BIOLOGIA MOLECULAR

DR LÁZARO MEDEIROS
BIOMEDICINA – PUC MINAS
 EXTRAÇÃO DE DNA
• MATERIAIS PASSÍVEIS DE EXTRAÇÃO;
BIOMOL

• Sangue
• Tecidos
• Cultura de Células
• Purificação de DNA de gel
• Parafina

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 EXTRAÇÃO DE DNA
• APLICAÇÕES;
BIOMOL

• Genotipagem
• Sequenciamento genético
• Quantificação / Tamanho

INTEGRIDADE
PUREZA
QUANTIDADE

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 EXTRAÇÃO DE DNA
• ETAPAS DE EXTRAÇÃO DO DNA;
BIOMOL

• 1. Lise das membranas lipídicas

• 2. Purificação do DNA
• 3. Precipitação do DNA (etanol)
• 4. Reidratação do DNA em água ou tampão

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 EXTRAÇÃO DE DNA
• LISE DE MEMBRANAS LIPÍDICAS;
BIOMOL

• Membranas são constituídas por proteínas e fosfolipídios

• Rompimento da membrana celular e dos compartimentos membranosos (organelas)
• Provocada por uma solução detergente

• PURIFICAÇÃO DO DNA;
• Remoção de componentes celulares como proteínas, organelas e restos celulares
• Proteinase K – desnaturação das proteínas
• FENOL – remove proteínas e outros contaminantes da solução aquosa
• CLOROFÓRMIO – ajuda a desnaturar proteínas e remover o fenol residual

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 EXTRAÇÃO DE DNA
• PRECIPITAÇÃO DO DNA;
BIOMOL

• DNA é solúvel em água e insolúvel em álcool

• Utiliza-se etanol para precipitar o DNA
• Quanto mais gelado estiver o etanol, menos solúvel o DNA vai estar
• Retira-se o álcool para a formação do pellet

• REIDRATAÇÃO DO DNA;
• Após a retirada do álcool, o DNA precisa se solubilizar em algum solvente – Água ultrapura ou
uma solução tampão
• Este solvente servirá para armazenamento do DNA extraído
• Deve ser livre de contaminantes e enzimas que degradam o DNA
6 • Armazenar o DNA a -20 ºC
 EXTRAÇÃO DE DNA
• PRINCIPAIS MÉTODOS;
BIOMOL

• FENOL / CLOROFÓRMIO – Remove proteínas / Remove excesso de Fenol

• Salting-out (Uso de sais – CTAB, NaCl2) (Salazar et al., 1998)
• Kits comerciais com colunas (Qiagen/Promega/Genzyme) - EXCELÊNCIA
• Equipamentos Automáticos

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• EXTRAÇÃO DE DNA;
• ETAPAS:
• LISE DAS MEMBRANAS LIPÍDICAS
• PURIFICAÇÃO DO DNA
• PRECIPITAÇÃO DO DNA
• REIDRATAÇÃO DO DNA

• IMPORTÂNCIA DO PROCESSO DE
EXTRAÇÃO DO DNA.