Anais do II CoBICET - Trabalho completo

Congresso Brasileiro Interdisciplinar em Ciência e Tecnologia

Evento online – 30 de agosto a 03 de setembro de 2021

CONTROLE DE QUALIDADE FÍSICO-QUÍMICO E

MICROBIOLÓGICO E EFICÁCIA ANTIMICROBIANA DE
ÁLCOOL ETÍLICO A 77% v/v EM GEL
Kamila Arêas Bastos1, Elder Oliveira Caetano1, Janaína Cecília Oliveira Villanova2,
Juliana Alves Resende2
1
Universidade Federal do Espírito Santo, Alegre-ES, Brasil (kamila.areas@hotmail.com)
2
Universidade Federal do Espírito Santo, Alegre-ES, Brasil

Resumo: O objetivo foi avaliar a qualidade físico-química, microbiológica e a eficácia

antimicrobiana de géis de carbômero contendo álcool etílico a 77% v/v. Os géis se
mostraram-se lisos, brilhantes, transparentes e com poucas bolhas de ar, com pH adequado.
As análises microbiológicas permitiram inferir que todos os géis apresentaram parâmetros
de qualidade, eficácia e segurança em conformidade com especificações recomendadas
pelos guias consultados.

Palavras-chave: Álcool etílico em gel, atividade antimicrobiana, esterilidade.

