Engenharia Bioquímica

AULA 5

Profª Ana Katerine de Carvalho Lima Lobato

 Fermentação Descontínua

 Fermentação Descontínua Alimentada

 Fermentação Semicontínua

 Fermentação Contínua
 Características do MO

Objetivos Forma ideal de

Meio de
específicos operação cultura

Viabilização do processo
fermentativo
Fermentação Descontínua ou Batelada
Operação
Uma suspensão celular é adicionada a um meio
de cultivo e o processo é transcorrido, sem
adição de meio novo, nem retiradas de meio
fermentado durante o processo.

Adicionado ao reator: ar, antiespumante, solução para controle do pH

Características
 Volume do biorreator permanece constante se
 Não houver adição de soluções para o controle do processo
 Perda de líquido por evaporação
 Variação das concentrações ao longo do tempo
• Fornece conhecimento básico da cinética do processo
• Base para comparações de eficiências atingidas

t t
Vantagens
 Menor risco de contaminação
 Esterilização ao final de cada batelada
 Baixa complexidade operacional
 Flexibilidade de operação
 Diferentes produtos
 Mais utilizado na indústria de alimentos
Desvantagens

 Baixos rendimentos ou produtividade

 Inibição, repressão ou desvio do metabolismo celular devido a  [S]i
 Esgotamento do meio de cultivo
 Acúmulo de compostos tóxicos
 Degradação do produto
 Tempos mortos
 Carga/descarga/lavagem/esterilização
Classificação (BORZANI, 1975) (modo de inoculação)

Com um inóculo por tanque

Com recirculação do microrganismo

Processo por meio de cortes

Descontínuo simples Inóculo Meio de cultura

 Preparação do substrato
 Alimentação do substrato no
fermentador
 Adiciona o MO (Inóculo)
 Aguarda o processo ocorrer
 Retira o meio fermentado
 Recuperação
 Purificação do produto Meio
fermentado

Problemas previstos
Inibição pelo substrato, produto ou outros metabólitos
Razões
Repressão na síntese de enzimas e a desidratação dos sistemas enzimáticos
Batelada repetida Inóculo Meio de cultura
 Encerrar a batelada
 Efetua-se a separação das Meio
células Células
fermentado

• Centrifugação
• Sedimentação no próprio reator
 Envia-se o meio fermentado Centrífuga
Meio
 Recuperação fermentado
com células
 Purificação Cervejarias
Destilarias de álcool

Vantagem
Evita o preparo de um novo inóculo para cada batelada
Redução de custos e tempo para obtenção de altas concentrações celulares
Cuidados
Risco de contaminação – Pré-tratamento (água e ácido sulfúrico)
Processo por meio de cortes Meio de cultura
Inóculo
 Inocula a dorna A
 Qdo a fermentação atinge
um determinado estágio
 Transfere parte do conteúdo
para a dorna B (vazia)
 Completa as duas com meio
de cultivo
 Nova fermentação
 Separação A Meio B
fermentado
 Purificação
Tempo do corte
Na fase de crescimento mais intenso – propagação do inóculo
Após o término do processo fermentativo
Desvantagem
Sucessão de cortes pode acarretar em sérias quedas de rendimento
Balanços cinéticos dos cultivos em batelada simples
Balanço para células
d (V . X )
Fi Ff  Fi . X i  rx .V  F f . X f rX=X.X
Si, Xi, Pi S f , Xf , P f dt
dX
  X .X
dt
Balanço para substrato
d (V .S )
 Fi .Si  (rS ).V  F f .S f rS=S.X
dt
dS
 S .X
V=cte dt
Fi=Ff=0 Balanço para produto
d (V .P)
 Fi .Pi  rP .V  F f .Pf rP=P.X
OBS: Desconsiderando a dt
morte celular dP
 P .X
dt
Fermentação Descontínua Alimentada
ou Batelada Alimentada
Operação
Um ou mais nutrientes necessários ao crescimento
celular e/ou formação do produto são adicionados ao
biorreator, intermitentemente ou continuamente, sem
que ocorra retirada de material durante a
fermentação.
“Fed batch”, batelada alimentada

 Introduz o inóculo (10-20% Vútil)

