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COMO FAZER IDENTIFICAÇÃO DE

MICRO-ORGANISMOS?
por Neoprospecta | jun 14, 2017 | Microbiologia

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POR QUE IDENTIFICAR OS MICRO- Controle de Qualidade

ORGANISMOS? Diagnóstico Microbiológico Digital E-Book

A detecção e identi icação de micro-organismos em qualquer ambiente é essencial para controle
Food Defense DNA Food Safety Gestão de dados
de qualidade, controle de processos de fabricação e manipulação, garantia da segurança em
Health care Indústria Alimentícia
alimentos e qualidade microbiológica em ambientes hospitalares.
Indústria farmacêutica Infecção Hospitalar
A identi icação de micro-organismos também é essencial para tomada de decisão de ações
Microbiologia Microrganismos bené icos
corretivas em casos de contaminações, ou na validação da higienização em que se deve ter um
ambiente controlado, como um hospital com alas de tratamento intensivo, onde a condição dos NeoBox NeoCast NeoScience

pacientes é delicada e eles não podem estar expostos a micro-organismos patogênicos, ou que
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possam levar a uma piora do quadro da saúde.
Sem categoria Sequenciamento Genômico

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OS MICRO-ORGANISMOS ESTÃO EM TODOS OS
LUGARES! Universidades

Os micro-organismos são os seres vivos que estão presentes nos lugares mais comuns, como no
ar, na água, no solo, no corpo humano, nos alimentos, nos animais, e até nos mais improváveis,
como no vácuo, por exemplo.

Alguns são micro-organismos bené icos aos humanos, como aqueles utilizados para fabricação
de alimentos (os fermentadores), outros podem ser utilizados como alimentos funcionais, ou
como probióticos. Os classi icados como micro-organismos deteriorantes, diminuem o
rendimento do processo de fabricação, produzem substratos indesejados, competem com micro-
organismos bené icos pela fonte de alimento. Além disso, alguns podem formar bio ilme, que
criam condições para crescimento de micro-organismos patogênicos. Os micro-organismos
patogênicos são os responsáveis pelas doenças transmitidas por alimentos (DTAs) e pelas IRAS
em ambientes hospitalares. Alguns deles, por exemplo, apresentam grandes danos à saúde do
consumidor inal e não podem ser identi icados nem em pequenas quantidades em alimentos.

IDENTIFICAÇÃO DE MICRO-ORGANISMOS E SUAS

LIMITAÇÕES
As limitações dos métodos tradicionalmente utilizados para o isolamento e cultivo de micro-
organismos em laboratório, contribuem para a falta de conhecimento sobre a diversidade
microbiana em amostras ambientais. Estas limitações incluem a utilização de meios e condições
de cultivo incompatíveis com as condições encontradas no ambiente natural dos micro-
organismos (Palleroni, 1996).

Apenas uma pequena fração dos micro-organismos na natureza, entre 0.1 a 1%, dependendo do
habitat, são cultivados por intermédio do emprego de métodos microbiológicos convencionais
(Amann et. al, 1995).

Em algumas circunstâncias, como bacteremias, a identi icação e o tratamento adequado são

críticos: a cada hora de demora no tratamento adequado de uma septicemia, a mortalidade
aumenta de 10 a 20%. O tempo de hospitalização e o preço de uma internação igualmente
diminuem com a identi icação precoce dos micro-organismos envolvidos em uma sepse.

Você conhece quais são as principais metodologias para identi icação de micro-organismos?
Veja como podemos identi icá-los:

METODOLOGIAS PARA IDENTIFICAÇÃO DE

MICRO-ORGANISMOS

CULTIVO MICROBIOLÓGICO
Esta metodologia depende da reprodução de condições para crescimento ideal do micro-
organismo (meios seletivos e diferentes condições de crescimento). A análise é fenotípica e a
detecção é apenas de organismos cultiváveis, que representa apenas 1% do total de espécies da
amostra. Os resultados desta metodologia são os mais demorados.