INTRODUÇÃO
As mãos são a principal via de transmissão de
microrganismos (Santos et al., 2014). A microbiota
das mãos é dividida entre microrganismos residentes,
que são capazes de sobreviver na superfície cutânea e
folículos pilosos, como Staphylococcus spp. e a
microbiota transitória, composta por microrganismos
que vivem temporariamente no hospedeiro e podem
ser potencialmente patogênicos. Como estão presentes
em camadas mais superficiais, a remoção mecânica
destes microrganismos é realizada com emprego de
antissépticos (Brasil, 2007; Locks et al., 2011).
Segundo Moriya e Módena (2008), um antisséptico
adequado deve apresentar atividade germicida sobre a
microbiota cutâneo-mucosa em presença de sangue,
soro, muco ou pus, sem irritar a pele ou as mucosas.
Dentre as alternativas disponíveis no mercado para
uso antisséptico, os álcoois mais utilizados são o
propílico, isopropílico e o etílico (Fernandes e Ramos,
2020). O álcool etílico é um composto orgânico
rotineiramente utilizado como antisséptico em
superfícies, sendo considerado seguro, uma vez que
apresenta baixa toxicidade, efeito microbicida e fácil
aplicação (Pereira et al., 2015). De acordo com a
Farmacopeia Brasileira (2019), o álcool etílico contém
no mínimo 95,1% (v/v), que corresponde a 92,55%
(p/p) e, no máximo, 96,9% (v/v) ou 95,16% (p/p) de
etanol (20º C), calculado por meio da densidade
relativa, que pode variar de 0,805 a 0,812. Trata-se de
um líquido incolor, límpido, volátil, inflamável e
higroscópico, miscível com água e com cloreto de
metileno (Brasil, 2019).
O álcool etílico quando em concentrações entre 70 a
92% p/p, apresenta ação bactericida, cujo mecanismo
de ação ainda não foi bem elucidado (Moriya e
Módena, 2008). Autores relacionam sua atividade à
dissolução da membrana lipídica, desnaturação de
proteínas e inibição do metabolismo microbiano
(Wanderlingh et al., 2010; Haft et al., 2014; Andrew
et al., 2020). Quanto ao mecanismo de ação virucida
dos álcoois, sua principal atividade está relacionada ao
rompimento do envelope viral, formado por lipídeos
onde encontra-se o seu material genético. Uma vez
que este envelope é rompido, o vírus perde sua
habilidade de transferir seu material genético para
outros hospedeiros, tornando o vírus ineficaz (Golin et
al., 2020).
O uso do álcool em gel é preferido para antissepsia
facilitando fricção nas mãos para reduzir a carga de
microrganismos sem a necessidade de enxágue ou
secagem com papel toalha ou outros equipamentos
(Brasil, 2010). É a forma farmacêutica preferida para
uso em dispensadores, pois, evita o desperdício e
reduz os custos para implantação da medida em todos
os estabelecimentos de saúde (OMS, 2007).
O conhecimento da atividade antimicrobiana destes
produtos frente a microrganismos gram-negativos e
gram-positivos é essencial. Além disso, é de extrema
importância assegurar que os mesmos atendam aos
critérios mínimos de qualidade exigidos, para garantir
a eficácia dos antissépticos bem como a segurança dos
usuários. Neste cenário, este estudo teve como
objetivo avaliar parâmetros físico-químicos e
microbiológicos de qualidade, bem como a eficácia
antimicrobiana de amostras de álcool 77% v/v
produzido na forma de gel no Laboratório de Produção
Farmacêutica do CCENS/UFES, em função da
pandemia do novo coronavírus, como parte do projeto
de extensão no 1740 registrado na PROEX/UFES.
MATERIAL E MÉTODOS
As amostras de álcool etílico a 77% v/v em gel
analisados no presente estudo foram produzidos no
período de abril a novembro de 2020, no Laboratório
de Produção Farmacêutica (LPF) do Centro de
Ciências Exatas, Naturais e da Saúde (CCENS), da
Universidade Federal do Espírito Santo. No total,
foram produzidos três lotes e amostras retiradas de
cada um foram armazenadas em recipientes
hermeticamente fechados, ao abrigo da luz, calor e
umidade.
Os géis foram preparados de acordo com formulação
adaptada do Formulário Nacional da Farmacopeia
Brasileira (FNFB) (2012), como dado na Tabela 1.
Tabela 1. Composição qualitativa e quantitativa do
álcool 77% v/v em gel
Componentes Quantidade Função
Lote Lote Lote farmacotécnica
1 2 3 Os microrganismos foram previamente cultivados em
