DIAGNÓSTICO MOLECULAR DE

POLIMORFISMOS
NOS GENES
MTHFR, FATOR V
E PROTROMBINA

ADRIEL APARECIDO GERALDO - JULHO/2022

 01 O que são polimorfismos e qual sua
relevância médica.

02 Identificação de polimorfismos por PCR e

RFLP.

Tópicos
03 MTHFR, polimorfismo 677C>T e sua
relação com cardiopatias.

04 Hemostasia.

05 PROTROMBINA, polimorfismo 20210G>A e
trombose.

06 FATOR V DE LEIDEN, polimorfismo

1691G>A e trombose.
 POLIMORFISMOS E SUA
01
RELEVÂNCIA MÉDICA
- Polimorfismo = SNP (single nucleotide
Polymorphism)

- Variações genéticas observadas em pelo

menos 1% da população.

- Maioria dos SNPs não afetam a função dos

genes pois ocorrem em regiões de íntrons
(não codificastes).

- Quando ocorrem em regiões codificantes do

gene (éxons) ou em regiões regulatórias
podem apresentar diferenças funcionais.

- Correlação com predisposição à doenças,

Fonte: NIH. Acesso 28-07-21.
resposta à fármacos, valor diagnóstico entre
outros.
 IDENTIFICAÇÃO DE
02
POLIMORFISMOS

A) COLETA DA
AMOSTRA C) PCR

D) ENZIMA DE
B) EXTRAÇÃO
RESTRIÇÃO
DO DNA
Reação em Cadeia da Polimerase
(Polymerase Chain Reaction - PCR)

ESTRUTURA DO DNA COMPONENTES DA PCR PROCESSO PCR

AMOSTRA PRIMERS NUCLEOTÍDEOS

TAQ POLIMERASE BUFFER TUBO PCR

 Digestão com enzima de restrição
(Restriction Fragment Length Polymorphism)

- Endonucleases (Endo = dentro; nuclease =

quebra).

-"Tesouras" biológicas.

- Reconhecem e clivam (cortam) sequências

específicas de DNA.
Ordem de
- Nomenclatura:
descoberta

Eco R I Fonte: Alberts et al. Biologia Molecular da Célula. 6a ed.

Estirpe Artmed.
Gênero
Espécie
Escherichia RY
coli
Eletroforese em gel de agarose
 MTHFR, polimorfismo 677C>T e sua
03
relação com cardiopatias.

POLIMORFISMO 677C>T

-Confere uma substituição de uma Ala por TÓXICO EM NÍVEIS ELEVADOS

uma Val em 5-MTHFR.
Manifestações clínicas associadas:
Sistema nervoso central - convulsões, desordens
psiquiátricas, retardo mental.
Sistema cardiovascular - tromboembolismo, DC,
aterosclerose.
 FREQUÊNCIA DO ALELO 677C>T NA
POPULAÇÃO BRASILEIRA*

28,1% 18,3% 10,4%

Caucasianos Afrodescendentes Alelo TT em caucasianos

com DAC

*Estudo realizado com 772 indivíduos na Bahia, sendo 480 caucasianos e 227 afrodescendentes. (DOMINGOS et al 2007)
04 Hemostasia
- Processo que evita sangramento excessivo após danos em vasos sanguineos.
- Envolve 3 elementos principais:
1 ) Parede vascular
2) Plaquetas
3) Cascata de coagulação

Fonte: Silverthorne, D. U. Fisiologia Humana. Artmed. 7ª ed.

 PROTROMBINA, polimorfismo
05
20210G>A e trombose
- Protrombina (fator II de coagulação) é uma proteína sintetizada no fígado com
a presença de vitamina K. É precursora da trombina na cascata de coagulação.
- Polimorfismo 20210G>A eleva níveis de protrombina na circulação
possivelmente pelo aumento de estabilidade do mRNA.
SUL DO BRASIL (SC/PR)** SUDESTE (MG)***

15,3%

11,1% Santa Catarina 5,9%

7,3%

Genótipo Genótipo
Heterozigótico Heterozigótico

**Estudo realizadocom 243 indivíduos nos estados de Santa Catarina e Paraná. (HERKENHOFF et al. 2012)
****Estudo realizado com 1109 indivíduos com suspeita de trombofilia em Minas Gerais (GUIMARÃES et al. 2009)
 TP/TAP- Tempo de protrombina

O QUE É?
Avalia anormalidades da via extrínseca
(VII, X, V, protrombina e fibrinogênio)

PARA O QUÊ SERVE?

Monitoramento de anticoagulantes
orais (ex. Marevan)

Fonte: Silverthorne, D. U. Fisiologia Humana. Artmed. 7ª ed.

 FATOR V DE LEIDEN, polimorfismo
06
1691G>A e trombose
- Polimorfismo 1691G>A no gene que codifica o fator V (Fator V de Leiden) da
cascata de coagulação resulta na resistência à ativação da proteína C do
endotélio, um anticoagulante..

FREQUÊNCIA NO SUDESTE (MG)*****

BRASIL****

20% 7,5%

Presença do alelo em Genótipo

pacientes com trombose Heterozigótico

****Estudo realizado com 81 indivíduos no Hospital das Clínicas da Unicamp. (ARRUDA et al. 1995)
*****Estudo realizado com 1109 indivíduos com suspeita de trombofilia em Minas Gerais (GUIMARÃES et al. 2009)
Referências
ARRUDA, V. R.; BIZZACCHI, J. M. A.; COSTA, F. F.; REITSMA, P. H. Factor V Leiden (FVQ506) is common in a brazilian population. American Journal of
Hematology. Vol. 49: 242-243. 1995.

DOMINGOS, L. S. R. et al. Sex-Specific Effect of the Thermolabile C677T Mutation in the MethylenetetrahydrofolateReductase Gene on Angiographically
Assessed Coronary Artery Disease in Brazilians. 2007.

GUIMARÃES, S. P. et al. Mutações predisponentes à trombofilia em indivíduos de Minas Gerais - Brasil com suspeita clínica de trombose. Rev. Bras. Hematol..
Hemoter. 2009

HERKENHOFF, M. E.; GAULKE, R.; SOUZA, J. G.; THOMÉ, N. S.; PITLOVANCIV, A. K.; REMUALDO, V. R. Análise da mutação G20210A no gene da protrombina
(fator II) em pacientes com suspeita de trombofilia no sul do Brasil. Bras. Patol. Med. Lab. Vol 48: 85-89. 2012.