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10/07/2015 Antocianina e capacidade antioxidante em Roselle (Hibiscus sabdariffa L.

) extrato

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Food Research International


Volume 35, Issue 4 , 2002, Pages 351­356

Antocianina e capacidade antioxidante em Roselle ( Hibiscus


sabdariffa L.) extrato
Pi­Jen Tsai um ,John McIntosh b ,Philip Pearce b ,Blake Camden b ,Brian Jordan R c , ,

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doi: 10.1016 / S0963­9969 (01) 00129­6 Get direitos e conteúdo

Resumo
A relação entre atividade antioxidante antocianina e foi determinada em Roselle (
Hibiscus sabdariffa L.) pétalas. Pétalas de Roselle, cultivar F141, foram recolhidos e
secos em Taitung. Extracto de Roselle foi preparado por extracção secas pétalas
Roselle em água a ferver. A relação entre a cor e capacidade antioxidante antocianina
foi elucidada através da comparação de absorvância a 520 nm, com férrico capacidade
redutora do plasma (FRAP), capacidade de absorção de radicais de oxigénio (ORAC) e
da defesa antioxidante (TAS) ensaios antioxidantes. Os resultados mostraram que a
capacidade antioxidante do extracto Roselle aumentada quando a extracção de tempo
ou aumento de peso de pétalas. O ensaio de FRAP mostrou uma relação linear com
antocianina, determinada a 520 nm. As comparações entre FRAP e ORAC ou FRAP e
ensaios TAS deu uma relação linear. Estes resultados sugerem que antocianina é a
principal fonte de capacidade antioxidante em extracto de Roselle. A purificação
adicional utilizando Amberlite XAD­2 e por HPLC indicou que antocianina e um pigmento
castanho na conta de extracto para cerca de 51 e 24% da capacidade antioxidante,
respectivamente. Sob diferentes temperaturas de processamento e períodos de
armazenamento, declínios teor de antocianinas. No entanto, outros compostos fenólicos
aumentar e em geral há apenas uma diminuição relativamente pequena em compostos
fenólicos totais e atividade antioxidante.

Palavras­chave
Antocianina ;Capacidade antioxidante ;Roselle ( Hibiscus sabdariffa L.)

Nomenclatura
FRAP: férrico capacidade redutora do plasma
ORAC: capacidade de absorção de radicais de
oxigénio
TAS: capacidade antioxidante total

GAE: equivalentes de ácido gálico

CCE: catequina equivalente

CFAE: caféico equivalente ácido


RUE: equivalente rutina

DEL: delfinidina­3­sambubiose

A 520 : absorvância a 520 nm

1. Introdução

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10/07/2015 Antocianina e capacidade antioxidante em Roselle (Hibiscus sabdariffa L.) extrato

Roselle (Hibiscus sabdariffa L.), um arbusto anual, é comumente usado para fazer
geleias, compotas e bebidas. A cor vermelha brilhante e um sabor único torná­lo um
produto alimentar valioso. Os pigmentos de antocianina que criam a cor ( Tsai & UO,
1996 ) são responsáveis ​ por uma vasta gama de corantes em muitos alimentos.
Recentemente, as actividades biológicas da antocianina, tal como a actividade anti­
oxidante, a protecção contra a aterosclerose e actividade anti­cancerígena foram
investigados, e mostraram ter alguns efeitos benéficos no tratamento de doenças. Por
exemplo, tem havido relatos sobre a atividade antioxidante da uva em antocianina (
Igarashi et al., 1989 e Tamura & Yamagami, 1994 ) eo efeito biológico de antocianina
em sistemas de lipoproteína de baixa densidade e lecitina­lipossoma ( Meyer et al., 1997
e Satué­Gracia et al., 1997 ). As antocianinas também foram encontrados para ter
muitas vezes mais atividade do que os antioxidantes comuns, tais como ascorbato (
Wang, Cao, & Prior, 1997 ). No geral, há agora cada vez mais evidências de que os
antioxidantes na dieta humana são de grande benefício para a saúde e bem­estar.

