A Paisagem Da Nanomedicina de MRNA

01/03/2023, 14:14 A paisagem da nanomedicina de mRNA | Medicina da Natureza
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artigo de revisão Publicados:10 de novembro de 2022
A paisagem da nanomedicina de mRNA

Xiangang Huang , Na Kong , Xingcai Zhang , Yihai Cao , Robert Langer & Wei Tao
Medicina da Natureza 28 , 2273–2287 ( 2022 )

36k acessos 7 Citações 428 Altmétrico Métricas
Abstrato
O RNA mensageiro (mRNA) é uma classe emergente de agente terapêutico para a prevenção e
tratamento de uma ampla gama de doenças. O recente sucesso das duas vacinas de mRNA
altamente eficazes produzidas pela Moderna e Pfizer-BioNTech para proteger contra a
COVID-19 destaca o enorme potencial da tecnologia de mRNA para revolucionar as ciências
da vida e a pesquisa médica. Os desafios relacionados à estabilidade e imunogenicidade do
mRNA, bem como à entrega in vivo e à capacidade de atravessar múltiplas barreiras
biológicas, foram amplamente abordados pelo progresso recente na engenharia e entrega de
mRNA. Nesta revisão, apresentamos os últimos avanços e inovações no crescente campo da
nanomedicina de mRNA, no contexto da tradução clínica em andamento e direções futuras
para melhorar a eficácia clínica.
Principal
O RNA mensageiro (mRNA) é um transportador transitório que transfere a informação

genética do DNA para os ribossomos, onde essa informação pode ser traduzida em proteínas 1
https://www-nature-com.translate.goog/articles/s41591-022-02061-1?error=cookies_not_supported&code=e739ccc2-be7d-462c-97b6-00b3920… 1/53
. Ao entregar mRNAs que expressam antígenos de doenças infecciosas ou cânceres,

baixar PDFde edição de genes ou proteínas terapêuticas relacionadas a doenças, várias
componentes
aplicações clínicas - incluindo vacinas e terapias de edição de genes e proteínas - podem ser
alcançadas 2 , 3 , 4 . Em 1976, foi demonstrado pela primeira vez que os ácidos nucléicos
podem ser encapsulados e veiculados por minúsculas partículas, neste caso compostas por
polímeros 5 . Embora inicialmente ridicularizado pela comunidade científica 6, 2 anos depois,
ácidos nucleicos exógenos (desta vez na forma de mRNAs) foram entregues por lipossomas e
relatados como capazes de produzir proteínas em células humanas e de camundongos 7 , 8 .
Desde então, os mRNAs demonstraram eficácia terapêutica em vários estudos pré-clínicos,
estabelecendo as bases para o estabelecimento do mRNA como medicamento e vacina 9 , 10 .
No entanto, o caminho para a aplicação bem-sucedida do mRNA como medicamento não foi
direto. Inicialmente, a instabilidade, a imunogenicidade e o alto custo de produção do mRNA
diminuíram substancialmente o entusiasmo das empresas e da comunidade científica em
investir recursos. Encorajadoramente, essas questões foram abordadas gradualmente pelo
rápido desenvolvimento de tecnologias de engenharia de mRNA, incluindo modificação
química 11 , otimização de sequência 12 , 13 e purificação 14 , que se baseou no trabalho de
vários pesquisadores ao longo de várias décadas 15 (Caixa 1). Esses avanços lançaram as bases
para o uso terapêutico do mRNA, mas a tradução clínica requer expressão em células ou
tecidos alvo in vivo. Aproveitando o progresso nos sistemas de entrega de drogas 6 , uma
ampla gama de materiais 16 , 17 - como nanopartículas lipídicas (LNPs) 18 , nanopartículas
poliméricas 19 , 20 e nanopartículas híbridas de lipídio-polímero 21 , 22 , 23 - foram desenvolvidas
para em entrega in vivo, com o objetivo de proteger o mRNA da degradação rápida por
RNases onipresentes e ajudá-lo a atravessar múltiplas barreiras biológicas 9 , 10 , 24. Embora
esse progresso tecnológico tenha possibilitado muitos estudos pré-clínicos e clínicos de drogas
de mRNA nas últimas duas décadas, nenhum nanomedicamento de mRNA (vacinas ou
terapias de mRNA) havia sido aprovado por qualquer autoridade reguladora até muito
recentemente, em 2021.
Desde então, sucessos no desenvolvimento de duas vacinas de mRNA contra o coronavírus

2019 (COVID-19) (Moderna mRNA-1273 e Pfizer/BioNTech BNT162b2) 25 , 26 , 27 , 28 ,
29alimentou um interesse de pesquisa renovado e intenso em engenharia e entrega de mRNA,
oferecendo a promessa de tradução clínica de várias terapias baseadas em mRNA. Aqui,
fornecemos uma visão geral do campo dos nanomedicamentos de mRNA. Discutimos os

baixartécnicos
desafios PDF das terapias baseadas em mRNA e os vinculamos a mecanismos biológicos e
resultados clínicos. Além disso, destacamos as recentes inovações e avanços na engenharia de

mRNA e métodos de entrega que aceleraram a tradução clínica de terapias de mRNA para
vários distúrbios, incluindo doenças infecciosas, cânceres e doenças hereditárias.
Quadro 1 Principais avanços no desenvolvimento da terapêutica com mRNA

1961
Mostre mais
Desafios em relação ao uso clínico do mRNA
O uso clínico de mRNA para fins terapêuticos requer tradução suficiente de mRNA nas células
de interesse sem causar respostas imunes indesejadas. No entanto, atingir esse objetivo requer
a superação de várias barreiras envolvendo a síntese e entrega de mRNA em contextos
extracelulares e intracelulares 9 , 24 . O mRNA terapêutico é sintetizado via transcrição in vitro
(IVT) em um sistema livre de células usando um modelo de DNA linear gerado a partir de um
plasmídeo ou PCR e polimerase de RNA T7, T3 ou SP6 (ref. 30) ( Fig . 1a). O mRNA é então
purificado usando métodos convencionais de purificação em escala laboratorial para ácidos
nucléicos (por exemplo, precipitação em etanol). No entanto, esses métodos muitas vezes
falham na remoção de impurezas, como RNA de fita dupla e fragmentos de RNA, que
reduzem a eficácia terapêutica e causam respostas biológicas indesejadas no uso clínico 31 .
Após administração local ou sistêmica, o mRNA pode ser rapidamente degradado pelas
nucleases abundantes no espaço extracelular, removido por fagocitose de macrófagos ou
eliminado por filtração renal 24 , 32 , 33 (Fig. 1b). Nesse ínterim, o mRNA é um grande
polinucleotídeo de cadeia simples, muito carregado negativamente, que é difícil de passar
através das membranas celulares carregadas negativamente. De fato, apenas 0,01% dos
mRNAs extravasados dos vasos sanguíneos podem entrar nas células-alvo 2 , onde a maioria
dos mRNAs são aprisionados nos endossomos e posteriormente degradados (Fig. 1c ).
Eventualmente, uma fração dos mRNAs internalizados escapa dos endossomos e atinge os
ribossomos para tradução de proteínas terapêuticas.
Fig. 1: Desafios no uso clínico do mRNA.

