Sedimentação de partículas traduzido para português

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/ / /5/ / / SEDIMENTAÇÃO
A sedimentação é amovimento de partículas ou macromoléculas

em um campo inercial. Suas aplicações na tecnologia de separação são extremamente difundidas. As
aplicações extremas vão desde a sedimentação por gravidade de toneladas de resíduos sólidos e
bactérias em estações de tratamento de efluentes até a centrifugação de alguns microlitros de sangue
para determinar o volume de hemácias (“hematócrito”) no laboratório clínico. As acelerações variam
de 1 ×gem tanques de floculação para 100.000 ×gem ultracentrífugas para medir as taxas de
sedimentação de macromoléculas. No bioprocessamento, as aplicações mais frequentes da
sedimentação incluem a clarificação de caldos e lisados, a coleta de células e corpos de inclusão e a
separação de fluidos de diferentes densidades.
As operações unitárias em sedimentação incluem tanques de decantação e centrífugas tubulares
para processamento em lote, centrífugas contínuas, como centrífugas de disco, e operações unitárias
menos usadas, como fracionadores de fluxo de campo e decantadores inclinados. Centrífugas em
escala de bancada que acomodam amostras pequenas podem ser encontradas na maioria dos
laboratórios de pesquisa e são frequentemente aplicadas ao processamento de culturas de células em
escala de bancada e preparações enzimáticas. Certas ultracentrífugas de alta velocidade são usadas
como ferramentas analíticas para a estimativa de pesos moleculares e coeficientes de difusão.
O capítulo começa com uma descrição dos princípios básicos de sedimentação, seguidos de
métodos de caracterização de centrífugas de laboratório e de grande escala. Duas importantes
centrífugas de produção, a centrífuga tubular tubular e a centrífuga disk-stack, são analisadas
em detalhes para fornecer a base para o aumento de escala. As ultracentrífugas, importantes
para o trabalho analítico e preparatório, são então analisadas. O efeito da floculação de
partículas na sedimentação é apresentado, e a sedimentação de partículas em baixas
acelerações é discutida. O capítulo termina com uma descrição da elutriação centrífuga.
5.1 OBJETIVOS INSTRUCIONAIS
Após concluir este capítulo, o leitor deverá ser capaz de fazer o seguinte:
• Determine a velocidade de uma partícula sedimentadora e calcule os tempos de

sedimentação, tempos equivalentes e coeficientes de sedimentação em campos
gravitacionais e centrífugos.
185
186/ /BI OSEPARA Ç Ã O Sc I nce E ENg INEER ING
• Realize análises de engenharia e cálculos de dimensionamento em centrífugas tubulares

e de pilha de discos.
• Escolha a centrífuga apropriada para separações líquido-sólido específicas.
• Calcule o peso molecular a partir de dados de ultracentrífuga.
• Explique o comportamento dos flocos sedimentares.
• Discernir a importância relativa da difusão numa operação de sedimentação.
• Explique como funcionam a sedimentação inclinada, o fracionamento de fluxo de campo e a elutriação
centrífuga.
5.2 PRINCÍPIOS DE SEDIMENTAÇÃO
Os campos inerciais mais frequentemente encontrados são a aceleração gravitacional, g=

9,8 m/s2, ou aceleração centrífuga,ω2R, OndeRé a distância da partícula ao centro de
rotação, eωé a velocidade angular (rad/s). A mesma teoria pode ser usada para descrever
a sedimentação em ambos os tipos de campos inerciais.
5.2.1 Equação de Movimento
A análise começa com a equação do movimento de uma partícula de raioumae densidadeρ

tendo massam= (4/3)πa3ρem um campo inercial movendo-se radialmente a uma distânciaRdo
centro de rotação (Figura 5.1)
Supondo que a partícula seja esférica,
DVD -4- 3 -4-

(5.2.1)m πum ρω2R− πa3ρ 0ω2R − 6π µuma
υ
dt =FiR+FbR+FdR= --3-- --3--
Direção do movimento
Partícula de raiouma
Centro de rotação
FIGURA 5.1Partícula movendo-se radialmente sob a influência de um campo inercial à distânciaRdo centro
de rotação.
Sedimentação/ /187
onde os subscritos designam forças noRdireção, devidoeu, aceleração inercial,b, flutuabilidade

devido à densidade do meioρ0através do qual as partículas sedimentam, ed, a força de arrasto
de Stokes, que em condições de escoamento rasteiro é proporcional à velocidadeυe viscosidade
µ[1]. Resolvendo a Equação (5.2.1) para velocidade em um campo centrífugo em estado
estacionário (todas as forças equilibradas, entãodv/dt=0) dá
2uma2(ρ−ρ0)ω2 R
(5.2.2)υ=
9µ
comumente chamada de “equação da centrífuga”. Se as partículas sedimentarem apenas

na presença da gravidade, então a aceleração inercial ég=9,8 m/s2, eω2Rna Equação (5.2.2)
é substituído porg. Se, no entanto, a partícula está se movendo para fora do centro de
rotação em uma centrífuga,Rnão é constante e está relacionado com a velocidade porv=
dR/dt, que resulta da Equação (5.2.2) após o rearranjo,
dR --2uma2(ρ−ρ 0)ω-2- dt
(5.2.3) =
R 9µ
com a seguinte condição inicial:
(5.2.4)em t=0, R=R0
Esta equação pode ser integrada para dar
-R- 2t
2uma2(ρ−ρ0) ω
(5.2.5)ln - -=
-R0- 9µ
Esta é uma equação útil que relaciona o tempo com a distância percorrida pela partícula.
5.2.2 Sensibilidades
As condições de fluxo rastejante são geralmente satisfeitas na sedimentação. Calculando o

número de Reynolds para partículas esféricas
(5.2.6)e =
2aυρ
µ
O fluxo rastejante ocorre em números de Reynolds inferiores a cerca de 0,1 [1]. A Tabela 5.1 mostra as
velocidades de sedimentação para biopartículas e biomoléculas importantes calculadas a partir da
Equação (5.2.2) comρ0= 1,0 g/cm3,µ=0,01gcm−1s−1(poise), e valores representativos deρeuma. A
velocidade de sedimentação e os resultados do número de Reynolds mostrados na Tabela 5.1 para
células de levedura e células bacterianas na aceleração da gravitação podem ser multiplicados pela
aceleração centrífuga de uma centrífuga para dar o correspondente
TABELA 5.1Velocidades de Decantação calculadas e Número de Reynolds para Bioprodutos de Exemplo

(Assume ρ0=1,0 g/cm3eµ=1,0 cp)
Adimensional Sedimentação
Biopartícula ou Sedimentação Densidade, aceleração velocidade, Reynolds
biomolécula Raio,uma(µm) ρ(g/cm3) (G=ω2R/g) v(cm/h) número, R
Célula de levedura 2,5 1.1 1 0,5 7 × 10−6
Célula de bactérias 0,5 1.1 1 0,02 6 × 10−8

Proteína 0,005 1.3 104 0,06 2 × 10−9
valores para operação na centrífuga; por exemplo, em uma aceleração adimensional de 10.000,
o número de Reynolds para células de levedura é 0,07, o que significa que o fluxo ainda está
rastejando.
Fica claro na Tabela 5.1 que a sedimentação gravitacional é muito lenta para ser prática para
bactérias, e a centrifugação convencional é muito lenta para macromoléculas de proteína. No caso de
partículas verdadeiras, a floculação (consulte a Seção 5.6) é frequentemente usada para aumentar o
raio de Stokesuma, enquanto a ultracentrifugação (ver Seção 5.5) é usada em separações
macromoleculares.
Quando a densidade de partículas e a densidade do solvente são iguais, a velocidade de
sedimentaçãov é zero, e o processo é chamadoisopicnicoouequilíbriosedimentação. Este fato é
explorado na determinação de densidades moleculares e na separação de células vivas. Um gradiente
de densidade ou uma prateleira de densidade é empregado em tais casos. As densidades de células,
organelas e biomoléculas representativas medidas por este método são fornecidas na Tabela 5.2 [2–
5]. A densidade deAmeba proteuscélulas é baixa porque essas células contêm vacúolos de gordura de
baixa densidade e não possuem parede celular.
Um exemplo de prateleira de densidade utilizada para a separação de células é a
preparação de linfócitos por sedimentação. O objetivo dessa separação é remover eritrócitos de
uma população de leucócitos com base em uma prateleira de densidade. Ao combinar Ficoll, um
polímero de alto peso molecular, e Hypaque, um derivado do ácido benzóico fortemente
iodado, em proporções adequadas em tampões aquosos, é possível atingir uma densidade em
torno de 1,07 g/cm3em soluções isotônicas. Nessa densidade, a maioria das subpopulações de
glóbulos brancos flutuará e quase todos os glóbulos vermelhos sedimentarão.
Quando a concentração de partículas de sedimentação aumenta, a velocidade de
sedimentação diminui, um fenômeno conhecido como “sedimentação impedida”. Este
efeito foi quantificado pela seguinte expressão para partículas de qualquer forma [6]:
(5.2.7)υc=υ(1 -ϕ)n
Ondevcé a velocidade de sedimentação de partículas em uma suspensão concentrada,vé a

velocidade das partículas individuais [Equação (5.2.2)],φé a fração de volume das
partículas, ené uma função apenas da forma da partícula e do número de Reynolds. Para
partículas esféricas com Re<0,2 (geralmente satisfeito durante a sedimentação), o
expoentenfoi encontrado em 4,65. A Equação (5.2.7) também pode ser aplicada
TABELA 5.2Valores medidos da densidade de células representativas,

organelas e biomoléculas
Célula, organela ou biomolécula Densidade,ρ(g/cm3) Ref.

Escherichia coli 1,09uma 2
Bacillus subtilis 1.12 3
Arthrobactersp. 1,17 4
Saccharomyces pombe 1,09 2
Saccharomyces cerevisiae 1.11uma 2
Amoeba proteus 1,02 2
Células B murinas 1,06uma 2
Células de ovário de hamster chinês (CHO) 1,06 2
Peroxissomos 1,26uma 5
Mitocôndria 1,20uma 5
Membranas plasmáticas 1,15uma 5
Proteínas 1,30uma 5
Ribossomos 1,57uma 5
ADN 1,68uma 5
RNA 2,00uma 5
umaValor médio.
TABELA 5.3Efeito da fração de volume de
partículas φ na velocidade de sedimentação de
partículas para partículas esféricas
φ vc/v
0,01 0,95
0,05 0,79
0,10 0,61
0,20 0,35
para partículas de qualquer tamanho em um sistema polidisperso, usando a fração de volume para
todas as partículas no cálculo [7].
A magnitude do efeito de sedimentação dificultada para partículas esféricas em função da fração
de volume de partículasφpode ser visto na Tabela 5.3. Observe que a sedimentação dificultada pode
ser significativa para concentrações de partículas de alguns por cento ou mais.
5.3 MÉTODOS PARA ANÁLISE DE SEDIMENTAÇÃO
Enquanto os princípios fundamentais da sedimentação são importantes para uma compreensão

básica deste assunto, outros métodos menos teóricos têm sido desenvolvidos para a prática
real da sedimentação. A sedimentação de equilíbrio, o coeficiente de sedimentação, o tempo de
sedimentação equivalente e a análise sigma são alguns dos métodos mais importantes.
5.3.1 Sedimentação de Equilíbrio
Alguns produtos podem ser isolados com base em sua densidade. Na ultracentrifugação isso é
verdade para os ácidos nucleicos, e a sedimentação isopícnica (mesma densidade) foi o método
originalmente usado para demonstrar a replicação semiconservativa do DNA [8]. Quandoρ=ρ0
na Equação (5.2.2), entãov=0 e todos os movimentos inerciais param; portanto, se a densidade
da solução é conhecida no local onde o movimento para, a densidade do soluto ou partícula
suspensa é conhecida. Na maioria das aplicações, o movimento inercial é interrompido em um
gradiente de densidade, de modo que a densidade do meio aumenta abaixo do ponto de
parada, e a força de empuxo [Equação (5.2.1)] é maior que a força inercial, o que faz com que a
partícula retorne ao seu nível isopícnico. A centrifugação pode, portanto, ser usada
analiticamente para determinar a densidade de partículas ou macromoléculas, conforme
discutido anteriormente.
Na prática, existem pelo menos três vias para o estabelecimento de condições para a
sedimentação isopícnica – a criação de uma região no vaso de sedimentação onde ρ0≥ρ. Um
método é a camada de soluções de densidade decrescente, começando no fundo do recipiente
e prosseguindo até que o recipiente esteja cheio. O gradiente resultante é como uma escada
até que a difusão o suaviza. Outra é centrifugar em velocidade extremamente alta, resultando
em estratificação isotérmica de um soluto formador de densidade, como CsCl. Tal gradiente não
é necessariamente linear. O método mais utilizado para formar um gradiente de densidade é o
método de mistura de gradiente, no qual dois recipientes cilíndricos, um contendo uma solução
concentrada e outro contendo uma solução diluída e um aparelho de agitação, são ligados
como na Figura 5.2 para produzir um escoamento com um gradiente linear de sal. Para esses
misturadores de gradiente, a concentração de soluto dependente do tempo é a seguinte [9]:
c − c1,0)
(5.3.1)c(t) =1,0+Q(c2 t
2V0
OndeQé a vazão devido ao bombeamento ou alimentação por gravidade,V0é o volume

inicial em cada cilindro,c1,0é a concentração inicial de soluto na câmara de mistura, ec2
Remo
Sal agitador
solução Sal
solução
Agitador magnético
FIGURA 5.2Dois tipos de misturador de gradiente linear.

é a concentração de soluto na câmara não misturada (constante). Por programação Q, pode-se

configurar uma variedade de gradientes de sal.
5.3.2 Coeficiente de Sedimentação
Quando uma força de corpo é aplicada, a velocidade através de um meio viscoso é geralmente
proporcional ao campo de aceleração (exemplos são elétricos, magnéticos e inerciais). No caso
da sedimentação, a constante resultante, uma propriedade tanto da partícula quanto do meio, é
acoeficiente de sedimentação,que é definido como
υ
(5.3.2)≡
ω2R
Comparando esta equação com a Equação (5.2.2), vemos que
2uma2(ρ−ρ0)
(5.3.3)s=
9µ
que definesapenas em termos de propriedades da partícula e do meio. Este coeficiente é

geralmente expresso em 20°C e sob condições (viscosidade e densidade) de água pura
como
20,W(s)
O coeficiente de sedimentação é frequentemente expresso em unidades svedberg, onde 10−13

s = 1 unidade svedberg (S), em homenagem ao inventor da ultracentrífuga, Theodor
Svedberg.
EXEMPLO 5.1
Aplicação do Coeficiente de SedimentaçãoEm 1974 DE Koppel mediu o coeficiente de

sedimentação (s20,W) para os ribossomos menores deEscherichia colia 70 S (Koppel, DE,
Bioquímica, 13,2712, 1974). Estime quanto tempo levaria para esclarecer completamente uma
suspensão desses ribossomos em uma centrífuga de alta velocidade operando a 10.000 rpm
com um tubo contendo a suspensão de ribossomos na qual a distância máxima de
deslocamento das partículas radialmente para fora é de 1 cm e a distância inicial de o centro de
rotação para as partículas mais próximas do centro de rotação é de 4 cm.
Solução
Podemos escrever a Equação (5.3.2) como
dR1
s=
dt ω2R
ou
dR
2sdt=
R
Integramos esta equação com a seguinte condição inicial:
not=0,R=R0(distância do centro de rotação até as partículas mais próximas do centro
de rotação)
dar
R
ω2rua=ln
R0
Para determinar o tempo máximo necessário, avaliamosRno curso máximo das

células medido a partir do centro de rotação (5 cm):
-R- 1h
ln ln(5/4 )
--R0-- 3600s
t= = 2
=8,1h
ω2s - rev 2πradical 1 minuto-
× × (70×10−13 s)
--10.000 min rev anos 60 --
Esta não deve ser uma quantidade razoável de tempo para centrifugar os ribossomos. No
entanto, como o tempo varia inversamente com o quadrado da velocidade de rotação, o tempo
pode ser reduzido para 2 h duplicando a velocidade.
5.3.3 Tempo Equivalente
Para avaliar as propriedades aproximadas de um tipo de partícula a ser separado, às vezes é

