GENÉTICA MOLECULAR SUPERIOR
Para se ter uma ideia geral do que pode ser realizado com a biologia molecular, segue abaixo algumas
INTRODUÇÃO A
GENÉTICA MOLECULAR
A genética molecular é uma ciência aplicada
que envolve um aprofundamento genético
e bioquímico para entender os padrões
moleculares e as reações químicas que ocorrem
em organismos vivos. Esses padrões definem
as estruturas e funções do material genético
e seus produtos de expressão (proteínas);
analisa a interação entre diversos sistemas
celulares, entre eles a interação do DNA (ácido
desoxirribonucleico) e RNA (ácido ribonucleico)
GENÉTICA MOLECULAR
bem como a síntese proteica.
É uma área da ciência que iniciou os seus
trabalhos nas pesquisas de Watson e Crick no
ano de 1953. Após este marco, ao longo dos
anos esta área tem crescido muito e está em
constante atualização. Podemos dividi-la em
duas partes, a primeira onde se estuda a parte da
genética mais “clássica” que trata da estrutura
do DNA, mecanismos de replicação, transcrição,
tradução e controle da expressão gênica; e uma
segunda que estuda a parte aplicada, parte esta
em constante atualização. Para se ter ideia na
década de 90 foi realizado o projeto Genoma (o
qual fez um levantamento do DNA humano); para
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aplicações:
este projeto foram gastos bilhões de dólares, e
investimento árduo de anos em tecnologia para
sequenciamento e montagem do DNA humano.
Ao seu término em 2001, um genoma humano
tinha um custo de 100 milhões de dólares. Este
valor baixou para 10 milhões de dólares em
2008, 10 mil dólares em 2011, e no final do ano
de 2015 o custo já estava próximo aos 1.000
dólares. Desta forma fica claro entender que a
biologia molecular está em constante avanços
e modificações, no que se diz as suas técnicas e
aplicações.
São inúmeras as aplicações da biologia molecular
que encontramos no nosso dia a dia e muitas
vezes nem nos damos conta. Um exemplo básico
é o sabão em pó presente no nosso cotidiano,
ele possui enzimas que promovem a quebra das
machas e sujeiras, estas enzimas por sua vez
são produzidas em larga escala utilizando-se na
maioria delas um organismo recombinante para
a expressão.
DNA MATERIAL GENÉTICO
Muitas são as características que fazem do DNA
o material genético por excelência, onde se
destacam três características essenciais:
Insulina humana;
Vacina contra a hepatite B;
Produção de proteínas Interferon-alfa;
recombinantes Hormônio do crescimento humano;
Enzimas de interesse biotecnológico como lipases, proteases,
celulases entre outras moléculas.
Terapia gênica Cura de doenças genéticas.
Investigações criminais, comparando sangue, cabelo e esperma
de supostos criminosos;
Solução de Delitos
Comprovação de paternidade;
Análise de múmias na antropologia.
Clonagem e sequenciamento de todo DNA de um organismo;
Projetos “genoma” de
Identificação de genes e regiões de interesse;
organismos
Elaboração de marcadores moleculares.
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Criação de plantas e
Soja com resistência a herbicida Tomates com vida prolongada
animais transgênicos
Estudo de genes localizados em genomas, a sua regulação
Estudo de estrutura de
e controle in vitro, através da criação de moléculas
genomas e genes
recombinantes.
Identificação de mutações ligadas a doenças se utilizando de
Diagnóstico de doenças
técnicas como Southern e Northern, os biochips, dentre outras.
Melhoramento genético Melhoramento genético de plantas e animais através da seleção
assistido assistida por marcadores ligados a genes de interesse.
Habilidade de transferir a informação para
células-filhas, através da replicação de sua
própria estrutura.
O DNA, melhor do que qualquer outra molécula
Estabilidade física e química de tal forma a não orgânica (RNA, proteínas, açúcares...), cumpre
perder informação com o passar do tempo, muito bem o papel de estabilidade e segurança
mas permitindo a variação por mutação, através de sua estrutura química.
importante para a evolução e especiação;
Estabilidade:
Grande variedade de formas, ligadas às
O esqueleto de açúcar-fosfato é extremamente
múltiplas funções em um organismo, e
estável;
portanto, habilidade de estocar grande
quantidade de informação e de expressá-la As ligações C-C no açúcar são resistentes ao
nas células quando necessário; ataque químico, exceto por ácidos sob altas
temperaturas;
3
 A ligação fosfodiéster é um pouco menos
estável e pode ser hidrolisada a temperatura
ambiente, sob pH;
Nota: no RNA, a presença do OH extra no C2’ facilita
a hidrólise, e portanto o RNA é menos estável:
organismos que usam o RNA como material genético
precisam protegê-lo com uma capa proteica.