baixar PDF
a , O mRNA terapêutico é sintetizado in vitro usando um molde de DNA linear e polimerase

de RNA (T7), seguido de purificação; contém um cap 5', um 5' UTR, um ORF que codifica a
proteína de interesse, um 3' UTR e uma cauda poli(A). b , Após entrega local ou sistêmica, os
mRNAs enfrentam vários desafios extracelulares, incluindo degradação rápida pelas
nucleases abundantes no espaço extracelular, remoção por fagocitose de macrófagos e
eliminação por filtração renal. c, Uma fração dos mRNAs extravasados dos vasos sanguíneos
pode ser internalizada pelas células. A maioria desses mRNAs internalizados fica presa em
endossomos e pode ser detectada por sensores de RNA endossomal e citosólico, o que
acaba reduzindo a tradução e a estabilidade do mRNA. Um cap 5' otimizado pode melhorar
a eficácia de ligação dos mRNAs citoplasmáticos aos ribossomos, eventualmente
aumentando a eficácia da tradução do mRNA. O escape endossômico de mRNA nu e não
modificado é desafiador, mas pode ser aprimorado usando transportadores de mRNA. Os
sensores de RNA endossomal incluem TLR3 (ref. 208 ), TLR7 (ref. 209 ) e TLR8 (refs. 210 , 211 ).
Os sensores de RNA citosólico incluem a proteína 2 contendo domínio de oligomerização de
ligação a nucleotídeos (NOD2) 18, proteína associada à diferenciação de melanoma 5
(MDA5) 212 , gene I induzível por ácido retinóico (RIG-I) 213 , 214 e domínio de ligação a
nucleotídeos contendo repetição rica em leucina família contendo domínio pirina 3 (NLRP3)
18baixar PDF
. dsRNA, RNA de cadeia dupla; hemácias, glóbulos vermelhos; ssRNA, RNA de fita simples.
O potencial imunoestimulatório do mRNA exógeno é outro grande obstáculo para a tradução

clínica 15 , 18 (Fig. 1c ). O mRNA exógeno pode ser detectado por receptores de
reconhecimento de padrão (PRRs) que desempenham um papel crucial na resposta aos RNAs
virais, induzindo a estimulação imune 34 . Após a endocitose, os mRNAs podem ser detectados
por sensores endossomais denominados receptores semelhantes a Toll (TLRs) 35 , a principal
família de PRRs expressos principalmente, mas não exclusivamente, por células imunes. Os
mRNAs que escapam dos endossomos podem ser detectados por vários PRRs citosólicos. A
estimulação desses PRRs eventualmente resulta na produção de interferons tipo I (IFNs) e
outras citocinas pró-inflamatórias 36. Esses IFNs secretados ligam-se aos seus receptores na
célula estimulada e nas células adjacentes, ativando a via JAK-STAT, que desencadeia a
transcrição de mais de 300 genes estimulados por IFN. Entre eles, o RNA da proteína quinase
induzível por IFN (PKR) pode suprimir a atividade do fator de iniciação do iniciador da
tradução 2, levando à inibição da tradução do mRNA 37 , 38 e das 2'-5'-oligoadenilato sintetases
39
e da adenosina desaminase específica do RNA 40 pode reduzir a estabilidade dos mRNAs.
Como todos esses desafios limitaram substancialmente o uso clínico do mRNA, são
necessários avanços nas tecnologias relacionadas ao mRNA para enfrentar esses desafios antes
que todo o potencial terapêutico dos mRNAs possa ser liberado.
Projeto de mRNAs e seus veículos de entrega
Avanços rápidos no campo da engenharia de mRNA e entrega de mRNA não viral forneceram
várias soluções para os desafios relacionados ao uso clínico de mRNA. Por exemplo,
problemas com a traduzibilidade, estabilidade e imunoestimulação do mRNA podem ser
resolvidos com a introdução de designs inovadores de mRNA. Além disso, os veículos de
entrega de mRNA podem abordar pelo menos alguns dos desafios da entrega de mRNA. O
design racional dos veículos de entrega de mRNA requer que eles protejam os mRNAs da
degradação por nucleases, atravessem várias barreiras biológicas e entreguem mRNAs de
forma eficiente no citoplasma para expressão robusta de proteínas.
Projeto de mRNAs
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IVT mRNAs are structurally similar to naturally occurring mature eukaryotic mRNAs, which
consist of five major domains: a 5′ cap, a 5′ untranslated region (UTR), an open reading frame
(ORF) encoding the protein of interest, a 3′ UTR and a poly(A) tail. The translation and
stability of mRNAs can benefit from UTR optimization. UTR sequences from highly
expressed genes, such as human β-globin41, are widely used for mRNA synthesis since
mRNAs containing these UTRs normally show high levels of translation and stability.
Furthermore, improved expression of mRNAs can be achieved by identifying novel UTR
sequences using high-throughput screening methods42,43 or deep learning approaches44.
Although many 5′ or 3′ UTRs can independently enhance mRNA translation, a rational
combination of 5′ and 3′ UTRs can maximize the translation efficiency45. Also, poly(A) tails
with lengths of 100–150 nucleotides can improve the stability of mRNAs and efficiently
initiate translation by forming complexes with poly(A) binding proteins46,47,48.
Uma das estratégias mais eficazes para anular a imunoestimulação por mRNAs de IVT é a
modificação de nucleosídeos. Em comparação com mRNAs não modificados, a incorporação
de nucleosídeos modificados de ocorrência natural — como pseudouridina (ψ),
5‑metilcitidina, N 6 ‑metiladenosina, 5‑metiluridina e 2‑tiouridina — reduz a produção de
citocinas 11 , 49 , 50 impedindo o reconhecimento por humanos TLRs. Mecanicamente, a
tradução melhorada e a estabilidade dos mRNAs incorporados em ψ são atribuídas à ativação
diminuída de PKR 38 e 2'-5'-oligoadenilato sintetases 51. Ao invés de substituir os nucleosídeos
originais por alguns tipos de nucleosídeos modificados, a substituição simultânea de
nucleosídeos parciais por 2‑tiouridina e 5‑metilcitidina suprime substancialmente a ativação de
TLRs e RIG-1 (outro PRR) tanto in vitro quanto in vivo 52 . Além disso, o nucleosídeo
modificado N 1 -metilpseudouridina 53 demonstrou ter menor citotoxicidade e capacidade de
imunoestimulação 54em comparação com ψ. Vale a pena notar que ambas as vacinas de mRNA
da Moderna e da Pfizer-BioNTech usam mRNAs modificados por nucleosídeos para evitar
respostas imunes não intencionais. Outra estratégia para reduzir a imunoestimulação por
mRNAs de IVT é a purificação aprimorada de mRNA. Os mRNAs de IVT purificados por
cromatografia líquida de alta eficiência, livres de contaminantes de RNA de fita dupla,
apresentam expressão proteica 10 a 1.000 vezes maior em células primárias do que mRNA não
purificado, sem induzir a produção de IFNs ou citocinas inflamatórias 14 . Embora a
purificação por cromatografia líquida de alto desempenho seja amplamente utilizada para a
produção de mRNA, um método de purificação baseado em celulose simples, rápido e

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econômico fornece uma alternativa para a produção de mRNA de IVT altamente puro 55 .
O design cap 5' fornece outro método para reduzir respostas imunológicas indesejadas
provocadas por mRNAs. O cap 5' natural eucariótico (cap-0) é uma 7-metilguaniosina (m7G)
ligada ao primeiro nucleotídeo localizado na extremidade 5' do mRNA através de uma ponte
5'-5'-trifosfato (m7GpppN) 56 . Cap-0 inibe estericamente a degradação de mRNAs por
nucleases e inicia a tradução através da ligação ao fator de iniciação da tradução eucariótica
4E 56 . Em comparação com cap-0, dois caps 5' adicionais (cap-1 e cap-2), contendo um grupo
metil adicional na hidroxila 2' da ribose do primeiro e segundo nucleotídeos, são mais
amplamente utilizados na síntese de mRNA devido a seu menor potencial imunoestimulatório
57
. Atualmente, mRNAs com estrutura cap-1 podem ser convenientemente fabricados usando
um método de capping cotranscricional ( https://www.trilinkbiotech.com/cleancap ), exibindo
imunoestimulação mínima e eficiência de tradução satisfatória. Além disso, a estabilidade e a
tradução de mRNAs podem ser aprimoradas simultaneamente por uma plataforma
computacional experimental 58 , enquanto a tradução e a imunoestimulação podem ser
moduladas por modificações quimioenzimáticas 59 , 60 .
Veículos de entrega de RNA mensageiro

