1307.PPO126 Proteina Bruta - Metodo Kjeldahl Modificado

PROCEDIMENTO PADRÃO DE OPERAÇÃO CÓDIGO: 1307.
PPO126
UNIDADE: RONDONÓPOLIS - MT VERSÃO: 06
ÁREA: Laboratório de Controle de Qualidade DATA: 06/05/2013
PROTEÍNA BRUTA
Página 1 de 9
MÉTODO DE KJELDAHL MODIFICADO
Lista de cópias controladas, sua localização e pessoa responsável:

Número da Cópia Localização Responsável
Original Gestão da Qualidade Supervisor de Qualidade
Cópia 1 Gestão de Qualidade do Laboratório Responsável da Qualidade do Laboratório
Resumo das alterações no procedimento:
DATA ITEM DESCRIÇÃO DA MUDANÇA RESPONSÁVEL

29/06/2005 - Título - Acrescentado tipo de Método de Análise Simoni Lima
- Número de IT - Mudança de numeração de IT
02/05/2009 Todos - Mudança no formato do documento Gisele Silva
- Retirado referência ao método AOCS do
cabeçalho
- Incluído procedimento para padronização do
H2SO4 0,1142
- Descrição dos EPIs necessários no item
recomendações de segurança
- Incluído Verificação do padrão l-cistina, teste em
branco e verificação da eficiência do sistema no
item instrução de trabalho
06/05/2013 Todos - Alterado formato do documento Paula Buono/
- Adaptação para equipamento Tecnal Jackeline Bertinetti
Elaboração: Revisão: Aprovação:

Paula Buono Jackeline Ribeiro Bertinetti Ademar Schreiber
Assinatura: Assinatura: Assinatura:
Salvo autorização específica do Responsável da Qualidade do Laboratório, é proibido qualquer tipo de cópia ou divulgação a terceiros deste
documento.
PROCEDIMENTO PADRÃO DE OPERAÇÃO CÓDIGO: 1307.PPO126
PROTEÍNA BRUTA
Página 2 de 9
SUMÁRIO
1. OBJETIVO
2. CAMPO DE APLICAÇÃO
3. DOCUMENTOS DE REFERÊNCIA E COMPLEMENTARES
4. DEFINIÇÕES, TERMINOLOGIA E SIGLAS
5. EQUIPAMENTOS
6. MATERIAIS E REAGENTES
7. ANÁLISE DE RISCOS
8. VERIFICAÇÃO DO EQUIPAMENTO
9. PROCEDIMENTO
10. EXPRESSÃO DOS RESULTADOS
1. OBJETIVO
Este método determina o teor de nitrogênio total e a proteína como 6,25 vezes o teor de nitrogênio da
amostra.
Este método tem sido avaliado através de estudos interlaboratoriais, comparando os tipos de
catalisadores, e tem sido adotado pelo comitê como o substituto oficial do método com catalisador de óxido
de mercúrio, AOCS Ba 4a-38. Uma avaliação interlaboratorial indicou que o método oficial AOCS Ba 4d-90
(que utiliza a mistura catalítica cobre/titânio) produz resultados mais próximos, em concordância com o
método oficial AOCS Ba 4a-38 (que utiliza catalisador óxido de mercúrio), do que os métodos que utilizam
catalisador sulfato de cobre. Como resultado deste estudo, os métodos Ba 4a-38 (óxido de mercúrio), Ba 4b-
87 (sulfato de cobre) e Ba 4c-87 (kjel-foss automático) foram declarados obsoletos em 1991.
Este método emprega o uso de solução de ácido bórico para coletar o destilado de amônia
empregando o sistema Macro-Kjeldahl, em substituição à convencional solução padrão de ácido. Os
resultados são comparáveis àqueles obtidos utilizando o método AOAC 2.036.
2. CAMPO DE APLICAÇÃO
Aplicável ao fruto de algodão, farelos, massas expandidas e pellets de girassol, soja, amendoim e
linhaça, e semente de girassol.
documento.
PROTEÍNA BRUTA
Página 3 de 9
Este método é utilizado em todas as análises de rotina da ADM.

