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Crescimento e Manutenção de Vero Cell APÊNDICE 4E

Linhas
Nicole C. Ammerman,1 Magda Beier-Sexton,1 e Abdu F. Azad1

1Departamento de Microbiologia e Imunologia, Escola de Medicina da Universidade de Maryland,

Baltimore, Maryland

ABSTRATO

As células Vero são derivadas do rim de um macaco verde africano e são uma das linhas celulares contínuas de
mamíferos mais comumente usadas em microbiologia e pesquisa em biologia molecular e celular. Esta unidade inclui
protocolos para o crescimento e manutenção de linhagens de células Vero em um ambiente de laboratório de pesquisa.
atual Protoc. Microbiol. 11:A.4E.1- A.4E.7. C 2008 por John Wiley & Sons, Inc.

Palavras-chave: Células Vero técnicas de cultura de células linha celular

INTRODUÇÃO

Derivadas do rim de um macaco verde africano (Cercopithecus aethiops) na década de 1960, as células Vero são uma
linha celular contínua comum de mamíferos usada em pesquisa. Esta linha celular dependente de ancoragem tem
sido amplamente utilizada em estudos de virologia, mas também tem sido usada em muitas outras aplicações,
incluindo a propagação e estudo de bactérias intracelulares (por exemplo, Rickettsia spp.; UNIT 3A.4) e parasitas ( por
exemplo, Neospora ) e avaliação dos efeitos de produtos químicos, toxinas e outras substâncias em células de
mamíferos no nível molecular. Além disso, as células Vero foram licenciadas nos Estados Unidos para a produção de
vacinas virais vivas (rotavírus, varíola) e inativadas (poliovírus), e em todo o mundo as células Vero foram usadas para
a produção de vários outros vírus, incluindo Vírus da raiva, Reovírus e vírus da encefalite japonesa. Os protocolos
descritos neste apêndice detalham os procedimentos para o crescimento de rotina e manutenção de células Vero em
um ambiente de laboratório de pesquisa. Existem várias linhas de células Vero disponíveis comercialmente (ou seja,
Vero, Vero 76, Vero E6), mas todas elas foram derivadas da mesma fonte, e os protocolos nesta unidade podem ser
usados com qualquer linha de células Vero.

NOTA: Todos os equipamentos e soluções que entram em contato com as células devem ser estéreis, e a técnica
estéril adequada deve ser usada.

NOTA: Todas as incubações de cultura de células são realizadas em uma incubadora umidificada a 37ÿC com 5% de
CO2.

NOTA: Todas as soluções devem ser aquecidas à temperatura ambiente ou 37ÿC antes de entrar em contato com as
células.

PROPAGAÇÃO DE CULTURA DE CÉLULAS VERO A PARTIR DE STOCKS CONGELADOS BÁSICO

PROTOCOLO 1
Para armazenamento de longo prazo, as células Vero são mantidas em nitrogênio líquido ou a -80ÿC. Este protocolo
descreve como começar a cultivar células Vero obtidas de estoque congelado. Após a recuperação do estoque
congelado, as células Vero geralmente levam de 2 a 3 passagens para atingir sua taxa de crescimento normal, e isso
deve ser levado em consideração se estiver planejando usar as células para experimentos, infecções, etc. são células
dependentes de ancoragem e, portanto, não podem ser cultivadas em suspensão.

Comumente usado
Métodos para Célula
Cultura

Current Protocols in Microbiology A.4E.1-A.4E.7, novembro de 2008 A.4E.1

Publicado online em novembro de 2008 na Wiley Interscience (www.interscience.wiley.com).
DOI: 10.1002/9780471729259.mca04es11 Suplemento 11
Copyright C 2008 John Wiley & Sons, Inc.
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Materiais

Estoque de células Vero, congelado em nitrogênio líquido ou a -80ÿC

solução de etanol 70% (usado para descontaminação de capela de fluxo laminar e objetos trazidos para
a capela)
Modificação de Dulbecco do meio Eagle (DMEM), suplementado com 10% de soro fetal bovino
inativado pelo calor (FBS), esterilizado por filtro (ver receita)

37°C banho-maria
Tubos cônicos de 15 ml, estéreis
Frascos de cultura de tecidos de 25 cm2 ou 50 cm2 com tampas ventiladas, estéreis

1. Descongele rapidamente um frasco (criotubo) de células Vero girando suavemente em banho-maria a 37°C .

A água do banho-maria é uma fonte potencial de contaminação para as células. Para reduzir o risco de contaminação,
mantenha o O-ring e a tampa do criotubo fora da água.