A tradução clínica rápida de vacinas ou terapias baseadas em mRNA beneficiou do
desenvolvimento de veículos de entrega para proteger e entregar as moléculas de mRNA
altamente instáveis. Atualmente, os principais sistemas de entrega de mRNA são
nanopartículas à base de lipídios, nanopartículas à base de polímeros e nanopartículas híbridas
de lipídio-polímero.
Nanopartículas à base de lipídeos

As nanopartículas de base lipídica são os veículos mais intensamente estudados e clinicamente
avançados para a entrega de mRNA 3 , 9 , 61 . Os mais amplamente utilizados são LNPs 62
catiônicos e ionizáveis , que normalmente contêm um lipídio catiônico ou ionizável,
colesterol, um fosfolipídio auxiliar e um lipídio PEGuilado (Fig. 2a ). Os lipídios catiônicos,
como DOTMA 63 ou DOTAP 64 , contendo grupos de amônio quaternário, permanecem
carregados positivamente de maneira independente do pH. Este ambiente catiônico permite a
condensação eficiente de mRNAs carregados negativamente, tornando os sistemas baseados
em lipídios catiônicos os sistemas mais amplamente usados para entrega de mRNA em estudos
baixar
clínicos PDF 65. Embora as nanopartículas à base de lipídios catiônicos que codificam
iniciais
antígenos tumorais compartilhados ou autoantígenos relacionados à doença tenham se
mostrado promissoras na imunoterapia do câncer 66 e no tratamento da encefalomielite
autoimune experimental 67 , sua citotoxicidade potencial 68 e tempo de circulação sanguínea
relativamente curto 69 impediram sua tradução clínica. Para resolver esses problemas, PEGs
lipídicos foram empregados e uma variedade de novos lipídios ionizáveis foi desenvolvida. Ao
contrário dos lipídios catiônicos, que possuem cargas positivas permanentes, os lipídios
ionizáveis permanecem neutros em pH fisiológico, mas podem ser protonados em pH ácido 70.
A neutralidade de lipídios ionizáveis em fluidos fisiológicos reduz a toxicidade e, até certo
ponto, aumenta a meia-vida de circulação de LNPs ionizáveis. Além disso, a protonação de
lipídios ionizáveis em pH ácido não apenas permite a conveniente condensação e
encapsulamento de mRNAs em tampão ácido, mas também facilita o escape de mRNAs dos
endossomos ácidos 48 . A camada de PEG introduzida pelos lipídios-PEGs melhora
amplamente a meia-vida de circulação de nanopartículas à base de lipídios ionizáveis e reduz a
agregação de nanopartículas, além de reduzir interações desfavoráveis com proteínas séricas 71
.
Fig. 2: veículos de entrega de mRNA.
baixar PDF
a , LNPs geralmente consistem em quatro componentes básicos: um lipídio PEGilado, um

lipídio auxiliar, colesterol e um lipídio catiônico ou ionizável. Os lipídios ionizáveis
determinam em grande parte as funções e a eficácia das LNPs. DSPC,
diestearoilfosfatidilcolina. PEG-DMG, 1,2-dimiristoil-rac-glicero-3-metoxipolietileno glicol. b ,
As nanopartículas híbridas de lipídio-polímero normalmente contêm um lipídio catiônico ou
ionizável, um lipídio PEGuilado e um polímero auxiliar. Em alguns casos, o lipídio catiônico
ou ionizável e o polímero auxiliar são substituídos por um lipídio auxiliar e um polímero

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catiônico. PDSA, poli(amida dissulfeto). PEG-DSPE, 1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-
fosfoetanolamina-N-metoxi(polietileno glicol); PEG-DMPE, 1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-
fosfoetanolamina-N-metoxi(polietileno glicol). c, As nanopartículas poliméricas consistem
simplesmente em polímeros catiônicos.
O desenvolvimento de nanopartículas à base de lipídios ionizáveis para entrega de mRNA

beneficiou-se, em grande medida, de estudos ao longo de décadas sobre nanopartículas à base
de lipídios ionizáveis para a entrega de pequenos RNAs interferentes (siRNAs), que permitem
o silenciamento direcionado de mRNAs endógenos. Por exemplo, DLin-MC3-DMA (MC3) 72
, 73 é um lipídio ionizável projetado para o primeiro fármaco siRNA aprovado pela Food and
Drug Administration dos EUA, patisiran 74 , que trata a amiloidose hereditária mediada por
transtirretina. Ao otimizar os parâmetros dessas formulações, como a proporção de RNA para
lipídios totais e a proporção da solução aquosa para solvente orgânico (etanol), as LNPs
baseadas em MC3 têm sido usadas no desenvolvimento de várias terapias baseadas em
mRNA, incluindo vacinas contra zika vírus75 , 76 , 77 , vírus da imunodeficiência humana 78 e
doença de Lyme 79 , além de tratamentos para fibrose cística 80 e linfedema 81 . Uma limitação
do MC3 é sua baixa degradabilidade, que pode resultar em problemas de toxicidade quando a
dosagem repetida é necessária. Para enfrentar esse desafio, bem como aumentar ainda mais a
eficácia do MC3, a Moderna desenvolveu um lipídio biodegradável chamado lipídio 5 (ref. 82
), que contém ésteres primários e mais caudas ramificadas do que o MC3. De fato, a
administração sistêmica e local repetida de LNPs de mRNA à base de lipídio 5 aliviou a
porfiria intermitente aguda 83 e alcançou imunidade anticancerígena durável84 em modelos
animais sem qualquer toxicidade óbvia.
Além do MC3, vários outros lipídios ionizáveis inicialmente desenvolvidos para entrega de
siRNA, como cKK-E12 (refs. 85 , 86 ) e C12-200 (ref. 87 ), também foram reformulados para
entregar mRNAs ao fígado para edição de genes e reposição proteica. No entanto, a entrega de
mRNAs terapêuticos a tecidos não hepáticos por essas LNPs é difícil devido ao seu acúmulo
seletivo nos fígados - um fenômeno provavelmente determinado pelas propriedades ionizáveis
desses lipídios. Enquanto isso, toxicidade hepática óbvia foi observada quando LNPs baseados
em cKK-E12 foram administrados em uma dose de mRNA de 2,25 mg kg- 1 ou superior 88. A
exploração intensiva da nova geração de lipídios ionizáveis acabou levando à criação do
lipídio H/SM-102 (refs. 89 , 90 ) e do lipídeo ALC-0315 (ref. 91 ), resultando no rápido

baixar PDF dos dois eficazes 19 vacinas de mRNA. Os perfis de segurança favoráveis
desenvolvimento
dessas vacinas são provavelmente atribuídos à biodegradabilidade dos lipídios. Além disso, a
Intellia alcançou uma edição robusta e persistente de genes in vivo em modelos animais
usando outro LNP baseado em lipídio biodegradável (LP01) transportando Cas9 mRNA e guia
RNA 92. Comparado com lipídios não biodegradáveis, o LP01 biodegradável tem menos
bioacumulação hepática e menos riscos de segurança. Embora os lipídios ionizáveis
indubitavelmente desempenhem um papel fundamental na atividade das LNPs, outros
componentes também são importantes. Os lipídios auxiliares podem promover o escape
endossomal de LNPs ajustando sua fluidez, consequentemente aumentando sua eficácia 93 ,
enquanto o colesterol desempenha um papel importante na estabilidade de LNP.
Nanopartículas híbridas lipídio-polímero