Sendo ricos em antocianina, Roselle pétala é ao mesmo tempo um bom corante e,


potencialmente, uma boa fonte de antioxidantes. No entanto, devido à alta reatividade
de antocianinas durante o processamento e armazenamento, são necessárias mais
informações para esclarecer a relação entre a cor ea atividade antioxidante. O foco
desta pesquisa é determinar o nível de atividade antioxidante em Roselle extrai e como
se relaciona com o teor de antocianinas através de diferentes ensaios de antioxidantes.
Como parte deste trabalho, nós determinamos a contribuição da antocianina para a
actividade antioxidante total através de cromatografia líquida e HPLC. Além disso,
temos caracterizado mudanças em antocianinas, antioxidantes e compostos fenólicos
durante o processamento e armazenamento.

2. Materiais e métodos
2.1. Preparação de amostra
Para preparar um extracto de Roselle, as pétalas de Hibiscus sabdariffa , cultivar F141,
foram recolhidos e secos em Taitung, Taiwan. Eles foram secos a 50 ° C durante 36
horas e armazenados a ­25 ° C antes da extracção. Experimentos preliminares foram
realizados para estabelecer as melhores procedimentos de extração para dar resultados
precisos e consistentes. Subsequentemente um único protocolo foi utilizado para
estudar os níveis de antioxidantes. O extracto foi rotineiramente preparada por fervura
de 3 g de pétalas de Roselle secos durante 3 minutos com 300 ml de água. O extracto foi
rapidamente filtrada através de um funil de Buchner e, em seguida, arrefecida em gelo e
mantidas a 4 ° C antes do ensaio. Para efeito de comparação, também foram analisadas
várias amostras dos seguintes bebidas, 17 amostras de chás pretos, três amostras de
chás verdes, nove amostras de vinho tinto e nove amostras de vinho branco. Amostras
de chá e de café foram preparados por fervura de 1 g durante 3 minutos com 300 ml de
água. Outras amostras foram tomadas a partir de bebidas disponíveis comercialmente.
Estas amostras de bebida foram obtidos a partir de um supermercado local.

2.2. Análise de antocianina, fenóis e atividade antioxidante


O filtrado foi passado através de uma coluna de resina polimérica de Amberlite XAD­2. A
coluna foi lavada com água e eluiu­se o material adsorvido com metanol ( Pouget,
Vennat, Lejuene, & Pourrat, 1990 ). O eluato foi concentrada num evaporador rotativo
sob pressão reduzida a 45 ° C. O concentrado foi aplicado a uma coluna LiChroprep RP­
8 ou LiChrosorb RP HPLC C18 (Merck, Darmstadt, Alemanha) e as antocianinas e
outros pigmentos fenólicos eluidas com uma mistura gradiente de 5% de ácido acético e
acetonitrilo ( Tsai & UO, 1996 ) . Frações, 1 ml, foram recolhidas das colunas. Pigmentos
de antocianina foram medidos pela sua absorção a 520 nm ( Hong & Wrolstad, 1990 )
usando um espectrofotómetro (Ultrospec 2000, Biochrom Ltd, Cambridge, Reino Unido),
e os antioxidantes medidos por férrico reduzindo a capacidade do plasma (FRAP), da
capacidade antioxidante total (TAS e) capacidade de absorção de oxigênio radical
(ORAC) métodos. Com base na identificação espectral, os compostos de fenol foram
divididos em quatro classes: hydroxycinnamates como equivalentes de ácido cafeico,
pico 316 nm; antocianinas como delfinidina, pico 520 nm; como equivalentes de
catequina, pico de 280 nm 3­ols flavan­; flavonóis como equivalentes rutina, pico de 365
nm e hidroxibenzoatos como equivalentes de ácido gálico, pico 280 nm.

2.3. Os ensaios de antioxidantes


A concentração de antioxidante do extracto Roselle foi rotineiramente medido pelo

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método FRAP usando um analisador Roche Cobas Fara II (Roche, Basileia, Suíça;
Benzie & Strain, 1996 ). ORAC também foi medido como ele é freqüentemente usado
como um padrão internacional ( Cao & Prior, 1999 ). TAS foi determinada utilizando um
kit fornecido pela Randox Laboratories Ltd. (Co. Antrim, Reino Unido.). Ambos ORAC e
TAS também foram determinadas em um analisador Roche Cobas Fara II.