As bases também são bastante estáveis
(exceto C, que se desamina para U, que pareia
com A e não com G).
Segurança:
A molécula é redundante, de tal forma que
uma cópia pode servir como modelo para
possíveis correções de erros; a dupla hélice
também forma um ambiente hidrofóbico, de
tal forma que a água é excluída e as bases e
GENÉTICA MOLECULAR
pontes de H sofrem pouco ataque.
Os nucleotídeos da fita unifilamentar do DNA
são ligadas por ligações fosfodiéster. O carbono
5 da desoxirribose se liga a um grupo fosfato,
este grupo fosfato por sua vez se liga ao carbono
3 do nucleotídeo seguinte. Uma vez que as fitas
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Uma série de experimentos, iniciados por volta
de 1930 pelo médico Griffith, definiu que o
DNA é o material genético na maioria dos
organismos, mas que alguns, particularmente
vírus, apresentam o RNA como material genético.
Veja a seguir a estrutura do DNA (Figura1),
composto por unidades fundamentais chamadas
de bases nitrogenadas, sendo elas: Adenina (A)
e Guanina (G) que são purinas (anel duplo); e
Timina (T) e Citosina (C) que são pirimidinas
(anel simples). Estas moléculas possuem em sua
estrutura cadeias de açúcar do tipo desoxirribose
e três ligações fosfato (P). A medida que uma
base é ligada a outra na fita unifilamentar
dois fosfatos são consumidos para promover a
ligação, restando apenas um.
Estrutura química do DNA.
são antipalalelas (mesma direção, mas sentido
oposto), podemos dizer que a direção das
ligações é 3’-5’ ou 5’-3’, dependendo de qual das
cadeias que se está referindo. Os nucleotídeos
de uma fita estão ligadas a outra por pontes de
hidrogênio, Adenina e Timina fazem duas pontes
de hidrogênio, já a Citosina e Guanina fazem
três pontes de hidrogênio.
Esquema da estrutura química da desoxirribose evidenciando a posição dos carbonos.
ESTRUTURA DO GENE
Em termos moleculares, um gene é usualmente
definido como toda a sequência de ácido
nucleico que é necessária para a síntese de
um polipeptídio funcional. De acordo com
esta definição, um gene inclui mais do que os
nucleotídeos que codificam a sequência de
aminoácidos de uma proteína, conhecida como
a região codificadora, mas nele são incluídas
também todas as sequências de DNA necessárias
para a síntese de um transcrito de RNA. Em alguns
genes procarióticos, as sequências de DNA que
controlam a iniciação da transcrição pela RNA
polimerase podem se encontrar a milhares
de pares de bases da região codificadora. O
tamanho varia de cerca de 75 até mais de 2.300
pares de bases. Os genes estão organizados de
maneiras diferentes nos diferentes organismos.
A diferença entre os genes de procariotos e
eucariotos se deve ao fato que nos procariotos
a sequência da região codificante é transcrita
integralmente, enquanto que nos eucariotos
essa sequência está dividida entre íntros e éxons
(região codificante do gene). De um modo geral,
os genes dos eucariotos tendem a possuir um
tamanho mais elevado, bem como possuem
maior versatilidade, produzindo mais de um tipo
GENÉTICA MOLECULAR
de proteína por genes (ver splicing alternativo –
aula de Transcrição e Expressão Gênica). Alguns
vírus apresentam genes muito compactados,
inclusive com a sobreposição de quadros de
leitura.
Elementos básicos na composição de um gene.
5
 DOGMA CENTRAL
A transmissão da informação na maioria dos
organismos vai do DNA para o RNA, e do RNA
para proteína. No caso do retrovírus, o fluxo de
informação ocorre de forma reversa do RNA para
o DNA. A replicação é um processo que ocorre
sempre que a célula ou o organismo se divide,
independentemente da transcrição ou tradução.
A passagem de DNA para RNA se chama
TRANSCRIÇÃO, enquanto que a passagem de
RNA para proteína se chama TRADUÇÃO.
REPLICAÇÃO
A replicação é um processo essencial para que
haja a multiplicação celular, já que as células-
GENÉTICA MOLECULAR
filhas precisam receber a informação genética.