Outro tipo de nanopartícula é a nanopartícula híbrida lipídio-polímero, que normalmente inclui
um lipídio ionizável (ou às vezes catiônico), um polímero hidrofóbico e um lipídio PEGilado
22 , 94 , 95
(Fig. 2b ). Essas nanopartículas têm sido usadas para restaurar eficientemente o
supressor de tumor PTEN e suprimir o crescimento do tumor em vários modelos de câncer de
próstata em camundongos 22 . Nesta plataforma, um polímero auxiliar hidrofóbico poli(ácido
láctico-co-glicólico) (PLGA) substitui o lipídeo auxiliar e o colesterol das LNPs.
Notavelmente, esta plataforma exibe excelente estabilidade sérica 96, o que provavelmente
pode ser atribuído à forte interação hidrofóbica entre o polímero e os lipídios, tornando-o ideal
para a entrega sistêmica de mRNAs terapêuticos aos tumores. A substituição do polímero
auxiliar PLGA por um polímero responsivo a redox poli(amida dissulfeto) resultou em uma
plataforma responsiva a redox para entrega sistêmica do mRNA do supressor tumoral p53 ,
alcançando supressão tumoral eficiente em modelos pré-clínicos 21 . O lipídio PEGilado PEG-
DMPE também foi adicionado para melhorar a eficácia da plataforma. Além disso,
simplesmente alterando ou funcionalizando os terminais de lipídios-PEGs revestidos na
superfície do núcleo polimérico, a entrega local ou entrega específica do órgão pode ser
facilmente alcançada. Por exemplo, usando DSPE-PEG-NH 2ou DSPE-PEG-SH,
nanopartículas mucoadesivas de mRNA podem ser geradas para entrega intravesical de
mRNAs para regular positivamente proteínas em tecidos de bexiga de camundongos in situ 23
e também podem ser usadas para regular positivamente proteínas-alvo para várias outras
aplicações em órgãos mucosos in situ. Outras nanopartículas híbridas lipídicas e poliméricas
também foram desenvolvidas recentemente para entrega efetiva de mRNA e testadas em

baixarpré-clínicos
modelos PDF 97 , 98 , 99 , 100
.
Nanopartículas à base de polímero

As nanopartículas poliméricas consistem simplesmente em polímeros catiônicos (Fig. 2c ). Os
primeiros estudos se concentraram no uso de polietilenonimina ou poli- L -lisina para a entrega
de ácido nucleico. No entanto, a toxicidade notável de polietilenonimina e poli- L -lisina (estes
polímeros altamente carregados positivamente podem facilmente interagir com componentes
celulares carregados negativamente, inibindo o processo celular normal) limitou sua aplicação
na entrega de mRNA 101 . Para resolver esse problema, uma série de poli(β-aminoésteres)
biodegradáveis (PBAEs) 102 , 103 foi sintetizada. Por exemplo, nanopartículas baseadas em
PBAE foram usadas para entrega in vivo de mRNAs funcionais para células T circulantes 104e
tecidos múltiplos 105 . Além disso, um PBAE hiperramificado (hPBAE) foi preparado para
entrega direta de mRNAs ao pulmão por inalação 19 . Outro polímero promissor para entrega
de mRNA é o transportador liberável de alteração de carga (CART) 33 , 106. Ao contrário dos
polímeros catiônicos tradicionais, os CARTs podem liberar sua carga de mRNA no citoplasma
por meio de um mecanismo único. As cargas positivas iniciais do oligo(α-amino éster) podem
efetivamente condensar e encapsular mRNA e entregá-lo às células, através das quais os
CARTs sofrem um rearranjo intramolecular degradativo e neutralizador de carga, levando à
liberação rápida de mRNAs funcionais. Essa característica única resultou no uso de CARTs
para entrega in vivo de mRNA para linfócitos 107 , o que poderia permitir estratégias de
tratamento para uma ampla variedade de doenças - por exemplo, estimulando efetivamente
respostas imunes contra tumores 108 e coronavírus da síndrome respiratória aguda grave 2 (
SARS-CoV‑2) 109 .
Inovações recentes promissoras
As inovações na engenharia e entrega de mRNA foram impulsionadas pelo desenvolvimento

bem-sucedido das vacinas de mRNA da COVID-19. Essas novas tecnologias podem
potencialmente produzir mRNAs de próxima geração com maior estabilidade e expressão mais
robusta, o que poderia permitir a aplicação de mRNAs nos campos da terapia de proteínas e
edição de genes (geralmente exigindo expressão de mRNA mais alta e sustentada do que as
vacinas de mRNA). Além disso, as inovações na entrega de mRNA podem aumentar muito a
baixar PDF
eficiência de entrega in vivo de mRNAs em várias aplicações. Essas inovações devem
promover ainda mais a tradução clínica de diferentes terapias de mRNA.
Inovações na engenharia de mRNA mRNA auto-amplificador

O mRNA auto-amplificador contém um replicon baseado em alfavírus que pode amplificar a
expressão de proteínas codificadas e, portanto, requer uma dosagem muito menor do que os
mRNAs convencionais na maioria das aplicações 110 , 111 . A incorporação de genes de replicon
adicionais torna o tamanho dos mRNAs auto-amplificadores maiores do que os mRNAs
convencionais. Assim, as formulações usadas para mRNAs convencionais podem precisar ser
ainda mais otimizadas para os mRNAs auto-amplificadores de tamanho maior 111 , 112 .
Embora a modificação de nucleosídeos seja amplamente usada em terapias baseadas em
mRNA atualmente aprovadas ou atualmente investigadas, os mRNAs auto-amplificadores não
podem conter essas modificações porque podem interferir no processo de auto-amplificação
113. As vacinas SARS-CoV-2 baseadas em mRNA de autoamplificação já demonstraram sua
capacidade de induzir altos títulos de anticorpos neutralizantes em animais 114 e vários
candidatos estão atualmente sendo testados em ensaios clínicos 48 . Eles têm potencial para
serem usados em doses mais baixas (1–10 µg) do que os mRNAs convencionais (30–100 µg)
em vacinas contra COVID-19 113 .
ARN circular
Conforme discutido, a estabilidade dos mRNAs pode ser substancialmente melhorada por
meio da modificação de nucleosídeos e otimização de regiões codificantes e não codificantes.
Alternativamente, a estabilidade melhorada pode ser alcançada por circularização. ARNs
circulares (circRNAs)—ARNs de cadeia simples com uma estrutura de anel fechado gerada
através de backsplicing—são uma classe de ARNs não codificantes com funções biológicas
potencialmente amplas 115 , 116 . Estudos recentes revelaram que a função de codificação de
proteínas de alguns circRNAs 117 , 118 , 119é uma grande promessa para aplicações de tradução
de proteínas. A estrutura única de anel fechado permite maior estabilidade de circRNAs em
comparação com mRNAs lineares, devido à falta de motivos finais necessários para a
degradação mediada por exonuclease 120 . De fato, um estudo pioneiro mostrou que um
circRNA construído usando um íntron de auto-splicing exibiu expressão de proteína robusta e
estável em células eucarióticas 121 . A auto-circularização do precursor de RNA linear
eventualmente resulta em circRNAs contendo um local interno de entrada ribossômica (IRES)

parabaixar PDFa expressão de proteínas 121 , 122 (Fig. 3a). Além da estabilidade aprimorada, os
conduzir
circRNAs induzem muito menos respostas imunes indesejáveis do que os mRNAs lineares não
modificados, uma vez que não ativam sensores de RNA, como TLRs e gene-I induzível por
ácido retinóico 123 . Uma vacina de circRNA provocou um nível mais alto de anticorpos
neutralizantes do que uma vacina de mRNA linear, demonstrando grande eficácia protetora
contra SARS-CoV-2 e suas variantes emergentes em camundongos e macacos rhesus 124 .
Mais recentemente, circRNAs contendo cinco elementos-chave, incluindo topologia vetorial,
UTRs 5' e 3', IRESs e aptâmeros sintéticos, foram construídos 125 , e a otimização simultânea
desses elementos resultou em maiores rendimentos de proteína circRNA 125. Além disso,
várias empresas estão explorando outras variações de circRNAs, como IRESs otimizados (Fig.
3b ).
Fig. 3: Inovações na engenharia e entrega de mRNA.
a , A autocircularização do precursor de RNA linear é iniciada pela ribozima de circularização,