2. Em uma capela de fluxo laminar, descontamine o frasco borrifando com etanol 70%.

3. Transfira a suspensão de células Vero do criotubo para um tubo cônico de 15 ml

contendo 10 ml de DMEM suplementado com FBS.

Os estoques de células congeladas conterão o criopreservante dimetil sulfóxido (DMSO), que pode ser prejudicial às células.
Portanto, após o descongelamento das células, é necessário diluir e remover o DMSO antes de transferir as células para
frascos de cultura de tecidos.

Outro meio além do DMEM também pode ser usado para o crescimento de células Vero. Veja Comentário para mais
informações.

4. Células de pellet por centrifugação 5 min a 200 × g, temperatura ambiente.

5. Remova e descarte o sobrenadante; ressuspender as células em 5 a 10 ml de DMEM suplementado

com 10% FBS.

As células Vero se recuperam melhor após o congelamento quando iniciadas em um frasco pequeno (25 cm2 ou 50 cm2) de
cultura de tecidos. Se estiver usando um frasco de 25 cm2 , ressuspenda as células em 5 ml de meio; se estiver usando um
frasco de 50 cm2 , ressuspenda as células em 10 ml de meio.

6. Transfira a suspensão de células Vero para o frasco de cultura de tecidos com tampa ventilada.

7. Incube os frascos em incubadora a 37ÿC com 5% de CO2.

8. Monitore as células diariamente ou em dias alternados. Troque o meio a cada 3 a 4 dias. Quando as células
atingirem uma monocamada confluente > 90%, passe as células para novos frascos de cultura de tecidos (consulte
o Protocolo básico 2).

As células Vero se recuperam lentamente após o congelamento; portanto, pode levar uma semana ou mais até que as células
estejam prontas para serem transferidas. Pode levar 2 ou 3 passagens antes que as células Vero atinjam sua taxa de
crescimento normal.

BÁSICO MANUTENÇÃO DE CULTURA DE CÉLULAS VERO

PROTOCOLO 2
As células Vero são derivadas de células renais normais; porque as células não são transformadas, elas não perderam
sua inibição de contato. Quando essas células atingem a confluência, elas param de crescer e começam a morrer;
portanto, é extremamente importante monitorar as células Vero e subcultivá-las à medida que formam monocamadas
confluentes. Culturas de células Vero em crescimento ativo dobram aproximadamente a cada 24 horas (Nahapetian et
al., 1986). Dependendo do número de células semeadas e do tamanho do frasco, as células geralmente precisam ser
passadas 2 a 3 vezes por semana. Este protocolo descreve um método geral para a subcultura de células Vero em
frascos de cultura de tecidos de 75 cm2 .

Crescimento e
Manutenção de
Linhas celulares Vero

A.4E.2
Suplemento 11 Protocolos Atuais em Microbiologia
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Materiais

Células Vero cultivadas em uma monocamada confluente em um frasco de 75 cm2 com tampa ventilada
DPBS sem cálcio ou magnésio, esterilizado por filtração (ver APÊNDICE 2A)
1× tripsina-EDTA em DPBS sem cálcio ou magnésio, esterilizado por filtração (ver
receita)
DMEM suplementado com 10% de FBS inativado pelo calor, esterilizado por filtração (ver receita)

Pipetas sorológicas, estéreis

Tubos cônicos de 15 ml, estéreis
Frascos de cultura de tecidos de 75 cm2 com tampas ventiladas, estéreis

1. Remova o meio de crescimento da monocamada confluente de células Vero.

2. Lave as células com 10 ml de DPBS.

O soro contém inibidores de tripsina, por isso é importante enxaguar qualquer meio restante
com DPBS.

3. Adicionar 5 ml de 1 × tripsina-EDTA e incubar as células 2 a 3 min a 37ÿC, até que as células comecem
riscar à medida que se desprendem do frasco.

Agitar suavemente ou bater no frasco pode ajudar a desprender as células.

4. Adicione 5 ml de DMEM com 10% de FBS para inativar a tripsina-EDTA.

5. Lave as células em meio, pipetando suavemente para quebrar quaisquer aglomerados de células.

6. Remova a suspensão de células do frasco e transfira para um tubo cônico estéril de 15 ml.

7. Centrifugar 5 min a 200 × g, temperatura ambiente.

8. Remova e descarte o sobrenadante; ressuspender as células em 10 ml de DMEM com 10% de FBS.

9. Prepare a diluição desejada de células em um total de 12 a 20 ml de DMEM com 10% de FBS e

adicione a frascos de cultura de células de 75 cm2 com tampas ventiladas.