MÉTODOS BIOQUÍMICOS
A identi icação de micro-organismos por métodos bioquímicos consistem em kit comerciais,
que possuem provas bioquímicas, que identi icam diferentes grupos de micro-organismos.
Portanto, é necessário o prévio conhecimento de qual grupo deseja identi icar. Para esta análise é
feita a cultura, a suspensão bacteriana e a inoculação. Na maioria dos kits, os resultados são
interpretados de maneira visual, outros são plotados em um software e a leitura é automatizada.

MÉTODOS AUTOMATIZADOS
Para este método são necessárias a cultura bacteriana e a prévia seleção do grupo que deseja
identi icar, através da coloração de Gram, por exemplo. Todos os estágios de identi icação de
leitura de resultados são automatizados, acelerando o processo de análise microbiológica
clássica.

TÉCNICAS DE ESPECTROMETRIA DE MASSAS

Método MALDI-TOF – Este método permite um diagnóstico muito mais rápido, podendo levar até
15 minutos após obter um material enriquecido. A amostra da cultura é colocada em uma placa e
bombardeada com um laser que a evapora. Um sistema ioniza e aspira o material volatilizado,
que chega a detectores, os quais registram o tempo em que a substância chega ao detector e sua
quantidade. Cada micro-organismo tem um espectro característico que é analisado por um
software e faz a leitura dos resultados. À medida que o uso dessa técnica aumenta, os bancos de
dados icam mais completos e a identi icação, melhor.

TÉCNICAS MOLECULARES
As técnicas moleculares para identi icação de micro-organismos são baseadas em análises
genotípicas de moléculas como DNA e RNA, sem necessidade de os micro-organismos estarem
vivos e oferece uma “imagem” de toda a comunidade microbiana da amostra. A detecção é feita
mesmo com um número baixo de micro-organismos e os resultados são mais rápidos e precisos
que nas demais técnicas. Além das muitas aplicações que este método engloba, como evolução e
genômica comparativa, forense, epidemiologia, diagnósticos médicos e terapêuticos.

SEQUENCIAMENTO DE PRIMEIRA GERAÇÃO

O método de Sanger foi criado em 1977 e é usado desde então, envolve síntese de um molde de
DNA de um gene de interesse por reação de PCR. Apresenta limitações quanto a escalabilidade e
tempo dos resultados.

SEQUENCIAMENTO DE NOVA GERAÇÃO (NGS)

Desde 2005, o sequenciamento de nova geração é a metodologia mais e icaz para
sequenciamento de DNA para identi icação de micro-organismos, pois permite uma nova
metodologia de sequenciamento em larga escala, de bilhões de moléculas de DNA
simultaneamente e em uma única amostra.

Diversas plataformas de NGS foram baseadas nas metodologias de Pirosequenciamento (454 –

Roche), Sequenciamento por ligação (SOLiD), Metodologia de semicondutores (Ion),
Sequenciamento por síntese (Illumina) e Sequenciamento de moléculas únicas (Paci ic
Biosciences e o Oxford Nanopore).

Para cada situação há uma diferente metodologia de identi icação. Para esclarecer, vamos
compará-las para sabermos qual apresenta melhor bene ício, em menos tempo e com maior
especi icidade.

COMPARAÇÃO DAS METODOLOGIAS DE

IDENTIFICAÇÃO DE MICRO-ORGANISMOS
Agora que você já conhece as maneiras de identi icar os micro-organismos, quer ver a
comparação completa das metodologias de identi icação?

Tenho certeza que este e-book vai te ajudar!

Referências:

Amann, R. I.; Ludwing, W.; Schleifer, K. H. Phylogenetic identi ication and in situ detection os
indivual microbial cells without cultivation. Microbiological Reviews, v. 59. 1995.

Palleroni, N. J. Microbial diversity and the importance of culturing. Culture Collections to Improve
the Quality of Life. Baarn, The Netherlands: Centraalbureai voor Schimmelcultures. 1996.

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