resultando nos intermediários de RNA. A emenda de RNA subsequente produz o circRNA
final altamente estável contendo um IRES para dirigir a expressão da proteína. b , Um RNA
infinito desenvolvido por Laronde poderia ter uma tradução de proteína duradoura usando
baixar
um IRESPDF
otimizado. c , A plataforma de partícula semelhante a vírus PEG10 ou nanopartícula
PEG10 consiste em uma proteína PEG10 para empacotamento de mRNA e fusogênio
sincitina A (SYNA) para direcionamento celular. d , Uma nova plataforma de veículo
proteolipídico fusogenix (PLV) compreendendo lipídios neutros e pequena proteína
transmembranar associada à fusão patenteada permite a distribuição direta de mRNA
citosólico. e, Uma plataforma de nanopartículas SORT preparada pela adição de uma
molécula SORT suplementar de lipídio catiônico, aniônico ou ionizável a um sistema LNP
convencional permite a entrega seletiva de mRNAs ao pulmão, baço ou fígado,
respectivamente.
Inovações na entrega de mRNA Novos sistemas de entrega de mRNA

Embora os LNPs sejam os sistemas mais avançados clinicamente e amplamente utilizados para
entrega de mRNA, muitos outros sistemas não LNP também têm grande potencial para entrega
de mRNA. A proteína semelhante a retrovírus PEG10 pode se ligar seletivamente e promover
a secreção vesicular de seus próprios mRNAs. Com base nisso, uma plataforma de partícula
semelhante a vírus PEG10 (VLP), desenvolvida inserindo genes de interesse (o modelo de
DNA do mRNA) no gene Peg10 , realizou uma potente edição de genes por meio da entrega
de ferramentas de edição de genes nas células 126 (Fig. 3c). Uma grande vantagem da
plataforma PEG10-VLP é sua imunoestimulação e toxicidade mínimas, dado o fato de que a
plataforma é construída usando proteínas humanas endógenas. Conforme discutido, o escape
endossômico de mRNAs é um grande desafio para a entrega de mRNA e o uso de lipídios
ionizáveis pode melhorar isso, mas uma estratégia alternativa é entregar mRNAs diretamente
no citoplasma. Para esse fim, a Entos Pharmaceuticals desenvolveu uma plataforma de veículo
proteolipídico fusogenix 127 usando lipídios neutros de baixa toxicidade e pequenas proteínas
transmembrana associadas à fusão proprietárias 128 . As pequenas proteínas transmembrana
associadas à fusão podem facilitar a fusão rápida do veículo proteolipídico e da membrana
celular, permitindo a entrega direta de cargas (por exemplo, mRNAs) no citoplasma (Fig.3d ).
Da mesma forma, um coacervato responsivo a pH e redox formado por um peptídeo de
separação de fase conseguiu entrega citosólica direta de mRNAs para células e liberação
redox-ativada de mRNAs, contornando as vias endocíticas clássicas 129 .
Juntamente com essas novas plataformas, as inovações continuam a produzir LNPs mais
baixarcom
potentes PDFmúltiplas funções, incluindo entrega aprimorada. LNPs contendo lipídios
heterocíclicos, identificados usando uma biblioteca combinatória, não apenas entregam

efetivamente mRNAs de antígeno a tumores de camundongos, mas também promovem a
maturação de células apresentadoras de antígenos por meio da via do estimulador de genes de
interferon (STING), aumentando sinergicamente a eficácia antitumoral 130 . A eficácia das
LNPs pode ser melhorada pela introdução de lipídios insaturados 131 ou lipídios alquinos 88 ,
enquanto a modificação de LNPs com um grupo tiol 23 ou grupo bisfosfato 132permite a
entrega direcionada de mRNAs para muco ou osso. Além disso, um dendrímero Janus
anfifílico ionizável de um componente permitiu a entrega eficiente de mRNAs para diferentes
órgãos, mantendo a promessa de simplificação do atual sistema LNP de quatro componentes
133 , 134 .
Veículos baseados em membrana biológica para entrega de mRNA

Os veículos baseados em membranas biológicas representam outra nova plataforma
biocompatível para entrega de mRNA. Tipos distintos de sistemas baseados em membrana
biológica, incluindo vesículas de membrana celular 135 , vesículas de membrana externa
derivadas de bactérias 136 e vesículas extracelulares 137 (por exemplo, exossomos 138 ), têm
sido empregados para entrega in vitro e in vivo de mRNAs terapêuticos. Como um tipo de
vesícula extracelular em nanoescala, os exossomos têm sido amplamente investigados como
transportadores para a entrega de drogas 139 , 140 . Por exemplo, a Codiak BioSciences lançou o
teste em humanos de uma terapêutica baseada em exossomas, chamada exoSTING, para o
tratamento de tumores sólidos ( NCT04592484). Em um estudo pré-clínico, as vacinas de
mRNA baseadas em exossomos induziram respostas robustas de imunoglobulina G e IgA
secretora em camundongos, que foram mais fortes do que aquelas induzidas por vacinas
baseadas em lipossomas 141 . Assim, exossomos biocompatíveis podem representar uma
plataforma promissora para entrega de mRNA 142 . Um grande desafio do uso clínico das
atuais LNPs de mRNA para terapias de reposição de proteínas é a potencial toxicidade causada
por administrações repetidas durante um curto período. No entanto, as vesículas biológicas são
menos imunogênicas e tóxicas do que a maioria das plataformas existentes, tornando-as
particularmente úteis para dosagem repetida de mRNA em ensaios clínicos.
Entrega de mRNA específica de órgão ou célula

A maioria das nanopartículas se acumula preferencialmente no fígado após injeção intravenosa

baixar
88 , 143 , 144PDF
. Assim, a entrega direcionada de mRNAs a tecidos não hepáticos ampliará
consideravelmente as aplicações das terapias de mRNA. Para esse fim, uma plataforma de
nanopartículas de direcionamento seletivo de órgãos (SORT) foi desenvolvida para a entrega
de mRNA específica de tecido 145 . Ao adicionar uma molécula SORT suplementar de lipídio
catiônico, aniônico ou ionizável ao sistema LNP de quatro componentes amplamente utilizado,
foi alcançada a entrega seletiva de mRNAs ao pulmão, baço ou fígado de camundongos
(respectivamente), permitindo a edição efetiva do gene CRISPR-Cas9 (Fig. .3e _). Uma nova
versão da plataforma de nanopartículas SORT contendo um fosfolipídio ionizável
desestabilizador de membrana melhorou ainda mais a eficiência de entrega de mRNA 146 . Um
estudo mecanicista revelou que a ligação de proteínas específicas à superfície das
nanopartículas permite seu acúmulo seletivo em diferentes tecidos 147 . Também é importante
notar que, embora o desenvolvimento e a otimização de novas nanoformulações para a entrega
de mRNA em órgãos específicos por meio de injeção intravenosa sejam significativos, alterar
as vias de administração pode ser uma solução mais prática em alguns contextos. Por exemplo,
vias alternativas de administração incluem entrega intravesical de nanopartículas de mRNA
para atingir locais específicos da bexiga 23, entrega oral de mRNA por meio de pílulas
robóticas para atingir locais do trato gastrointestinal 148 e entrega inalada de nanopartículas de
mRNA para atingir locais específicos do pulmão.
Além de direcionar órgãos, a entrega seletiva de mRNAs para tipos de células específicos
permite terapias mais precisas e eficientes. Uma estratégia para a entrega de mRNA específico
do tipo de célula é desenvolver LNPs ou nanopartículas poliméricas com formulações
otimizadas para o tipo de célula alvo específico. Por exemplo, bem otimizados 149 , 150 ,
biomiméticos 151 e 152 LNPs e polímeros 104 , 108 baseados em imidazol foram usados para a
entrega direcionada de mRNAs a células T para imunoterapia contra o câncer, e a entrega
seletiva de mRNAs a leucócitos 153 também foi alcançou. Outra estratégia é usar ligantes
específicos da célula. Para permitir a entrega direcionada de mRNAs terapêuticos para Ly6c+
leucócitos inflamatórios em camundongos com doença inflamatória intestinal 154 , um ligante
de direcionamento anti-Ly6c foi conjugado com as LNPs usando uma plataforma de
direcionamento modular chamada ASSET (fragmento variável secundário de cadeia única
ancorado permitindo o direcionamento) 155 . Uma vantagem desta plataforma é que os
anticorpos monoclonais de direcionamento podem ser convenientemente substituídos de
acordo com diferentes aplicações. De fato, em outro estudo, um ligante direcionado ao