conveniente calcular um “tempo equivalente”. Para fazer isso, primeiro definimos uma
aceleração adimensional,G, a razão entre a aceleração centrífuga e gravitacional para uma
centrífuga particular:
ω2R
(5.3.4)G≡
g
OndeRé geralmente definido como o raio da tigela da centrífuga. Assim, esta unidade
adimensional é medida em “g's”—múltiplos da aceleração gravitacional da Terra. Uma
aproximação grosseira da dificuldade de uma dada separação por centrifugação é o
produto da aceleração adimensional e o tempo necessário para a separação. Este produto
é chamado de tempo equivalente para a separação e é escrito como
ω2R
(5.3.5)Tempo equivalente≡Gt= t
g
Os valores típicos de tempo equivalente são os seguintes: 0,3 × 106s para células
eucarióticas, 9 × 106s para precipitados de proteína, 18 × 106s para bactérias e 1100 × 106s
para ribossomos [10].
O tempo equivalente para a centrifugação de células ou partículas biológicas de
propriedades de sedimentação desconhecidas pode ser estimado em uma centrífuga de
laboratório. As amostras são centrifugadas várias vezes até atingir um volume constante de
células compactadas. O tempo equivalenteGté calculado como o produto daGpara a centrífuga
específica e o tempo necessário para atingir o volume constante de células compactadas. Uma
centrífuga que tem sido comumente usada para esta determinação é o Gyro-Tester (Alfa Laval,
Inc.).
Uma abordagem para aumentar a escala de uma operação centrífuga é assumir um tempo equivalente
constante:
(5.3.6)(Gt)1= (Gt)2
onde os subscritos referem-se às centrífugas 1 e 2, respectivamente.
EXEMPLO 5.2
Aumento de escala com base no tempo equivalenteSe restos de células bacterianasGt=54 × 106s [10], qual
deve ser o tamanho do recipiente da centrífuga e qual a velocidade da centrífuga necessária para efetuar
uma sedimentação completa em um período de tempo razoável?
SOLUÇÃO
Suponha que uma quantidade razoável de tempo seja cerca de 2 h. Da Equação (5.3.5) paraGt,
podemos estimar a velocidade da centrífugaωse soubermos o tamanho da tigela da centrífuga
e o tempo de centrifugação. É razoável ter uma centrífuga com 10 cm de diâmetro. Resolvendo
a Equação (5.3.5) paraωusando esses valores dá
- 6 m1/2
-
/
-Gtg-1 2 -
54×10 segundos×9,81
s2-
ω = --
radical 1 rotação anos 60
= -0,05m =1213 × × =11.590 rpm
Rt-- - × 2(3600)s -- s 2πradical min
- -
Esta velocidade pode ser alcançada em uma centrífuga tubular de produção (veja mais adiante: Tabela
5.5).
5.3.4 Análise Sigma
A análise mais comumente usada na indústria é a “análise sigma”, que usa a constante de
operação Σ para caracterizar uma centrífuga na qual a alimentação flui em volume volumétrico.
quociente de vazãoQ. Como o engenheiro geralmente precisa determinarQno aumento de escala, uma
relação conveniente é
(5.3.7)= {υg}[∑]
Ondevgé a velocidade de sedimentação a 1 ×g, ou seja,
(ρ−ρ)0g
(5.3.8)υg=2uma2
9µ
e Σ representa a geometria e a velocidade da centrífuga, conforme derivado na discussão

de centrífugas individuais na próxima seção; Σ também pode ser pensado como a área da
seção transversal equivalente da centrífuga, com unidades de comprimento ao quadrado.
Portanto, na Equação (5.3.7) os elogios {} indicam propriedades da partícula a ser
separada e do fluido em que a separação está ocorrendo, e os colchetes [] indicam
propriedades da centrífuga.
A velocidade de sedimentação a 1 ×gpode ser estimado diretamente usando a equação
(5.3.8) se as propriedades relevantes do sistema forem conhecidas, ou se ele puder ser medido
em laboratório. Combinando as Equações (5.3.8) e (5.2.5), obtemos
-R-
gln
--R0--
(5.3.9)υ
g=
ω2t
Esta é uma equação útil para determinarvgno laboratório. Os parâmetros na Equação (5.3.9)
podem ser medidos como segue. O tempo mínimotpara clarificar a amostra em uma centrífuga
de laboratório em velocidadeωestá determinado;ReR0são as distâncias do centro de rotação ao
topo dos sólidos empacotados e ao topo do líquido no tubo da centrífuga, respectivamente.
Uma vez que a amostra não pode ser observada diretamente quando a centrífuga está sendo
operada, uma série de experimentos seria necessária para determinar o tempo de
centrifugação em queRé constante.
5.4 CENTRÍFUGAS DE PRODUÇÃO: COMPARAÇÃO

E ANÁLISE DE ENGENHARIA
Os tipos comuns de centrífugas de produção são ilustrados na Figura 5.3, e uma comparação
das vantagens e desvantagens dos diferentes projetos de centrífugas é apresentada na Tabela
5.4 [11]. Na centrífuga tubular, os sólidos se depositam na parede da cuba e a alimentação
continua até que a cuba esteja quase cheia, momento em que a operação é interrompida e os
sólidos removidos. Este tipo de centrífuga funciona bem para partículas de coeficiente de
sedimentação relativamente baixo que devem ser recuperadas, como precipitados de proteínas.
As centrífugas de disco possuem área de sedimentação relativamente alta para o seu volume e
permitem a descarga contínua ou intermitente de sólidos; elas
Sólidos
(uma) (b) (c)
Sólidos
(d) (e) (f)

FIGURA 5.3Tipos comuns de centrífugas de produção: (uma) tigela tubular, (b) multicâmara, (c) disco,
bocal, (d) disco, descarga intermitente, (e) rolar, e (f) cesta. As setas indicam o caminho da fase líquida;
linhas tracejadas mostram onde os sólidos se acumulam.
têm sido usados com sucesso para a centrifugação de células e lisados celulares, onde todo o
processo muitas vezes deve ser contido para evitar o escape de aerossóis. As centrífugas de rolo
(ou decantador) e cesta são normalmente usadas para partículas que sedimentam com relativa
rapidez e podem ser lavadas bem como sólidos compactados, como cristais de antibióticos.
De todas as centrífugas, as do tipo tubular e de disco são provavelmente as mais prováveis de

serem encontradas em um processo de bioseparação envolvendo a recuperação de uma proteína
produzida pelas células. As capacidades das centrífugas tubulares e de disco são apresentadas na
Tabela 5.5 [12]. Observe que geralmente há uma redução no valor máximog-força (aceleração
adimensional) à medida que o diâmetro da cuba aumenta. As centrífugas tubulares e de disco são
analisadas para desenvolver o valor de Σ que pode ser usado no aumento de escala.
5.4.1 Centrífuga de Taça Tubular
A centrífuga de cuba tubular permite que o fluido entre em uma extremidade de um cilindro
giratório e saia na extremidade oposta, enquanto as partículas se movem em direção à parede
do cilindro e são capturadas tanto na parede quanto por um vertedor na saída, conforme
indicado na Figura 5.4. . O líquido entra na tigela através de uma abertura no centro da cabeça
inferior da tigela. O líquido é empurrado pela força centrífuga em direção à periferia da tigela
rotativa. O líquido clarificado transborda um açude anelar na cabeça superior da cuba, o raio
TABELA 5.4comparação de centrífugas de produçãouma
Sistema Vantagens Desvantagens

Tigela tubular (a) Alta força centrífuga (a) Capacidade limitada de sólidos
(b) Bom desaguamento (b) Espuma, a menos que seja usada uma
(C) Fácil de limpar desnatação especial ou bomba centrípeta
(d) Desmontagem simples da tigela (c) Recuperação de sólidos difícil
tigela de câmara (a) A eficiência de clarificação permanece constante (a) Sem descarga de sólidos
até que o espaço de lodo esteja cheio
(b) Grande capacidade de retenção de sólidos (b) Limpeza mais difícil do que a
tigela tubular
(c) Bom desaguamento (c) Recuperação de sólidos difícil
(d) Resfriamento da tigela possível
Centrífuga de disco (a) Descarga de sólidos possível (a) Desidratação deficiente
(b) A descarga de líquido sob pressão elimina a (b) Difícil de limpar

formação de espuma
(c) Resfriamento da tigela possível
Rolo ou decantador (a) Descarga contínua de sólidos (a) Força centrífuga baixa
centrifugar (b) Alta concentração de sólidos de alimentação (b) Turbulência criada pela rolagem
Centrífuga de cesta (a) Os sólidos podem ser bem lavados (a) Não é adequado para sólidos biológicos
macios
(b) Bom desaguamento (b) Sem descarga de sólidos
(c) Grande capacidade de retenção de sólidos (c) Recuperação de sólidos difícil
umaConsulte a referência [11].
TABELA 5.5capacidades das centrífugas tubulares e de discouma
Diâmetro da tigela Velocidade Máximo adimensional Taxa de transferência
Modelo (milímetros) (rpm) aceleração (G),ω2R/g (litros/min)
Tigela tubular 44 50.000 61.400 0,2–1,0

105 15.000 13.200 0,4–38
127 15.000 16.000 0,8–75
Disco com bocal 254 10.000 14.200 40–150
descarga 406 6.250 8.850 100–570
686 4.200 6.760 150–1500
762 3.300 4.630 150–1500

Saída
Açude de anel
R0
R1
Líquido
interface
eu
R
z
Alimentação
FIGURA 5.4Seção transversal de uma centrífuga tubular em operação.
dos quais estabelece a profundidade da poça de líquido em torno da periferia da

tigela rotativa.
Como na maioria dos cálculos de engenharia, desejamos determinar a vazãoQ. As equações
de movimento que dão a trajetória das partículas sedimentadas são, primeiramente, na direção
radial da Equação (5.2.2)
dR 2uma2(ρ−0ρω)2R
(5.4.1) =
dt 9µ
depois no sentido axial, devido apenas ao fluxo bombeado,Q
dz Q Q
(5.4.2) = =
dt UMAπ(R20−R2 1)
OndeUMAé a área da seção transversal para o fluxo de líquido na centrífuga. Essas equações de
movimento são combinadas para dar a equação da trajetória
dR
(5.4.3)
dt = dR
dz dz
dt
Substituindo as Equações (5.4.1) e (5.4.2) nesta razão, integrandodRentreR0
eR1, e integrandodzentre 0 eeue resolvendo paraQdá
- -
- 2−R2 2-
( 0
--2uma2(ρ−ρ0) -- -πL R 1)ω -
(5. 4.4)Q= - -- -
-- 9µ --- -R-
ln 0 -
-- --R1-- --
Tendo em vista as Equações (5.3.7) e (5.3.8), o primeiro fator na Equação (5.4.4) pode ser multiplicado
porgenquanto o segundo é dividido porgpara dar, novamente, a Equação (5.3.7) para análise Σ:
(5.4.5)Q= {υg}[∑]
onde, para uma centrífuga de tigela tubular,
πL(R20−R1)2ω 2
(5.4.6)∑ =
-R-0
gln
--R1--
Na prática, utiliza-se uma centrífuga de bancada para determinarvge escolhe uma

centrífuga com rendimento na faixa desejada. O fabricante da centrífuga fornece Σpara a
centrífuga selecionada, e a vazão é determinada pela Equação (5.4.5). Alternativamente, se
a vazão for limitada por algum outro fator, uma centrífuga personalizada com um Σ
específico pode ser construída. Isso também é verdade para a centrífuga contínua de pilha
de discos, que é o assunto da próxima seção.
Uma centrífuga de tigela tubular opera no modo de lote. A tigela começa a girar, seca ou
cheia de água, que será deslocada pela suspensão de sólidos. A suspensão de sólidos é
alimentada a partir do fundo da cuba, conforme descrito anteriormente, tipicamente através de
um jato que pulveriza a suspensão na parede da cuba. Se a tigela começar vazia, a suspensão se
distribui rapidamente ao longo do comprimento da tigela em uma película fina. À medida que a
suspensão é alimentada, a camada de líquido cresce da parede em direção ao centro da tigela,
até que a espessura da camada líquida seja igual à represa no topo da tigela. Neste ponto, o
líquido clarificado começa a sair da centrífuga na taxa de alimentação. O tempo de residência
do fluido no recipiente é
πL(R20−R1)2
(5.4.7)τ=
Q
À medida que os sólidos se acumulam na parede da cuba, o raio interno da cuba diminui
efetivamente, reduzindo o tempo de residência na cuba, mas também reduzindo a distância de
sedimentação e a velocidade máxima de sedimentação [ver Equação (5.2.2)]. Referindo-se à
Equação (5.4.6), pode-se observar que Σ diminui com o tempo durante a operação do tambor
tubular, poisR0abordagensR1. Portanto, para continuar a capturar partículas no recipiente
tubular, a taxa de fluxo deve ser diminuída à medida que a operação prossegue.
Praticamente, isso não é feito - a centrífuga é alimentada até que as partículas se rompem, e
então a operação é descontinuada e a cuba esvaziada de sólidos. Normalmente, os sólidos não
ocupam mais de 80% do volume do recipiente.
Existem agora centrífugas comerciais tubulares que possuem meios mecânicos para
descarregar sólidos. Esse recurso torna a operação da centrífuga tubular mais conveniente e
provavelmente reduz o tempo de inatividade. No entanto, a centrífuga ainda precisa ser parada,
os sólidos descarregados e reiniciados, o que reduz a eficiência geral.
Normalmente, as centrífugas de tigela tubular podem concentrar sólidos até 100% do
peso úmido, ou o peso que você mediria centrifugando uma amostra no laboratório e
decantando o sobrenadante. Os sólidos não precisam fluir para operar o equipamento; de
fato, é preferível um “pellet apertado”. Esta é uma vantagem de uma centrífuga de tigela
tubular sobre uma centrífuga de disco.
EXEMPLO 5.3
Recuperação completa de células bacterianas em uma centrífuga tubular tubularDeseja-se

obter a recuperação completa das células bacterianas de um caldo de fermentação com uma
centrífuga tubular em escala de planta piloto. Foi determinado que as células são
aproximadamente esféricas com um raio de 0,5µm e têm uma densidade de 1,10 g/cm3. A
velocidade da centrífuga é de 5000 rpm, o diâmetro do recipiente é de 10 cm, o comprimento
do recipiente é de 100 cm e a abertura de saída do recipiente tem um diâmetro de 4 cm. Estime
a vazão máxima do caldo de fermentação que pode ser alcançada.
SOLUÇÃO
A taxa de fluxo pode ser estimada a partir da Equação (5.4.5) determinando a velocidade
de sedimentação sob gravidade (vg) e o fator Σ para a centrífuga. Podemos estimarvg
da Equação (5.3.8) e assumindo a viscosidadeµé o mesmo que para a água (1,0 cp):
6 g m 106cm3
2(0,5×10−m)2× (1,10 -1,00) ×9,81 ×
2uma2(ρ−ρ0)g cm3 s2 m3
υg= =
9µ - g-
9- 0,01
- cms--
=5,45×10−6cm/s
Para a recuperação completa das células, podemos usar a Equação (5.4.6) para estimar Σ:
- rev 2πrad-2
(
πL R20− R12 ω2 ) π(100cm)× (5 2 − 2)2 cm×2 --5000min× rev --
Σ= =
-R-0 m -60 s-2
gln ×
100 centímetros
9,81×ln (5/2)× s2
--R1-- m --min--
=2.01×106cm2
Da Equação (5.4.5):
litro 60s litro

Q=υ∑g = (5.4 5×106−cm/s)× (2.01×106cm2)× × =0,66
103cm3 min min
5.4.2 Centrífuga de Disco
Uma centrífuga de disco é um sistema de cones invertidos concêntricos de

rotação rápida colocados juntos para minimizar o tempo para capturar partículas
densas ou líquidos em acelerações adimensionais relativamente altas. Nesta
configuração (Figura 5.5), a suspensão de alimentação entra no eixo de rotação e
é forçada para o fundo do tambor rotativo. A pressão força a suspensão para
cima. O fluido mais pesado é forçado através de orifícios na extremidade de cada
canal do disco até atingir a periferia externa do recipiente. O fluido de isqueiro
flui pelos canais do disco e sai da centrífuga. O sedimento mais pesado flui por
um bocal se estiver aberto; caso contrário, ele se acumula na parede externa da
tigela. Dependendo se o bico está aberto ou fechado, esta centrífuga está
operando em modo contínuo ou em lote, respectivamente.
Para determinar a taxa de alimentação máximaQ, é usado um diagrama simplificado de

uma única zona entre dois discos, conforme mostrado na Figura 5.6. Por conveniência,xy
coordenadas são colocadas em um plano vertical que intercepta o eixo do rotor com oxeixo
paralelo à superfície do disco. As equações de movimento de uma partícula suspensa são então
determinadas com a restrição de que cada partícula deve sedimentar da parede inferior para a
superior de um par de discos. Assim, uma relação adequada deve ser obtida entreυ0, o fluxo
Alimentação
Líquido
descarga
Disco cônico
canais
Leve
líquido
Mais pesado
sedimento
Tigela
Canais de disco
Entrada
FIGURA 5.5Diagrama de seção transversal de uma centrífuga de disco, mostrando o caminho do fluxo de
líquido e a coleta de sólidos na periferia.
θ
x
y νω
R1 eu
νω
R
ν0
R0
FIGURA 5.6Diagrama da zona entre dois discos e a definição de variáveis para uma centrífuga de
disco.
velocidade, eυω, a velocidade de sedimentação das partículas. As seguintes

suposições simplificam a análise:
1. Normalmente,υ0, a velocidade do fluxo, é muito maior do queυω.