 Alimenta o meio de cultura a uma
Meio Inóculo
vazão adequada
 Mantendo o líquido fermentado no
reator até Vútil
 Retira o caldo fermentado
 Separação
 Recuperação

Meio
fermentado
 Características

 Um ou mais nutrientes são adicionados ao fermentador

durante o cultivo
 Os produtos permanecem até o final da fermentação
 A vazão de alimentação pode ser constante (contínua) ou
variar com o tempo (intermitente)
 O volume do reator pode ou não variar (depender da
concentração do substrato e da taxa de evaporação do
sistema)

• Devido a flexibilidade de utilização de diferentes vazões de alimentação

• É possível controlar a concentração de substrato no fermentador
• Possibilitando o deslocamento do metabolismo microbiano para uma
determinada via metabólica - levando ao acúmulo de um produto específico
Vantagens
 Permite alta concentração de substratos indutores
 Impede o efeito de repressão catabólica
 Mantém baixa concentração de substratos inibitórios para
formação de produto
 Permite obtenção de alta concentração celular

Desvantagens
 Maior risco de contaminação
 Maior necessidade de controle do processo (adição de nutrientes)
 Mudanças constantes na condições ambientais
 Possível degradação do produto devido a longos tempos de
processo
Finalidades

 Minimização dos efeitos do controle do metabolismo celular

 Regulação dos fenômenos de repressão e indução catabólica
 Prevenção da inibição por substrato (X) ou precursores (P)
 Controle da vazão de alimentação evitando o trabalho em condições inibitórias
 Minimização da formação de produtos de metabolismo tóxicos
 Controlando a velocidade de crescimento celular
 Superação de problemas frequentes de manutenção da estabilidade em
processo contínuo
 Contaminação, mutação e instabilidade de plasmídeo
 Adequação do processo fermentativo a condições operacionais
 Evitar a formação de espuma, instabilidade de nutrientes, reposição de líquidos
perdido por evaporação
 Estudo da cinética de processos fermentativos
 Manutenção de baixos níveis de substrato por longos períodos favorece a
estimação de parâmetros cinéticos
 Manutenção da concentração celular constante e controle da velocidade de
crescimento em condições transientes
Classificação ou ajustes

Descontínuo alimentado repetitivo

Descontínuo alimentado estendido

Descontínuo alimentado repetitivo

 Fração constante de volume de cultura é removida a intervalos

de tempos fixos
 Recolocando o mosto para completar o volume de fermentação
 Enchimento e esvaziamentos repetitivos de V específicos –
operação cíclica de V

Aproveitar como inóculo o MO que está crescendo com alta

velocidade de crescimento e de trabalhar com células que
estão na fase produtiva por mais tempo, levando ao
aumento de produtividade do sistema
Descontínuo alimentado estendido

 Concentração de substrato limitante é mantida constante no

meio de fermentação pelo suprimento contínuo do nutriente

Estender o período de fermentação, mantendo níveis de

concentração de substrato no biorreator adequados para
que as células continuem com a atividade fermentativa
direcionada para a formação do produto desejado
Classificação (quanto ao modo de alimentação)

 Com controle por retroalimentação

 O substrato pode ser controlado (controle direto ou indireto) em
função de sua concentração no meio de fermentação
 Sem controle por retroalimentação
 O suprimento do substrato é feito intermitentemente ou de
forma ininterrupta até o final da fase de enchimento da dorna
Balanços cinéticos dos cultivos em batelada alimentada
Balanço para células
F
Sm d (V . X )
Fi Ff  Fi . X i  rx .V  F f . X f rX=X.X
Si, Xi, Pi S f , Xf , P f dt dV/dt =F
dX
 (  X  D). X F/V=D
dt
Balanço para substrato
d (V .S )
 Fi .Si  F .S m  (rS ).V  F f .S f rS=rX/yX/S
dt rX=X.X
dS 1 dV/dt =F
 D( S m  S )   x .X F/V=D
V=variável dt yX S
Fi=Ff=0 Balanço para produto
d (V .P) rP=P.X
 Fi .Pi  rP .V  F f .Pf
dt dV/dt =F
dP F/V=D
  P . X  DP
dt
Fermentação Semicontínua
Operação

Consiste na retirada de parte do caldo

fermentado ao final do processo (esgotamento
da fonte de carbono). A fração de meio que fica
é utilizada como inóculo da próxima batelada.
 Fermentação Semicontínua