3. DOCUMENTOS DE REFERÊNCIA E COMPLEMENTARES
3.1. Documentos de referência

 AOCS Ba 4d-90
 CQ.024
 1307.PPO001 – Elaboração, revisão, aprovação, emissão e controle de documentos
3.2. Documentos complementares

 1307.F501 – Relatório de Ensaios – Farelo
 1307.PPO103 – Verificação de balanças do laboratório crushing
4. DEFINIÇÕES, TERMINOLOGIA E SIGLAS
 F – Formulários – gestão e técnicos (planilhas, formulários, tabelas, etc.).

 TLC – software para reporte de resultados Total Lab Client
5. EQUIPAMENTOS
 Equipamento de Digestão e Destilação Macro Kjeldahl.

 Lavador de gases.
 Balança analítica, com sensibilidade 0,0001g.
 Dosimat – titulador automático.
6. MATERIAIS E REAGENTES
 Erlenmeyer – 250 mL.

 Balão de digestão de kjedalhl – 800 mL (Pyrex) ou Tubos Macro de Borossilicato para digestão e
condensadores Tecnal.
 Dispensador para ácido.
 Espátula ou suporte de pesagem.
 Proveta de 100 mL para soda.
documento.
PROTEÍNA BRUTA
Página 4 de 9
 Mistura catalítica (9g).

a) 8,35g sulfato de sódio + 0,3g dióxido de titânio (pedra pome) + 0,005g sulfato de cobre.
 Ácido sulfúrico PA (densidade = 1,84 g/mL).
 Solução de Ácido Sulfúrico 0,1143N.
 Hidróxido de Sódio 50%.
 Solução de Ácido Bórico 2% com indicador.
 Zinco granulado de 3-8 mm.
 L-cistina com elevado grau de pureza
7. ANÁLISE DE RISCOS
POSSÍVEL (s) CAUSA

PERIGO RISCO CONTROLE (s)
(s)
Atenção durante a atividade; uso correto
de EPI's como uso de luva nitrílica;
Ácido Queimadura Contato com a pele, olhos,
presença de equipamentos de segurança
Sulfúrico química inalação ou ingestão.
no local chuveiro e Diphoterine.
Manusear sempre em capela.
Hidróxido de Queimadura Contato com a pele ou Usar luva de procedimento, jaleco, óculos
Sódio química olhos. e botina de segurança.
Irritação
Ácido Bórico moderada aos Contato com os olhos Utilizar óculos de proteção.
olhos
Dor, febre,
náuseas,
vômitos,
Zinco Contato com a pele, olhos, Usar luva de procedimento, jaleco e
doenças
granulado inalação ou ingestão. óculos de segurança.
cardiovasculares
, sintomas
musculares.
Contato com a pele ou Usar luva de procedimento, jaleco, óculos
L-cistina Irritante
olhos. e botina de segurança.
Azul de Usar luva de procedimento, jaleco, óculos
Intoxicação Ingestão
metileno e botina de segurança.
Manusear vidrarias com atenção, não usar
Vidraria Cortes Quebra de vidraria
vidrarias trincadas ou quebradas.
7.1. Recomendações de Segurança