baixardo
receptor PDF
fator de crescimento epidérmico (EGFR) foi revestido para LNPs usando a mesma
plataforma ASSET 156. Esses EGFR-LNPs entregaram seletivamente mRNAs Cas9 e RNAs
guia únicos (sgRNAs) para disseminar tumores ovarianos que expressam EGFR em
camundongos, suprimindo o crescimento do tumor e aumentando a taxa de sobrevivência por
meio da edição eficiente do gene CRISPR-Cas9. A distribuição seletiva de mRNAs para
células T CD8 + específicas de antígeno 157 ou células T CD4 + 158 pode ser alcançada pela
conjugação de antígeno ou anticorpos CD4 a LNPs, respectivamente. Com mais pesquisas,
essas plataformas de entrega de mRNA específicas de órgãos ou células expandirão os tipos de
doenças que podem ser tratadas por terapias de mRNA.
Entrega de mRNA inalável, intranasal ou oral

A entrega inalável permite o acúmulo rápido e seletivo de drogas de mRNA nos pulmões,
oferecendo uma grande promessa para o tratamento de doenças relacionadas ao pulmão que
prevalecem desde o início da atual pandemia de COVID-19. A entrega inalada de mRNAs aos
pulmões foi demonstrada usando uma nanoformulação baseada em hPBAE, levando a uma
alta expressão da proteína luciferase nos pulmões de camundongos 19 . Um estudo subsequente
usando esta plataforma hPBAE alcançou uma entrega eficiente de mRNA Cas13a aos pulmões
de camundongos e hamsters, resultando na degradação do RNA influenza e redução da
replicação de SARS-CoV-2 e sintomas de infecção 159. Como outro método de administração
não invasivo, a administração intranasal de vacinas pode provocar imunidade da mucosa
contra patógenos respiratórios, tornando-se um método de administração promissor para
vacinas SARS-CoV-2 113 . De fato, a administração intranasal de vacinas de mRNA de SARS-
CoV-2 protegeu camundongos da infecção por SARS-CoV-2, conforme demonstrado pelo
título viral mais baixo e menos dano tecidual nos pulmões 160 . Um estudo em camundongos
sugeriu que as respostas imunes induzidas pela administração intranasal de vacinas de mRNA
eram menores do que aquelas dadas por administração intramuscular; uma possível razão para
isso é que os LNPs usados por via nasal não foram projetados especificamente para essa via de
entrega 161 . As formulações de LNP direcionadas a tipos de células apropriados no trato
respiratório superior podem mitigar esses problemas.
A injeção intramuscular é a principal via de administração para as vacinas COVID-19

atualmente aprovadas, mas é limitada pela necessidade de pessoal médico ou farmacêutico, o
que pode afetar negativamente o lançamento da vacina. A administração oral oferece uma
baixar PDF
alternativa promissora e atraente para a administração da vacina COVID-19, devido ao seu
caráter não invasivo, fácil de usar e à possibilidade de implantação rápida. De forma
encorajadora, uma vacina oral de adenovírus tipo 5 SARS-CoV-2 reduziu com sucesso a
gravidade e a transmissão da doença em um modelo de hamster infectado por SARS-CoV-2,
levando a um ensaio clínico de fase 1 ( NCT04563702 ) 162. Embora a administração oral seja
uma rota mais desafiadora para mRNAs frágeis, sua viabilidade foi demonstrada em roedores
e porcos usando cápsulas ingeríveis de miliinjetores, mantendo uma grande promessa para o
desenvolvimento de vacinas orais de mRNA 163 , 148 . A BioNTech e a Matinas BioPharma
anunciaram recentemente uma colaboração de pesquisa exclusiva para desenvolver potenciais
vacinas orais de mRNA usando uma nova plataforma de nanocristais lipídicos 164 . Este
nanocristal lipídico - uma nanopartícula cristalina estável contendo várias camadas - é formado
por meio da interação de cálcio e fosfolipídios aniônicos, durante o qual moléculas de drogas
ativas induzindo mRNAs podem ser carregadas dentro das camadas 165 .
Estudos translacionais e clínicos de nanomedicina de mRNA
A expressão aberrante de proteínas é característica de uma ampla gama de doenças. À medida

que a tecnologia de mRNA progride rapidamente, a manipulação precisa dos níveis de uma
proteína específica pode ser facilmente alcançada por meio da entrega intracelular de mRNAs
que codificam a proteína de interesse (upregulation) ou mRNAs que codificam componentes
de edição de genes (downregulation), tornando a nanomedicina de mRNA uma promissora e
versátil ferramenta para o tratamento de várias doenças. Atualmente, uma variedade de
nanomedicamentos de mRNA, incluindo vacinas (Tabela 1 ) e terapias de edição de proteínas
ou genes (Tabela 2 ), estão sendo intensamente investigadas em estudos clínicos 166 .
Tabela 1 Ensaios clínicos selecionados concluídos e em andamento de vacinas de

mRNA
Tabela 2 Ensaios clínicos selecionados concluídos e em andamento de
nanomedicamento de mRNA para substituição de proteínas e edição de genes