Álcool 77% v/v 10 L 10 L 10 L Veículo
Carbômero 980 60 g 60 g 60 g Gelificante
Glicerina USP 250 150 75 Umectante
L L mL
Aminometilpropanol qs pH 6,5 - 7,0 Alcalinizante
Os géis alcoólicos foram obtidos mediante hidratação
do álcool 77% v/v previamente preparado a partir de
diluição do álcool etílico 99,5o GL em água purificada.
A graduação alcoólica do álcool 77% v/v em solução
foi conferida utilizando alcoômetro centesimal. Em
seguida, o carbômero foi disperso sobre o álcool 77%
v/v e o recipiente foi recoberto com filme plástico e
papel alumínio, para evitar a evaporação do álcool
etílico. Após 8 horas de hidratação, a dispersão foi
neutralizada com alcalinizante até pH entre 6,5 e 7,0.
Para homogeneização foi utilizado agitador mecânico
de hélice tipo âncora. Após preparo, o produto foi
envasado em frascos de 500 g. Foram tomados 6
frascos de 500 g cada lote, de forma aleatória, para a
realização dos ensaios.
A avaliação do aspecto e a determinação do pH foram
realizadas de acordo com métodos previstos no Guia
de Estabilidade de Produtos Cosméticos e no Guia de
Controle de Qualidade de Produtos Cosméticos. A
avaliação da qualidade microbiológica seguiu as
recomendações da Farmacopeia Brasileira 6ª edição
(Brasil, 2004; Brasil 2008; Brasil, 2019). Os foram
realizados em triplicata e os resultados do pH são
apresentados como média e desvio padrão.
A determinação do pH foi realizada pelo método
potenciométrico, utilizado equipamento digital de
bancada, mediante inserção do eletrodo diretamente
nas amostras, em temperatura ambiente. O teste de
resistência à centrifugação foi realizado colocando-se
5g das amostras em tubos Falcon, que posteriormente
foram submetidos a 3 ciclos de centrifugação de
1.000, 2.000 e 3.000 rotações por minuto (rpm),
durante 30 minutos em temperatura ambiente. Ao final
do teste, as amostras foram submetidas a análise
macroscópica visando avaliar a ocorrência de
quaisquer instabilidades.
Para verificação da esterilidade das formulações foi
realizado de acordo com Reis et al. (2011), com
algumas modificações. Em tubos estéreis, 1 g de cada
amostra foi colocado em 4 mL de caldo nutriente.
Seguida de incubação a 37º C por 24 h.
Posteriormente, semeados em placas contendo ágar
Triptona de Soja (TSA) e ágar MacConkey e,
incubadas a 37º C por 24h. Após este período, foram
realizadas as leituras a fim de identificar se houve
crescimento microbiano.
A pesquisa da atividade antimicrobiana dos géis
alcoólicos foi realizada como descrito por Reis et al.
(2011) com modificações, utilizando como linhagens
padrão as Gram negativas Escherichia coli (ATCC
25922) e Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853) e
Gram positivas Staphylococcus aureus (ATCC
25923) e Staphylococcus epidermidis (ATCC 12228).
ágar nutriente, a 35º C por 24 h. Em seguida, os
microrganismos foram inoculados em 3 mL de caldo
nutriente até atingirem o padrão de turbidez de 0,5 da
escala McFarland (1,5 x 108 UFC/mL). Em tubos
estéreis, foram adicionados 0,2 mL da suspensão
preparada anteriormente, 0,8 mL de soro fetal bovino
e 4 g de cada amostra. A mistura foi agitada
manualmente por 1 minuto. Após a agitação, os tubos
ficaram em repouso a temperatura ambiente durante
10 minutos. Por fim, foram retiradas alíquotas de 0,1
mL da mistura preparada anteriormente e semeada em
placa contendo TSA com neutralizante tiossulfato de
sódio a 0,6%. As placas foram incubadas e analisadas
após 24 e 48 horas a 37º C para contagens das
colônias. Como controle negativo foram realizados
testes com salina 0,85% na ausência de material
orgânico. O experimento foi realizado em triplicata.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
A análise dos parâmetros organolépticos mostrou que
foram produzidos géis incolores semissólidos,
límpidos, transparentes, sem sujidades, ausência de
grumos e com poucas bolhas de ar incorporadas. As
formulações apresentaram odor característico de
álcool etílico. Os géis dos diferentes lotes preparados
foram de fácil espalhamento, com sensorial não
gorduroso, toque úmido e não deixou resíduos quando
espalhado sobre a pele do dorso da mão.
Os carbômeros são excipientes empregadas como
