UNIVERSIDADE PAULISTA-UNIP

CIENCIAS BIOLOGICAS

BIOLOGIA MOLECULAR
Enzimas de restrição

Thaina Lourenço Xavier de Souza – D657ie5

Bauru
2020
Enzimas de restrição
As enzimas de restrição são endonucleases que clivam em
sequências específicas do DNA. Quase todas as enzimas de
restrição reconhecem sequência palíndrômicas, isto é, quando uma
das fitas for lida de 5’  3’ e a outra no mesmo sentido, elas serão
as mesmas.

Atividade
A sequência abaixo foi obtida de um banco de dados que armazena
sequências. Essa sequência é fita simples e está representada
seguindo a convenção, ou seja, de 5’  3’.
GCCTTCAATGGCAAGCGGTCTGGAATCCTACTTCTTGAATCGG
CACGGTGTCATTACGGGCGGGGGCCAGAACAACGTCCCTGGA
CATCACACCTAGCCCGTGCGACGGCGGAAACCTTCGCCGGCG
CAGGCTTCGACGTGACCCTCATCGCGGAACCCTCCCCCACCC
CAGTGTTGGCGTGGCTGGTGCGCTCACGGCGAATGGACGTGG
GCGTGCAGATCACCGCCTCGCACAATCGAATTCAGGACAACGG
CTACAAGCTGTACCTGGACGGCGGCTCTCAGCTGGTCTCCCCC
GCCGACCGGCAGATCGAGGAGCACATTGCCGCCCAGCCAACT
GACGCGGCGAAGATCCCCCGCTCCGAGGCGAAGTCTGTAGAC
CTGTCCGTAGTCTCCGGCTATGTCACCGAGCTAAGTACCCTGG
TGGCCACCGGCCGCCAATCCGAGCTGGCGCCGCGGCGGAAG
CTGAAGATCCTCTACACCCCCATGCACGGCGTGGGCGGCAAT
GCCCTGGAGTGGGCCTTACGTGAATTCGGCTTCGGCAACGTG
CACGCGGTGGCCTCGCAGCGCTGGCCGGACCCGACCTTCCCG
ACTGTGGACTTCCCCAACCCTGAGGAGCCGGGTGCCACCGAC
GCGCTGCTGGAAGAAGCCCGCGCCATCGATGCGGACCTGCTG
ATCGCCCTGGATCCGGATGCGGACC

a) Quantos sítios de restrição existem nessa sequência? 7 sitios

b) Faça uma pesquisa sobre os tipos de cortes das enzimas de
restrição. Descreva-os e classifique o corte da enzima BamHI.
Coesivas: apresentam um pequeno número de nucleótidos em
cadeia simples, capazes de se associar por ligações por pontes
de hidrogénio, com outra cadeia simples em que a sequência
de bases seja complementar desta.
Cegas: os fragmentos de DNA com extremidades cegas, ainda
que compatíveis com outros com extremidades cegas
resultantes da ação de qualquer enzima de restrição que as
gere, não possuem a capacidade de estabelecer entre si pontes
de hidrogénio por complementariedade de bases.
A enzima BamHI faz o corte do tipo Coesivas.
c) O gel abaixo apresenta, na canaleta 1, um padrão de peso
molecular onde as bandas representam sequências com 50bp,
80bp, 200bp e 1000pb. Suponha que o DNA acima tenha sido
clivado pela enzima PvuII e represente, na canaleta 2, os
fragmentos resultantes do corte.
1 2
O sitio de clivagem identificado por PyuII: CAGCTG
A enzima ira clivar o filamento em dois fragmentos, com um
apresentando um peso molecular de 218bp e outro de 414pb. Na
canaleta 2, o menor (218bp) ficara mais próximo da banda que
apresenta 200bp na 1, e o maior (414bp) mais distante da banda de
200bp da canaleta 1