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Vacinas
As duas vacinas eficazes de mRNA COVID-19 foram desenvolvidas e lançadas em uma
velocidade sem precedentes, potencialmente salvando milhões de vidas e ajudando a
reconstruir sociedades em todo o mundo 27 . No entanto, as vacinas de mRNA COVID-19 não
foram os primeiros nanomedicamentos de mRNA a entrar em ensaios clínicos; muitos
começaram os ensaios clínicos anos antes, mas seu progresso foi relativamente lento. O
sucesso das vacinas de mRNA COVID-19 alimentou fortemente o entusiasmo de investidores
e pesquisadores em nanomedicamentos de mRNA, levando a inúmeras inovações e rápido
progresso no desenvolvimento clínico. Enquanto a primeira vacina não modificada de mRNA
COVID-19 da CureVac (CVnCoV) mostrou uma eficácia insatisfatória de 48% (ref. 167 ) em
um estudo de fase 2/3 ( NCT04652102), seu CV2CoV de segunda geração apresentou eficácia
melhorada em estudos pré-clínicos 168 e agora está na fase 1 de desenvolvimento clínico (
NCT05260437 ). Arcturus desenvolveu uma vacina COVID-19 baseada em RNA
autorreplicante que protegeu camundongos da infecção por SARS-CoV-2 com uma dose única
de 2 µg (ref. 169 ); o ensaio de fase 3 ( NCT05012943 ) mostrou que sua vacina tem 95% de
eficácia na prevenção da doença grave de COVID-19 e 55% de eficácia na prevenção da
doença sintomática de COVID-19 170 . Notavelmente, as variantes Delta e Omicron foram
dominantes durante o estudo.
Além das vacinas COVID-19, o desenvolvimento de vacinas de mRNA contra muitas outras
doenças infecciosas progrediu nos últimos anos. Por exemplo, a vacina mRNA-1647 da
Moderna ( NCT05085366 ; codificando o complexo pentâmero de citomegalovírus e antígenos
da glicoproteína B contra o citomegalovírus) e a vacina mRNA-1345 ( NCT05127434 ;
codificando a glicoproteína F de pré-fusão estabilizada contra o vírus sincicial respiratório)
estão sendo testadas em ensaios de fase 3. Mais recentemente, a vacina quadrivalente sazonal
mRNA-1010 da Moderna, que codifica cepas recomendadas pela Organização Mundial da
Saúde, entrou na fase 3 dos ensaios, tornando-se a quarta vacina mRNA da Moderna a atingir a
fase 3 ( NCT04956575 ) 171. Além das doenças infecciosas, o câncer é outro alvo importante
das vacinas de mRNA, sendo intensamente investigado em ensaios clínicos. A vacina
Moderna/Merck mRNA-4157 para melanoma avançado está sendo investigada em um ensaio
de fase 2 ( NCT03897881 ). Esta é uma vacina de mRNA personalizada contra o câncer que
baixaraté
codifica PDF
34 neoantígenos identificados e projetados usando sequenciamento de última
geração e automação de fluxo de trabalho. Da mesma forma, a BioNTech também lançou sua
vacina BNT111 para melanoma, que induziu respostas objetivas duradouras em pacientes com
melanoma tratados com inibidores de checkpoint em um estudo de fase 1 ( NCT02410733 )
172 .
Terapia de proteínas e edição genética

A terapia de edição genética e de proteína baseada em mRNA tem várias aplicações clínicas
potenciais (Tabela 2 ). A terapia com células T do receptor de antígeno quimérico (células
CAR-T) demonstrou grande eficácia no tratamento de tumores líquidos 173 , 174 , mas sua
aplicação em tumores sólidos provou ser desafiadora - em parte devido à falta de alvos
disponíveis. Enquanto isso, a terapia celular CAR-T padrão requer a modificação das células T
dos pacientes fora do corpo, o que é caro e demorado. Para abordar potencialmente esses
desafios, a BioNTech identificou vários novos antígenos de tumores sólidos e desenvolveu
uma terapia com células CAR-T (BNT211) para tumores sólidos ( NCT04503278), no qual um
lipoplexo de mRNA que codifica antígenos-alvo CAR-T é administrado ao paciente e produz
células CAR-T funcionais in vivo. Além dos tumores, a terapia com células CAR-T baseada
em mRNA também mostrou potencial para o tratamento de lesões cardíacas – gerando células
CAR-T antifibróticas transitórias in vivo (em camundongos) usando mRNAs modificados 175 .
A edição de genes é outra aplicação importante da nanomedicina de mRNA 176 , 177 , 178 que
permite aos mRNAs regular negativamente os níveis de uma proteína específica, semelhante à
função dos siRNAs 4 , 94 , 95 , 179 . Em primatas, um tratamento de dose única de LNPs
carregado com mRNAs que codificam um editor de base de adenina CRISPR alcançou o
knockdown quase completo de PCSK9 no fígado, juntamente com reduções de 90 e 60% nos
níveis sanguíneos de PCSK9 e colesterol de lipoproteína de baixa densidade, respectivamente.
Surpreendentemente, o efeito deste tratamento persistiu por mais de 8 meses 180. A Intellia
desenvolveu um sistema baseado em lipídeo ionizável LP01 biodegradável para distribuição
de mRNA e sgRNA de Cas9, alcançando >97% de eliminação da transtirretina sérica após um
tratamento de dose única 92 . Esses dados levaram ao teste em humanos ( NCT04601051 ) de
um medicamento de edição de genes baseado em LNP (chamado NTLA-2001), no qual uma
redução de 87% na concentração sérica de proteína transtirretina foi alcançada após uma dose
única de 0,3 mg kg − 1 (ref. 181 ). Esses dados encorajadores estimularão fortemente a tradução
baixar
clínica de PDF
mais terapias de edição de genes baseadas em mRNA.
Desafios da nanomedicina de mRNA atual
Apesar do sucesso das vacinas COVID-19, os nanomedicamentos de mRNA em

desenvolvimento ainda enfrentam vários desafios. Mais inovações e avanços são necessários
para superar esses desafios e acelerar as traduções clínicas de mais nanomedicamentos de
mRNA.
Segurança
O MC3 é um lipídio ionizável potente usado em alguns ensaios clínicos em andamento. No
entanto, vários estudos pré-clínicos mostraram que as LNPs baseadas em MC3 eram
imunoestimulantes e induziam maior expressão de citocinas pró-inflamatórias do que outras
LNPs em camundongos 87 , 182 . Além disso, a administração intravenosa de LNPs de mRNA
de eritropoetina humana (hEPO) baseada em MC3 a ratos e macacos resultou em efeitos
toxicológicos leves com um nível de dose de mRNA de 0,3 mg kg -1 (ref. 183). Neste estudo,
lesões hepáticas, variações na contagem de glóbulos brancos e parâmetros de coagulação
foram observadas em ratos, enquanto ativação reversível do complemento, necrose esplênica e
depleção de linfócitos foram observadas em macacos. Notavelmente, os efeitos toxicológicos
foram melhorados ao diminuir a dose de mRNA para um nível terapêutico mais baixo (0,03
mg kg −1 ) 183 . Efeitos fora do alvo de vacinas ou terapias de mRNA LNP podem levar à
tradução indesejada de mRNA em várias células ou órgãos, tornando-os alvos de morte 184 . A
otimização contínua de sistemas de entrega de mRNA específicos de órgãos ou células ajudará
a resolver esse problema.
Relatórios dispersos sugeriram a possibilidade da integração do SARS-CoV-2 RNA 185 e

mRNA das vacinas COVID-19 186 no genoma das células hospedeiras por meio de um
mecanismo de retroposição mediado por LINE1. No entanto, essa conclusão foi questionada
por outros 187 e estudos mais meticulosos devem ser conduzidos para validar essa conclusão.
Se mais estudos futuros mostrarem que as sequências de mRNA manipuladas podem ser
integradas ao genoma das células hospedeiras, designs específicos podem ser aplicados aos
baixaratuais
mRNAs PDF para inibir sua retrotranscrição.
Ensaios clínicos mostraram perfis de segurança favoráveis das duas vacinas aprovadas de
mRNA para COVID-19, e a maioria dos eventos adversos locais e sistêmicos são leves a
moderados 25 , 26 . No entanto, como com a maioria das outras vacinas, foram observados
casos raros de reações anafiláticas 188 . No caso das vacinas de mRNA, uma possível razão
para essas reações anafiláticas é que os lipídios PEGilados nas LNPs podem induzir reações
alérgicas devido a anticorpos pré-existentes (presentes em até 40% da população) 189 . Vale a
pena notar que a dose de PEG usada nas vacinas atuais contra COVID-19 é muito menor do
que em outros agentes clínicos e terapias que desencadeiam raras reações anafiláticas 189 , 190,
e um estudo recente mostrou que um paciente com anticorpos anti-PEG pré-existentes tolerou
uma vacina de mRNA para COVID-19 sem desencadear reações anafiláticas 191 . Portanto,
outros fatores subjacentes podem estar associados a esses eventos adversos raros, e um ensaio
clínico de fase 2 ( NCT04977479 ) foi lançado recentemente para investigar reações alérgicas
às vacinas de mRNA da COVID-19.
Será importante reconhecer quais partes das vacinas de mRNA são responsáveis por esses
eventos adversos, especialmente no contexto do tratamento de deficiência de proteína e
doenças crônicas, onde altas doses ou doses repetidas são necessárias, o que pode aumentar
ainda mais o risco de tais eventos. Uma melhor compreensão desses mecanismos pode nos
levar a formulações otimizadas que reduzam ou substituam o componente desfavorável,
diminuindo assim o risco de eventos adversos.
Adjuvanticidade
A adjuvanticidade pode ser uma limitação ou uma vantagem, dependendo do contexto. Devido
à maior eficiência e estabilidade da tradução, os mRNAs modificados que não podem provocar
respostas imunes são amplamente utilizados em ensaios clínicos em andamento 11 , 113 . Assim,
os próprios mRNAs dentro das formulações de mRNA LNP geralmente não atuam como
adjuvantes. Em contraste, a outra parte da formulação, a LNP, é conhecida por ter
adjuvanticidade. Camundongos imunizados com injeção intramuscular de LNPs e 10 µg do
imunógeno de proteína hemaglutinina recombinante produziram células auxiliares T
foliculares específicas de antígeno e números de células B do centro germinativo mais altos do
que camundongos imunizados apenas com proteína hemaglutinina, demonstrando a atividade