Diluições de 1:5 a 1:10 são típicas para cultura celular de rotina. Consulte a Tabela A.4E.1 para obter os volumes
médios totais recomendados para crescimento em vários tamanhos de vasos de cultura de tecidos.

10. Incube os frascos em incubadora a 37ÿC com 5% de CO2.

Monitore as células diariamente ou em dias alternados. Troque o meio a cada 3 a 4 dias. Uma vez que as células
atingir uma monocamada confluente > 90%, células de passagem novamente repetindo este protocolo.

Tabela A.4E.1 Requisitos de volume do meio celular

Navio Volume médio total

frasco de 25 cm2 4-6 ml

frasco de 50 cm2 7-10 ml

frasco de 75 cm2 12-20 ml

frasco de 150 cm2 25-40 ml

placa de 96 poços 100 ÿl (por poço)

prato de 16 mm 800 ÿl

prato de 35 mm 2 ml

prato de 60 mm 8 ml

Comumente usado
Métodos para Célula
Cultura

A.4E.3
Protocolos Atuais em Microbiologia Suplemento 11
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BÁSICO PREPARAÇÃO DE STOCKS CONGELADOS DE CULTURA DE CÉLULAS VERO

PROTOCOLO 3
A manutenção de estoques congelados é extremamente importante ao cultivar linhas de células. Quando as
células em crescimento ativo não forem necessárias por um longo período de tempo (3 semanas ou mais), manter
os estoques congelados permite que os pesquisadores interrompam a subcultura regular, economizando tempo e
dinheiro valiosos. Além disso, muito importante, estoques congelados de células fornecem uma nova fonte de
células caso ocorra contaminação durante as passagens subseqüentes. A fim de manter um inventário de células
Vero de baixa subcultura, os estoques congelados devem ser preparados logo após o início das culturas dos
estoques congelados.

Materiais

Dimetil sulfóxido (DMSO)

DMEM suplementado com 20% de FBS inativado pelo calor, esterilizado por filtração (ver receita)
Células Vero cultivadas em uma monocamada confluente em um frasco de 75 cm2 com tampa ventilada
DPBS sem cálcio ou magnésio, esterilizado por filtração (ver APÊNDICE 2A) 1× tripsina-
EDTA em DPBS sem cálcio ou magnésio, esterilizado por filtração (ver
receita)

Tubos cônicos de 15 ml, estéreis

Pipetas sorológicas, estéreis
Criotubos adequados para congelamento a -80ÿC ou nitrogênio líquido, estéreis

CUIDADO: DMSO é perigoso; consulte a UNIDADE 1A.3 para obter orientações sobre manuseio, armazenamento
e descarte.

1. Em uma capela de fluxo laminar, adicione 1 ml de DMSO a 9 ml de DMEM suplementado (para um

concentração final de 10% de DMSO) em um tubo cônico de 15 ml.

O DMSO dissolve as membranas de acetato de celulose comumente usadas para esterilização por filtração,
portanto, deve ser adicionado após o DMEM ter sido suplementado com FBS. O DMSO pode ser filtrado
usando filtros de membrana de nylon; em alternativa, abra apenas a garrafa de DMSO em condições estéreis
na capela de fluxo laminar.

2. Remova o meio de crescimento da monocamada confluente de células Vero.

3. Lave as células com 10 ml de DPBS.

O soro contém inibidores de tripsina, por isso é importante enxaguar qualquer meio restante com DPBS.

4. Adicione 5 ml de 1× tripsina-EDTA e incube as células por 2 a 3 minutos a 37ÿC, até que as células comecem
a se desprender do frasco.

Agitar suavemente ou bater no frasco pode ajudar a desprender as células.

5. Adicione 5 ml de DMEM com 20% de FBS para inativar a tripsina-EDTA.

6. Lave as células em meio, pipetando suavemente para quebrar quaisquer aglomerados de células.

7. Remova a suspensão de células do frasco e transfira para um tubo cônico estéril de 15 ml.

8. Centrifugar 5 min a 200 × g, temperatura ambiente.

9. Remova e descarte o sobrenadante; ressuspender as células em 10 ml de DMEM com 20% de FBS

e 10% de DMSO.

