presena da luz)
ou brancos
Autoclavao (nem todos)
 Pipetas

Pipetas graduadas: medio e

transferncia rigorosa de volumes Micropipetas: mono ou multicanal
lquidos, escalas variveis com Medir volumes muito pequenos com
preciso alta preciso variando de 1L a
1mL

Ponteiras:
adequao de
volumes, com
Pipeta Pasteur: quantidades pequenas e ou sem filtro,
sem volume pr-definido autoclavveis
Acessrios para pipetas
potencial Hidrogeninico
pH potencial hidrogeninico
ndice que indica a acidez, neutralidade ou alcalinidade de um meio
qualquer
Escala de pH pode variar de zero (cido) a 14 (base)
 Medida de pH
Papel tornassol Fitas indicadoras de pH
Indicadores de pH
Substncias orgnicas com propriedade de mudar de
colorao com a variao de pH do meio Ex: meios para
cultura de clulas
pHmetro
Aparelho usado na medida de pH
Eletrodo + potencimetro

Trs pontos de calibrao : 4, 7 e 9

Ajustes com NaOH 1N ou HCl 1N MP 225 Mettler Toledo

com sensor de temperatura
Eletrodo gera leituras em milivolts quando
submerso na amostra
Milivolts so convertidos para uma escala de
pH

Eletrodo:
mantido em soluo KCl 3M
deve ser lavado com dHO e
delicadamente seco a cada troca de soluo
Eletrodo combinado
Eletrodo indicador (externo) e um
eletrodo de referncia (interno)
combinados em uma nica unidade

A bulbo de vidro = membrana de

vidro
B tubo com eletrodo interno
C eletrodo de prata- cloreto de prata
+ soluo HCl 0,1M
D tubo com eletrodo externo
E - eletrodo de prata-cloreto de prata +
soluo saturada KCl 3 M

Manter imerso em soluo KCl 3M

Lavar com dHO secar delicadamente a
cada troca de soluo
Etiquetas de identificao
Rtulo, rtulo e rtulo!
Qualquer frasco com qualquer substncia (mesmo gua) deve ser
rotulado! Mesmo que voc esteja deixando a bancada por um minuto

GUA DESTILADA SOLUO ESTOQUE NaOH 5N

12/04/11 NPS PBS 0,01M [20X ] 12/04/11
12/04/11 SPK SHR

SOLUO ESTOQUE [5X] SOLUO DE USO

TAMPO DE TRANSFERNCIA BLOT TAMPO TRANSFERNCIA BLOT
12/04/11 tila 12/04/11 tila usado II

Triton X-100 5% em dH2O Gelatina 1% em PBS TRIS-HCl 1M pH 6,8

12/04/11 SPK 12/04/11 SPK 12/04/11 SHR
Diluies
Terminologia
Amostra teste - parte representativa do que ser estudado

Amostra padro amostra com composio definida,

caracterstica em estudo exatamente conhecida

Amostra controle simula a composio qumica e as

caracterstica fsico/qumicas das amostras teste, avalia as medidas
efetuadas nas amostras teste

Analito substncia em anlise nas amostras teste Ex: glicose

Soluto e solvente - Uma soluo sempre composta de duas

coisas: uma que dissolve, que chamaremos de solvente (Ex: gua,
PBS), e outra que dissolvida, que chamaremos de soluto (Ex:
sal, soro).
Diluindo
 Diluies seriadas
Para reduzir concentraes de um reagente, amostras de cluas, de
um padro ou amostra teste
Ex: titulao de amostras teste para IFI, reaes de aglutinao e outras

Ex: base 10
Tubo 1 diluio 1:10 =
1mL soluto puro + 9mL de solvente (10mL final)=
(/10) 0,1mL + 0,9mL (1mL final) =
(/10) 0,01mL + 0,09mL (0,1mL ou 100L final) =
(x5) 0,05mL + 0,45mL (0,5mL ou 500L final)

1:10 Tubo 2 diluio 1:100 = 1mL da diluio 1:10 +

9mL de solvente
Tubo 3 diluio 1:1000 = 1mL da diluio 1:100
SOLUTO SOLVENTE + 9mL de solvente
Tubo 4 diluio 1:10000 = 1mL da diluio
1:1000 + 9mL de solvente
 Diluies seriadas
Base 2 ( vol/vol ) = 1:2 = 1+1 = 100L + 100L, etc...
Tubo1 diluio 1:10 = 1+9 = 1mL soluto puro + 9mL de solvente (10mL
final)

Tubo 2 diluio 1:20 = 1mL da diluio 1:10 + 1mL de solvente

Tubo 3 diluio 1:40 = 1mL da diluio 1:20 + 1mL de solvente

Tubo 4 diluio 1:80 = 1mL da diluio 1:40 + 1mL de solvente

Tubo 5 diluio 1:160 = 1mL da diluio 1:80 + 1mL de solvente

Tubo 6 diluio 1:320 = 1mL da diluio 1:160 + 1mL de solvente 5mL

 Diluies seriadas
Sem base definida Ex:
1:100 = 1 + 99
500 / 100 = 5 diluio base 5 = 1:5 = 1+4
1:500 = ?
1000 / 500 = 2 diluio base 2 = 1:2 = 1+1
1:3 1:1000
1500 / 1000 = 1,5 diluio base 1,5 =1 + 0,5 !!!
1:1500

1:3000
1:4000
OBSERVAR O VOLUME FINAL DESEJADO E OS VOLUMES QUE
SERO RETIRADOS PARA REALIZAO DE OUTRAS DILUIES,
DEVE SOBRAR O SUFICIENTE PARA UTILIZAR NO ENSAIO
Sugesto de leitura

Na Bancada - Manual de iniciao cientfica em laboratrio de

pesquisas biomdicas, Kathy Baker, Editora Artmed, 2002

www.goldanalisa.com.br/.../Garantia_e_Controle_da_Qualidade_no
_Laboratorio_Clinico.pdf
Homero Jackson Lopes MG, 2003

Boas Prticas de Laboratrio , Maria de Ftima da Costa Almeida,

Editora Difuso, 2008

Bom trabalho!