baixar PDF
adjuvante de LNPs 192. Um estudo recente também mostrou que os LNPs das vacinas de
mRNA do SARS-CoV-2 podem atuar como um componente adjuvante que induz células
auxiliares foliculares T robustas e respostas humorais 193 . Notavelmente, o LNP exibiu uma
potência adjuvante mais forte do que um adjuvante amplamente utilizado, AddaVax 193 .
Embora nenhuma das vacinas de mRNA COVID-19 baseadas em LNP contenha quaisquer
adjuvantes, as fortes respostas imunes celulares e humorais contra SARS-CoV-2 provocadas
por essas vacinas podem ser parcialmente atribuídas ao efeito adjuvante do próprio
componente LNP. Além de atuar como adjuvante em vacinas para doenças infecciosas, o LNP
também potencializou a eficácia antitumoral da vacina de mRNA contra o câncer ativando a
sinalização TLR4 194. Embora mais e mais estudos tenham demonstrado a adjuvanticidade das
LNPs, como manipular essa adjuvanticidade ainda é um desafio. Para este fim, o mecanismo
de ação do adjuvante LNP e a relação estrutura-atividade dos componentes lipídicos devem ser
investigados.
Conclusões e direções futuras
Os nanomedicamentos de mRNA já demonstraram eficácia como vacinas para a prevenção da

COVID-19 e redução do risco de hospitalização e morte 3 , 27 , 28 , 29 . Encorajados por esse
sucesso, espera-se que mais e mais vacinas e terapias baseadas em mRNA alcancem tradução
clínica. No entanto, vários objetivos cruciais devem ser alcançados antes que o potencial dos
nanomedicamentos de mRNA seja totalmente realizado. Evidências crescentes sugerem que
vias biológicas específicas podem interferir na entrega ou tradução do mRNA 195 , 196. Assim, a
compreensão de como as vias biológicas afetam a entrega e a tradução do mRNA in vivo pode
melhorar ainda mais a eficácia das drogas de mRNA, enquanto a toxicidade potencial e a
resposta imune levantadas pelos mRNAs e seus portadores também devem ser cuidadosamente
consideradas.
Em última análise, a implementação rápida e eficiente de nanomedicamentos de mRNA

depende em grande parte de sua estabilidade e requisitos logísticos, que afetam a
implementação e o lançamento no mundo real. Portanto, inovações que melhorem a
estabilidade serão cruciais. Em estudos recentes, foi relatado que uma vacina de mRNA
termoestável fornece eficácia protetora contra SARS-CoV-2 em camundongos 197 e entrou em

baixar
ensaios PDF 198 . O mRNA-1283 da vacina COVID-19 de próxima geração da Moderna
clínicos
pode ser estável a 2–5 °C.
Novos avanços de engenharia facilitarão aplicações no mundo real de nanomedicamentos de

mRNA de inúmeras maneiras. Por exemplo, novas micropartículas de PLGA podem ser uma
plataforma promissora para entrega de mRNA com liberação programável de drogas e até
mesmo permitir vacinas auto-reforçadas 199 , 200 , 201 . Além disso, adesivos de microagulhas,
que demonstraram sua segurança e imunogenicidade como portadores de vacinas contra
influenza sazonal 202 e SARS-CoV-2 (refs. 203 , 204 ), podem ser uma plataforma conveniente e minimamente
invasiva para entrega de mRNA.
Como o enorme potencial dos nanomedicamentos de mRNA já foi demonstrado pelas vacinas
de mRNA COVID-19 sem precedentes, esperamos que a inovação contínua leve a terapias
novas e altamente eficientes baseadas em mRNA, incluindo vacinas para outras doenças
infecciosas não-COVID-19, câncer imunoterapia, terapia de proteínas, terapia baseada em
edição de genes e potencialmente muitos outros.
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Acknowledgements
We are supported by the US METAvivor Early Career Investigator Award (2018A020560 to

W.T.), Harvard Medical School/Brigham and Women’s Hospital Anesthesia Department Basic
Scientist Grant (2420 BPA075 to W.T.), Khoury Innovation Award (2020A003219 to W.T.),
Gillian Reny Stepping Strong Center for Trauma Innovation Breakthrough Award (113548 to
W.T.), Nanotechnology Foundation (2022A002721 to W.T.), Farokhzad Family Distinguished
Chair Foundation (018129 to W.T.) and American Heart Association Collaborative Sciences
Award (2018A004190 to W.T.).
Author information
These authors contributed equally: Xiangang Huang, Na Kong, Xingcai Zhang.

Authors and Affiliations

Centerbaixar PDF and Department of Anesthesiology, Brigham and Women’s Hospital, Harvard Medical School, Boston, MA, USA
for Nanomedicine
Xiangang Huang, Na Kong & Wei Tao
Liangzhu Laboratory, Zhejiang University Medical Center, Hangzhou, China

Na Kong
School of Engineering and Applied Sciences, Harvard University, Cambridge, MA, USA
Xingcai Zhang
Department of Microbiology, Tumor and Cell Biology, Karolinska Institutet, Stockholm, Sweden
Yihai Cao
Koch Institute for Integrative Cancer Research, Massachusetts Institute of Technology, Cambridge, MA, USA
Robert Langer
Department of Chemical Engineering, Massachusetts Institute of Technology, Cambridge, MA, USA

Robert Langer
Corresponding authors
Correspondence to Yihai Cao, Robert Langer or Wei Tao.
Ethics declarations
Competing interests
R.L. declares the following current competing interest: Moderna. A list of all competing
interests for R.L., past and present, is provided as Supplementary Table 1. The other authors
declare no competing interests.
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Huang, X., Kong, N., Zhang, X. et al. The landscape of mRNA nanomedicine. Nat Med 28, 2273–
2287 (2022). https://doi.org/10.1038/s41591-022-02061-1
Received Accepted Published

05 August 2022 29 September 2022 10 November 2022
Issue Date
November 2022
DOI
https://doi.org/10.1038/s41591-022-02061-1
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Nanotransportadores de entrega de genes responsivos a estímulos para
terapia do câncer
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Nature Medicine (Nat Med) ISSN 1546-170X (online) ISSN 1078-8956 (print)

A Paisagem Da Nanomedicina de MRNA - Medicina Da Natureza

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01/03/2023, 14:14 A paisagem da nanomedicina de mRNA | Medicina da Natureza

natureza medicina natural artigos de revisão artigo

artigo de revisão Publicados:10 de novembro de 2022

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Desafios em relação ao uso clínico do mRNA

Fig. 1: Desafios no uso clínico do mRNA.

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O potencial imunoestimulatório do mRNA exógeno é outro grande obstáculo para a tradução

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