gelificantes, polieletrolíticos, de natureza aniônica,
devendo ser neutralizados para atingir uma
viscosidade, brilho e transparência máximos (Varges
et al., 2019).
De acordo com a Formulário Nacional da
Farmacopeia Brasileira (FNFB) (2012), formulações
de géis alcoólicos preparados a partir dos carbômeros
devem apresentar valor de pH dentro de uma faixa
entre 5 e 7. O valor do pH encontrado para as amostras
são dados na Tabela 2.
Tabela 2. Valores médios do pH (± DP) das amostras
de álcool etílico a 77% v/v em gel.
Parâmetro Gel 1 Gel 2 Gel 3
pH 6,28 6,34 6,45
(± 0,07) (± 0,08) (± 0,16)
Os produtos dos lotes analisados apresentaram pH
dentro da faixa recomendada. Gisch et al. (2017),
avaliaram as características físico-químicas de
amostras de álcool em gel manipuladas e obtiveram
valores de pH que variaram de entre 6,4 e 7,8.
De acordo com Friedrich et al. (2007), o teste de
resistência a centrifugação é capaz de fornecer
informações antecipadas acerca da instabilidade de
um sistema, como a separação de fases ou liquefação
caso ocorram quaisquer instabilidades nos produtos,
os mesmos devem ser reformulados. Após cada ciclo
de centrifugação, as amostras foram analisadas
macroscopicamente e nenhuma instabilidade foi
visualizada (Figura 1). Tais achados sugerem que a
formulação é adequada do ponto de vista
farmacotécnico, não requerendo ajustes.
Figura 1. Imagens ilustrativas das amostras após ciclos
de centrifugação de 30 minutos a 1.000, 2.000 e 3.000
rpm.
A realização do controle de qualidade microbiológico
de produtos semissólidos contendo água, tais como
medicamentos, cosméticos e produtos de higiene é de
grande importância, tanto do ponto de vista da saúde
pública quanto dos aspectos relacionados à qualidade
e estabilidade do produto (Mota et al., 2017).
Segundo a Farmacopeia Brasileira (2019), os testes de
esterilidade são adequados para comprovar a ausência
de microrganismos patogênicos e determinar o
número de microrganismos viáveis, estes testes
aplicam-se a insumos farmacêuticos, medicamentos e
demais produtos para a saúde. A qualidade microbiana
é uma das exigências em relação a critérios de
aceitação e segurança, pois o crescimento de
microrganismos pode resultar na produção de enzimas
e toxinas, na mudanças de cor, odor e consistência da
forma farmacêutica, o que promove a deteriorização
do produto e oferecer risco à saúde do paciente (Vieira
et al., 2020).
Alguns produtos são considerados não estéreis, ou
seja, permitem uma determinada carga microbiana
limitada que atende aos parâmetros de garantia de
qualidade. A maior ameaça em termos de
contaminação é a presença de patógenos que possam
potencialmente oferecer risco à saúde do consumidor.
Pacientes imunossuprimidos, ou mesmo pacientes em
tratamento de lesões na pele, o contato com produtos
contaminados pode desencadear uma infecção
(Bugno, 2001). Dessa forma, a realização do controle
de qualidade microbiológico de produtos se torna
essencial na preservação da saúde.
A verificação da esterilidade das formulações indicou
que não houve crescimento microbiano em nenhuma
das placas após a incubação (Figura 2). A placa de
cultivo contendo ágar Triptona de Soja (TSA) é usada
com proposito de crescimento de uma grande
variedade de microrganismos e o ágar MacConkey,
seletivo para bactérias Gram negativas. Tais achados
sugerem que todas os lotes foram preparados segundo
normas de Boas Práticas de Manipulação, com
ausência de microrganismos potencialmente
patogênicos.
Figura 2. Imagens representativas das placas contendo
inóculo semeado em Ágar TSA (A) e Ágar
MacConkey(B) sem crescimento microbiano em
nenhuma das placas após incubação.
Na avaliação dos resultados da eficácia
antimicrobiana in vitro, as amostras de álcool em gel
se mostraram eficazes frente a linhagens de
Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa (Figura
3), Staphylococcus aureus e Staphylococcus
epidermidis, inibindo o crescimento microbiano. Estas
linhagens foram escolhidas devido à grande
importância na saúde humana. Os resultados
asseguram a eficácia do produto frente aos
microrganismos de interesse e, portanto, podendo ser
empregados como antissépticos.