 Executar toda a tarefa com atenção.
documento.
PROTEÍNA BRUTA
Página 5 de 9
 Ao trocar o frasco de ácido sulfúrico concentrado ou soda, utilizar avental de PVC, luva nitrílica de
cano longo e protetor facial.
 Antes de usar o tubo, fazer uma inspeção no frasco para localizar rachaduras e pontos de ruptura. Se
o mesmo apresentar pequenas bolhas no fundo, parede muito fina ou marcas profundas, descartar.
 Ao iniciar a digestão, colocar os tubos no equipamento antes que alcance 150ºC, pois, apesar dos
tubos serem de borossilicato, a alta temperatura pode ocasionar a quebra, gerando cacos de vidro na
presença ácido sulfúrico concentrado.
 Após resfriamento, antes de cristalizar a solução de digestão, adicionar água, diluir bem e deixar
resfriar, só então prosseguir com o método analítico para destilação.
 Sempre utilizar tubos e conexões apropriados para o equipamento, que suportem temperatura e
soluções cáusticas.
 Quando encaixar os tubos para digestão e destilação, sempre utilizar luvas de Kevlar (corte)
associadas com neoprene/látex/nitrílica, tanto antes quanto depois da operação.
 Verificar a vazão da água e lavador de gases.
 Durante a destilação, não usar temperatura máxima, iniciar com temperatura média, e então
aumentar gradativamente.
 A resistência (tanto na digestão como na destilação), quando no máximo, atinge uma temperatura de
600ºC. A 530°C já se tem uma temperatura ideal para se trabalhar com o vidro (modelar). Isto
também colabora para o desgaste do vidro, pois já se tem solução cáustica quente que também vai
corroendo o vidro, diminuindo assim, o tempo de vida do balão e aumentando o risco durante a
destilação.
 Durante a etapa de digestão, ligar o exaustor da capela e lavador de gases.
 Não adicionar soda quando o catalisador estiver sólido, pois pode causar explosão.
 Os resíduos finais, após o final da destilação, devem ser descartados na pia com o auxílio de um
fluxo moderado de água, para descartá-los sem perigo de respingo. Tomar cuidado com esses
resíduos, pois são altamente corrosivos, devido seu alto pH. Importante o uso de máscara com filtros
para vapores e manter sempre o sistema de exaustão ligado.
 Ácido sulfúrico é um ácido forte e pode causar sérias queimaduras. Avental de PVC e luva nitrílica
ou PVC devem ser utilizados ao manipular este ácido. É um agente oxidante e não deve ser
armazenado próximo a materiais orgânicos. Sempre ter extrema cautela ao misturá-lo com água
devido ao calor liberado, que pode causar explosão. Quando diluir o ácido, sempre adicionar ácido à
água, e nunca o contrário.
documento.
PROTEÍNA BRUTA
Página 6 de 9
 Solução de Hidróxido de Sódio – Contato com os olhos pode causar danos permanentes. Causa
queimadura pela exposição a qualquer rota. Corrosivo ao alumínio.
8. VERIFICAÇÃO DO EQUIPAMENTO
8.1. Verificação de balança analítica

Verificar diariamente a balança seguindo o procedimento 1307.PPO103 – Verificação de balanças do
laboratório.
9. PROCEDIMENTO
9.1. Preparo e padronização dos reagentes

 Ácido Sulfúrico 0,1143N: Adicione 5,84 g de ácido sulfúrico concentrado por litro de água destilada.
Pegue 20 mL desta solução e titule contra uma solução de KOH ou NaOH 0,1N, usando de 1 a 3
gotas de uma solução de fenolftaleína a 1% para indicar o ponto final da titulação. Esta titulação
deve consumir entre 22,8 a 22,9 mL. Padronizar solução conforme descrito abaixo:
a) Secar em estufa, em cadinho de platina, o carbonato de sódio (Na 2CO3), por 1hora, a temperatura
de 200 ºC;
b) Após esfriado em dessecador, pesar aproximadamente 0,2423 g de Na 2CO3 e transferir para
erlenmeyer de 125 mL. Dissolver em 50 mL de água destilada;
c) Colocar 3 a 5 gotas de vermelho de metila pH= 4,2 amarelo pH=6,3 e titular com H 2SO4
0,1143N, até a viragem do amarelo para o vermelho;
d) Calcular a normalidade real usando equação abaixo:
mb ×1000
N real=
52 , 995×V a
Onde:
mb= massa de Na2CO3 usada em g
Va = volume de H2SO4 usado na titulação em mL
52,995 = equivalente grama do carbonato
 Hidróxido de Sódio 50%: Pesar 766,5 g de NaOH em lentilhas e completar com água destilada até
1000 mL, a leitura em um aerômetro deve ser igual a 42º baumé ou densidade relativa a 15 ºC de
1,530, se necessário acrescentar mais hidróxido de sódio.
documento.
PROTEÍNA BRUTA
Página 7 de 9
 Solução de Ácido Bórico 2% com indicador: Dissolver 200 g de cristais de ácido bórico em um
béquer de 2 L com água deionizada. Aqueça esta solução para ter certeza de que o ácido foi
totalmente dissolvido. Coloque em um recipiente de 10 litros, adicione 83,5 mL da solução
indicadora indicada abaixo e complete o volume para os 10 litros.
 Solução indicadora para ácido bórico: Dissolver 2 g azul de metileno e 4 g de vermelho de metila em
3 litros de álcool etílico desnaturado.
9.2. Análise da amostra