2.v0=Perguntas/Respostas, OndeUMAdiminui à medida que as partículas se movem em direção ao centro.
3. A velocidade do fluidoυ0é uma função deye vai para zero na superfície dos
discos.
A equação do movimento noxdireção é
dx
(5.4.8) =υ0−υpecado
ω θ
dt
Isso é simplificado pela suposição de queυ0é muito maior do queυωpecadoθ. O valor

médio deυ0, denotado <υ0>, é dado pela vazãoQdividido pela área da seção transversal
UMAperpendicular ao fluxo dendiscos:
(5.4.9)υ0 =
Q Q
=
UMAn(2πRl)
onde oRé a distância radial do centro de rotação, que é variável, e eué o

espaçamento entre discos, que é fixo. O valor local deυ0pode ser encontrado
multiplicando <υ0> por uma funçãof(y) que dá a variação de velocidade entre os
discos:
(5.4.10)υ0=
Q
f(y)
n(2πRl)
Integrandoυ0através do espaço entre os discos dá o valor médio deυ0:
eu
∫υ0(y)dy Q
(5.4.11)0 =
eu n(2πRl)
Das Equações (5.4.10) e (5.4.11), é facilmente deduzido que
eu
∫f(y)dy
(5.4.12)0 =1
eu
Das Equações (5.4.8) e (5.4.10), desprezandoυωpecadoθem comparação aυ0,
temos
dx Q
(5.4.13) = f(y)
dt n(2πRl)
A equação do movimento noydireção é o movimento centrífugo da partícula:
dy 2uma2(ρ−ρ0)ω2R
(5.4.14) =υωporqueθ= porqueθ
dt 9µ
onde a velocidade centrífugaυωé obtido da Equação (5.2.2). A inclinação da trajetória das

partículas que se movem entre qualquer par de discos é determinada pela combinação
das equações de movimento noxeyinstruções:
dy
4nπuma
2(ρ−ρ)ω
0 2R2
(5.4.15)dy = dt =
euporqueθ
dx dx 9µQf(y)
dt
Desdedx= −dR/pecadoθ, a Equação (5.4.15) pode ser reorganizada para dar
(5.4.16)Q f(y)dy 4nπa2( ρ − ρ0)ω R

2 2berço θ
=− dR
eu 9µ
Para as condições de contorno de integração, focamos nas partículas que são as

mais difíceis de capturar: tal partícula entrando emy=0 eR=R0sairia em y=eueR=R
1(veja a Figura 5.6). Após a integração da Equação (5.4.16) e usando o resultado
da Equação (5.4.12), o resultado pode ser rearranjado após multiplicar e dividir

porgrender-se
--2uma2(ρ−ρ
0 )g---2nπω2(R3−R03)berço
1 θ-
(5.4.17)= - -- - = {υ}g[∑]
-- 9µ -- -- --
3g --
Portanto, em uma análise de sensibilidade vê-se que o fator Σ depende do cubo do raio da
cuba, da cotangente do ângulo agudo do disco, do número de discos na pilha e, como na
centrífuga tubular, do quadrado da velocidade do rotor. O ângulo agudo do discoθfeita
pelos discos cônicos é tipicamente entre 35˚ e 50˚ [13].
Existem três tipos de centrífugas de disco, dependendo do modo de descarga dos
sólidos. No modo descontínuo, os sólidos se acumulam na periferia da cuba até que
a cuba esteja quase cheia, o que é evidenciado pela turbidez do líquido que sai da
centrífuga. Neste ponto, a centrífuga precisa ser desligada e os sólidos removidos
manualmente. O teor de sólidos da alimentação precisa ser baixo (0 a 1 vol. %) para
que o tempo de inatividade para remoção de sólidos não se torne excessivo. No
modo semicontínuo, a cuba é aberta intermitentemente para permitir a descarga de
sólidos através de portas na periferia. O teor de sólidos da alimentação pode estar na
faixa de 0 a 10 vol. % para a descarga intermitente, e os sólidos que saem podem ser
não escoáveis. Para operação contínua, os bicos são colocados na periferia da
centrífuga, e o teor de sólidos da alimentação está na faixa de 6 a 25% vol. %. Os
sólidos que saem dos bicos são fluidos. Os bicos são distribuídos ao redor da
periferia da centrífuga e normalmente variam de 12 a 24, dependendo do tamanho
da centrífuga [13].
O tempo entre descargas no modo de operação semi-contínuo de uma centrífuga de disco com
taxa de alimentação volumétricaQpode ser estimado a partir de [13]:
Vsϕe
(5.4.18)t d=
Qϕf
OndeVsé o volume de retenção de sólidos do recipiente (que normalmente é de 40 a 50% do

volume total do recipiente) eφeeφfsão as frações volumétricas de sólidos no sedimento que sai e
na alimentação, respectivamente.
5.5 ULTRACENTRIFUGAÇÃO
As ultracentrífugas operam em uma faixa de acelerações inerciais de 50.000 a 100.000 ×g.

Essas acelerações são tão grandes que é possível sedimentar partículas muito pequenas e
até macromoléculas em solução por uma ultracentrífuga. DentroanalíticoNa
ultracentrifugação [14], um volume de amostra inferior a 1,0 ml é centrifugado em uma
célula óptica enquanto a concentração é monitorada opticamente em função da distância
do centro de rotação. Dentropreparativocentrifugação, amostras de até 50 ml são
centrifugadas em operação de batelada e coletadas, geralmente em função da distância
final do centro de rotação. Essa coleta geralmente é realizada perfurando cuidadosamente
o fundo do tubo da centrífuga e coletando o fluxo de saída em uma série de tubos.
5.5.1 Determinação do Peso Molecular
Um dos usos mais importantes da ultracentrifugação tem sido a determinação de pesos

moleculares pela medição combinada dos coeficientes de sedimentação e difusão – o “peso
molecular de sedimentação-difusão”. As proteínas são os compostos macromoleculares mais
comuns que são homogêneos em relação ao peso molecular, e é para esses compostos que o
método de sedimentação-difusão tem sido usado principalmente. Os pesos moleculares de
proteínas, bem como de vírus, obtidos por este método mostraram-se em excelente
concordância com aqueles obtidos por outros métodos [15]. Hoje, os pesos moleculares de
proteínas e ácidos nucleicos são comumente determinados por espectroscopia de massa,
eletroforese ou cromatografia (ver Capítulo 2).
O desenvolvimento da dependência do peso molecular nos coeficientes de sedimentação e
difusão começa com a equação de movimento para uma molécula sedimentando em estado
estacionário [Equação (5.2.1)], que pode ser escrita da seguinte forma:
(5.5.1)V(ρ−ρ0)ω2R−6πµaυ=0
OndeVé o volume de uma única molécula. Se deixarmosV=mV=m ρ, OndeVé o volume

específico da molécula emé a massa de uma única molécula, então a Equação (5.5.1) pode
ser rearranjada para dar
6π µaυ
(5.5.2)m=
(1 -Vρ)0ω2 R
A viscosidade pode ser relacionada ao coeficiente de difusão pela equação de Stokes-Einstein:
µ 1
(5.5.3) =
kT 6πa
Ondeké a constante de Boltzmann. Substituindo a equação de Stokes-Einstein na

Equação (5.5.2) e fazendo uso da definição do coeficiente de sedimentaçãos [Equação
(5.3.2)] e da constante de Boltzmann (=R/N,OndeRé a constante universal do gás eNé
o número de Avogadro) leva a
sRT
(5.5.4)M=
D(1 -Vρ0)
OndeMé o peso molecular e aquiRé a constante do gás. O volume específico parcialVpode
ser facilmente determinado como a inclinação de um gráfico do volume específico da
solução versus a fração em peso da substância (ver, por exemplo, a determinação deMde
quimotripsinogênio por Schwert [16]). Para determinações precisas deMusando este
método, é necessário queseDser extrapolado para concentração zero. O coeficiente de
difusão da macromolécula pode ser medido a partir de perfis de concentração em
equilíbrio durante a sedimentação com um gradiente de densidade, ou mais comumente,
em um procedimento separado, como pelo método de difusão livre [15].
5.6 FLOCULAÇÃO E SEDIMENTAÇÃO
Após as células terem sido lisadas ou as biopartículas terem sido dispersas, muitas vezes é útil
acelerar o passo subsequente de sedimentação ou filtração aumentando reversivelmente o
tamanho das partículas a serem separadas. Para tanto, utiliza-se a floculação, que ocorre pela
adição de um produto químico adequado denominado “floculante” ou pela seleção de células
naturalmente floculantes para fermentação, como é o caso da levedura lager. Os floculantes
podem atuar formando “pontes” moleculares interpartículas entre as partículas, caso em que os
floculantes são geralmente polímeros ou oligômeros; eles também podem atuar reduzindo as
forças repulsivas entre as células, geralmente reduzindo a intensidade do campo eletrostático
(para detalhes, consulte o Capítulo 3, Seção 3.4).
A centrifugação é frequentemente usada após a adição de um floculante a um caldo ou lisado
celular não depurado. Embora os agregados resultantes sejam frequentemente tratados como esferas
de Stokes, na verdade são estruturas abertas nas quais pode ocorrer convecção interna. Várias teorias
de sedimentação de flocos têm sido propostas, tendo em vista a importância deste movimento na
indústria de processamento de água (tratamento de esgoto) [17].
O Capítulo 3 introduz o assunto da floculação, mas não a coleta dos flocos que
são produzidos. Na engenharia de processos, a sedimentação de flocos é geralmente
tratada empiricamente. No entanto, vários tratamentos formais desse problema
foram realizados. Na Equação padrão (5.2.2) para sedimentação de esferas, ajustes
empíricos para velocidade de sedimentação de flocos podem ser feitos com base na
redução da densidade pela fração de volume vazioε do floco e a redução da força de
arrasto pelo fator de redução de arrasto Ω, que também é função da fração de
volume vazioεe o raio do flocouma. A velocidade de sedimentação Stokes resultante
de flocos esféricos compostos de partículas de densidadeρé então
2uma2(1 -ε)(ρ−ρ0)ω2R
(5.6.1)υ=
9µΩ(ε,uma)
Para estimar a redução da força de arrasto devido ao fluxo de líquido através do volume vazio
do floco, um diâmetro adimensional normalizadoβ≡uma/k1/2é definido,
f em que kfé a
permeabilidade do floco para o fluido no qual está se depositando. O fator de redução da força
de arrasto tem sido relacionado à fração de volume vazio e ao raio do floco por uma variedade
de funções intimamente relacionadas, a mais amplamente utilizada das quais parece ser [18]:
- tanhβ-
2β2 -1 −
- β--
(5.6.2)(ε,uma) =
- tanhβ-
2β2+ 3-1 −
- β--
A determinação deβrequer conhecer a permeabilidade do flocokf, que pode ser

calculado usando a seguinte forma da equação de Carman-Kozeny:
ε2
(5.6.3)kf=
KS2(1 -ε)2
onde a constante de KozenyK=4.8 [19], eSé a área superficial específica de Carman, definida
como a área de materiais não porosos expostos ao líquido por unidade de volume, determinada
a partir da geometria das partículas individuais que formam o agregado.
Além do comportamento coletivo das partículas nos flocos, as partículas não se comportam de
forma totalmente independente quando suspensas em alta concentração, como na borda externa de
uma centrífuga ou no fundo de um tanque de decantação.
5.7 SEDIMENTAÇÃO EM BAIXAS ACELERAÇÕES
Embaixogforças, a velocidade de sedimentação diminui e às vezes pode ser semelhante à

velocidade de transporte por difusão, que não é afetada por forças inerciais. Aqui, examinamos
maneiras de comparar as taxas de sedimentação e difusão. É avaliado o caso de sedimentação
isotérmica, que pode levar a distribuições exponenciais de concentração em função da altura
para partículas pequenas. Sedimentação inclinada e fracionamento de fluxo de campo, duas
operações que separam partículas suspensas com base no movimento inercial a 1 ×g, também
são descritos.
5.7.1 Difusão, Movimento Browniano
Einstein descreveu a difusão como consequência de um “passeio aleatório” das partículas

devido à sua energia térmicakT(k=constante de Boltzmann). O resultado surpreendentemente
simples foi
(5.7.1)x2= 2Dt
onde <x2> é a distância quadrada média percorrida por uma partícula com coeficiente de
difusãoDem tempot. Usando a equação de Stokes-Einstein [Equação (5.5.3)] para partículas
esféricas de raioumasofrendo movimento browniano em um fluido de viscosidadeµ, podemos
relacionar o coeficiente de difusão com a energia térmicakTdo seguinte modo:
kT
(5.7.2) =
6π µuma
Em um gradiente de concentração, o fluxo unidirecional líquido de partículas é proporcional a D

e o gradiente,dc/dx, da concentração de partículasc. A difusão não é afetada pela gravidade. As
velocidades de difusão e sedimentação, no entanto, às vezes são semelhantes, e sua soma
resulta em sedimentação gradual.
5.7.2 Assentamento Isotérmico
Se a temperaturaTnão muda ao longo da alturahde um conjunto de partículas, então a energia

cinética média, que é proporcional akT, de todas as partículas é a mesma em todas as alturas. A
energia potencial de uma partícula de massamé geralmente expresso como mgh; mas se as
partículas estão sujeitas a forças de empuxo no fluido, a energia potencial torna-seV(ρ−ρ0)gh
para o volume de partículasV. A partir da regra de distribuição de Boltzmann, a concentração de
partículas na alturahem equilíbrio é, portanto,
- −V(ρ−ρ)gh
0 -
(5.7.3)c(h) =c(0)exp - -
- kT -
Isso significa que a concentração é uma função exponencial da altura sob condições isotérmicas
e que partículas grandes e densas com energia potencial muito maior quekT (de células de
mamíferos a bolinhas de gude) serão concentrados emh=0 e que pequenas partículas
(principalmente moléculas) terãoCH) ≈ constante. No entanto, partículas orgânicas
submicrométricas e certas macromoléculas têm valores deVeρque levam a distribuições
exponenciais mensuráveis deCH).
5.7.3 Movimento Convectivo e Análise de Péclet
Uma maneira de determinar seCH) será distribuído como na Equação (5.7.3) é estimar o
valor do número de Péclet, Pe, comumente usado na análise adimensional do movimento
do fluido em relação ao transporte difusivo. O número de Péclet é uma razão entre a
velocidade de sedimentação e a taxa característica de transporte difusivo ao longo da
distânciaeu:
υ
e=
(5.7.4) Deu
Se Pe<0,1, a difusão é dominante; eCH) é aproximadamente constante ou distribuído.