2.4. Ensaio de compostos fenólicos totais


Compostos fenólicos solúveis totais no extracto Roselle foram determinadas com o
reagente de Folin­Ciocalteu pelo método de Slinkard e Singleton (1977) usando ácido
gálico, como um padrão.

3 Resultados e discussão
Estudos preliminares foram realizados para determinar as condições necessárias para a
extração de atividade antioxidante. A atividade antioxidante foi baixa durante o primeiro
minuto de extração, mas depois aumentou rapidamente e manteve­se no mesmo nível
para 3­5 min ( Fig. 1A ). Isto indica que um período de incubação de 3 min dá a extracção
praticamente completa. Foi também demonstrado que a actividade antioxidante
aumentou proporcionalmente ao peso de Roselle pétalas usado ( Fig. 1B ). Para uma
série de amostras padrão, existiu uma relação linear entre FRAP e TAS ( R 2 = 0,9411,
Fig. 2 ) ou ORAC ( R 2 = 0,9288, Fig. 3 ). Isto sugere que qualquer um destes métodos
dará uma medida precisa da capacidade antioxidante.

Figo. 1.
Efeito de (a) tempo de extracção e (b) o peso da amostra no FRAP de Roselle pétalas.
Figura opções

Figo. 2.
Correlação da FRAP e medição de TAS atividade antioxidante em Roselle extrair.
Figura opções

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Figo. 3.
Correlação da FRAP e medição ORAC da atividade antioxidante em Roselle extrair.
Figura opções

Para determinar o nível relativo de antioxidantes que estavam presentes no extracto de


Roselle, foram feitas comparações com outras bebidas. Fig. 4 dá dados representativos
de antioxidantes em uma variedade de bebidas seleccionadas. Vinho tinto foi
previamente demonstrado ter uma capacidade antioxidante mais elevada do que o chá
preto e sumo de laranja ( Benzie & Szeto, 1999 ). No presente estudo vinho tinto tinha
um nível substancialmente mais elevado do que o antioxidante outras bebidas. Chás
verdes eram rotineiramente mais alta em atividade antioxidante em todos os chás
testados. Extrato Roselle foi de aproximadamente 16­25% tão ativo quanto o chá verde.
A atividade antioxidante alta no vinho e suco de amostra comercial podem parcialmente
surgir a partir da presença de metabissulfito ou vitamina C. Metabissulfito é
rotineiramente utilizado na produção de vinho e muitos sucos são suplementadas com
vitamina C.

Figo. 4.
Atividade FRAP como média e SD em várias bebidas. * BLT, chá preto: n = 17 (1 g foi extraída durante 3
min em 300 ml a 100 ° C); * TAB, chá verde: n = 3 (1 g foi extraída durante 3 min em 300 ml a 100 ° C); *
CFB, café: n = 3 (1 g foi extraída durante 3 min em 300 ml a 100 ° C); RDW, vinho tinto: n = 9; Whw, vinho
branco: n = 9; RdM, vinho rose: n = 3; ** ORJ, suco de laranja: n = 3 (engarrafada); * RoX, extracto de
Roselle: n = 9 (1 g foi extraída durante 3 min em 300 ml a 100 ° C).
Figura opções

A relação entre o teor de antocianina e capacidade antioxidante foi investigada por


medição de Roselle extrai mais de uma vasta gama de valores de absorvância a 520 nm
e para a actividade antioxidante pelo ensaio de FRAP. Havia uma relação linear entre a
actividade FRAP e A 520 como mostrado na Fig. 5 . O coeficiente de correlação foi de
0,8375. Este valor é ligeiramente superior ao resultado que Antes et ai. (1998)
encontrados em bagas usando ORAC para medir a atividade antioxidante. Nossos
resultados também concordam com os achados de que o vinho feito de uvas com um
teor de antocianinas superior tiveram uma maior capacidade antioxidante ( Kähkönen et
al., 1999 ).