Inóculo Meio de cultura

Fermentação Semicontínua
 Coloca no reator o meio de
cultura e o inóculo
 Aguarda o término da
fermentação
 Retira parte do meio fermentado
 Adiciona ao reator um volume de
meio de cultura igual ao volume
Meio
do meio retirado fermentado
 Repete todo o processo enquanto
não houver queda de
produtividade
 Fermentação Semicontínua

Características

 O meio fermentado não retirado do fermentador serve de

inóculo ao meio de fermentação adicionado

 Tanto os fluxos de entrada do meio no reator quando o de

saída de material fermentado são intermitentes e a uma vazão
elevada

t
 Fermentação Semicontínua

Diferença entre semicontínua e descontínua alimentada

Vazão de retirada e preenchimento do reator -
Preenchimento instantâneo

Técnica distinta
Operação por choques de carga de substrato
 Inóculo Meio de cultura

Células

Meio Centrífuga
fermentado
com células

 Meio fermentado é submetido a centrifugação

 Células volta ao reator juntamente como meio de cultura
Vantagens

 Possibilidade de operar o fermentador por longos

períodos (às vezes, alguns meses) sem que seja
necessário preparar um novo inóculo

 Possibilidade de, uma vez conhecidas as melhores

condições de operação, conseguir produtividade
significativamente maior do que a obtida em processo
descontínuo
Fermentação Contínua
Operação

Caracteriza-se por possuir uma alimentação

contínua do mosto a uma vazão constante, sendo
o volume de reação mantido constante através da
retirada contínua do caldo fermentado
Características
 A manutenção do V = cte de líquido no reator é de primordial
importância → a condição de estado estacionário ou regime
permanente
 Considera-se agitação perfeita – sistema homogêneo
 [X,S,P] no líquido efluente = [X,S,P] no interior do reator
 Pode operar por longos períodos de tempo em estado
estacionário
 A manutenção do V = cte é obtida com FA = FD (impossível de
se obter na prática) – mais utilizado o sistema de
transbordamento
 Outro problema na manutenção do V = cte , principalmente em
processos aerados, é a formação intensa de espuma – utilização
de antiespumantes, sistemas mecânicos de quebra de espuma
Vantagens

  produtividade do processo -  tempos mortos

 Uniformidade do fermentado – facilita o downstream
 Manutenção da fisiologia do MO – mecanismos de regulação
metabólica e otimização da composição de meio de cultura
 Possibilidade de associação com outras operações contínuas na
linha de produção
 Maior facilidade no emprego de controles avançados
 Menor necessidade de mão-de-obra
 Minimização das condições de inibição (S e P)
Desvantagens

 Alto custo de instalação

 Ocorrência de mutações genéticas espontâneas - seleção de
mutantes menos produtivos
 > Probabilidade de contaminações
 Dificuldades de manutenção de homogeneidade no reator
◦ ( F ou fermentado tem comportamento pseudo-plásticos - cultivo de fungos
filamentosos)
 Dificuldades de operação em estado estacionário
◦ (formação de espuma, crescimento do MOs nas paredes do reator e nos
sistemas de entrada e saída de líquidos)
Classificação

Contínuo em um único estágio

- Sem reciclo de células
- Com reciclo de células

Contínuo em múltiplos estágios

- Com uma única alimentação (s/ ou c/ reciclo de células)
- Com múltiplas alimentações (s/ ou c/ reciclo de células)
Sem reciclo de células

 Carrega-se o reator com meio

de cultura Inóculo Meio de cultura
 Inocula-se com o MO
 Após um período de operação F
descontínua (até atingir a fase S0
X0
exponencial de crescimento – (P0)
Xmáx nessa fase )
 Inicia-se a alimentação do meio
de cultura e retirada de caldo F
fermentado S
X
P
 Balanços cinéticos dos cultivos contínuos
Fi Ff Balanço para células
Si, Xi, Pi S f , Xf , P f
d (V . X )
 Fi . X i  rx .V  F f . X f rX=X.X
dt F/V=D
D  X dX/dt=0