Neste caso, a Equação (5.7.3) deve ser usada. Se Pe>10, a sedimentação domina, e a
concentração acabará por ser alta emh=0 e 0 em outros lugares.
5.7.4 Sedimentação Inclinada
A remoção rápida de sólidos de alta densidade pode ser alcançada em 1 ×gusando sedimentação
inclinada. Um decantador inclinado é mostrado na Figura 5.7; as dimensões e as taxas de fluxo são
rotuladas. Em uma aplicação típica, a alimentação contendo partículas suspensas é bombeada para o
decantador próximo ou em sua extremidade inferior na vazãoQf,estouro livre de partículas sai da
extremidade superior na taxa de fluxoQo,e a suspensão rica em partículas sai no subfluxo a uma taxa
Qvocê. Este é um excelente método para colher sobrenadantes continuamente ou em lotes de caldo
carregado de partículas (células). As relações de equilíbrio material são
(5.7.5)Qf=Qvocê+Qo
(5.7.6)cfQf=cvocêQvocê+coQo
onde oc's designa as concentrações de partículas. Muitas vezes é desejável queco=0. Para
conseguir isso,Qodeve ser igual à taxa de compensação volumétricaS(υ). Esta taxa de
compensação volumétricaSé igual à velocidade de assentamento verticalυgdas células
multiplicado pela área projetada horizontal das superfícies voltadas para cima do canal sobre o
qual as células podem se acomodar, que é dada pela seguinte equação [20]:
(5.7.7)S=υgW(eupecadoθ+bporqueθ)
Ondeθé o ângulo de inclinação das placas em relação à vertical, eb, w, eeu são a
altura, largura e comprimento do colono retangular, respectivamente (Figura 5.7).
Os decantadores inclinados são projetados de modo que o caminho para a conclusão da
sedimentação de uma partícula seja extremamente curto, apenas alguns milímetros, antes que
as partículas sedimentadas comecem a ser convectadas em direção ao subfluxo. Se a fração
particulada for desejada, ela pode ser concentrada em lote por reciclagem contínua do subfluxo
de volta ao tanque enquanto o transbordamento sangra o sobrenadante. Pelo uso de ajustes
apropriados, governados e previstos pelas equações anteriores, também é possível remover
partículas pequenas no overflow enquanto retêm as maiores no underflow, efetuando assim
uma classificação binária de partículas por tamanho [20].
Uma aplicação importante dos decantadores inclinados é na remoção de células improdutivas ou
parasitas de biorreatores ou sistemas de cultura de células; este método foi usado para remover células de
hibridoma não viáveis de uma cultura de células, o que resultou em altas concentrações de células viáveis e
alta produtividade de anticorpos monoclonais durante um período de cultura de 2 semanas [20].
Bombear
b
Transbordar,Qo
Amostragem
θ eu
Amostragem Colono inclinado
Alimentação
Qf Subfluxo,Qvocê
FIGURA 5.7Diagrama de um sistema de decantadores inclinados indicando as variáveis utilizadas no balanço de

massa [Equação (5.7.5)] e taxa de compensação volumétrica [Equação (5.7.7)].
Uma vez que os colonizadores inclinados podem ser ampliados diretamente aumentando a área para
assentamento, eles potencialmente podem ser usados em escala maior que a de laboratório. Esses colonos operam
em capacidades muito mais altas do que os colonizadores verticais porque as células precisam se estabelecer apenas
a uma distância de ordemb(ver Figura 5.7) em um decantador inclinado, comparado com uma distância de ordemeu
em um colonizador vertical.
5.7.5 Fracionamento de Fluxo de Campo
O fracionamento de fluxo de campo (FFF) é projetado para separar partículas de tamanhos diferentes
com base na hidrodinâmica de um canal horizontal muito fino e plano através do qual uma suspensão
de amostra é bombeada e submetida ao gradiente de velocidade de fluxo laminar no canal, como
mostrado na Figura 5.8. No caso da sedimentação, a força motriz em direção à parede inferior do
canal é a gravidade ou a sedimentação centrífuga. Neste último caso, o canal é “enrolado” em torno
do perímetro de uma centrífuga rotativa. Gradientes de velocidade acentuados ocorrem nas paredes
superior e inferior do canal e resultam em uma distribuição de partículas maiores em direção ao
centro e partículas menores em direção à parede inferior. A separação de partículas por este
fenômeno é chamada de FFF “estérica”. À medida que o transporte de partículas prossegue ao longo
da parede inferior, as partículas se agrupam de acordo com sua velocidade; assim, a parede inferior é
chamada de “parede de acumulação”. Para operação contínua, um divisor horizontal na saída permite
a coleta de partículas grandes em uma saída superior e partículas pequenas em uma saída inferior. A
equação governante para o fracionamento de fluxo de campo é
(5.7.8)R=
6γuma
b
OndeRé a razão de retenção, definida como a razão entre a velocidade da partícula e a
velocidade média do fluido,umaé o raio da partícula,bé a altura do canal eγé o “fator estérico”
que determina a velocidade líquida da partícula e é aproximadamente igual a (1 +δ/uma), Onde
δé a distância entre a partícula e a parede de acumulação, conforme observado em
Injeção de amostra
(ingresso)
Campo
Coleta de frações
(fluxo de saída) Campo
Vetores de fluxo
cana Perfil de fluxo parabólico

Pare l FFF
de d 3
e ac Fluxo 2
umu 1
laçã
o
δ1 δ2 δ3
(uma) (b)
FIGURA 5.8(uma) Vista explodida de um canal de fracionamento de fluxo de campo (FFF). O “campo” é a força motriz
para a separação, que deve atuar diferencialmente em partículas de diferentes tipos. O campo pode ser gravitacional,
elétrico, térmico, adsortivo ou estérico, para citar alguns. (b) O princípio de FFF estérico. Partículas maiores se
projetam para a região de maior velocidade do fluxo laminar, portanto, são transportadas mais longe em um
determinado período de tempo do que suas contrapartes menores.
Figura 5.8. Esta técnica mostrou separar duas populações de látex do tamanho de células
com diâmetros de esfera de 10 e 15µm, e também para separar glóbulos brancos e
vermelhos [21].
5.8 ELUTRIAÇÃO CENTRÍFUGA
A elutriação centrífuga é semelhante à sedimentação inclinada e ao fracionamento de fluxo de campo, pois a sedimentação ocorre na presença de fluxo de fluido. Na
elutriação centrífuga, também chamada de centrifugação de contracorrente, o comprimento efetivo de um caminho de sedimentação é grandemente estendido pelo
bombeamento contínuo de um fluido de contracorrente na direção oposta à da sedimentação. Para conseguir isso, “rotores de elutriação” foram projetados. Esses rotores
executam funções semelhantes às das centrífugas tubulares e de pilha de discos. A suspensão da amostra é mantida na câmara do rotor e as partículas permanecem lá
enquanto as duas forças opostas estiverem em equilíbrio. Por aumentos incrementais na taxa de fluxo do fluido ou por diminuições na força centrífuga, populações
distintas de partículas (incluindo células) com tamanhos relativamente homogêneos podem ser eluídas do rotor sequencialmente. O objetivo da elutriação é, portanto,
coletar partículas de um volume especificado, modificando a velocidade do fluido eluente ou a velocidade angular do rotor [22]. Ambas as variáveis devem ser
controladas com extremo cuidado para que a precisão da separação seja alcançada. O volume e o raio da maior partícula que pode escapar contra o contrafluxo e ser
coletada no efluente podem ser determinados a partir da equação de movimento de uma partícula esférica em um campo inercial [Equação (5.2.1)], usando a velocidade
O objetivo da elutriação é, portanto, coletar partículas de um volume especificado, modificando a velocidade do fluido eluente ou a velocidade angular do rotor [22].
Ambas as variáveis devem ser controladas com extremo cuidado para que a precisão da separação seja alcançada. O volume e o raio da maior partícula que pode
escapar contra o contrafluxo e ser coletada no efluente podem ser determinados a partir da equação de movimento de uma partícula esférica em um campo inercial
[Equação (5.2.1)], usando a velocidade O objetivo da elutriação é, portanto, coletar partículas de um volume especificado, modificando a velocidade do fluido eluente ou a
velocidade angular do rotor [22]. Ambas as variáveis devem ser controladas com extremo cuidado para que a precisão da separação seja alcançada. O volume e o raio da
maior partícula que pode escapar contra o contrafluxo e ser coletada no efluente podem ser determinados a partir da equação de movimento de uma partícula esférica
em um campo inercial [Equação (5.2.1)], usando a velocidadev0para a eluição
fluido [22]:
-3/2
- υ0µ
9π2 - -
-R(ρ−ρ 0) -
(5.8.1)V=
ω3
-1/2
- υ0µ
3- -
-2R(ρ−ρ 0) -
(5.8.2)uma=
ω
OndeVeumasão o volume e o raio da partícula, respectivamente. A capacidade de
elutriação centrífuga no modo de lote é de cerca de 108partículas de cerca de 10µdiâmetro
m.
5.9 RESUMO
A sedimentação é o movimento de partículas ou macromoléculas em um campo inercial.

As acelerações inerciais variam de 1 ×gem tanques de floculação para 100.000 ×gem
ultracentrífugas.
• A sedimentação, como a filtração, é usada nos estágios iniciais do bioprocessamento a jusante

principalmente para separações líquido-sólido. As partículas podem ser separadas em grande
escala em centrífugas contínuas, e as macromoléculas podem ser separadas, seja para análise
ou coleta, em pequena escala por ultracentrifugação em velocidades muito altas.
• A velocidade de sedimentaçãoυde uma partícula depende do quadrado de seu raio
uma e linearmente na diferença entre sua densidadeρe a do solvente de suspensão
ρ0:
2uma2(ρ−ρ0)ω2R
υ=
9µ
Ondeωé a velocidade angular (rad/s),Ré a distância da partícula ao centro

de rotação, eµé a viscosidade do fluido. O termoω2Ré a aceleração
centrífuga.
• Correções relacionadas aos cálculos de sedimentação são necessárias quando as concentrações de
partículas são altas o suficiente para dificultar a sedimentação. Funções de concentração estão
disponíveis para esta correção.
• O coeficiente de sedimentaçãos, uma propriedade da partícula e do meio, é definida
como
υ
s≡
ω2R
o que leva a
2uma2(ρ−ρ 0)
s=
9µ
• O tempo equivalente é o produtoGt, OndeGé definido como
ω2R
G≡
g
Uma abordagem para aumentar a escala da centrifugação é assumir um tempo equivalente

constante.
• Análises de engenharia e cálculos de dimensionamento em centrífugas de grande escala são
frequentemente realizados por meio de "análise sigma", que usa a constante de operação Σ
para caracterizar uma centrífuga na qual a alimentação flui na taxa de vazão volumétrica Q.
Como o engenheiro geralmente precisa estimarQ, uma relação conveniente é
Q= {υg}[∑]
Ondeυgé a velocidade de sedimentação a 1 ×g,
2uma2(ρ−ρg
0)
υg=
9µ
e Σ representa a geometria e a velocidade da centrífuga.

• A centrífuga apropriada para uma determinada separação líquido-sólido é
escolhida com base nos objetivos da operação, no teor de sólidos e na vazão da
corrente de alimentação e na aceleração máxima na qual o dispositivo pode
operar.
• O peso molecular de uma macromolécula como uma proteína pode ser determinado a
partir de dados de ultracentrífuga, que medem os coeficientes de sedimentação e
difusão.
• Após a floculação, formam-se partículas porosas, pouco estruturadas, que sedimentam mais
rapidamente do que as suas contrapartes sólidas com o mesmo tamanho. Os fatores de
correção permitem o cálculo da velocidade das partículas floculadas.
• A difusão ocorre em operações de sedimentação, e sua significância, especificamente em
baixas acelerações, pode ser verificada pelo cálculo do número de Péclet.
• Duas operações de sedimentação úteis a 1 ×gsão sedimentação inclinada e
fracionamento de fluxo de campo.
• Na elutriação centrífuga, um fluido de contracorrente é bombeado continuamente
na direção oposta à da sedimentação. Isso estende muito o caminho de
sedimentação e permite que populações distintas de partículas (incluindo células)
com tamanho relativamente homogêneo sejam eluídas do rotor da centrífuga
sequencialmente.
NOMENCLATURA
umaraio da partícula (μm) área da

UMAseção transversal (cm2) Altura
b (cm)
c concentração (M, ou g litro−1) coeficiente
D de difusão (cm2s−1) aceleração
g gravitacional (9,8066 ms−2)
G múltiplo da aceleração gravitacional (=ω2R/g) (adimensional)
h altura (cm)
Fx força emxdireção (N)
k constante de Boltzmann (1,3807 × 10−23JK−1)
kf permeabilidade do floco (cm2)
K Constante de Kozeny (= 4,8) (adimensional)
m massa de partícula ou molécula (g)
M peso molecular (Daltons)
n expoente na Equação (5.2.7) (adimensional) número de

n discos em uma centrífuga de disco (adimensional) número
N de Avogadro (6,0221 × 1023moleculas mol−1) espaçamento
eu entre discos em uma centrífuga (cm)
eu distância (cm)
eu comprimento de um colono inclinado (cm)
Número de Péclet (=vL /D) (adimensional) vazão
Educaçao Fisica
Q (cm3s−1)
R distância do centro de rotação (cm)
R razão de retenção no fracionamento de fluxo de campo (= razão da velocidade das partículas para a
velocidade média do fluido) (sem dimensão)
R constante da lei dos gases (8,3145 J mol−1K−1) Número de Reynolds
Ré (2avρ/μ) coeficiente de sedimentação (adimensional) [Equação
s (5.3.2)] (s) taxa de desobstrução volumétrica em um decantador
S inclinado (cm3s−1) hora(s)
t
td tempo entre descargas de uma centrífuga de disco ejetor de sólidos (s)
T temperatura (K)
υ velocidade de sedimentação (cm s−1)
υc velocidade de sedimentação em uma suspensão concentrada (cm s−1)
υg velocidade de sedimentação a 1 ×g(cm s−1) velocidade de sedimentação
υω emωvelocidade angular (cm s−1) velocidade do fluido (cm s−1)

υ0
V volume de uma molécula ou partícula (cm3)
V0 volume do cilindro em um misturador de gradiente [Equação (5.3.1)] (cm3)
Vs volume de retenção de sólidos na tigela de uma centrífuga de disco (cm3)
volume específico de uma molécula (cm3g−1) largura de um colono inclinado
W (cm)
Letras gregas
β diâmetro normalizado de um floco(=uma/k1/2 f ) (sem dimensão)
γ fator estérico no fracionamento de fluxo de campo(≅1 + δ/a)(adimensional) distância entre a
δ partícula e a parede de acumulação no fracionamento de fluxo de campo (cm) fração vazia de
ε partículas em um floco (adimensional)
θ ângulo agudo do disco de centrifugação (Figura 5.6) (graus)
θ ângulo de inclinação de um decantador inclinado da viscosidade vertical
μ (graus) do fluido (g cm−1s−1= poise) densidade da partícula ou molécula (g
ρ cm−3) densidade do meio (g cm−3) constante de operação de uma
ρ0 centrífuga (cm2) tempo de residência do fluido na cuba(s) da centrífuga
Σ (s) fração volumétrica de partículas (adimensional)
τ
φ
φe fração de volume de sólidos no sedimento de saída (sem dimensão) fração

φf de volume de sólidos na alimentação (sem dimensão)
ω velocidade angular (rad s−1)
Ω fator de redução de arrasto [Equação (5.6.2)] (adimensional)
PROBLEMAS
5.1Sedimentação versus FiltraçãoQuatro materiais particulados, A, B, C e D, são

suspensos em água (densidade = 1,00 g/cm3) e têm as propriedades dadas na
Tabela P5.1. Escolha entre sedimentação e filtração para a separação dos seguintes
pares de partículas entre si em suspensões mistas em água. Explique sua resposta
em cada caso.
(a) A de B
(b) B de C
(c) C de D
TABELA P5.1
Nome da partícula Densidade (g/cm3) Raio (µm)

UMA 1,05 10
B 1,05 12
C 1,01 50
D 1,04 25
5.2Estratégias para Separação de ProdutosCélulas de levedura (uma=3µm) em um fermentador

secretam um produto de baixo peso molecular em uma concentração que produz cristais em
forma de bastonete uniformes 2 × 6µm em cerca de 20 vezes a concentração do número
(partículas/ml) como as células. Usando declarações concisas, desenhe duas estratégias
possíveis que aproveitem a natureza particulada do produto para separar o produto do caldo e
das células. Que informações adicionais sobre os cristais do produto seriam úteis?
5.3Sedimentação isopícnicaVocê deseja capturar 3µm partículas em um gradiente de densidade linear com uma
densidade de 1,12 g/cm3na parte inferior e 1,00 na parte superior. Você coloca uma suspensão de partículas
finas no topo da coluna de 6 cm de fluido com uma viscosidade de 1,0 cp e permite que as partículas se
assentem a 1g.
(a) Quanto tempo você deve esperar pelas partículas que deseja (densidade = 1,07 g/cm3)
sedimentar até 0,1 cm de seu nível isopicnico? É possível determinar o tempo necessário
para que as partículas sedimentemexatamenteseu nível isopicnico?
(b) Se, em vez de 1 g, você usar uma centrífuga funcionando a 800 rpm e o topo do fluido
estiver a 5 cm do centro de rotação, por quanto tempo você deve centrifugar para que as
partículas se movam até 0,1 cm de seu nível isopícnico? ?
5.4Tempo necessário para sedimentação por gravidadeUm certo reagente é adicionado a uma
suspensão de células 4µm de diâmetro. Estas células têm uma densidade de 1,08 g/cm3, e estão
suspensos em um líquido com densidade de 1,00 g/cm3e viscosidade de 1,0 cp. Este reagente faz com
que cerca de metade das células formem agregados bastante sólidos, todos com 90µm
de diâmetro e têm densidade intermediária entre a do líquido e das células. Quanto tempo é
necessário para que todos os agregados sedimentem até 1 cm do fundo de um recipiente cheio
de suspensão com 0,5 m de altura? Aproximadamente que fração das células individuais teria
sedimentado a essa profundidade na mesma quantidade de tempo? Quanto tempo é
necessário para que todas as células individuais sedimentem até 1 cm do fundo do vaso?
5,5Tempo necessário para sedimentação em uma centrífugaUsando os resultados do Problema