Figo. 5.
Correlação de atividade antioxidante (FRAP) e teor de antocianinas (A 520 ) de extrato de Roselle.
Figura opções

O extrato Roselle foi fracionado para descobrir quais compostos eram responsáveis ​
pela
atividade antioxidante. O extracto foi passado através de uma coluna de XAD­2

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Amberlite onde os pigmentos foram adsorvidos. A coluna foi inicialmente lavada com
água para dar a fracção não absorvida "A". Esta fracção continha 70% (em peso) do
material extraído, mas apenas 3% da actividade antioxidante. Os pigmentos foram
eluídas com metanol, dando Fracção "B", que continha 86% do total dos pigmentos tal
como estimado por A 520 . Esta fracção foi ainda dividido em três sub­fracções numa
coluna LiChroprep RP­8 com um ácido acético: gradiente de acetonitrilo: sub­fracção
era vermelho B1, B2 e B3 foi rosa era castanho. Estes dados estão resumidos na Tabela
1 e Fig. 6 .

Tabela 1.
Distribuição das antocianinas e atividade antioxidante em infusão Roselle

Fração A 520 FRAP Peso Fenólicos


totais
Extrato aquoso Roselle 100% 100% 100% 100%
Fracção A (elutate Água de XAD­2 coluna) 2% 3% 70% 5%
Fracção B (MeOH eluato da coluna de XAD­2) 86% 75% 17% 81%
Fracção B1 vermelho (coluna RP­8) Del­3­sambubioside 73% 48% ­ 49%
um

Fração B2 Pink (RP­8 coluna) Cy­3­sambubioside b 13% 3% ­ 9%


Fracção B3 castanho (coluna RP­8) 0,5% 24% ­ 23%
uma Delfinidina 3­sambubioside.
b Cianidina 3­sambubioside.

Opções de tabela

Figo. 6.
As Um 520 e FRAP contribuições das frações Roselle após cromatografia em coluna de XAD­2 e
LiChroprep RP­8. * Pe A, eluato de água de XAD­2; P. B, MeOH eluato de XAD­2; P. B1, fracção eluída
vermelho por HOAc: acetonitrilo (3­delfinidina sambubioside); Fr B2, fração rosa fluido por HOAc,
acetonitrilo (cianidina 3­sambubioside); Fr B3, fração marrom fluido por HOAc: acetonitrilo.
Figura opções

Após a comparação com padrões autênticos (adquiridas a partir de polifenóis


Laboratories, Sandnes, Noruega) no sistema de HPLC, o pigmento vermelho foi
identificado como 3­sambubioside delfinidina (85% de antocianina) e do pigmento cor de
rosa foi provisoriamente identificado como cianidina 3­sambubioside ( Tsai & Ou, 1996 ).
Estes dois pigmentos são responsáveis ​ por 51% da atividade total FRAP. O restante da
actividade (24%), foi devido ao pigmento castanho que foi composta de compostos
fenólicos. Esta conclusão baseia­se os espectros de absorvância da fracção castanha e
a sua reacção com o reagente de Ciocalteu. A quantidade de compostos fenólicos no
Roselle extrair (23 mg / g de peso seco) é semelhante à encontrada por Mazza,
Fukumoto, Delaquis, Givard, e Ewert (1999) em várias frutas, tais como morangos e
groselha.

Os efeitos sobre a composição de secagem e armazenagem a diferentes temperaturas


foram investigados. Após a secagem e armazenagem a 20 ° C durante 15 semanas,
90% dos compostos fenólicos totais permaneceram. O armazenamento a 40 ° C
diminuiu apenas os compostos fenólicos por alguns por cento. Mesmo após secagem a
75 ° C e armazenamento durante 15 semanas a 40 ° C, 85% do total de compostos
fenólicos permaneceu. Os efeitos sobre a composição percentual de secagem e
armazenagem a diferentes temperaturas estão resumidos na Tabela 2 .