O DMSO e FBS ajudam a preservar as células durante os processos de congelamento e descongelamento,

respectivamente.

10. Coloque 1 ml de células ressuspensas em cada criotubo.

Crescimento e
Manutenção de
Linhas celulares Vero

A.4E.4
Suplemento 11 Protocolos Atuais em Microbiologia
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11. Congele as células lentamente a -80ÿC e continue a armazenar as células a -80ÿC ou em líquido
nitrogênio (preferido).

O ideal é congelar as células com a temperatura diminuindo a uma taxa de -1ÿC por minuto.
Isso pode ser obtido usando recipientes de congelamento, como o Nalgene Cryo 1ÿC Freezing Container.
Alternativamente, as células podem ser colocadas a 4ÿC por várias horas, depois a -20ÿC durante a noite,
depois a -80ÿC durante a noite e então mantidas a -80ÿC ou transferidas para armazenamento de nitrogênio
líquido.

REAGENTES E SOLUÇÕES
Use água destilada deionizada em todas as receitas e etapas do protocolo. Para soluções de estoque comum, consulte o
APÊNDICE 2A; para fornecedores, consulte o ANEXO DE FORNECEDORES.

Modificação de Dulbecco do Eagle Medium (DMEM) suplementado com soro fetal

bovino inativado pelo calor (FBS)

10% ou 20% de FBS inativado pelo calor (consulte o APÊNDICE 2A)

Traga para o volume desejado em DMEM

Filtrar-esterilizar
Armazenar até 1 semana a 4ÿC
Para fazer 500 ml de DMEM com 10% de FBS, adicione 50 ml de FBS inativado pelo calor a 450 ml de DMEM.

Para fazer 500 ml de DMEM com 20% de FBS, adicione 100 ml de FBS inativado pelo calor a 400 ml de DMEM.

Tripsina-EDTA (1×) em DPBS

Dilua 10× tripsina-EDTA em DPBS (ver APÊNDICE 2A) para obter o volume desejado com uma
concentração final de 1×. Esterilize por filtração, prepare alíquotas de 10 ÿl e armazene por até 6
meses a -20ÿC. Descongele as alíquotas imediatamente antes de usar. Uma vez descongelado,
armazene a 4ÿC e use dentro de 48 horas.

Para fazer 100 ml, adicione 10 ml 10× tripsina-EDTA a 90 ml de DPBS.

COMENTÁRIO

Informações básicas As células Parâmetros críticos e solução

Vero foram originalmente isoladas do rim de um de problemas de
macaco verde africano adulto normal (ou seja, não
contaminação por Mycoplasma
doente) em 27 de março de 1962 por Y. Yasumura e Y.
Um dos problemas mais importantes ao cultivar
Kawakita na Universidade de Chiba em Chiba, Japão.
qualquer cultura de células é a contaminação. Para
Em sua 93ª passagem, a linha celular foi trazida para o
reduzir o risco de contaminação, sempre trabalhe com
Instituto Nacional de Alergia e Doenças Infecciosas dos
as células em uma capela de fluxo laminar estéril,
Institutos Nacionais de Saúde dos Estados Unidos, e foi
certifique-se de que todos os equipamentos e soluções
fornecida à American Type Culture Collection (ATCC)
que entram em contato com as células sejam estéreis e
em 1966. No final de Na década de 1960, as linhas de
use a técnica estéril adequada ao trabalhar na capela.
células Vero estavam sendo usadas em todo o mundo,
Muitos pesquisadores manterão suas células com um
principalmente em laboratórios de virologia. baixo nível de antibiótico adicionado ao meio, mais
comumente uma mistura de penicilina/estreptomicina.
Isso também pode ajudar a reduzir a contaminação
As células Vero podem ser adquiridas nos repositórios
bacteriana externa; no entanto, dependendo da
ATCC e European Collection of Animal Cell Cultures
aplicação para a qual as células Vero serão usadas, a
(ECACC). As linhas de células Vero comumente usadas
adição de antibióticos pode não ser recomendada (por
da ATCC incluem CCL-81 (Vero), CRL-1286 (Vero
exemplo, se as células forem infectadas com bactérias).
C1008) e CRL-1587 (Vero 76). Linhagens celulares
Ver Sato e Kan (2001) para uma discussão sobre o uso
comumente usadas do ECACC incluem 84113001 (Vero),
de antibióticos em culturas de células de mamíferos.
85020206 (Vero C1008), 88020401 (Vero-WHO) e
Uma das fontes mais comuns de contaminação em
85020205 (Vero 76). culturas de células é Comumente usado
Métodos para Célula
Cultura