5.4, determine o diâmetro e a velocidade de uma centrífuga necessários para reduzir o tempo
total de sedimentação dos agregados por um fator de dez, supondo que você usará recipientes
com 20 cm de altura na centrífuga. Suponha também que o centro de rotação esteja a 3 cm do
topo dos recipientes. Por quanto tempo a mesma centrífuga deve ser operada para também
sedimentar todas as células individuais? Para simplificar, suponha uma centrífuga do tipo balde
oscilante, na qual o eixo do recipiente cilíndrico é horizontal, portanto paralelo à direção de
sedimentação.
5.6Determinação de Sigma para uma nova centrífuga de escala pilotoVocê testa uma nova
centrífuga em escala piloto fazendo um experimento inovador usando fermento como
partículas de teste. Verificou-se anteriormente que a levedura sedimentava a 100µm/s em uma
centrífuga de laboratório operada a uma aceleração de 500 ×g. A vazão de ruptura é de 10
litros/min. Qual é o sigma (Σ) desta nova centrífuga?
5.7Testes de escala de bancada para uma centrífuga de tigela tubularVocê pode testar em bancada
uma separação de tigela tubular caracterizando primeiro o produto em uma centrifugação em tubo
de ensaio. Sem realmente conhecer o tamanho e a densidade das partículas na suspensão, deduza
uma expressão para a velocidade angular necessária para capturar os sólidos a uma determinada
vazão volumétrica.Qem termos da geometria da tigela tubular e das quantidades que você mediria na
centrifugação do tubo de ensaio.
5,8Recuperação deE. coliem uma centrífuga de tigela tubularVocê está usando uma centrífuga tubular
para recuperarE. colicélulas contendo um importante bioproduto de um caldo de fermentação. Em
uma corrida preliminar, você descobre que 50% das células são recuperadas a uma taxa de fluxo de 5
litros/min e velocidade de rotação de 6000 rpm.
(a) Para aumentar o rendimento para 95% usando a mesma centrífuga, qual deve ser a vazão?
(b) Qual é a variação da velocidade de sedimentação se você dobrar a velocidade de
rotação?
5.9Aumento de escala de uma centrífuga de disco com base em dados de laboratórioDetermine a
vazão máxima para a clarificação de uma suspensão deEscherichia colicélulas por uma centrífuga de
disco em escala de planta com base em dados de laboratório. A centrífuga da planta tem um diâmetro
de cuba de 25,4 cm e capacidades mostradas na Tabela 5.5. Para esta centrífuga, você também sabe
queθ= 42°,R1= 8cm,R0= 20 cm e número de discos = 100 (ver Figura 5.6).
Em uma centrífuga de laboratório, você determinou que levou no mínimo 17 minutos
para clarificar o lisado celular a 12.000 rpm. O topo da cultura a ser centrifugada estava a
32 mm do centro de rotação e o topo dos sólidos embalados estava a 79 mm do centro
de rotação após 17 min.
5.10Determinação do Peso Molecular por UltracentrifugaçãoUm novo biofarmacêutico “X”
foi descoberto. Apenas extratos brutos estão disponíveis, e o material é conhecido por
ser uma macromolécula. Você recebe uma ultracentrífuga preparativa e pede para
estimar o peso molecular da macromolécula. Você então faz dois experimentos.
No primeiro, você configura um gradiente linear de densidade de sacarose e coloca uma

amostra bruta de X em cima dele, usando um tubo de centrífuga de 5 cm de comprimento
(completamente preenchido) e centrifuga até o equilíbrio por 3 dias (72 h) a 25.000 rpm . No
segundo experimento, você coloca a amostra em seu tampão diluído (viscosidade igual à da
água) diretamente nodoisdos mesmos tubos de ultracentrífuga de plástico e execute a
centrífuga por 24 h a 25.000 rpm, momento em que você para e remove frações de um dos
dois tubos. Após mais 72 h a 25.000 rpm, você para a centrífuga e remove as frações do tubo
restante. Nos três casos, você coleta 20 frações, e cada fração corresponde a uma camada de
2,5 mm, então a fração 1 veio do fundo do tubo e a fração 20 veio do topo. Suponha que o topo
de cada tubo de centrífuga esteja a 3 cm do centro de rotação.
O biólogo da empresa então pega os três conjuntos de 20 frações e os testa em culturas de células. O
biólogo retorna dados para você em termos de unidades de atividade biológica em cada fração, em
uma escala que é conhecida por ser linear com a massa do produto. Você então plota os dados dos
três tubos de centrífuga (Figura P5.10).
40 1.2 40
Unidades de atividade biológica por fração
Unidades de atividade biológica por fração

24 + 72 horas
Densidade (g/cm3)
24 horas
1.1
0 1,0 0
0 4 8 12 16 20 0 4 8 12 16 20
Número da fração Número da fração
(uma) (b)
FIGURA P5.10Resultados da ultracentrifugação. (uma) Primeiro experimento: extrato bruto colocado no topo de um
tubo com gradiente linear de densidade de sacarose e centrifugado até o equilíbrio por 72 h. (b) Segundo
experimento: extrato bruto em seu tampão diluído em cada um dos dois tubos plásticos iguais com um tubo
centrifugado por 24 h e o outro tubo por 72 h. Velocidade da centrífuga 25.000 rpm. As frações, cada uma
correspondendo a uma camada de 2,5 mm no tubo, são numeradas de baixo para cima de cada tubo.
(a) A partir das equações apropriadas para ultracentrifugação, use os dados para estimar
o peso molecular do produto X. (Dica:Use larguras de perfis para estimar a
difusividade.)
(b) Faça um esboço do método para coletar frações.
(c) Depois que você completou seus cálculos de balanço de material nos tubos, que tinham 8
mm de diâmetro, o biólogo lhe disse que cada tubo continha originalmente 20 unidades
de atividade biológica. Especule sobre por que o balanço de materiais não fechou.
5.11Decantação isotérmicaCom base nos dados da Tabela 5.1, estime o perfil de

concentração reduzida,c(h)/c(0), para o assentamento isotérmico em 1gde uma proteína
com um raio de sedimentação de 0,005µm à temperatura ambiente até uma altura de
100 cm. Recalcular o perfil de uma proteína com um raio de sedimentação de 0,002µm.
Calcule também o peso molecular de cada proteína. Explique o significado dos perfis de
concentração.
5.12Custo de centrifugaçãoEm um bioprocesso para a produção de foreveron (uma hipotética proteína

doadora de juventude feita pela Kindergen, Inc.), uma centrífuga é usada para remover as células do
caldo de cultura. A centrífuga opera continuamente a 20 kW e processa 20 litros de caldo de cultura de
alimentação por hora, descarregando uma fase líquida sobrenadante contendo 92% em volume do
líquido de alimentação e sem células. A saída da pasta de células tem uma densidade de 1,08 g/cm3. A
ração é processada em lotes em 40 litros de ração por lote. Um técnico ocupado (US$ 20/h) leva 15
minutos para iniciar o fluxo de alimentação e 15 minutos para coletar cada lote e entregar o
sobrenadante e o sedimento para as próximas etapas. A Kindergen pagou US$ 50.000 pela centrífuga,
que tem vida útil de 10 anos, compra um contrato de serviço por US$ 5.000/ano e substitui o rotor
todo ano por US$ 10.000. A centrífuga é usada apenas para processamento ininterrupto em dois lotes
por dia, 300 dias por ano.
Calcule o custo do processamento centrífugo por quilograma de pasta celular produzida.

O que mais contribui para o custo da centrifugação?
5.13Estimativa da taxa de fluxo para centrifugação de células de leveduraUma vazão máxima de
50 litros/min foi alcançada para a centrifugação de células bacterianas em uma centrífuga
tubular. As células eram 2,0μm de diâmetro e tinha uma densidade de 1,08 g/cm3. O meio tinha
uma densidade de 1,01 g/cm3e viscosidade de 1,2 cp.
Deseja-se centrifugar as células de levedura nesta mesma centrífuga. As células de levedura têm um
diâmetro de 5,0μm e uma densidade de 1,10 g/cm3. O meio tem uma densidade de 1,02 g/cm3e uma
viscosidade de 1,3 cp. Estime a taxa de fluxo máxima que pode ser usada para centrifugar as células
de levedura.
5.14Determinação de Sigma a partir de dados de laboratórioEm uma centrífuga de laboratório,

descobriu-se que foram necessários 300 s para centrifugar as células a 2.000 rpm até uma altura
constante de eritrócitos. O topo da suspensão de células e o topo dos eritrócitos estavam a 5 cm e 9
cm, respectivamente, do centro de rotação da centrífuga. Para processar essas células em uma
centrífuga de cuba tubular a uma vazão de 20 litros/min, qual deve ser o valor de Σ?
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/ / /6/ / / EXTRAÇÃO
A extração é umaprocesso em que duas fases entram em contato

com o objetivo de transferir um soluto ou partícula de uma fase para outra. Para a separação e
purificação de produtos biológicos, as fases são mais comumente líquidos imiscíveis, e o soluto
está na forma solúvel. Em certos casos, no entanto, uma fase é um líquido e a outra fase é um
sólido; a extração de cafeína dos grãos de café é um exemplo. Embora a maioria das extrações
em biotecnologia envolvam a transferência de bioprodutos solúveis, organelas e células às
vezes foram transferidas entre as fases. Um solvente orgânico é frequentemente usado como o
líquido de extração quando o soluto a ser extraído é estável no solvente orgânico, sendo
exemplos típicos antibióticos de baixo peso molecular. Geralmente não é viável extrair
proteínas com solventes orgânicos, uma vez que as proteínas são frequentemente
desnaturadas ou degradadas como resultado do contato com o solvente orgânico. Muitas
vezes, as proteínas podem ser extraídas com sucesso por meio de duas fases líquidas imiscíveis
que consistem em soluções de dois polímeros solúveis em água, mas incompatíveis, ou um
polímero mais uma alta concentração de certos sais.
A extração geralmente ocorre no início do processo de purificação de um bioproduto e
normalmente precede uma etapa de alta resolução, como a cromatografia. A extração é muitas vezes
vantajosa porque pode provocar uma redução significativa no volume e/ou pode separar o produto
desejado das células ou detritos celulares. É desejável reduzir o volume o mais rápido possível no
processo, uma vez que grandes volumes normalmente levam a grandes custos.
As extrações de interesse na purificação de produtos biotecnológicos e farmacêuticos são
principalmente líquido-líquido, e esta é a ênfase deste capítulo. As definições básicas e os
princípios de extração são desenvolvidos primeiro, seguidos por uma explicação dos
procedimentos de dimensionamento e design para os extratores mais comumente usados
para bioprodutos.
6.1 OBJETIVOS INSTRUCIONAIS
Após concluir este capítulo, o leitor deverá ser capaz de fazer o seguinte:
• Defina e use constantes-chave, como o coeficiente de partição, a razão solvente-

alimentação e o fator de extração.
219
220/ /BI OSEPARAT I ONs CIÊNCIA E ENGENHARIA
• Explique os fatores que afetam a partição de biomoléculas.

• Construir um diagrama de fases para sistemas bifásicos aquosos e entender
suas aplicações na extração de proteínas.
• Calcule as concentrações de soluto em cascatas de extração em contracorrente de vários
estágios.
• Desenhe linhas de equilíbrio e de operação e use-as para calcular os estágios de
equilíbrio na extração em contracorrente.
• Efetue cálculos de escala para extratores de placa alternativa e centrífugos.
6.2 PRINCÍPIOS DE EXTRAÇÃO
A separação de biomoléculas na extração líquido-líquido depende da partição

das biomoléculas entre as fases líquidas. O desenho do processo de extração
depende da miscibilidade das duas fases líquidas entre si e da taxa de equilíbrio
das biomoléculas entre as duas fases. A extração aquosa em duas fases é uma
técnica não desnaturante e não degradante que pode ser usada para várias
biomoléculas, como proteínas, vírus, células e organelas celulares; portanto,
enfatiza-se a análise de partição em extração aquosa bifásica. Abordagens
gráficas e analíticas para cálculos do estágio extrator são discutidas.
6.2.1 Separação de Fase e Equilíbrios de Particionamento
Em um processo de extração de estágio único, uma corrente de alimentação entra em contato com
uma corrente de solvente de extração e a mistura se divide em fases de equilíbrio de extrato e
refinado, conforme mostrado esquematicamente na Figura 6.1. A distribuição de um soluto em
equilíbrio entre duas fases líquidas é definida pelapartiçãooucoeficiente de distribuiçãoComo
y
(6.2.1)K=
x
Ondeyexsão as concentrações do soluto nas fases de extrato e refinado, respectivamente.

Assim, para o menor volume de solvente de extração, é desejável ter Ko maior possível.
Coeficientes de partição próximos da unidade exigiriam grandes volumes e muitas
extrações em série para recuperação total. Coeficientes de partição próximos de zero
indicariam nenhuma extração.
O coeficiente de partição pode depender de muitos parâmetros, como o tamanho da
molécula que está sendo extraída, pH, tipos de solvente, temperatura e concentração e
ExtrairS,y1 S,ysSolvente de extração

Equilíbrio
palco
AlimentaçãoF,xf F,x1Refinado
FIGURA 6.1Diagrama de fluxo de um estágio de equilíbrio, mostrando as variáveis do fluxo. As duas fases
são consideradas imiscíveis.
Extração/ /221
100
10
Coeficiente de partiçãoK
CX-1
Penicilina G
1
0,1
1 2 3 4 5 6 7 8
pH
FIGURA 6.2Dependência do coeficiente de partição em pH para penicilina G e impureza ácida CX-1:
um solvente orgânico foi usado para extração do caldo de fermentação filtrado.(Dados de
M. Souders, GJ Pierotti e CL Dunn, "A recuperação da penicilina por extração com um gradiente de pH",Química Eng.
Prog. Sintoma Ser.100, vol. 66, pág. 39, 1970.)
peso molecular de polímeros (ou sal) nas fases. A literatura contém coeficientes de
partição para muitas moléculas biológicas, especialmente aminoácidos e antibióticos,
mas deve-se ter cautela se forem utilizadas condições diferentes das relatadas. Um
exemplo do efeito do pH no coeficiente de partição é mostrado na Figura 6.2 para o
antibiótico penicilina G e uma impureza ácida. Pode-se observar que abaixo de pH 4 a
extração da penicilina G na fase solvente é favorecida em relação à impureza ácida
CX-1.
Os modelos desenvolvidos para descrever o particionamento de biomoléculas são úteis não
apenas para estender os dados de particionamento existentes para novas condições, mas também
para obter primeiras estimativas razoáveis de coeficientes de partição. Um dos modelos mais simples
para descrever o particionamento entre fases é o desenvolvido por Brønsted [1]:
-Mλ-
(6.2.2)K=exp
--kT--
OndeMé o peso molecular da molécula que está sendo particionada,ké a constante de

Boltzmann,Té a temperatura absoluta, eλé uma constante (parâmetro agregado) que
inclui características tanto do sistema de fase quanto da substância de partição. Isto
pode-se observar que para o particionamento da penicilina G (Figura 6.2) o modelo de