Tabela 2.
Efeito da secagem e armazenagem em temperaturas a percentagem de compostos fenólicos total
encontrado em Roselle

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Temperatura de Temp O tempo de GAE CCE CFAE RUE DEL Fenólicos


secagem (° C) (° C) armazenamento (%) (%) (%) (%) (%) totais (%)
(semanas)
25 20 0 2.62 5,60 2.97 2.61 86.20 100
4 2.39 6.59 2.84 2.60 85.58 100
15 2.85 8,09 3.06 6.25 79,75 100
25 40 0 2.62 5,60 2.97 2.61 86.20 100
4 2.69 5.69 3.09 2.75 85,78 100
15 3.11 9.23 6.37 11.65 69,04 100
50 20 0 4.25 7,48 3.20 4.80 80.27 100
4 3,76 7,85 2.78 6.30 79,31 100
15 1.53 8.35 7,46 13,08 69,58 100
50 40 0 4.25 7,48 3.20 4.80 80.27 100
4 5.02 12,28 5.21 6.95 70,54 100
15 5.61 19.82 5.35 11,81 57,41 100
75 20 0 6.57 4,74 10.83 5.65 72,21 100
4 12.12 5.93 5.10 6.05 70.80 100
15 12.10 12,46 9.83 10,79 54.82 100
75 40 0 6.57 4,74 10.83 5.65 72,21 100
4 6.25 12,63 15.04 5.08 61.00 100
15 9.26 23.91 9.13 7,74 49.96 100

Opções de tabela

No entanto, sob estas condições, as antocianinas diminuiu de cerca de 80% do total de


compostos fenólicos e cerca de 50%. Houve um aumento correspondente da
percentagem de outros compostos fenólicos ( Fig. 7 ). Estes resultados aparentemente
contraditórios são consistentes com a conversão de algumas antocianinas
monoméricas polimerizadas em fenólicos durante a armazenagem.

Figo. 7.
Efeito do tempo de armazenamento em fenólicos Roselle seco a 75 o C e armazenado a 40 ° C. Os dados
são médias e SD ( n = 3). * GAE, equivalente ácido gálico; CCE, catequina equivalente; CFAE, cafeico
equivalente ácido; RUE, equivalente rutina; DEL, delfinidina­3­sambubiose.

Figura opções

Medição da actividade antioxidante sob estas condições mostrou uma forte correlação
com a concentração de antocianina, diminuindo com a temperatura eo tempo. No
entanto, os níveis de antioxidantes globais não diminuir substancialmente (poucos por
cento), presumivelmente devido à contribuição da formação de fenóis poliméricos
(dados não mostrados). No geral, Roselle pétalas são uma boa fonte de antioxidantes e
esta atividade é relativamente estável ao longo de um período de armazenamento,
embora fornecida por compostos diferentes.

O benefício nutricional de Roselle como um anti­oxidante dependerá em última instância


a biodisponibilidade das antocianinas. Estudos preliminares mostram que delpinidum 3­
sambubioside e cianidina­3­sambubioside são rapidamente absorvidos a partir do tracto
gastrointestinal quando administradas aos ratos. Outros estudos estão em andamento
para confirmar esse achado.

Agradecimentos
Somos gratos pelo apoio de pesquisas prestadas pela Associação Conselho Científico
Nacional do Governo da República da China.

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Referências
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A capacidade redutora do ferro no plasma (FRAP) como uma medida do "poder antioxidante": o
ensaio de FRAP
Download PDF Exportação
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Artigo esboço Mostrar contorno completoPesquisa avançada
Benzie & Szeto, 1992 IFF Benzie, YT Szeto
Resumo
Capacidade antioxidante total de chás pelo férrico reduzindo ensaio poder antioxidante /
Palavras-chave
J. Agric. Food Chem., 47 (1999), pp. 633­636
1. Introdução
2. Materiais e métodos Ver Record em Scopus | Texto completo via CrossRef | | | | Citando artigos (295)
3 Resultados e discussão
Cao & Prior, 1999 G. Cao, RL Antes
Agradecimentos
A medição da capacidade de absorção de radicais de oxigénio em amostras biológicas
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10/07/2015 Antocianina e capacidade antioxidante em Roselle (Hibiscus sabdariffa L.) extrato

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10/07/2015 Antocianina e capacidade antioxidante em Roselle (Hibiscus sabdariffa L.) extrato

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http://www­sciencedirect­com.ez82.periodicos.capes.gov.br/science/article/pii/S0963996901001296 15/15

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