PUC-Goiás 18 de novembro de 2021

Hibridização

in Situ

Fluorescente
Alunas:
Professor: Hermínio Sobrinho
Giovanna Quirino
Lara Gomes
Vitória Borba
PUC-Goiás 18 de novembro de 2021

1 Histórico

Sumário
2 Metodologia

3 Fatores interferentes

4 Aplicações Clínicas
 FISH: hibridização in situ fluorescente

Histórico Aperfeiçoamento da hibridização in

situ desenvolvida em 1969 por Gall e

Pardeu

Método mais moderno da Patologia

Molecular

Transição da citogenética clássica

para a molecular

Três tipos :
1. Centromérica ou de sequências

repetitivas (
CEP );
2. Locus -
específicas ou de sequência

única (
LSI );
3. Cromossomos inteiros ou pintura

cromossômica (
WCP )
Aplicações : detecção de alteração

genética e associação com

morfologia celular
 Método

Coleta da amostra

Identifica e localiza a sequência alvo de DNA ou RNA

Promove a ligação complementar de sondas na sequência , mas as sondas

são sequências conhecidas de DNA

A sonda é marcada por moléculas fluorescentes ( flurocromos )

As identificações genéticas são obtidas através da observação da luz

emitida

O sistema analisa o comprimento de onda obtido pela luz

Vantagens
Rápido diagnóstico

(
intérfase )
de
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Metodologia sensível e er
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Alta eficácia de úl çã
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hibridização e detecção lt
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Correlação direta entre

aspectos citogenéticos e

morfológicos
Giovanna Quirino

Passo a passo

1)Fixação e permeabilização
da amostra;
2) Hibridização;
3) Lavagem para remoção
das sondas em excesso;
4) Detecção pela
microscopia fluorescente. Fonte:
https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123
456789/18677/1/Dissertacao-
2016%20Mariela%20Sader.pdf
Giovanna Quirino

Interpretação

de resultados

 Cada fluorescência identifica uma única cópia do

cromossomo lócus com sequência de DNA homóloga

Sondas rotuladas de cores diferentes permitem a

interpretação simultânea de múltiplas assinaturas
genéticas, gerando o FISH multicolor

Funções:
1- Identificar as posições dos genes
2-Diagnosticar anormalidades cromossômicas (deleções,
duplicações e translocações)
 Fonte:
http://www.pcs.uem.br/drgenetica/exames/citogeneticos/moleculares/sky

Síndrome de Chacot-Marie-
Tooth
Duplicação de pequena
porção do cromossomo
17
Aparecimento de 3
pontos vermelhos
(normalmente são
apenas 2).
Lara Gomes

Fatores

Interferentes

 Falsos-positivos:

microorganismos ou
substâncias-alvo com

autofluorescência
ou
falta de especificidade
com a sequência de
oligonucleotídeo Falsos-negativos:

condição de baixa

de rRNA
quantidade
disponível para
anelamento

Questões não relacionadas ao

processo em si:

A técnica é despendiosa;
Requer espaço, infraestruturas e equipamento
adequados;
O pessoal deve ser formado e habilitado;
O tempo de padronização pode ser longo.
Lara Gomes

Aplicações na

área médica

Análise de danos cromossomais

Mapeamento genético
Diagnóstico de doenças
- Diagnóstico e prognóstico de neoplasias (padrão ouro
em patologia molecular oncológica)
- Diagnósticos pré-natais e pré implantacionais
Toxicologia molecular
Detecção de micro-organismos
Detecção de genoma viral (HIV, HPV...)
Identificação de novas cepas
Identificação de fungos nos tecidos
Escolha de droga e doses para o paciente

Desafio Futuro!

ização Depende da
id
r vivo eficácia da sonda
fluorescente em
in
b

penetrar células
iH

vivas
1. Neves SMN, Guedes RMC. Hibridização in situ fluorescente: princípios básicos e
perspectivas para o diagnóstico de doenças infecciosas em medicina veterinária. Arq
Inst Biol (Sao Paulo). 2012;79(4):627–32.
2. “Técnica de Hibridização in situ e suas aplicações na rotina diagnóstica”. Disponível
em:
https://www.sbhistotecnologia.bio.br/v2/painel/arquivos2/palestra_00000026_012.p
df
3. Fonte Medicina Diagnóstica. Disponível em:
https://fontemd.com/exames/hibridizacao-in-situ/#tab
4. Departamento de Patologia da UFRJ. Disponível em:
http://patologia.medicina.ufrj.br/index.php/metodos-de-estudo/343-hibridizacao-in-
situ/126-hibridizacao-in-situ
5. Genética Médica e Forense. Disponível em
https://www.geneticamedica.com.br/site/pasta_134_0__prA©-natal-e-perda-
fetal.html
6. Técnicas citogenéticas e moleculares para o diagnóstico de doenças genéticas -
Prof. Dr. Michel Naslavsky. Disponível em:
https://edisciplinas.usp.br/pluginfile.php/4618132/mod_resource/content/1/6-
Tecnicas.pdf
7. https://www.geneticamedica.com.br/site/pasta_133_0__fish.html
8. http://fontemd.com/exames/hibridizacao-in-situ/
9. http://sites.uem.br/drgenetica/exames-1/citogeneticos-1/molecular-
1/fish.
10.https://repositorio.ufsc.br/xmlui/bitstream/handle/123456789/132329/2
0092-CarolinaEFoppa.pdf?sequence=1&isAllowed=y
11. "Hibridização in situ fluorescent: princípios básicos e perspectivas para
diagnóstico de doenças infecciosas em medicina veterinária". Disponívem
em: https://www.scielo.br/j/aib/a/rQfs49x8J3zb8NK5M67sbFb/?
lang=pt&format=pdf
12. Fluorescence In Situ Hybridization (FISH). Disponível em:
https://www.nature.com/scitable/topicpage/fluorescence-in-situ-
hybridization-fish-327
PUC-Goiás 18 de novembro de 2021

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