A.4E.5
Protocolos Atuais em Microbiologia Suplemento 11
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Mycoplasma. Estas bactérias são muito pequenas
(<1 ÿm) e, portanto, contaminação com
Mycoplasma pode não ser visível com o nu
olho, tornando esses organismos difíceis de detectar.
Vários kits de detecção de Mycoplasma estão disponíveis
comercialmente (como o kit MycoAlert
de Lonza, ver Mariotti et al., 2008), e
procedimentos para detecção e tratamento de contaminação
por My coplasma também são descritos em
APÊNDICE 3B. As células Vero devem ser regularmente
testado (uma vez por mês) para a presença de
Contaminação por micoplasma . Se forem encontradas células
Para ser infectado, o curso de ação recomendado é descartar
as células e iniciar novas culturas de estoques congelados
não infectados. Há
também várias opções para o tratamento de células
infectadas por Mycoplasma (ver Uphoff e Drexler, 2002),
incluindo kits disponíveis comercialmente.
Mídia cultural
Os protocolos neste apêndice descrevem o
crescimento e manutenção de células Vero usando
DMEM como meio de cultura. Enquanto DMEM
é um meio de cultura muito comum, uma variedade
de outras mídias também podem ser usadas com sucesso
com células Vero. Ver Sato e Kan (2001) para uma
descrição de diferentes meios de cultura que podem
ser usado com linhagens de células de mamíferos.
Dependendo da aplicação, pode ser
desejado ou necessário para contar o número de
células (ou seja, se um número específico de células precisa
para ser analisado, banhado, etc.). A concentração de
células em suspensão (após tripsina
tratamento) pode ser determinado usando um hema
citômetro. Ver Phelan (2007) para uma
protocolo para determinar o número de
células em solução. Quando as células Vero serão
usado para infecções bacterianas, o hospedeiro em divisão
Crescimento e
Manutenção de
Figura A.4E.1 Células Vero 76 (ATCC #CRL-1587), ~95% monocamada confluente. Essas células vão
Linhas celulares Vero
precisam ser subcultivados dentro de um dia.
A.4E.6
Suplemento 11
células podem diluir as infecções, que, dependendo do
sistema, podem confundir a análise
dos resultados. Uma técnica que tem sido
empregada para resolver esse problema é a radiação gama.
Em níveis apropriados, a irradiação não
não mata as células Vero, mas impede a divisão celular,
permitindo o crescimento bacteriano nas células Vero
sem o fator complicador da divisão e crescimento da célula
hospedeira. Ver Chen et al. (1995) e
Zamboni et ai. (2001) para exemplos de irradiação gama de
células Vero antes da infecção com
Ehrlichia chaffeensis e Coxiella burnetii,
respectivamente.
Certas aplicações, como a produção de vacinas, podem
exigir a expansão do Vero
culturas de células. Existem dois sistemas de crescimento
usados para aumentar a escala de linhas celulares
dependentes de ancoragem: frascos rolantes e
microcarreadores. Garrafas rolantes são recipientes cilíndricos,
e as células crescem na superfície interna do
tubo. As garrafas giram lentamente para continuamente
banhar as células em meio de crescimento. A superfície
área disponível para fixação de células pode ser ainda
aumentado ainda mais pelo crescimento das células em mi
crocarrier grânulos. Os grânulos, geralmente ~0,2 mm,
pode ser feito de dextrana, celulose, gelatina,
vidro, ou sílica, e pode aumentar consideravelmente
a área de superfície disponível para o crescimento de células Vero.
Ver Hegde et al. (2008) e Silva et al. (2008)
para exemplos de crescimento de células Vero usando rolo
frascos e microtransportadores, respectivamente, para o
produção de vacinas virais.
Resultados Antecipados
Ao iniciar uma semente de células Vero
do estoque congelado, as células geralmente precisam de um
algumas passagens antes de começarem a crescer
Protocolos Atuais em Microbiologia
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em sua taxa normal, que dobra aproximadamente