Figura 3. Imagem representativa das placas, semeadas
com P. aeruginosa, incubadas na presença de
amostras dos géis dos lotes 1 (A), 2 (B), 3 (C) e 4 (D).
Tais achados estão de acordo com o estabelecido na
RDC no 42/2010 e são consistentes com inúmeros
relatos da literatura. Gisch et al. (2017) realizaram
análise da eficácia antimicrobiana in vivo de cinco
amostras de álcool gel, sendo quatro delas
manipuladas e uma industrializada. Todas as amostras
analisadas apresentaram ação antimicrobiana
satisfatória, sendo capazes de inibir o crescimento
microbiano.
Os dados do controle de qualidade microbiológico e
da eficácia antimicrobiana indicam que os produtos
atendem aos requisitos de esterilidade e são eficazes
na inibição das linhagens estudadas. Vale ressaltar
que, a ação antimicrobiana de produtos antissépticos
baseados no álcool etílico em gel, como os testados
neste estudo, pode ser diminuída na presença de
matéria orgânica. Deste modo, uma área pode
necessitar ser esfregada e lavada antes da aplicação do
antisséptico (Reis et al., 2011).
CONCLUSÃO
Os resultados das análises físicas e microbiológicas
permitem inferir que todos os produtos apresentaram
parâmetros de qualidade em conformidade com
especificações recomendadas pelos guias consultados.
AGRADECIMENTOS
O presente trabalho foi realizado com apoio da
Universidade Federal do Espírito Santo (UFES), a
Fundação de Amparo à Pesquisa e Inovação do
Espírito Santo (FAPES) e Coordenação de
Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil
(CAPES) - Código de Financiamento 001.
REFERÊNCIAS
Agência Nacional de Vigilância Sanitária (Brasil).
Farmacopéia Brasileira, volume 1. 6ª Ed. Brasília,
2019.
Andrew, P. et al. Hand sanitizers: A review of
ingredients, mechanisms of action, modes of delivery,
and efficacy against coronaviruses. American Journal
of Infection Control 2020;48:1062-7.
Brasil. Agência Nacional de Vigilância Sanitária.
Guia de Estabilidade de Produtos Cosméticos. 1. ed.
Brasília: Anvisa, 2004.
Brasil. Agência Nacional de Vigilância Sanitária.
Higienização das mãos em serviços de saúde. Brasília:
Anvisa, 2007.
Brasil. Agência Nacional de Vigilância Sanitária.
Guia controle de qualidade de produtos cosméticos.
2.ed. Brasília: Anvisa. 2008.
Brasil. Agência Nacional de Vigilância Sanitária.
Segurança do Paciente em Serviços de Saúde:
Higienização das Mãos. Brasília, 2009. Disponível
em:<http://bvsms.saude.gov.br/bvs/publicacoes/segur
anca_paciente_servicos_saude_higienizacao_maos.p
df >. Acesso em: 15 junho. 2021.
Brasil. Agência Nacional de Vigilância Sanitária.
Segurança do paciente: Higiene das mãos. Brasília:
Anvisa, 2011.
Brasil. Agência Nacional de Vigilância Sanitária.
Formulário Nacional da Farmacopeia Brasileira. 2. ed.
Brasília: Anvisa, 2012.
Brasil. Resolução RDC nº. 42 de 25 de Out. de 2010
da Agência Nacional de Vigilância Sanitária do
Ministério da Saúde. Dispõe sobre a obrigatoriedade
de disponibilização de preparação alcoólica para
fricção antisséptica das mãos, pelos serviços de saúde
do País, e da outras providências. Diário [da]
República Federativa do Brasil, Brasília, DF, 26 de
Out. de 2010. Seção 1, p.27-8.
Bugno, A. Esterilidade: Validação de Metodologia e
propostas de Otimização de Resultados. 2001. 161 f.
Dissertação de Mestrado (Produção e Controle
Farmacêuticos) - Programa de Pós Graduação em
Fármacos e Medicamentos, Universidade de São
Paulo, São Paulo, 2001.
Fernandes, P. A.; Ramos, M. J. O álcool contra a
COVID-19. Revista de Ciência Elementar, v. 8, n. 2,
2020.
Friedrich, M. et al. Avaliação da estabilidade físico-
química de creme não iônico inscrito no Formulário
Nacional. Latin American Journal of Pharmacy, v. 26,
n. 4, p. 558, 2007.
Gisch, C. et al. Caracterização e eficácia de álcool gel.
Cosmetics e Toiletries, v. 29, n. 6, p. 48-54, 2017.
Golin, A. P. et al.. Hand sanitizers: A review of
ingredients, mechanisms of action, modes of delivery,
and efficacy against coronaviruses. American Journal
of Infection Control, v. 48, n.9, p. 1062-1067, 2020.
Haft, R. J. F. et al. Correcting direct effects of ethanol
on translation and transcription machinery confers
ethanol tolerance in bacteria. Proceedings of the
National Academy of Sciences, v. 111, n. 25, p. 2576-
2585, 2014.
Locks, L. et al. Qualidade da higienização das mãos
de profissionais atuantes em unidades básicas de
saúde. Revista Gaúcha de Enfermagem, v. 32, n. 3, p.
569-575, 2011.
Ministério da Saúde (Brasil). Agência Nacional de
Vigilância Sanitária - ANVISA. Segurança do
paciente: Higienização das Mãos. Brasília (DF): MS;
2009
Moriya, T.; Módena, J. L. P. Assepsia e antissepsia:
técnicas de esterilização. Medicina (Ribeirão Preto), v.
41, n. 3, p. 265-273, 2008.
Mota, V. A. M.; et al. O controle da contaminação
microbiológica de produtos magistrais. Revista
Brasileira Multidisciplinar, v. 20, n. 1, p. 33-48, 2017.
Organização Mundial da Saúde (OMS). Primeiro
Desafio Global para a Segurança do Paciente: Uma
Assistência Limpa é Uma Assistência Mais Segura.
Guia para Implantação, Brasília, 2007. Disponível em:
<https://www.anvisa.gov.br/servicosaude/controle/hi
gienizacao_oms/guia_de_implement.pdf>. Acesso
em: 15 junho 2021.
Pereira, T. C. et al. Avaliação da qualidade de
diferentes marcas de álcool gel comercializadas na
cidade de São Paulo. Boletim do Instituto Adolfo
Lutz, v. 25, n. 1, p. 15-16, 2015.
Reis, L. M. et al. Avaliação da atividade
antimicrobiana de antissépticos e desinfetantes
utilizados em um serviço público de saúde. Revista
Brasileira de Enfermagem, 64(5), 870-875. 2011.
Santos, T. C. R. et al. Higienização das mãos em
ambiente hospitalar: uso de indicadores de
conformidade. Revista Gaúcha de Enfermagem, v. 35,
n. 1, p. 70-77, 2014.

Vieira, N. R. et al.. Controle de qualidade

microbiológica de produtos não
estéreis/Microbiological quality control in non-sterile
products. Brazilian Journal of Development, v.6, n.1,
p. 2889-2901, 2020.
Varges, P. R. et al. Rheological characterization of
Carbopol® dispersions in water and in water/glycerol
solutions. Fluids, v. 4, n. 1, p. 3, 2019.
Wanderlingh, U. et al. Interaction of alcohol with
phospholipid membrane: NMR and XRD
investigations on DPPC–hexanol system.
Spectroscopy, v. 24, n. 3-4, p. 375-380, 2010.