Brönsted corresponde a um decréscimo constanteλde pH 2 a 5.
Aquososistemas de extração de duas fasessão feitos combinando dois polímeros
solúveis em água ou um polímero e um sal em água, acima de uma “concentração crítica”.
Esses sistemas separam-se em duas fases líquidas imiscíveis, uma delas enriquecida em
um polímero e a outra enriquecida no outro polímero ou sal. Separadores solúveis ou
particulados, adicionados ao sistema, dividem-se entre as duas fases. A extração aquosa
em duas fases tornou-se reconhecida como uma técnica não desnaturante e não
degradante para a separação de várias entidades biológicas, como proteínas, enzimas,
vírus, células e organelas celulares. Este método também tem sido útil para a remoção de
subprodutos contaminantes indesejáveis, tais como ácidos nucleicos e polissacarídeos.
Cada sistema aquoso bifásico pode ser caracterizado por um diagrama de fases,
cujo exemplo é mostrado na Figura 6.3. Nas concentrações de poli(etilenoglicol) (PEG)
e dextrano abaixo da curva da Figura 6.3, há apenas uma fase líquida. Na curva, há
duas fases líquidas, e linhas de amarração conectam as composições das fases que
estão em equilíbrio. Conforme observado na Figura 6.3, a fase enriquecida em PEG
quase não contém dextrano. Os sistemas mais comuns usam dextrano e PEG, ou PEG
e fosfato de potássio, embora o dextrano purificado seja caro e alternativas a ele
tenham sido usadas [2]. A fase rica em PEG é menos densa do que a fase rica em
dextrano ou rica em sal e, portanto, é a fase mais leve ou superior. As concentrações
típicas de sistemas PEG-dextrano são 10% (p/p) de PEG e 15% de dextrano, ou com
fases de fundo ricas em sal,
15
10
Poli(etilenoglicol) (% p/p)
0
0 5 10 15 20 25
Dextrano (% p/p)
FIGURA 6.3Diagrama de fase para um sistema PEG 6000-dextrano D48 a 20°C.(Dados de P.- Å. Albertsson,
Partição de Partículas Celulares e Macromoléculas,3ª ed., Wiley, Nova York, 1986.)
Extração/ /223
TABELA 6.1Fatores que afetam a partição de proteínas

em sistemas aquosos bifásicosuma
Peso molecular da proteína Carga da proteína,
propriedades da superfície Peso molecular
do(s) polímero(s) Composição da fase,
comprimento da linha de amarração Efeitos do
sal
Ligantes de afinidade ligados a polímeros
umaVer referência [3].
Em geral, para extração bifásica aquosa, contaminantes como células e detritos

celulares particionam para a fase inferior ou interface. Para proteínas, o particionamento
é afetado por muitos parâmetros, que são dados na Tabela 6.1. Esses parâmetros são
difíceis de separar e analisar individualmente, o que significa que uma previsão a priori
dos coeficientes de partição é muito difícil.
Modelos foram desenvolvidos para explicar vários mecanismos de nível molecular que
influenciam a partição de proteínas na extração aquosa de duas fases. Esses modelos
podem ser categorizados em três tipos: modelos de rede, expansões viriais e abordagens
termodinâmicas de escala. Esses modelos tendem a ser complicados, exigindo a medição
independente de vários parâmetros. Um exemplo desses modelos é o modelo de
expansão virial desenvolvido por King et al. [4]. Para uma solução com dois polímeros que
é muito diluída em proteína, de modo que a concentração de qualquer polímero seja
muito maior que a concentração de proteína, o coeficiente de partição da proteínaKpÉ
dado por
yp − y)
zpF(φ x φ
(6.2.3)ln Kp=ln =uma 1)uma2p(2
1(1 px−y+ x−y2) +
xp RT
Ondeyp,xp=concentração de proteína na fase leve e pesada, respectivamente

y1,x1= concentração de polímero 1 em fase leve e pesada, respectivamente y2,x
2= concentração de polímero 2 em fase leve e pesada, respectivamente
uma1p=segundo coeficiente virial para interação entre proteína e poli-
mer 1
uma2p=segundo coeficiente virial para interação entre proteína e poli-
mer 2
φy,φx=potencial elétrico para fase leve e pesada, respectivamente,
tivo a alguma referência
zp=carga superficial líquida da proteína F
=Número de Faraday R=constante de gás
Os coeficientes viriais podem ser medidos para cada tipo de polímero e sal por osmometria de
membrana ou por dispersão de luz laser de baixo ângulo. Os potenciais elétricos podem ser
determinados em função do tipo de sal e do comprimento da linha de amarração. Os dados
também são necessários para a carga da superfície da proteína em função do pH. O uso desses
métodos deu uma boa concordância entre os coeficientes de partição previstos e medidos
experimentalmente para albumina,α-quimotripsina e lisozima em sistemas PEG-dextrano [4].
A influência do tamanho da proteína na partição de fase foi demonstrada pela correlação do
coeficiente de partição com o peso molecular de várias proteínas. Conforme indicado na Figura
6.4, a partição da proteína para a fase superior é fracamente favorecida em pesos moleculares
mais baixos, enquanto a partição da fase inferior é fortemente favorecida para as proteínas
maiores. Para todos esses dados, o pH da solução estava no ponto isoelétrico da proteína (pI)
para minimizar quaisquer efeitos da carga da proteína.
Outros fatores que podem ter um grande efeito na partição de proteínas são o
tipo e a concentração do sal no sistema e a carga da proteína. Por exemplo, a Figura
6.5 mostra que o coeficiente de partição para ovalbumina pode variar muito
dependendo do pH, o que significa que este é um efeito eletrostático. Isso é
corroborado pela observação de que todas as curvas na Figura 6.5 se cruzam no pH
isoelétrico da proteína, onde há carga líquida zero na molécula. Também se vê que
3,0
2,0
Ovalbumina
Albumina sérica bovina

Transferrina (humana)
(bacteriano)
α-Amilase
1,0
β-Galactosidase (deE. coliK12 e WL)
Papaína
Insulina
α-Quimotripsina
Tripsina
RNase
Lisozima (galinha e peru)
0,1
0,05
1 2 3 4 5 6 7 8 50
Peso molecular da proteína (×104Da)
FIGURA 6.4Efeito do peso molecular da proteína na partição em um sistema PEG 6000-dextrano 500
com pH no ponto isoelétrico (pI) para todas as proteínas.(Dados de S. Saskawa e H. Walter, “Partition
comportamento de proteínas nativas em sistemas aquosos de dextrano-poli(etilenoglicol)-fase",Bioquímica,volume 11, pág.
2760, 1972.)
Extração/ /225
3,0
2,0
K1,0
0,8
0,6
0,4
0,3
0,2
3 4 5 6 7
pH
FIGURA 6.5Dependência da partição de ovalbumina no pH da solução e tipo de sal em um sistema PEG
6000-dextrano 500. Símbolos abertos denotam sais de cloreto, símbolos sólidos, sulfatos (quadrados,
potássio; círculos, sódio; triângulos, lítio).(Dados de H. Walter, S. Sasakawa e P.-Å. Albertsson, “Partição cruzada
de proteínas: Efeito da composição iônica e concentração”,Bioquímica,volume 11, pág. 3880, 1972.)
o coeficiente de partição é muito afetado pelo uso de sais de cloreto ou sulfato. Assim, o
efeito de qualquer mudança no tipo de sal em um sistema aquoso bifásico deve ser
verificado experimentalmente.
A seletividade da extração para a proteína de interesse pode ser aumentada pelo acoplamento de
um ligante bioespecífico a um dos polímeros. O PEG é um polímero frequentemente selecionado para
conjugação porque as técnicas químicas para modificar o PEG são simples, altamente eficientes e bem
conhecidas. Acoplando um ligante bioespecífico ao PEG e usando condições que favorecem a partição
de contaminantes para a fase de fundo, o coeficiente de partição de uma proteína desejada pode ser
grandemente aumentado. A estratégia mais comum é anexar o ligante ao polímero PEG por
derivatização das hidroxilas livres em cada extremidade da cadeia polimérica. Intermediários reativos
foram formados pela conversão da hidroxila terminal do PEG em haletos, ésteres de sulfonato ou
derivados de epóxido, que se acoplam a um ligante para formar um polímero com um sítio de ligação
à proteína em cada extremidade [5]. Ligantes dos corantes reativos, incluindo Cibacron blue, Procion
red e Procion yellow, têm sido usados para a separação por afinidade de muitas proteínas. O corante
funciona como um inibidor competitivo para o substrato, coenzima ou efetor de uma variedade de
proteínas, muitas vezes com uma afinidade maior do que a mostrada pelo corante competitivo.
100
Com Procion amarelo

HE-3G-PEG
Glicose 6-fosfato
desidrogenase
10
3-Fosfoglicerato
Coeficiente de partição,K
quinase
Proteína total
Álcool
0,1 desidrogenase
Sem
PEG ligado
0,01
2 3 4 5 6 7 8
Fração em peso de PEG (%)
FIGURA 6.6Partição de afinidade de enzimas em um sistema PEG 6000-dextrano 500 com e sem
Procion amarelo-PEG.(Dados de G. Johansson e M. Andersson, "Parâmetros que determinam a partição de afinidade de
enzimas de levedura usando ligantes de corante de triazina ligados a polímero",J. Cromatogr., v. 303, pág. 39, 1984.)
molécula [6]. A melhoria no coeficiente de partição para três enzimas quando o amarelo
Procion foi ligado ao PEG no sistema de extração de duas fases aquosas de PEG-dextrano
é mostrado na Figura 6.6.
Após a ligação da proteína ao ligante-polímero, é necessário recuperar a proteína na
forma livre. Isso tem sido realizado pela adição de sal à fase superior, rica em ligante-
polímero, originando duas fases e consequente partição da proteína para a fase inferior
resultante [7]. Em outra abordagem, um efetor solúvel foi adicionado a um novo sistema
de duas fases para competir com o ligante ligado pelo sítio de ligação da proteína,
fazendo com que a proteína fosse liberada do ligante-polímero e mudasse para a fase
inferior [8].
6.2.2 Cálculos do Estágio de Contracorrente
Para obter alta recuperação do bioproduto na extração, frequentemente é necessário usar mais
de uma etapa de extração. Os processos de extração são geralmente configurados onde o
solvente de extração e a alimentação funcionam em contracorrente um ao outro. O fluxo em
contracorrente é preferível ao fluxo em cocorrente porque a diferença de concentração de
soluto entre as fases de rafinado e de extração, a força motriz do processo, é maior no caso de
contracorrente. A extração em contracorrente é analisada graficamente e analiticamente
quanto ao equilíbrio em cada estágio de contato. Esta análise é útil para determinar o equilíbrio
entre o número de estágios e a proporção da extração
Extração/ /227
y1 y2 y3 yn-1 yn ys
ExtrairS S Extração
solvente
1 2 n-1 n
AlimentaçãoF
xn F Refinado
xf x1 x2 xn-2 xn-1
FIGURA 6.7Cascata de extração em contracorrente comnestágios de equilíbrio, mostrando as variáveis do
fluxo.
vazão de solvente para a vazão de alimentação. Esta análise também pode ser usada para determinar a
eficiência de extração de plantas piloto e extratores em escala de planta.
Uma cascata de extração de contracorrente é mostrada esquematicamente na Figura 6.7
para nestágios, cada um como mostrado na Figura 6.1. As correntes que saem de cada estágio
estão em equilíbrio e são numeradas de acordo com o estágio em que estão saindo. O alimento
entra no estágio 1 e sai no estágion, enquanto o solvente de extração está fluindo na direção
oposta. Uma vez que o feed tenha entrado na cascata, ele é chamado de “rafinado”. Para esses
cálculos, fazemos três suposições principais:
1. Os dois solventes são imiscíveis ou já estão em equilíbrio de fases (ou seja, nenhum
solvente ou polímero é trocado entre as fases).
2. As concentrações de soluto são suficientemente baixas para que as taxas de fluxo do refinado e
do extrato sejam constantes.
3. O equilíbrio é alcançado em cada estágio.
A primeira suposição depende dos solventes escolhidos. Normalmente, o solvente de extração é

selecionado para minimizar sua solubilidade no refinado; caso contrário, a perda de solvente de
extração no refinado pode ser tão grande que ele deve ser recuperado para que o processo seja
economicamente viável. A segunda suposição normalmente vale para a extração de
bioprodutos. As concentrações de bioprodutos em caldos de fermentação são tipicamente
inferiores a 10 g/litro (ou 1%) e muitas vezes são inferiores a 1 g/litro (0,1%), o que significa que
o erro causado pela segunda suposição é geralmente menor que o erro na o ensaio do
bioproduto. Se os desvios da segunda suposição se tornarem significativos, entãoFeSdevem ser
as taxas de fluxo de solvente puro e as concentrações devem ser razões de soluto para solvente
puro.
Um equilíbrio de material no soluto ao redor da extremidade de alimentação da cascata até o estágio n−
1é
(6.2.4)xfF+ynS=xn−1F+y1S
OndeFé a taxa de fluxo da fase de alimentação ou refinado,Sé a taxa de fluxo da fase de extração, e as
concentrações são definidas como na Figura 6.7. Essa equação pode ser escrita em termos deynComo
F y1S−xfF
(6.2.5)yn= xn−1 +
S S
Da Equação (6.2.5) vê-se queynexn−1são concentrações de fluxos de passagem em uma linha de

inclinaçãoF/S, que é chamado delinha de operação. O cálculo do número de estágios
necessários para reduzir a concentração de soluto na corrente de alimentação para xnpode ser
realizado graficamente em um diagrama do tipo McCabe-Thiele comyplotado versusxconforme
mostrado na Figura 6.8. A linha de operação da cascata de inclinaçãoF/Scruza oxeixo no ponto (
xn,ys). No ponto de desenho (xn,ys), assume-se aqui queys=0 (uma vez que o solvente de
extração é geralmente livre de soluto). ocurva de equilíbrio,não necessariamente uma linha reta
[ou seja, o coeficiente de partição, definido pela Equação (6.2.1), pode não ser constante para a
faixa de concentrações que se aplicam], origina-se emx=y=0. A saída dos estágios de equilíbrio
começa na linha de operação onde a alimentação entra e o extrato sai da cascata (xf,y1). As
concentraçõesx1ey1estão em equilíbrio e, portanto, estão na curva de equilíbrio. Um estágio de
equilíbrio é representado graficamente como a linha horizontal desenhada de (xf,y1) que
intercepta a curva de equilíbrio em (x1,y1); uma linha vertical é desenhada de (x1,y1) que
intercepta a linha de operação em (x1,y2). Este procedimento é continuado atéysé atingido.
Para soluções diluídas isotérmicas, o coeficiente de partiçãoKmuitas vezes é constante. Para

esta situação, uma solução analítica pode ser desenvolvida para a concentração de soluto no
refinado em função da concentração na alimentação e outras variáveis do processo. É
conveniente definir umfator de extração Ecomo a inclinação da linha de equilíbrio dividida pela
inclinação da linha de operação:
K KS
(6.2.6)E= =
F/S F
x1,y1
1 xf,y1
y, Concentração de soluto no extrato
Equilíbrio
curva
2 x1,y2
Cascata
linha de operação
(inclinação =F/S)
xn,yn n-1
xn 1,yn
n
xn,ys
x, Concentração de soluto em refinado

FIGURA 6.8Cálculo gráfico de estágios de equilíbrio para extração em contracorrente.
Extração/ /229
Um balanço de material no soluto para onª etapa, assumindo que não há soluto no solvente de
extração de entrada (ys=0), dá
(6.2.7)xn−1F=xnF+ynS
Usando as definições deKeEleva a
(6.2.8)xn−1= (E+1)xn
Um balanço de material no soluto para o (n−1)ª etapa resulta em
(6.2.9)xn−2= (E2+E+1)xn
Continuando este procedimento até o estágio 1 dá
(EnE+
n− 1+
(6.2.10)x f= + E2+E+1)xn
que é matematicamente equivalente a
-En+1− 1-
(6.2.11)xf=
-- E−1 --xn
ou
- E−1 -
(6.2.12)xn=
--En+1− 1--x
f
Esta equação pode ser rearranjada para dar a forma mais comumente usada
-x f -
ln - (E−1) + 1-
xn
(6.2.13)n= - - −1
lnE
À medida que o número de estágios se torna grande (n→∞), vemos pela Equação (6.2.11) que
xf
(6.2.14)xn→ → 0
En
que sabemos por intuição - podemos extrair quase todo o soluto com um número muito grande
de estágios.
Para o caso especial do fator de extraçãoE=1.0, podemos ver pela Equação
(6.2.10) que
xf
(6.2.15)x n=
n+1
Para valores deE <1.0 e um grande número de etapas de extração (n→∞), fica claro pela
Equação (6.2.12) que
(6.2.16)xn→ (1 -E)xf
EXEMPLO 6.1
Separação de um Bioproduto e uma Impureza por Extração em Contracorrente Um

extrator de contracorrente com quatro estágios de equilíbrio está disponível para separar
um bioproduto desejado de uma impureza contaminante, que é 10% do peso do
bioproduto em uma corrente de alimentação. Para o solvente de extração utilizado, que é
imiscível com a corrente de alimentação, o bioproduto possui um coeficiente de partiçãoK
de 10, enquanto a impureza temK=1. Para umS/Frazão de 0,2, qual será a razão de
impureza para bioproduto na fase de extrato na saída do extrator?
Solução
Podemos usar a Equação (6.2.12) para calcular a proporção de bioproduto ou impureza no refinado de saída
para aquela na alimentação de entrada:
KS
Bioproduto: E= =10(0,2) = 2,0
F
xn = E−1 2-1
= =0,0323
xf n1
E+− 1 24+1− 1
Impureza: E=1,0(0,2) = 0,2
xn 0,2 -1
= =0,800
xf 0.24+1 −1
Para calcular a proporção de impureza para bioproduto no extrato de saída, usamos 100 g
de bioproduto na ração como base:
10 − 0,8(10)
Relação de impureza para bioproduto no extrato = =0,021
100 − 0,0323(100)
EXEMPLO 6.2
Efeito da taxa de solvente na extração em contracorrente de um antibiótico