a cada 24 horas (Nahapetian et al., 1986). Após
este período inicial de “inicialização”, as células
irão proliferar regularmente ao longo das
passagens subseqüentes. O uso de técnica estéril
adequada ao subcultivar as células deve resultar
na propagação bem-sucedida das células Vero.
Um exemplo de células Vero em aproximadamente
95% de confluência é mostrado na Figura A.4E.1.
Considerações de tempo
Ao subcultivar células Vero em uma proporção
entre 1:5 a 1:10, elas geralmente precisarão ser
passadas 2 a 3 vezes por semana. Se dividir as
células em uma proporção de 1:10, o meio pode
precisar ser trocado entre as subculturas.
Literatura Citada Chen,
SM, Popov, VL, Feng, HM, Wen, J. e Walker, DH 1995.
Cultivo de Ehrlichia chaffeensis em embrião de
camundongo, células Vero, BGM e L929 e estudo do
efeito citopático induzido por Ehrlichia e formação de
placa. Infectar.
Imune. 63:647-655.
Hegde , R. , Gomes , AR , Byregowda , SM , Hugar , P. ,
Giridhar , P. , and Renukaprasad , C. 2008 .
Padronização da produção em larga escala de vacina
PPR viva atenuada homóloga na Índia.
Trop. Anim. Prod. de Saúde 40:11-16.
Mariotti, E., Mirabelli, P., Di Noto, R., Fortunato, G., e
Salvatore, F. 2008. Detecção rápida de Mycoplasma em
linhas celulares contínuas usando um teste bioquímico
seletivo. Leukemia Res. 32:323-326.
Nahapetian, AT, Thomas, JN e Thilly, WG
1986. Otimização do ambiente para cultura de células
Vero de alta densidade: Efeito do oxigênio dissolvido e
suprimento de nutrientes no crescimento celular e
mudanças nos metabólitos. J. Cell. ciência 81:65-103.
Phelan, MC 2007. Técnicas básicas em cultura de tecidos
de células de mamíferos.Curr. Protoc.Cell Biol.
36:1.1.1-1.1.18.
Sato, JD e Kan, M. 2001. Meios para cultura de células de
mamíferos. atual Protoc. Cell Biol.
00:1.2.1-1.2.15. Silva, A.C., Delgado, I., Sousa,
Protocolos Atuais em Microbiologia
MFQ, Carrondo, MJT e Alves, PM 2008.
Sistemas de cultivo escalonáveis utilizando diferentes
linhagens celulares para a produção de vacina para
ruminantes Peste des Petits. Vacina 26:3305-3311.
Uphoff, CC e Drexler, HG 2002. Erradicação antibiótica
comparativa de infecções por Mycoplasma de linhas
celulares contínuas. Célula In Vitro. Biol. 38:86-89.
Zamboni, DS, Mortara, RA, e Rabinovitch, M. 2001. Infecção
de células Vero com Coxiella burnetii fase II: Carga
bacteriana intracelular relativa e distribuição estimada
por microscopia confocal de varredura a laser e
morfometria. j.
Microbiol. Métodos 42:223-232.
Referências Chave
´
Cote, RJ 2001. Técnica asséptica para cultura de células.
atual Protoc. Cell Biol. 00:1.3.1-1.3.10.
Esta referência contém um protocolo para técnica estéril
adequada usando uma capela de fluxo laminar.
Simizu, E. e Terasima, T. (eds.) 1988. Vero Cells—Origin,
Properties and Biomedical Applications. Departamento
de Microbiologia, Chiba University, Chiba, Japão.
Esta referência descreve a história da linha celular Vero e
também inclui uma tradução para o inglês do artigo original
que descreve as células Vero (Yasumura e Kawakita, 1963,
abaixo).
Yasumura, Y. e Kawakita, Y. 1963. Estudos sobre SV40 em
cultura de tecidos - Etapa preliminar para pesquisa de
câncer "in vitro". Nihon Rinsho 21:1201-1215. (artigo em
japonês)
Esta é a publicação original que descreve o isolamento e a
propagação inicial da linha celular Vero.
Recursos da Internet http://
www.atcc.org Site da
American Type Culture Collection (ATCC). A ATCC mantém
um repositório de células, que inclui células Vero. Este site
fornece informações adicionais sobre o crescimento e
manutenção das células Vero. http://www.ecacc.org.uk Site
da Coleção
Europeia de Culturas de
Células Animais (ECACC). A ECACC mantém um repositório
de células, que inclui células Vero. Este site fornece
informações adicionais sobre o crescimento e manutenção
das células Vero.
Comumente usado
Métodos para Célula
Cultura
A.4E.7
Suplemento 11