Balanço para substrato

S Sr = .X
d (V .S )
 Fi .Si  (rS ).V  F f .S f S=X/yX/S
V=cte
dt F/V=D= X
dS/dt=0
Fi=Ff=F
Meio de cultura esterilizado Xi=0
Si  S f   1 .X
yX S
Regime estacionário Balanço para produto
P P r = .X
d (V .P)
 Fi .Pi  rP .V  F f .Pf F/V=D = X
dt p=X.yP/X
P f  Pi   y P X . X dP/dt = 0
Com reciclo de células

Tem como objetivo a obtenção de alta densidade celular no

reator, aumentando as velocidades de transformações e
consequentemente a produtividade em célula do processo

 Recirculação interna

 Recirculação externa
 Com recirculação externa de células
• O líquido efluente circula Fi Fs
através de um separador de Si, Xi, Pi S f , Xf , P f
células
• Sedimentador, centrífuga
ou sistema de filtração por (1-c)Ff
membranas Sf, hXf, Pf
• Uma corrente concentrada Centrífuga
em células retorna ao
cFf
fermentador
aFs Sf, gXf, Pf
• Outra (filtrado, permeado ou
Sf, gXf, Pf
sobrenadante) sai
praticamente isenta de células 1  ag Fator de concentração de células
B
m X = BD 1 a Razão de reciclo
• É uma alternativa bastante viável no caso de processos em que a
preocupação com assepsia não seja tão intensa, ou até mesmo não exista
• Fermentação alcoólica e tratamento de resíduos (processo de lodos ativados)
 Fi cFf
Si, Xi, Pi S f , Xf , P f
 Com recirculação interna de células (1-c)Ff
Sf, hXf, Pf

◦ Uma fração das células é mantida no reator

(simples sedimentação ou filtração na saída do
reator)

m X = AD A  [c  h(1  c)]

Fator de diluição da concentração celular obtido no

filtrado
Fração do líquido efluente, não filtrado,
removida do fermentador

• É uma situação mais segura em termos de manutenção de condições de

assepsia
• Produção de enzimas e antibióticos
Opções de condução do processo
 Sistema com uma única alimentação
 Sistema com múltiplas alimentações
 Sistema com reciclo de células
 Com uma alimentação
 Com múltiplas alimentações
 ◦ Sistema com uma única alimentação
F0 Fn =F0
S0, X0, P0 Sn, Xn, Pn

S1 SS12 S3 Sn
X1 XX12 X3 Xn
P1 PP12 P3 Pn

• A alimentação do meio esterilizado é apenas no primeiro estágio

• Nos demais reatores a alimentação é o líquido efluente do reator
imediatamente anterior a este
 ◦ Sistema com múltiplas alimentações
F2 F3 Fn
F1 S 02 F
S 03 S 0n
S01, X0, P0 Sn, Xn, Pn

S1 SS12 S3 Sn
X1 XX12 X3 Xn
P1 PP12 P3 Pn

• Nos reatores intermediários tem-se duas alimentações, sendo uma o meio

de cultura esterilizado e a segunda o efluente do fermentador anterior
 ◦ Sistema com reciclo de células - uma única alimentação
F0
S0, X0, P0

S1 S2 Sn
X1 X2 Xn
P1 P2 Pn

• No sistema com reciclo de células, existem inúmeras possibilidades de reciclo

• O reciclo pode ser realizado do último para o primeiro estágio
• Pode haver a existência de reciclos intermediários entre os estágios
 Fermentação Contínua
Contínuo em múltiplos estágio (n reatores em série)

◦ Sistema com reciclo de células – múltiplas alimentações

F2 Fn
F1 S 02 S 0n
S01, X0, P0

S1 S2 Sn
X1 X2 Xn
P1 P2 Pn

• De uma forma geral, os sistemas múltiplos estágios proporcionam diferentes ambientes

para o desenvolvimento das células, ao se mudar de um estágio para outro
• Permitindo que se empreguem condições otimizadas distintas nos vários reatores
 Descontínuo
Descontínuo alimentado Contínuo
Células
|
____Células ____Células
Concentração

Substrato Substrato
| |
____Substrato

Tempo Tempo Tempo

 Livro Engenharia Bioquímica (Volume 2)
◦ Capítulo 9
◦ Capítulo 10
◦ Capítulo 11
◦ Capítulo 12

ATIVIDADE INTEGRADORA
 Lista de exercícios sobre forma de condução de bioprocessos