Descobriu-se que um antibiótico tem um coeficiente de partiçãoKde 8,4 a pH 10,0 em um
sistema com fases aquosa e de acetato de butila. O pKumado antibiótico é 8,5, devido a um
único grupo amina terciária na molécula. Deseja-se recuperar 95% deste
Extração/ /231
antibiótico por extração em fase contracorrente com acetato de butila de uma alimentação de
fase aquosa a um pH de 10,0. A vazão da alimentação é de 200 litros/min.
Determine a dependência do número de estágios ideais na vazão da fase de
extração. Em que faixa de vazão provavelmente haveria um ótimo econômico? Por
que é desejável fazer a extração em um pH de 10,0?
Solução
Para resolver este problema, precisamos de uma expressão que relacione o número de estágios
de contracorrente ideaisnpara a taxa de fluxo do solvente de extraçãoS. Substituindo na
Equação (6.2.13) porEdá
-xf-KS - -
ln - − 1-- +1-
-x--nF
n= - −1
-KS-
ln--F--
A equação acima assume que a água e o acetato de butila são imiscíveis. Como a
solubilidade da água no acetato de butila é inferior a 1%, essa é uma boa suposição.
Para este problema sabemos que a razãoxn/xf=0,05. Substituindo os valores dexn/xf, K
, eF, e vários valores deSnesta equação, obtemos um gráfico dencontraS (Figura
E6.2).
A determinação de um ótimo econômico exato envolveria o cálculo do
custo total anualizado em função da vazão do extrato, o que exigiria
n 4
0
0 20 40 60 80 100 120 140 160
S(litros/min)
FIGURA E6.2Dependência do númeronde etapas teóricas de extração na taxa de fluxoSda fase de
extrato de acetato de butila.
colocando os custos do equipamento numa base anualizada. No entanto, a faixa da vazão do

solvente de extração onde se encontra um ótimo econômico pode ser estimada a partir dan
contraScurva. A partir deste gráfico, abaixo de uma vazão de extração de 30 litros/min, o
número de estágios ideais parece aumentar exponencialmente; enquanto acima de uma vazão
de cerca de 80 litros/min, a mudança no número de estágios com a vazão torna-se
relativamente pequena. Assim, o ótimo econômico provavelmente estará na faixa de vazão de
acetato de butila de 30 a 80 litros/min.
Acima de seu pKumade 8,5, a amina terciária torna-se progressivamente mais desprotonada,
enquanto abaixo deste pKumao inverso é verdadeiro. A um pH de 10,0, esta amina é
essencialmente não protonada e o antibiótico é assim extraído mais facilmente na fase de
acetato de butilo mais hidrofóbica do que se fosse protonado.
6.3 ESCALA E PROJETO DE EXTRATORES
Embora muitos tipos diferentes de extratores sejam usados em larga escala na indústria
química, apenas alguns são usados no campo da biotecnologia. De longe, os extratores
mais usados em biotecnologia são as colunas de extração mecanicamente agitadas e os
extratores centrífugos [9]. Das colunas de extração agitadas mecanicamente, as colunas
de extração de placas alternativas têm sido as mais utilizadas. Os extratores centrífugos
têm sido amplamente utilizados na recuperação de antibióticos, e provavelmente o
extrator mais utilizado desse tipo é o extrator centrífugo Podbielniak. Um resumo das
características gerais desses dois extratores é apresentado na Tabela 6.2. Ambos os
extratores serão discutidos em detalhes.
Dois conceitos que são úteis em scaleup e design sãoeficiência geral do palco ealtura
equivalente a um estágio teórico(HETS). A coluna pode ser tratada como uma pilha de
estágios, em que o produto está em equilíbrio entre as duas fases em cada estágio como
na Figura 6.7. Essas variáveis são
número de etapas teóricas

(6.3.1)Porcentagem de eficiência do estágio = ×100
número de estágios reais
TABELA 6.2resumo das características de dois extratores comumente usados em biotecnologiauma
Tipos de extrator Características gerais
Coluna de pratos alternativos Alto rendimento, baixo HETS; grande versatilidade e flexibilidade;
simplicidade na construção; lida com líquidos contendo
sólidos suspensos e misturas com tendências emulsificantes Tempo
Extrator centrífugo de contato curto para material instável; espaço limitado
requeridos; lida com materiais e sistemas facilmente emulsificados com pequenas
diferenças de densidade do líquido

Extração/ /233
altura do extrator
(6.3.2)HETS =
número de etapas teóricas
O número de estágios teóricos é definido pela Equação (6.2.13). Os objetivos do projeto são
maximizar a eficiência do estágio e minimizar o HETS.
6.3.1 Colunas de Extração de Placa Alternativa
A característica mais importante para aplicações de biotecnologia de colunas de extração de

placas alternativas é sua capacidade de lidar com líquidos com sólidos suspensos e misturas
que emulsionam facilmente. Nestas colunas, desenvolvidas pela primeira vez por Karr [11], a
interdispersão é conseguida por placas alternativas ou vibratórias. A coluna consiste em uma
pilha de placas perfuradas, que são alternadas verticalmente por meio de um mecanismo de
acionamento alternativo localizado no topo da coluna (Figura 6.9). A amplitude de reciprocidade
é variável e geralmente na faixa de 3 a 50 mm; a frequência de reciprocidade é variável até 1000
golpes/min (SPM).
Estudos de pesquisa sobre a hidrodinâmica e mistura axial em colunas de extração de
placas alternativas mostraram que a presença de muitas placas espaçadas leva a
condições que se aproximam da turbulência isotrópica uniforme [12]. A distribuição mais
uniforme da dissipação de energia nessas colunas dá alta turbulência de fases
interdispersas e baixa mistura axial, e assim dá altas taxas de transferência de massa e
baixo HETS. Assim, as colunas comerciais são projetadas com o espaçamento ideal entre
as placas.
Esta coluna obedece à relação para o número de estágios teóricos em um extrator de
estágios em contracorrente [Equação (6.2.13)] e é dimensionado com base no diâmetro da
colunaDe taxa de reciprocidade das placas, SPM. Com base nos dados de desempenho
obtidos para colunas com diâmetros de 25, 76, 305 e 914 mm (1, 3, 12 e 36 pol.), as
seguintes equações foram desenvolvidas para o aumento de escala de extratores de
placas alternativas [13 ]:
(HETS)2 -D-20,38
(6.3.3) =
(HETS)1 -D-1-
-0,14
(SPM)2 - D1
(6.3.4) =-
(SPM)1 -D-2-
onde os subscritos 1 e 2 referem-se às colunas de pequena e grande escala, respectivamente. Um

projeto bem sucedido de um extrator de placas reciprocantes em grande escala pode ser alcançado
após experimentos de otimização terem sido realizados em escala de planta piloto. Os seguintes
procedimentos são recomendados para o aumento de escala:
Contrapeso Velocidade variável
Biela dirigir
Eixo excêntrico
Selo
Fase de luz
Ponta de eixo tomada
Fase pesada
pulverizador de alimentação
placa de aranha
Eixo central
e espaçadores
Placa defletora de metal

Tirantes
e espaçadores
Placa perfurada
Defletor de teflon
Fase de luz
prato
pulverizador de alimentação
Fase pesada
tomada
FIGURA 6.9Diagrama esquemático de uma coluna de extração de placa alternativa de 900 mm (36 pol.) de diâmetro
hum.(Desenho baseado em um projeto da Glitsch Process Systems Inc.)
1. Dados comoxn/xfno especificadoSeFsão obtidos em uma coluna de 25, 51 ou 76 mm

(1, 2 ou 3 pol.) de diâmetro.
2. O desempenho ideal da coluna piloto é determinado. O critério para o desempenho
ideal é a máxima eficiência volumétrica em uma coluna com espaçamento ideal
entre as placas.
3. Ao aumentar a partir dos dados da escala piloto, os seguintes parâmetros são mantidos constantes: proporção
de solvente para alimentaçãoS/F, taxa de transferência por área de seção transversal da coluna (S+F)/A,
espaçamento das placas e comprimento do curso.
4. O HETS mínimo esperado na coluna de grande diâmetro é calculado a partir da

Equação (6.3.3). A altura do extrator é calculada a partir da Equação (6.3.2),
com o número de estágios teóricos estimados a partir da Equação
(6.2.13), que se baseia nas três premissas introduzidas na Seção 6.2.2.
5. A velocidade recíproca correspondente necessária é calculada a partir da Equação (6.3.4).
6. São fornecidas placas defletoras adequadas em design e espaçamento.
A eficiência volumétrica da coluna é definida como

Extração/ /235
Eficiência volumétrica
taxa de transferência volumétrica total/área de seção transversal da coluna =
(6.3.5)
HETS
onde o rendimento volumétrico total é definido como a soma da taxa de fluxo de alimentação e a taxa
de fluxo de solvente,S+F. Este procedimento foi usado para dimensionar colunas com sucesso para
um diâmetro de 1,5 m (5 pés) [12] e uma altura de pilha de placas de 12,2 m (40 pés) [13].
EXEMPLO 6.3
Ampliação de uma Coluna de Extração de Placa AlternativaA operação de uma coluna de

extração de placas alternativas em escala piloto foi otimizada para a extração de um antibiótico
do caldo de fermentação completo usando acetato de amila como solvente. O antibiótico tem
um coeficiente de partiçãoKde 7,5. As condições óptimas de funcionamento são as seguintes:
caudal de solvente de 105 ml/min, caudal de caldo de fermentação de 70 ml/min e proporção de
antibiótico no refinado para antibiótico na alimentação de 0,07. A coluna tinha 2,54 cm de
diâmetro e a altura do extrator (altura das placas alternativas) era de 1,83 m. A velocidade do
agitador foi de 280 golpes/min. Que tamanho de coluna e velocidade do agitador são
necessários para fornecer uma proporção de antibiótico no refinado para antibiótico na
alimentação de 0,03 e para lidar com o caldo de fermentação a uma taxa de 150.000 litros a
cada 12 h? (Observação:150.000 litros é um volume típico para um fermentador de antibiótico
vegetal.)
Solução
Nosso primeiro objetivo é encontrar o HETS para o funcionamento ideal da planta piloto. Sabemos
para o piloto que
xf 1
= =14.29
xn 0,07
S 105
= =1,5
F 70
Deixamos os subscritos 1 e 2 denotarem a planta piloto e as escalas da planta, respectivamente. Como
a solubilidade do acetato de amila em água está bem abaixo de 1%, assumimos a hipótese de fases
imiscíveis. Assim, podemos usar a Equação (6.2.13) para determinar o número de estágios teóricos
-xf-KS - -
ln - --F − 1- + 1
-x n -- - ln[14,29(7,5×1,5 − 1) + 1]
n1= −1 = − 1 = 1,06
-KS- ln (7,5×1.5)
ln--F--
e da Equação (6.3.2)
altura das placas 1,83

(HETS)1= = =1,73 m
n1 1,06
Para a unidade de grande escala, podemos primeiro encontrar o diâmetro mantendo um rendimento total
constante por unidade de área de seção transversal. Para a unidade piloto
Capacidade total 70+105 ml

= =34,6
Área de seção transversal π(2.54)2/4 mín. cm2
ManutençãoS/Fconstante em grande escala dá
(105/70)(150.000) + 150.000 litros 1 hora

(Rendimento total)grande escala= ×
12 h 60 minutos
litros
=520,8
min
Agora podemos resolver para o diâmetro da coluna grande:
-4×520.800-1/2
D= -- -- = 136,3 centímetros
34,6π
O HETS para a coluna de grande escala pode ser encontrado usando a Equação (6.3.3):
0,38
- D- - 138,5-0,38
(HETS)2= (HETS )1- 2 = (1,73) =7,91m
- D1- - --2,54 --
Para encontrar a altura da coluna de grande escala, precisamos usar a concentração desejada
de antibiótico no refinado para calcular o número de estágios teóricos para esta coluna:
ln[(1 / 0,03)(7,5×1,5 − 1) + 1]
n2= − 1 = 1,41
ln (7,5×1.5)
Da Equação (6.3.2)
Altura das placas)coluna grande=n2(HETS)2= 1,41(7,91) = 11,2m
A velocidade do agitador em grande escala pode ser encontrada usando a Equação (6.3.4):
0,14
-D- - 2,540,14
-
(SPM)2= (SPM)1- 1 - = (280)- =160 braçadas/min
-D-2 - 138,5 --
Assim, a coluna de grande porte não é mais larga ou mais alta do que as maiores colunas desses tipos
que foram construídas.
Extração/ /237
6.3.2 Extratores Centrífugos
Os extratores centrífugos foram desenvolvidos pela primeira vez para o processamento

biotecnológico, e essa ainda é sua principal aplicação. Esses extratores são os mais populares na
produção de antibióticos, onde os grandes volumes de caldo de fermentação que devem ser
processados são facilmente emulsificados. As principais vantagens dos extratores centrífugos são
sua capacidade de evitar emulsões e separar fases líquidas com pequenas diferenças de densidade
(tão pequenas quanto 0,01 g/cm3).
Os extratores centrífugos consistem em vários cilindros perfurados concêntricos que
giram em torno de um eixo. O princípio deste projeto é alimentar a fase pesada próximo
ao eixo do cilindro giratório, enquanto a fase leve é alimentada próximo à periferia. A
Figura 6.10 é um diagrama de seção transversal do extrator centrífugo Podbielniak
amplamente utilizado que indica os fluxos das fases pesada e leve. A força centrífuga
aplicada faz com que as duas fases se movam radialmente em contracorrente, de modo
que a fase pesada se mova para a periferia e a fase leve para o eixo de rotação. As
capacidades dos vários tamanhos de extratores centrífugos Podbielniak para a extração
de caldo de fermentação são dadas na Tabela 6.3.
A ampliação dos extratores centrífugos Podbielniak usa o conceito detempo equivalente, Gt,
discutido anteriormente para centrífugas [ver Equação (5.3.5)]. Primeiro, é determinado o
desempenho ideal do extrator centrífugo piloto. A razão do volume de alimentação para o volume do
solvente é mantida constante após o aumento de escala. O tempo de contatotpara o fluxo de
alimentação na centrífuga é calculado para o extrator de grande escala, assumindo queGté constante
na escala. A taxa de alimentação em grande escala é calculada a partir deste tempo de contato [14].
Mecânico
selos Polia de acionamento
Pesado Leve
líquido líquido
entrada entrada
Leve Pesado
saída de líquido saída de líquido
Rotor
plugues de limpeza
FIGURA 6.10Diagrama de corte transversal de um extrator centrífugo Podbielniak.