 Pesar aproximadamente 0,5000 g da amostra (anotar o peso para uso no cálculo) no suporte de
pesagem e transferir para o tubo de digestão. Adicionar 9 g de mistura catalítica e 15 mL de ácido
sulfúrico concentrado, deixando escorrer pelas paredes para arrastar os resíduos de farelo e tomando
o cuidado de envolver toda a amostra. Misturar brandamente para completa homogeneização antes
de iniciar a digestão e conectar os condensadores em cada tubo.
 Ligar o controlador de temperatura e o lavador de gases (Scrubber). Colocar os tubos no
equipamento até temperatura máxima de 150ºC, por motivos de segurança e garantia que não
ocorrerá perda de amostra. Aguardar a temperatura de 420ºC e marcar o tempo de 1:30 horas para
completa digestão. Após esse tempo, aguardar alguns minutos para que a temperatura abaixe e então
retirar os tubos do equipamento e transferir para o suporte. Somente após o total resfriamento, retirar
os condensadores. Acrescentar 90 mL de água destilada, tomando-se o cuidado de escorrer
vagarosamente pelas paredes do tubo e agitar para evitar a cristalização. A reação é exotérmica e o
tubo aquecerá novamente. É necessário aguardar novamente o resfriamento.
 Ligar o destilador de nitrogênio na chave geral, ligar a Caldeira e aguardar o led indicativo de
volume acender. Assim que acender, desligar a chave caldeira.
 Adicionar exatamente 40 mL de solução de ácido bórico 2% em um erlenmeyer de 300 mL. Colocar
no equipamento de destilação com o cano imerso na solução de ácido bórico.
 Conectar o tubo no destilador de nitrogênio, vedar bem utilizando a rosca e adicionar, através do
compartimento de vidro, 50 mL de NaOH 50%. A solução hidróxido de sódio deve ser adicionada
lentamente, fechando a válvula sempre que houver muita turbulência. A reação é extremamente
violenta e devem ser seguidas todas as recomendações de segurança. Somente após todo volume de
hidróxido de sódio adicionado, ligar o aquecimento.
 Destilar até volume total 200 mL no erlenmeyer. Após recolhido o volume estipulado, retirar o
erlenmeyer, lavar com o auxílio de uma pisseta de água destilada o cano que estava submerso na
solução, para arrastar toda solução e desligar o aquecimento. Desconectar o tubo, desligar o
documento.
PROTEÍNA BRUTA
Página 8 de 9
equipamento na chave geral e fazer a limpeza do equipamento passando água destilada por todo o
sistema (compartimento de hidróxido de sódio e condensação). Verificar o nível da caldeira entre
uma análise e outra.
 Titular o destilado com H2SO4 0,1143 N até cor púrpura ou pH = 4,7.
 Uma determinação em branco deve ser feita semanalmente ou sempre que mudar algum reagente. A
performance do método deve ser checada com padrão L-Cistina uma vez por semana (Resultado
deve ficar entre 11,53 e 11,65%).
9.3. Análise do Padrão L-Cistina

 Pesar exatamente 0,2000 ± 0,0005 g de padrão L-cistina no suporte de pesagem e transferir para o
balão de digestão. Adicionar a mistura catalítica e seguir o mesmo procedimento para análise de
proteína de amostras de farelo/grãos.
9.4. Cálculos
( mL gasto−Branco ) × FC × ( 0,1143 ×14 ×100 × 6,25 )
Proteína Bruta , %=
massa da amostra ×1000
( Volume gasto−branco ) × FC
L−cistina, %=
massa cistina ×6,25
L-cistina ≥ 99% de pureza
1 mol L-cistina = 240,30 g
L-cistina_______100% X = 11,65%
28 g N2________X
11,65%________100% X = 11,53%
X_____________99%
Portanto, L-cistina [11,53% a 11,65%]
9.5. Recomendações de Boas Práticas Laboratoriais