Ela parte de uma cadeia dupla de DNA para
gerar duas novas cadeias duplas de DNA de
um modo semiconservativo (cada cadeia-
filha contém metade da cadeia-mãe e metade
recém-sintetizada). O processo é realizado
pelas enzimas DNA polimerases. Além das DNA
polimerases, várias outras enzimas participam do
processo. Este assunto será tratado em detalhes
na aula de Replicação do Material Genético.
TRANSCRIÇÃO
A transcrição é o processo que gera um RNA a
partir do DNA, e é o primeiro passo na passagem
da informação do material genético para a
síntese de proteínas. As principais enzimas
responsáveis pelo processo são as chamadas
ANOTAÇÕES
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RNA polimerases, e existem diferenças entre
as enzimas de procariontes e de eucariontes.
São gerados três tipos principais de RNAs:
EXERCÍCIOS
mRNA, tRNA e rRNA, cada um com uma função
especializada. Em termos gerais, o processo
QUESTÃO RESOLVIDA NA AULA
é semelhante à replicação, mas apenas um 5 Qual o sentido que ocorre as ligações entre os
nucleotídeos na cadeia unifilamentar?
pequeno segmento (gene a ser transcrito) do
DNA é utilizado. Uma outra diferença é que o
Quais seriam os benefícios de se ter o genoma pessoal
produto da transcrição é uma fita simples de sequenciado?
RNA, que se libera do DNA após sintetizada,
sendo que o DNA volta a se enrolar ao final do
processo. Nos eucariontes o mRNA precisa ser
processado e passa pelo processo de splicing.
A partir do splicing alternativo é possível ser 6 Quais são os elementos básicos na composição
traduzida mais de um tipo de proteína a partir de um gene? Existe uma diferença entre genes de
de um único gene. Este assunto será tratado procariotos e eucariotos?
em detalhes na aula de Transcrição e Expressão
Gênica. 1 Qual foi o grande marco histórico que deu início ao
estudo da genética molecular?
TRADUÇÃO
EXERCÍCIOS
A tradução é o último passo na conversão da
informação do DNA para o polipeptídio ou
proteína. Ela começa com a montagem do 7 Cite três ocasiões onde a genética molecular está
aplicada na sociedade onde você vive.
complexo ribossômico, em seguida é reconhecido
o códon de iniciação (AUG) e os tRNAs começam 2 Quais são as características fundamentais e desejáveis
a chegar, em resposta à leitura dos códons pelos para o material genético?
ribossomos. Após o início da síntese, para cada
adição de aminoácido ocorre a formação de
uma ligação peptídica entre o novo aminoácido
e a cadeia peptídica, bem como o rompimento
da ligação de alta energia feita durante a 8 No DNA de um organismo, 18% das bases
nitrogenadas são constituídas por citosina. Quais as
aminoacilação do tRNA e a translocação de porcentagens das outras bases desse DNA? Justifique
todo o sistema para o próximo códon. O ciclo 3 O que postula o Dogma Central? Ele está certo? sua resposta.
é repetido várias vezes, até que um códon de
finalização seja encontrado.
9 Quais são as bases púricas e as pirimídicas e qual a
4 Quais são os tipos de ligações químicas entre os principal diferença entre elas?
nucleotídeos na cadeia de DNA?
7
 10 (ENADE 2008) Analise as seguintes asserções:
É mais fácil separar nucleotídeos que unem as duas
fitas complementares da molécula de DNA que
separar nucleotídeos que pertençam à mesma fita.
Porque
As ligações entre nucleotídeos que unem as duas
fitas são ligações de hidrogênio (ligações não
covalentes que também são denominadas de pontes
de hidrogênio), enquanto as ligações que unem
nucleotídeos da mesma fita são ligações covalentes
do tipo fosfodiéster.
Acerca das asserções apresentadas, assinale a opção
correta.
ANOTAÇÕES
EXERCÍCIOS
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(A) As duas asserções são proposições verdadeiras,
e a segunda é uma justificativa correta da primeira.
(B) As duas asserções são proposições verdadeiras,
mas a segunda não é uma justificativa correta da
primeira.
(C) A primeira asserção é uma proposição verda-
deira, e a segunda, uma proposição falsa.
(D) A primeira asserção é uma proposição falsa, e a
segunda, uma proposição verdadeira.
(E) Tanto a primeira asserção quanto a segunda
são proposições falsas
GABARITO DJOW
INTRODUÇÃO A GENÉTICA MOLECULAR
QUESTÃO RESOLVIDA NA AULA
Com o genoma pessoal sequenciado é possível analisar o
nosso DNA a procura de padrões genéticos que possam nos
fornece informações quanto a nossa propensão genética de
desenvolver certas patologias, de apresentar preferência
por determinados fármacos entre outras informações
relevantes. Com o desenvolvimento da tecnologia em um
futuro próximo será possível utilizar a chamada terapia
genômica, onde poderemos receber um tratamento médico
especial de acordo com nossas características genotípicas.