TABELA 6.3Capacidades de extratores centrífugos podbielniak para extração de caldo de fermentação
Força centrífuga máxima ×g (G,

Capacidade (m3/h)uma Velocidade máxima (rpm) aceleração adimensional)
0,05 10.000 11.400
6,0 3.200 3.600
15,0 2.100 2.300

30,0 2.100 2.300
umaSoma das taxas de fluxo de alimentação e solvente.
Fonte:B&P Process Equipment and Systems, 2000.
EXEMPLO 6.4
Aumento na taxa de alimentação para um extrator centrífugo PodbielniakUm extrator

centrífugo Podbielniak com capacidade de 30,0 m3/h (ver Tabela 6.3) está operando a uma
velocidade de 1500 rpm, taxa de alimentação de 300 litros/min e taxa de solvente de 60 litros/
min para a extração de um bioproduto na alimentação. Mudanças no processo a montante do
extrator exigem que a taxa de alimentação seja aumentada para 400 litros/min. Que mudanças
nas variáveis operacionais devem ser feitas para manter a mesma recuperação do
bioproduto? Essas alterações podem ser feitas dentro das capacidades deste extrator?
Solução
Seguindo as orientações para escalonamento de extratores centrífugos, o tempo equivalente (Gt) é
mantida constante para obter a mesma recuperação quando as taxas de fluxo são alteradas.
G1t1=G2t2
onde os subscritos 1 e 2 referem-se às condições operacionais atuais e novas,

respectivamente. Também mantemos a relação solvente-alimentação (S/F) constante, o
que equivale a manter o fator de extraçãoE(=KS/F) constante desde o coeficiente de
partiçãoK não mudou (mesmo sistema de alimentação e extração). Usando a definição de
G(Equação 5.3.4) e escrevendot's em termos de vazão e volume de alimentaçãoVocupado
pela alimentação no extrator dá
ω2R
G≡
g
ω2trailer ω2trailer
1 2
=
g F1 g F2
que se reduz a
Extração/ /239
ω12 ω22
=
F1 F2
de modo a
-F-21/2 -400-1/2
ω2 = =1500 rpm -- 300 -- =1732 rpm
ω1--F--
Esta velocidade ainda está abaixo da velocidade máxima para esta centrífuga (ver Tabela 6.3). A nova
taxa de solvente é
-S- -60 -
S2 = F2- - =1 400 80 litros mín.−
1
-F1- --300-- =
Nas novas vazões,
litros1m3 60 minutos 3 −1
S2+F280= + 400 = 480 × × =28 .8mh
min 103litros h
Portanto, nas novas vazões, a soma deSeFestá dentro da capacidade deste

extrator.
6.4 RESUMO
Na extração, duas fases entram em contato com o objetivo de transferir um soluto ou partícula
de uma fase para a outra. A extração líquido-líquido é o tipo de extração mais comumente
usado para bioprodutos. A extração líquido-líquido auxilia no isolamento do produto e pode ser
usada para purificação parcial de solutos quando usado no modo multiestágio.
• As principais constantes físicas usadas na extração são o coeficiente de partição K=s/

x, a razão da concentração de um soluto na fase de extrato para aquela na fase de
refinado no equilíbrio; a razão solvente-alimentaçãoS/F, o volume ou taxa de fluxo
da fase de extração dividido pelo volume ou taxa de fluxo da fase de alimentação; e
o fator de extraçãoE=KS/F.
• As condições e propriedades químicas têm efeitos previsíveis no coeficiente de partição.
Tanto o pH quanto o tipo de sal ou sais presentes geralmente têm um forte efeito sobreK.
• Um diagrama de fases de equilíbrio para sistemas aquosos de duas fases consiste em um

gráfico da concentração de um polímero enriquecido em uma das fases contra a
concentração de outro polímero ou sal enriquecido na outra fase. Os pontos formados
por fases em equilíbrio na curva de equilíbrio (binodal) são conectados por linhas de
amarração.
• A extração de enzimas por partição por afinidade consiste no acoplamento de um

dos polímeros, geralmente poli(etilenoglicol) (PEG), a um ligante de afinidade ao
qual a proteína alvo se ligará.
• Em umncascata de extração em contracorrente de estágio, a fração de soluto
extraída é calculada a partir da relação
xn E−1
= n
xf E+1 −1
Ondené o número de estágios teóricos,xfé a concentração de alimentação, exn

é a concentração no refinado de saída.
• Uma linha de equilíbrio é construída como um gráfico deycontrax, e uma linha de
operação é construída traçando o balanço de material nos mesmos eixos. O gráfico
combinado é conhecido como diagrama de McCabe-Thiele e é usado para calcular o
número de estágios de equilíbrio necessários começando emx=xfe reduzindox
grafando os passos entre os dois gráficos até oxné atingido.
• Um extrator de placas alternadas consiste em uma coluna vertical através da qual as fases
fluem em sentido contrário umas às outras e na qual a interdispersão das fases é acionada por
placas alternadas. As regras de escala para a altura da coluna e a velocidade das placas
perfuradas alternativas são baseadas em uma potência da razão entre o diâmetro de grande
escala e o diâmetro de pequena escala.
• Os extratores centrífugos (Podbielniak) efetuam a separação de fases aplicando um campo de
força centrífuga à medida que as fases fluem em contracorrente entre si através de cilindros
perfurados para efetuar o contato. As regras de escala são aquelas aplicadas à centrifugação.
NOMENCLATURA
umaeu j segundo coeficiente virial para interação entre proteínaeue polímeroj

(litro mol−1)
UMA área da seção transversal (cm2)
D diâmetro da coluna (cm)
E fator de extração (=KS/F)
F vazão de alimentação (= vazão de refinado quando os solventes são imiscíveis e as
concentrações de soluto são baixas) (litro h−1) Número de Faraday (9,6485 × 104C mol
F −1) aceleração gravitacional (= 9,8066 ms−2)
g
G múltiplo da aceleração gravitacional (=ω2R/g) (adimensional)
HETS altura equivalente a um estágio teórico [Equação (6.3.2)] (cm)
k constante de Boltzmann (= 1,3807 × 10−23JK−1) partição ou
K coeficiente de distribuição (=s/x) peso molecular (Daltons)
M
Extração/ /241
R constante de gás (8,3145 J mol−1K−1)

S vazão do solvente de extração (= vazão do extrato quando os solventes são imiscíveis
e as concentrações de soluto são baixas) (litro h−1) taxa de reciprocidade de placas
SPM (cursos min−1) tempo (h)
t
x concentração de soluto na fase refinado ou fase pesada (M, ou g litro−1)
y concentração de soluto na fase extrato ou fase leve (M, ou g litro−1) carga
zp superficial líquida da proteína
Letras gregas
λ parâmetro concentrado na equação para coeficiente de partiçãoK[Equação (6.2.2)]
φ potencial elétrico (mV)
PROBLEMAS
6.1Extração de contracorrente de dois estágiosEm uma extração em contracorrente de dois estágios de

um produto farmacêutico, qual é a relação entre a concentração de alimentação e a concentração
final de refinado em termos do fator de extração?Ese ambos os estágios estão em equilíbrio? Para um
coeficiente de partiçãoKde 5,0 e uma razão solvente-alimentação (S/F) de 0,5, qual será a razão entre a
concentração de refinado e a concentração de ração?
6.2Fator de Purificação para Extração de uma EnzimaVocê está preparando uma enzima industrial,
álcool desidrogenase, a partir de levedura usando extração aquosa de duas fases. O extrato bruto
clarificado contém apenas proteínas e tem uma atividade específica de 200 unidades/g de proteína.
Após um único estágio de extração de afinidade usando um complexo corante Cibacron-PEG, o
extrato contém 400.000 unidades de atividade enzimática e 20 g de proteína. Qual é o fator de
purificação para esta etapa?
6.3Condições de extração para vários bioprodutosPara os seguintes bioprodutos, descreva

como a extração pode ser usada no processo de purificação usando informações obtidas
de trabalhos relatados na literatura:
(a) Magnamicina, um antibiótico macrolídeo daStreptomyces halstedii
(b) Glumamicina, um antibiótico peptídico deStreptomyces zaomyceticus
(c)β-Galactosidase, uma enzimaEscherichia coli
(d) Pululanase, uma enzima deKlebsiella pneumoniae
Forneça o máximo de informações possível sobre quais devem ser as condições do processo
(solventes, pH, concentração, etc.).
6.4Relação Solvente-Alimentação Necessária na Extração de ContracorrenteEm um extrator em

contracorrente, em equilíbrio com quatro estágios de equilíbrio, determine a proporção necessária de
extrato para alimentação (S/F) para purificar o bioproduto A a 90% de pureza do contaminante B. A
alimentação contém dois componentes, 60% A e 40% B, e os coeficientes de partição sãoKUMA= 13,0 eK
B= 1,0.
6,5Purificação de um Antibiótico por Extração ContracorrenteUma unidade de extração em

contracorrente com três estágios de equilíbrio é usada para a separação de um antibiótico desejado
(coeficiente de partição = 6,0) de um contaminante principal (coeficiente de partição = 1,0)
em uma corrente de alimentação aquosa. As taxas de fluxo da fase de alimentação (ou

refinado) e de extração são iguais. Que fração de cada é descartada do refinado? Assumindo
que a ração contém apenas esses dois componentes em uma proporção antibiótico-
contaminante de 3:1, qual é a pureza do antibiótico no extrato de saída do estágio 3? O que
você conclui sobre a eficácia dessa extração como meio de purificação do antibiótico?
6.6Sistema de extração do misturador-settlerVocê recebe a tarefa de extrair zitramicina com um

rendimento de pelo menos 90% a partir de um caldo de fermentação fúngica clarificado,
usando uma unidade de extração misturadora de quatro estágios na planta piloto. (Um
misturador-settler constitui um estágio de equilíbrio na cascata de extração em contracorrente
mostrada na Figura 6.7.) On-butanol solvente de extração flui a 20 litros/h, enquanto o caldo
clarificado flui a 30 litros/h. O coeficiente de partição da zitramicina é ajustável alterando o pH.
Qual valor mínimo do coeficiente de partição você deve usar para a conclusão bem-sucedida de
sua tarefa atribuída?
6.7Cálculos de Estágio de Equilíbrio Gráfico para Extração de um PeptídeoA partição de

equilíbrio de um peptídeo entre uma fase de alimentação aquosa e uma fase de extrato
de solvente orgânico foi considerada não linear e pode ser representada pela seguinte
equação:
y=1,47 litrox+3,96
Ondeyexsão concentrações do peptídeo nas fases de extrato e alimentação aquosa (ou

refinado), respectivamente, em gramas por litro. Deseja-se extrair 95% do peptídeo de uma
corrente de alimentação com uma concentração de peptídeo de 4,0 g/litro. Para uma corrente
de alimentação a uma vazão de 5,0 litros/min e uma corrente de extração a uma vazão de 3,3
litros/min, estime graficamente quantos estágios de equilíbrio serão necessários para o fluxo
em contracorrente das fases. Qual é a concentração do peptídeo na corrente de extrato de
saída? À medida que a concentração do peptídeo no refinado diminui, a partição do peptídeo
no extrato se torna mais ou menos favorável?
6,8Aumento de escala de um extrator centrífugo PodbielniakTestes em planta piloto com um extrator

centrífugo Podbielniak indicaram uma excelente recuperação (>95%) de um bioproduto desejado
pode ser obtido a partir do caldo de fermentação filtrado por extração com um solvente orgânico
imiscível. As vazões foram as seguintes:
caldo filtrado(aquoso)taxa de fluxo = 500 ml/min(fase contínua)

Taxa de fluxo de solvente orgânico = 125 ml/min(fase dispersa)
O extrator da planta piloto fornece uma força centrífuga de 11.400 ×g, e o cilindro
giratório dentro do extrator tem diâmetro de 20 cm e largura de 2,5 cm.
Você foi solicitado a aumentar essa extração usando um extrator Podbielniak maior,
que fornece 2300 ×ge tem um cilindro giratório com diâmetro de 91 cm e largura de 91
cm. Quais taxas de fluxo devem ser usadas no extrator maior para obter a mesma
recuperação do bioproduto?
6.9Ampliação dos Testes da Planta Piloto de uma Coluna de Extração de Placa AlternativaOs
dados da planta piloto na Tabela P6.9 são para a extração de um antibiótico de todo
Extração/ /243
TABELA P6.9
Taxas de fluxo (ml/min)
Concentração de antibiótico
Número de execução Caldo Clorofórmio em refinado (mg/litro)
1 45 135 2
2 67,5 135 3
3 125 135 30
4 80 120 5
5 100 150 7
6 120 180 9
7 150 225 25
caldo de fermentação usando o solvente clorofórmio em uma coluna de extração de

placas alternativas. A concentração do antibiótico foi de 1,4 g/litro no caldo. A coluna
tinha um diâmetro de 2,54 cm e a altura das placas era de 3,05 m. O coeficiente de
partição Kpara o antibiótico é de 2,68.
Para cada corrida piloto, determine o diâmetro e a altura das placas para a coluna da
planta que seriam necessários para processar 50.000 litros de caldo em 12 h para obter
uma concentração de rafinado de antibiótico de saída de 10 mg/litro, assumindo uma
concentração de antibiótico em o caldo de alimentação de 1,0 g/litro (uma planilha é
conveniente para esses cálculos). Sem fazer uma análise econômica completa, na sua
opinião, qual operação piloto ampliada parece ser a ideal? (Dados de AE Karr, W. Gebert
e M. Wang,Posso. J. Chem. Eng.,volume 58, pág. 249, 1980.)
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Bioquímica. Eng. Biotecnologia., v. 47, pág. 89.
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Separação para Engenheiros Químicos, 3ª ed., PA Schweitzer, ed., McGraw-Hill, Nova Iorque, p.
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14. Creegan, R. (2000). Equipamentos e sistemas de processo B&P.Comunicação pessoal.

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A sedimentação é amovimento de partículas ou macromoléculas

5.1 OBJETIVOS INSTRUCIONAIS

• Determine a velocidade de uma partícula sedimentadora e calcule os tempos de

• Realize análises de engenharia e cálculos de dimensionamento em centrífugas tubulares

5.2 PRINCÍPIOS DE SEDIMENTAÇÃO

Os campos inerciais mais frequentemente encontrados são a aceleração gravitacional, g=

5.2.1 Equação de Movimento

A análise começa com a equação do movimento de uma partícula de raioumae densidadeρ

DVD -4- 3 -4-

onde os subscritos designam forças noRdireção, devidoeu, aceleração inercial,b, flutuabilidade

comumente chamada de “equação da centrífuga”. Se as partículas sedimentarem apenas

com a seguinte condição inicial:

(5.2.4)em t=0, R=R0

Esta equação pode ser integrada para dar

As condições de fluxo rastejante são geralmente satisfeitas na sedimentação. Calculando o

TABELA 5.1Velocidades de Decantação calculadas e Número de Reynolds para Bioprodutos de Exemplo

Célula de bactérias 0,5 1.1 1 0,02 6 × 10−8

Ondevcé a velocidade de sedimentação de partículas em uma suspensão concentrada,vé a

TABELA 5.2Valores medidos da densidade de células representativas,

Célula, organela ou biomolécula Densidade,ρ(g/cm3) Ref.

TABELA 5.3Efeito da fração de volume de

partículas φ na velocidade de sedimentação de

partículas para partículas esféricas

5.3 MÉTODOS PARA ANÁLISE DE SEDIMENTAÇÃO

Enquanto os princípios fundamentais da sedimentação são importantes para uma compreensão

5.3.1 Sedimentação de Equilíbrio

OndeQé a vazão devido ao bombeamento ou alimentação por gravidade,V0é o volume

FIGURA 5.2Dois tipos de misturador de gradiente linear.

é a concentração de soluto na câmara não misturada (constante). Por programação Q, pode-se

5.3.2 Coeficiente de Sedimentação

Comparando esta equação com a Equação (5.2.2), vemos que

que definesapenas em termos de propriedades da partícula e do meio. Este coeficiente é

O coeficiente de sedimentação é frequentemente expresso em unidades svedberg, onde 10−13

Aplicação do Coeficiente de SedimentaçãoEm 1974 DE Koppel mediu o coeficiente de

Para determinar o tempo máximo necessário, avaliamosRno curso máximo das

5.3.3 Tempo Equivalente

Para avaliar as propriedades aproximadas de um tipo de partícula a ser separado, às vezes é

onde os subscritos referem-se às centrífugas 1 e 2, respectivamente.

5.3.4 Análise Sigma

Ondevgé a velocidade de sedimentação a 1 ×g, ou seja,

e Σ representa a geometria e a velocidade da centrífuga, conforme derivado na discussão

5.4 CENTRÍFUGAS DE PRODUÇÃO: COMPARAÇÃO

(uma) (b) (c)

(d) (e) (f)

De todas as centrífugas, as do tipo tubular e de disco são provavelmente as mais prováveis de

5.4.1 Centrífuga de Taça Tubular

Sistema Vantagens Desvantagens

(C) Fácil de limpar desnatação especial ou bomba centrípeta

(d) Desmontagem simples da tigela (c) Recuperação de sólidos difícil

até que o espaço de lodo esteja cheio

(c) Bom desaguamento (c) Recuperação de sólidos difícil

(d) Resfriamento da tigela possível

Centrífuga de disco (a) Descarga de sólidos possível (a) Desidratação deficiente

(b) A descarga de líquido sob pressão elimina a (b) Difícil de limpar

(c) Resfriamento da tigela possível

(b) Bom desaguamento (b) Sem descarga de sólidos

(c) Grande capacidade de retenção de sólidos (c) Recuperação de sólidos difícil

umaConsulte a referência [11].

TABELA 5.5capacidades das centrífugas tubulares e de discouma

Diâmetro da tigela Velocidade Máximo adimensional Taxa de transferência

Modelo (milímetros) (rpm) aceleração (G),ω2R/g (litros/min)

Tigela tubular 44 50.000 61.400 0,2–1,0