 Limpar bem o equipamento de destilação antes e depois do uso, pois incrustações podem ocasionar
erros à análise e danos ao equipamento.
documento.
PROTEÍNA BRUTA
Página 9 de 9
 Fazer um branco semanalmente, onde o valor máximo deverá ser de 0,2%. Conduzir sempre 2
análises em branco, caso o valor entre eles seja muito diferente, analisar em triplicata.
 A circulação da água de resfriamento deve ser controlada. Altas temperaturas impedem a total
condensação dos gases, isso pode ser verificado, através da temperatura do destilado recebido, que
não pode estar quente. Caso isso esteja acontecendo, verificar a temperatura e vazão da água, que
deverá estar em torno de 3L/min.
 Por questões de segurança, evitar a cristalização da amostra antes da destilação.
 O tempo para alcançar a temperatura de 420ºC é de aproximadamente 1 hora.
 Trocar as mangueiras de conexão da caldeira para o destilador sempre que identificar rupturas, pois
se houver furos causará erro nos resultados. Usar mangueiras de silicone.
 Problemas que podem ocorrer na digestão:
a) Quantidade de ácido usado não ser suficiente.
b) A relação ácido/catalisador não ser eficiente.
c) Temperatura abaixo da necessária.
d) Tempo acima do necessário para a digestão, pois se houver excesso de tempo de aquecimento
após a digestão acarretará oxidação da amônia e consequente liberação de nitrogênio molecular
o que não está correto. Portanto, monitorar o tempo de digestão corretamente.
e) Derramamento da água da Caldeira dentro do tubo de digestão. Isso pode ocorrer se elevar muito
o nível da Caldeira e poderá ser corrigido aquecendo o sistema até obter o nível adequado, antes
de colocar a amostra para destilação. Nunca alimentar a Caldeira durante a análise.
10. EXPRESSÃO DOS RESULTADOS
Reportar a proteína como porcentagem arredondado para mais próximo de 0,01 %.

Os resultados devem ser lançados ao final da análise no TLC no perfil “Processamento – Qualidade”.
documento.

1307.PPO126 Proteina Bruta - Metodo Kjeldahl Modificado

Enviado por

Dados do documento

Título original

Direitos autorais

Formatos disponíveis

Compartilhar este documento

Compartilhar ou incorporar documento

Opções de compartilhamento

Você considera este documento útil?

Este conteúdo é inapropriado?

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

1307.PPO126 Proteina Bruta - Metodo Kjeldahl Modificado

Enviado por

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

PROCEDIMENTO PADRÃO DE OPERAÇÃO CÓDIGO: 1307.

Lista de cópias controladas, sua localização e pessoa responsável:

Resumo das alterações no procedimento:

DATA ITEM DESCRIÇÃO DA MUDANÇA RESPONSÁVEL

Elaboração: Revisão: Aprovação:

Este método é utilizado em todas as análises de rotina da ADM.

3.1. Documentos de referência

3.2. Documentos complementares

4. DEFINIÇÕES, TERMINOLOGIA E SIGLAS

 F – Formulários – gestão e técnicos (planilhas, formulários, tabelas, etc.).

 Equipamento de Digestão e Destilação Macro Kjeldahl.

 Erlenmeyer – 250 mL.

 Mistura catalítica (9g).

POSSÍVEL (s) CAUSA

7.1. Recomendações de Segurança

8.1. Verificação de balança analítica

9.1. Preparo e padronização dos reagentes

9.2. Análise da amostra

9.3. Análise do Padrão L-Cistina

Portanto, L-cistina [11,53% a 11,65%]

9.5. Recomendações de Boas Práticas Laboratoriais

10. EXPRESSÃO DOS RESULTADOS

Reportar a proteína como porcentagem arredondado para mais próximo de 0,01 %.

Você também pode gostar