1 - Entre vários acontecimentos importantes sobre estudos
moleculares da década de 50, o marco histórico da descoberta
da estrutura do DNA pelos pesquisadores Watson e Crick foi o
que desencadeou diversos outros estudos na área da genética
molecular. Nesta descoberta, Watson e Crick descobriram a
estrutura tridimensional do DNA, na sua forma de dupla-hélice.
2 - A molécula deve ter boa estabilidade física e química para
não perder informação com o passar do tempo, mas permite a
variação por mutação, importante para a evolução e especiação.
Grande variedade de formas, habilidade de estocar grande
quantidade de informação e de expressá-la nas células quando
necessário. Habilidade de transferir a informação para células-
filhas, através da replicação de sua própria estrutura.
3 - Postula que a informação genética vai do DNA para
transcrição do RNA, e do RNA para síntese da proteína. Ele está
errado, embora a maioria dos organismos respeitam esse fluxo,
alguns organismos revertem o ciclo, passando a informação do
RNA para o DNA, a exemplo o retrovírus.
4 - Os nucleotídeos da fita unifilamentar do DNA são ligadas por
ligações fosfodiéster. Os nucleotídeos de uma fita estão ligadas
a outra por pontes de hidrogênio, Adenina e Timina fazem duas
pontes de hidrogênio, já a Citosina e Guanina fazem três pontes
de hidrogênio.
5 - O carbono 5 da desoxirribose se liga a um grupo fosfato, este
grupo fosfato por sua vez se liga ao carbono 3 do nucleotídeo
seguinte. Desta forma, podemos dizer que um nucleotídeo está
ligado ao outro na direção 5’ para 3’ ou na direção 3’ para 5’
dependendo de qual das cadeias que se está referindo.
6 - Os genes são compostos por regiões de iniciação (promotores
de transcrição), região codificante e regiões de terminação do
transcrito. Os genes de procariotos e eucariotos são diferentes,
visto que que nos procariotos a sequência da região codificante
é transcrita integralmente, enquanto que nos eucariotos essa
sequência está dividida entre íntros e éxons (região codificante
do gene).
7 - Algumas das aplicações são produção de proteínas
recombinantes, terapia gênica, solução de delitos baseados em
marcadores moleculares, projetos “genoma” de organismos,
criação de plantas e animais transgênicos, estudo de estrutura
de genomas e genes, diagnóstico de doenças por marcadores
moleculares, melhoramento genético assistido. (A resposta
engloba a utilização de técnicas de biologia molecular, pode
conter itens que não estejam nesta resposta, mas devem seguir
o pré-requisito de se utilizar de técnicas de biologia molecular).
8 - C=18%; G=18%; T=32%; A=32%. Visto que citosina (C) se
pareia apenas com guanina (G), e adenina (A) com timina (T).
9 - As bases Adenina (A) e Guanina (G) são pirimídicas; e Timina
GENÉTICA MOLECULAR
(T) e Citosina (C) são púricas, no RNA encontramos a Uracila (U)
que também é uma púrica. As bases pirimídicas apresentam dois
aneis na sua estrutura, enquanto as bases púricas apresentam
apenas um.
10 - [A]
O DNA formado por uma dupla hélice de nucleotídeos mantém
as duas fitas desta hélice em posição através de pontes de
hidrogênio entre as bases púricas e pirimídicas. Estas ligações
são não covalentes consideradas interações fracas entre as
moléculas envolvidas, em que uma associação intermolecular
direcional ocorre. Já a interação entre os nucleotídeos de uma
mesma fita são ligações do tipo fosfodiéster, que são covalentes
consideradas as mais intensas das forças que mantêm a
integridade de moléculas, em virtude do compartilhamento
de elétrons entre os átomos envolvidos. Especificamente na
molécula de DNA, o fosfato é esterificado entre as duas unidades
de desoxirriboses dos nucleotídeos envolvidos.
REFERÊNCIAS
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SNUSTAD, D.P. e SIMMONS, M.J. Fundamentos de
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editor, 2014. 218 p.
VALADARES, B. L. B., ARAÚJO, E. D. DE; PANTALEÃO, S. DE
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de Sergipe, CESAD, 2011.
ZAHA, A. (Org.). Biologia molecular básica. 3. ed., rev. e
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